專利名稱：刺槐凝集素及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于醫(yī)藥方面的刺槐(Robinia pseudoacacia，RPA)凝集素，涉及分離的刺槐凝集素同聚多肽，涉及含有刺槐凝集素的組合物，涉及刺槐凝集素在制備用于減輕和/或治療疾病之藥物中的用途，涉及控制、減輕和/或治療疾病的方法，還涉及含有刺槐凝集素的食物或食物添加劑。
凝集素是具有識(shí)別特異性復(fù)合糖結(jié)構(gòu)特征的蛋白質(zhì)或糖蛋白(Pusztai，1991)。一些口服的凝集素能抵抗胃內(nèi)的消化并保持完整地到達(dá)腸內(nèi)。在腸內(nèi)，凝集素可附著到在各種腸粘膜細(xì)胞表面表達(dá)的碳水化合物結(jié)構(gòu)上(Pusztai等，1995)。凝集素附著腸細(xì)胞的結(jié)果各異。例如，生物學(xué)反應(yīng)依賴于給藥劑量。高劑量時(shí)，菜豆凝集素(PHA)會(huì)引起上皮細(xì)胞絨毛可逆性結(jié)構(gòu)破壞。這種結(jié)構(gòu)破壞可被內(nèi)源過(guò)程迅速修復(fù)。同樣，小腸內(nèi)大量PHA的存在會(huì)引起內(nèi)源大腸桿菌(Escherichia coli)過(guò)度生長(zhǎng)。此外，還會(huì)增加脂動(dòng)員和葡萄糖氧化并降低骨骼肌中蛋白質(zhì)合成。然而，PHA為低劑量時(shí)，可觀察到隱窩細(xì)胞形成速率增加，導(dǎo)致腸增生性生長(zhǎng)(Bardocz等，1995)，但沒(méi)有高劑量時(shí)發(fā)生的損傷作用。
刺槐(Robinia pseudoacacia)(洋槐)是北美和中歐常見(jiàn)的一種豆科樹(shù)種。刺槐的樹(shù)皮、根、根瘤、韌皮部、木質(zhì)部(wood)和葉(Geitl和Ziegler，1980)以及種子(Van Damme等，1995b)產(chǎn)生凝集素。盡管這些凝集素的確切功能未知，但是人們認(rèn)為，這些凝集素可能用作休眠期的氮源儲(chǔ)備(Yoshida等，1994)。還已知樹(shù)皮內(nèi)的凝集素水平在冬天期間增加。由于已知刺槐屬凝集素對(duì)哺乳動(dòng)物有毒(Nishiguchi等，1997)，樹(shù)皮凝集素也有可能充當(dāng)一種在冬天抵抗草食動(dòng)物如野兔的防衛(wèi)機(jī)制。
人們已經(jīng)在生化和分子水平描述了刺槐樹(shù)皮和種子凝集素的特性(Van Damme等，1995a，1995b)。根凝集素也已得到分離和特性描述(Duverger等，1997)。刺槐凝集素(主要來(lái)自種子)已有許多用途，主要用作診斷和研究工具。RPA的特異碳水化合物(N-乙酰-D-半乳糖胺)結(jié)合性質(zhì)已被用于研究生物組織的碳水化合物組成(Raedler等，1982)。RPA的促有絲分裂特性也已被用于體外研究分離的淋巴細(xì)胞的生物學(xué)性質(zhì)(Sabeur等，1986；Sharif等，1978 & 1977)。Banach等(1983)顯示小鼠RPA腹腔內(nèi)給藥導(dǎo)致了肝毒性作用，包括肝糖原迅速降低。Pusztai(1993)也顯示在高劑量時(shí)RPA強(qiáng)烈結(jié)合大鼠腸壁并導(dǎo)致胰腺生長(zhǎng)，提示RPA可能破壞腸壁，促使大腸菌過(guò)度生長(zhǎng)，并引起胰腺炎。
來(lái)源于刺槐樹(shù)皮的凝集素可用一系列凝膠分離、DNA和蛋白質(zhì)序列測(cè)定技術(shù)進(jìn)行特性分析(Van Damme等，1995a)。從柱上洗脫下來(lái)的天然樹(shù)皮凝集素包括兩種凝集素RPbA I和RPbA II，它們?cè)诒碛^分子量大約120kDa共純化。SDS PAGE膠分析表明RPbA I由兩個(gè)亞基組成多肽a和多肽b，分子量分別為31.5kDa和29kDa。RPbA I是四聚體，由a、b多肽單體所有可能的組合方式組成。多肽a和b已進(jìn)一步用標(biāo)準(zhǔn)cDNA克隆和測(cè)序技術(shù)進(jìn)行了特性分析。多肽a和b的預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)序列見(jiàn)

圖1。
RPbA II是四聚體，由單一的分子量26kDa的單體多肽(亞基)c組成。對(duì)多肽c做了進(jìn)一步特性分析，所測(cè)cDNA和預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)序列也見(jiàn)圖1。
刺槐種子含有兩種凝集素RPsA I和RPsA II，它們?cè)诒碛^分子量大約120kDa共純化(Van Damme等，1995b)。兩種凝集素的SDSPAGE膠分析表明，每種凝集素都是由單一的單體亞基組成(分別為34和29kDa)。已用cDNA克隆和測(cè)序技術(shù)對(duì)種子凝集素進(jìn)行了特性分析，預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)序列見(jiàn)圖2。最近發(fā)表的關(guān)于根凝集素的工作顯示，它們包含兩種凝集素(Duverger等，1997)。根凝集素看來(lái)與種子和樹(shù)皮凝集素不同它們是二聚體分子，分為RPrA I和RPrA II，其分子量分別為58和63kDa。RPrA I是由一個(gè)31kDa的亞基和一個(gè)29kDa的亞基組成的異型二聚體。RPrA II是由單一的30kDa亞基組成的同型二聚體。
對(duì)刺槐凝集素的研究產(chǎn)生了一些關(guān)于各種凝集素的準(zhǔn)確分子量和亞基組成的混亂。Wantyghem等(1986)在種子中鑒定了兩種凝集素二聚體的RPA1和四聚體的RPA3。然而，同年Fleischmann等(1986)描述了稱為RPA1和RPA2的兩種四聚體凝集素的分離，二者具有相似的亞基分子量。因此，這些凝集素似乎可以以單體、二聚體、三聚體和四聚體的形式存在。
粘膜由粘膜細(xì)胞組成，是襯在生物體許多管狀結(jié)構(gòu)和腔內(nèi)的潮濕膜。它們包括腸、口腔、鼻通道、食管、胃、肺、小腸和大腸(包括直腸)的粘膜層。長(zhǎng)期以來(lái)人們已認(rèn)識(shí)到粘膜對(duì)生物體生存的重要性，但控制粘膜和非粘膜細(xì)胞增生的能力以前從未被認(rèn)為是說(shuō)明許多生理問(wèn)題(包括患病和損傷細(xì)胞和/或組織)的機(jī)會(huì)。粘膜細(xì)胞的許多疾病都是已知的，包括細(xì)胞分裂加速、減速的疾病，粘膜細(xì)胞受到損傷或失去保護(hù)性外層例如粘膜的疾病。與粘膜細(xì)胞增殖失控有關(guān)的疾病包括皮膚癌、牛皮癬、易激性腸綜合征、炎性疾病和粘膜炎。
粘膜炎是一種痛苦的消耗性疾病，在該疾病中迅速生長(zhǎng)的上皮和粘膜細(xì)胞受到損傷，外層粘膜層被除去和/或不能被迅速取代。粘膜炎可導(dǎo)致微生物感染，所述微生物存在于例如口腔或腸道中。在本文中，粘膜炎覆蓋所有腸道病變(可能是粘膜損傷的后果)。這種疾病被認(rèn)為是癌癥治療的主要副作用。粘膜炎的發(fā)病率和嚴(yán)重程度可隨癌癥治療輪次的增加而增加，并最終影響患者治療的順應(yīng)性和存活率。本發(fā)明提供的技術(shù)方案利用了凝集素對(duì)生物學(xué)材料的組織保護(hù)性和代謝影響。
病變細(xì)胞和損傷細(xì)胞不能足夠迅速地修復(fù)或再生，會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重并潛在威脅生命的健康危險(xiǎn)。代謝性疾病，如肥胖、高血糖癥、心血管疾病、中風(fēng)和胃腸道疾病(包括腸易激綜合癥，炎性腸病和腹腔疾病)，也是維持正常細(xì)胞功能的問(wèn)題。
細(xì)胞和組織的患病和損傷有各種各樣的原因。引起細(xì)胞損傷的因素包括化療試劑，放射療法，化學(xué)品(有機(jī)的或無(wú)機(jī)的)，毒素，酸，堿，放射源，自由基以及在試圖治療另一更有問(wèn)題的疾病時(shí)進(jìn)行外科手術(shù)或治療引起的損傷。癌癥治療是作為其它操作的副作用而引起有機(jī)體細(xì)胞和/或組織損傷的一個(gè)最佳實(shí)例。癌癥治療主要基于單獨(dú)、同時(shí)或聯(lián)合外科手術(shù)使用化療或放療?；熓褂眉?xì)胞毒性劑直接破壞靶細(xì)胞的DNA。如果向靶組織即腫瘤施用了足夠劑量的細(xì)胞毒性劑，DNA的錯(cuò)誤修復(fù)可導(dǎo)致DNA突變、損傷和染色體畸變的積累并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。放療使用輻射直接損傷靶細(xì)胞DNA，或利用電離輻射產(chǎn)生能斷裂DNA鏈之自由基的潛能(Steel，1996)。因此，化療或放療的使用是通過(guò)導(dǎo)向輻射最大程度損傷癌細(xì)胞同時(shí)避免無(wú)可挽回地破壞正常組織的折衷。
盡管放療和化療是最廣泛使用的癌癥治療手段，但由于多種因素存活率有限。關(guān)鍵因素是細(xì)胞毒性藥物或輻射不能區(qū)分正常組織和癌癥組織。在大多數(shù)情況下，不可能提供足夠劑量的細(xì)胞毒性藥物或輻射以可靠地殺死所有癌組織，因?yàn)樗鰟┝繉?duì)于患者也是致死性的?，F(xiàn)有治療方案共有的副作用包括頭發(fā)脫落、骨髓抑制、惡心、嘔吐和腹瀉(Paulsen等，1996)。另外，在將放療用于特別是骨盆區(qū)的情況下，還會(huì)導(dǎo)致胃腸功能發(fā)生改變(Yeoh等，1993)，并會(huì)對(duì)腸造成長(zhǎng)期損傷，從而需要進(jìn)行外科手術(shù)(van Halteren等，1993)。
在過(guò)去10年里，利用造血生長(zhǎng)因子已取得了重要的突破?，F(xiàn)在可以施用較高劑量的細(xì)胞毒性藥物，然后通過(guò)施用重組生長(zhǎng)因子例如粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子拯救組織例如骨髓和白細(xì)胞(Erkisis等，1996)。所述方法能改善預(yù)后和期望達(dá)到的存活率。盡管表皮特異性生長(zhǎng)因子例如表皮生長(zhǎng)因子是已知的，但是腸生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的復(fù)雜性使得很難開(kāi)發(fā)有效的腸“拯救”方法(Podolsky，1993)。由于目前沒(méi)有用于腸的這類生長(zhǎng)因子，細(xì)胞毒性藥物和輻射給胃腸道造成的損傷現(xiàn)在已成為劑量限制。
本發(fā)明通過(guò)提供一種有效的新產(chǎn)品及其用途，使得生物學(xué)材料能夠有效而受控制地生長(zhǎng)，從而克服了此領(lǐng)域的問(wèn)題。
因此，本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供用于醫(yī)藥領(lǐng)域的刺槐凝集素。其醫(yī)藥用途是廣泛的，包括控制粘膜細(xì)胞增殖，減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷，減輕和/或治療代謝性疾病，或其兩種或多種情況的組合。在本文中，“減輕”指減輕任何損傷或醫(yī)學(xué)疾病至任何程度的任何效果，包括預(yù)防(預(yù)防性用途)。在本文中，“治療”指失調(diào)、疾病、綜合征、病癥、疼痛或其兩種或多種組合情況的任何緩解。本發(fā)明的治療(或組合物的使用)可在其它治療如化療和/或放療期間進(jìn)行。
就減輕和/或治療粘膜炎(包括腸道損傷)而言，刺槐凝集素用于控制粘膜細(xì)胞增殖是特別有用的?？刂普衬ぜ?xì)胞增殖對(duì)減輕和/或治療細(xì)胞損傷劑引起的損傷特別有用。本發(fā)明所有方面涉及的典型細(xì)胞損傷劑包括放療、化療或其組合。在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)“輻射”和“放療”具有相同的含義，它是一種用作治療技術(shù)或否的輻射源。
本發(fā)明特別適用于減輕和/或治療哺乳動(dòng)物組織、尤其是人組織的損傷。本發(fā)明對(duì)人組織尤其重要，因?yàn)樵诎┌Y治療過(guò)程中需要相當(dāng)多的放療和/或化療。然而，本發(fā)明也可用于其它動(dòng)物和生物學(xué)材料，尤其是獸醫(yī)業(yè)，包括畜牧動(dòng)物和寵物。
刺槐在醫(yī)學(xué)中的用途涉及所有細(xì)胞和/或組織，包括整個(gè)肌體內(nèi)的細(xì)胞和組織以及整個(gè)肌體外的細(xì)胞和組織，包括分離的細(xì)胞和組織。刺槐涉及所有生物學(xué)材料，包括整個(gè)肌體及其部分。本發(fā)明還涉及故意地或非故意地接觸過(guò)任何細(xì)胞損傷劑的材料。
本發(fā)明特別用于對(duì)細(xì)胞損傷劑如放療和/或化療劑特別敏感的生物學(xué)材料。這些生物學(xué)材料包括粘膜，特別是腸、口腔、鼻通道、食管、胃、肺、小腸、大腸(包括結(jié)腸和直腸)、上皮組織(如覆蓋眼睛的)的粘膜層以及任何其他粘膜細(xì)胞和/或組織，還包括非粘膜細(xì)胞和組織如骨髓、脾、所有造血細(xì)胞、血液組織、胸腺、生發(fā)組織、眼組織、生殖道、睪丸/前列腺組織或其兩種或多種的組合。本發(fā)明尤其與襯在體內(nèi)中空結(jié)構(gòu)內(nèi)的粘膜層相關(guān)，包括襯在眼內(nèi)的永遠(yuǎn)潮濕的組織。細(xì)胞和組織對(duì)細(xì)胞損傷劑的敏感性與其代謝狀態(tài)有關(guān)。在施用細(xì)胞損傷劑之前、過(guò)程中和/或之后，刺槐凝集素的生長(zhǎng)因子作用、特別是對(duì)腸(特別是小腸)的作用被認(rèn)為是對(duì)預(yù)防和/或治療效果非常重要的。
刺槐凝集素在放療、化療或其組合治療前、過(guò)程中和/或之后對(duì)控制粘膜細(xì)胞增殖特別有效。本發(fā)明是由于凝集素的保護(hù)和修復(fù)能力而達(dá)到目的的。
粘膜細(xì)胞是組成任何粘膜(襯在許多管狀結(jié)構(gòu)和腔中的濕膜)的細(xì)胞。它們中的許多在動(dòng)物的外界環(huán)境和內(nèi)部器官之間提供一個(gè)保護(hù)層。粘膜細(xì)胞/組織包括腸、口腔、鼻通道、食管、胃、肺、小腸、大腸、上皮組織、生殖道和其它器官的粘膜層。本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及所有這些粘膜細(xì)胞/組織。本發(fā)明第一個(gè)方面涉及的其它細(xì)胞和組織包括骨髓、脾、造血細(xì)胞、血液組織、胸腺、生發(fā)組織、眼組織、生殖道、睪丸/前列腺組織和其兩種或多種的組合。
根據(jù)本發(fā)明，刺槐凝集素在醫(yī)學(xué)中的使用可與細(xì)胞保護(hù)劑聯(lián)合。所述細(xì)胞保護(hù)劑優(yōu)選放射致敏劑、化學(xué)保護(hù)劑(包括自由基清除劑)、生長(zhǎng)因子或其兩種或多種物質(zhì)的組合。在上述細(xì)胞保護(hù)劑名單中，下列物質(zhì)是優(yōu)選的放射致敏劑-維生素K模擬劑例如磷鈉甲萘醌或亞硫酸氫鈉甲萘醌，texaphyrin釓配合物或碘芐胍(([[3-碘-13311)苯基]甲基]胍)；化學(xué)保護(hù)劑-Sulcraphate，半胱氨酸，巰基乙胺，Ethyol，balazipone或多司馬酯；自由基清除劑-WR3689(磷酸二氫2-[[3-甲基氨基)丙基]氨基]乙二醇酯，AD20(2-[[2-甲氧基苯基)乙酰]氨基]-2-丙烯酸或硝基氧抗氧化劑；生長(zhǎng)因子-粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，促紅細(xì)胞生成素(EPO)，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGFα和β)，任何種類的白細(xì)胞介素包括IL-11和IL-15，胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)，血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGR)，鈴蟾肽，松弛素，降鈣素，初乳衍生的生長(zhǎng)因子(CDGF)，氨氯地平或amoxanox，protegrin，鹽酸匹魯卡品，干細(xì)胞因子(STF)，血小板生成素，青灰因子(SF)，任何一種干擾素，包括干擾素α，或任何一種細(xì)胞因子。
除細(xì)胞保護(hù)劑外，刺槐凝集素還可與一種或一種以上其它化合物/試劑(優(yōu)選藥物)聯(lián)用。具體地講，可包含抗微生物劑?？砂鲈噭┮缘挚估^發(fā)感染，例如與粘膜炎有關(guān)聯(lián)的繼發(fā)感染。
就胃腸道細(xì)胞(用于減輕和修復(fù)損傷)和代謝性疾病而言，刺槐凝集素在醫(yī)學(xué)中的用途是特別有用的。所述控制可以是為了胃腸道的功能和/或長(zhǎng)度的提高或?yàn)榱丝刂莆改c-細(xì)胞表達(dá)的表面糖蛋白的性質(zhì)和/或密度。在控制粘膜細(xì)胞增殖方面的其他用途包括減輕和/或治療腸疾病如炎性腸疾病和易激性腸綜合征以及減輕和/或治療腸損傷，及在放療、化療或其兩種或多種組合治療前、過(guò)程中或之后修復(fù)和替換粘膜細(xì)胞。
這些控制特征的應(yīng)用包括(a)腸細(xì)胞增殖導(dǎo)致功能腸面積和長(zhǎng)度增加，這對(duì)于例如因外科手術(shù)或事故引起的腸功能損傷是一種有用的治療，和/或(b)控制腸細(xì)胞更新率，這樣可以控制被表達(dá)的表面糖結(jié)合物的性質(zhì)和密度，因?yàn)檫@些會(huì)隨著細(xì)胞老化而逐漸變得更復(fù)雜。
由于糖結(jié)合物影響特定的腸特性，例如細(xì)菌附著的傾向，因此，可設(shè)想將凝集素施用作為對(duì)這些特性的治療或預(yù)防性控制。
具體地說(shuō)，可將細(xì)胞增殖的控制用于使小腸營(yíng)養(yǎng)能力提高和/或控制腸細(xì)胞的糖結(jié)合物表達(dá)。所述作用不必是對(duì)醫(yī)學(xué)疾病，除了令人滿意的醫(yī)學(xué)方面外，可以僅僅是在美容性或功能性方面。
這些作用對(duì)刺槐凝集素用于減輕和/或治療代謝性疾病也可能很有用。
代謝性疾病包括任何與身體代謝和/或是代謝結(jié)果有關(guān)的疾病，具體地說(shuō)是肥胖和與肥胖有關(guān)疾病如高血糖(II型糖尿病)、心血管疾病、中風(fēng)、胃腸和胃腸相關(guān)的疾病。代謝性疾病可能需要控制粘膜細(xì)胞的增殖，或者粘膜細(xì)胞增殖的控制可能與代謝性疾病無(wú)關(guān)。還包括非醫(yī)學(xué)性的純粹美容的減肥。
根據(jù)本發(fā)明，凝集素濃度越高，就可以更快地減輕和/或治療任何醫(yī)學(xué)疾病或其它非醫(yī)學(xué)癥狀。但是，正如本文所討論的，各方面因素可能影響凝集素劑量的優(yōu)選濃度。
本發(fā)明中刺槐凝集素可以是在天然組合物中的或從中純化的凝集素、化學(xué)合成的或通過(guò)重組技術(shù)產(chǎn)生的凝集素。該凝集素可以是修飾的凝集素或衍生物(天然或合成的)。用于生產(chǎn)凝集素的方法是本領(lǐng)域已知的，所述生產(chǎn)方法包括從天然來(lái)源中純化凝集素或用重組技術(shù)生產(chǎn)凝集素(Pusztai and Palmer，1977；Carvalho，1993以及美國(guó)專利4889842)。本發(fā)明凝集素優(yōu)選為“最初”分離的刺槐凝集素在功能上的等同物。任何刺槐凝集素的功能均可根據(jù)其附著特異糖結(jié)合物結(jié)構(gòu)的能力而確定。最優(yōu)選的是，如果一種多肽是任何已知刺槐凝集素的等同物(或下文定義的凝集素變體)，即在氨基酸水平或DNA序列水平有40％，優(yōu)選50％，優(yōu)選60％，更優(yōu)選70％，最優(yōu)80％或更高相同性，則該多肽就是本發(fā)明的刺槐凝集素，例如與圖1或2所列凝集素相比。
本文所述“凝集素變體”是指與天然凝集素基本上同源、但因一個(gè)或多個(gè)缺失、插入或替換而與天然凝集素(人、鼠或其它哺乳類物種)氨基酸序列不同的多肽。變體氨基酸序列優(yōu)選與天然凝集素氨基酸序列至少80％相同，最佳至少90％相同。相同性百分比可通過(guò)例如用Devereux等(Nucl.Acids Res.12387，1984)描述的GAP計(jì)算機(jī)程序6.0版比較序列信息而確定。GAP程序可從威斯康星大學(xué)遺傳學(xué)計(jì)算機(jī)研究組(UWGCG)得到。GAP程序采用Needleman和Wunsch(J.MoL BioL 48443，1970)提出、Smith和Waterman(Adv.Appl.Math 2482，1981)修改的對(duì)齊方式。
因?yàn)槟厥堑鞍踪|(zhì)，許多參數(shù)例如熱、酸、堿等，可明顯地將其去穩(wěn)定/變性。由于凝集素在本發(fā)明(整個(gè))中的用途需要其蛋白質(zhì)特性，因此在凝集素使用前或使用過(guò)程中(例如在胃的強(qiáng)酸條件和下段小腸的溫和堿性條件下)，所述凝集素不會(huì)被完全破壞或變性是很重要的。因此，首先需就用于本發(fā)明的刺槐凝集素在加工和/或施用過(guò)程中如何受到影響來(lái)表征所述凝集素。所述表征是標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，而且任何本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易完成。如果凝集素已經(jīng)經(jīng)任何方法被變性或去穩(wěn)定，則本發(fā)明任何方面所需的凝集素的濃度就會(huì)發(fā)生變化。
本文已提供的刺槐凝集素的濃度是以其沒(méi)有通過(guò)變性或去穩(wěn)定有效降低其活性的天然特性為基礎(chǔ)的。因此，所提供的凝集素的濃度不是絕對(duì)的，但反映了凝集素的活性。因此，其凝集素活性降低了一半但濃度加倍了的組合物與凝集素的量降低了一半但凝集素活性未改變的組合物是相同的。此外，例如通過(guò)在重組生產(chǎn)中的修飾和/或通過(guò)生產(chǎn)活性已提高的截短突變體，可以提高任何凝集素的活性。有關(guān)凝集素濃度對(duì)活性的考慮也同樣適用于活性提高了的凝集素。所有修飾的刺槐凝集素或其衍生物均被本發(fā)明所覆蓋，包括活性提高或降低的凝集素，還包括例如截短凝集素亞基和/或具有全部或修飾活性的不同糖基化的凝集素。本發(fā)明還包括含有任何凝集素之生物活性所涉及的一個(gè)或多個(gè)關(guān)鍵氨基酸(優(yōu)選所有這些氨基酸和所有生物活性)的蛋白質(zhì)序列。例如Nishiguchi等1997描述的RPA多肽b序列的活性區(qū)域，包括如下(氨基酸位置)天冬氨酸87，苯丙氨酸130，蘇氨酸215，亮氨酸217，絲氨酸218。
本發(fā)明第一方面的刺槐凝集素可以來(lái)源于刺槐植物的任何部分，優(yōu)選樹(shù)皮、種子、根、根瘤、韌皮部、木質(zhì)部或其兩種或多種情況的組合；或者是上述凝集素的等同物。根據(jù)本發(fā)明，刺槐凝集素可以包含僅一種多肽亞基。所述多肽亞基可以是本領(lǐng)域任何已知任何多肽亞基(如RPbA I(a或b)、RPbA II(c)、RPsA I或RPsA II、RPrA I或RPrA II)或其等同物，或者是還沒(méi)有鑒定的多肽亞基。優(yōu)選地，本發(fā)明第一方面的刺槐凝集素包含亞基的單體、二聚體、三聚體或四聚體或其兩種或多種的組合。這里允許模擬天然存在的多肽組合。所述單體、二聚體、三聚體和四聚體可由同種或一種以上聚合亞基組成。四聚體優(yōu)選由四個(gè)樹(shù)皮多肽a亞基，四個(gè)樹(shù)皮多肽b亞基或a、b亞基的中間混合物組成。所述凝集素多肽可包含或相應(yīng)于圖1或圖2列出的一種或多種氨基酸序列，優(yōu)選至少40、50、60、70、80、90、100％同源(如上所述凝集素變體)。
本發(fā)明的第二方面提供了分離的同型四聚體、同型三聚體、同型二聚體或單亞基刺槐凝集素，優(yōu)選純化至60％或更高水平。本文中，“純化的”是指基本上無(wú)雜質(zhì)。在藥物組合物和醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用優(yōu)選此純度的凝集素。刺槐凝集素優(yōu)選純化至70％，80％，90％或更高水平，最佳為95％，99％或100％。上述本發(fā)明第一方面的優(yōu)選特征也適用于本發(fā)明的第二方面。
本發(fā)明的第三方面提供了包含優(yōu)選純度60％(優(yōu)選70，80，90，95或100％)的剌槐凝集素或者根據(jù)本發(fā)明第二方面的RPA凝集素并結(jié)合可藥用賦形劑的組合物。優(yōu)選地，此組合物是一種包含可藥用賦形劑的藥物組合物。適宜的賦形劑包括藥物級(jí)淀粉、明膠、油、糖、乙醇或水(優(yōu)選無(wú)菌)。此組合物可以是一種混合給藥制劑，或?yàn)橥瑫r(shí)、分開(kāi)或依次使用(或給藥)的組合制品。在組合制品中，所述凝集素和任何其它成分可分開(kāi)、以任何順序給藥。上述本發(fā)明第一和第二方面的特征和優(yōu)選特征也適用于本發(fā)明第三方面。特別地，如上文所述，此組合物可由刺槐凝集素聯(lián)合細(xì)胞保護(hù)劑組成。
本發(fā)明第四方面提供了制備根據(jù)本發(fā)明第三方面之組合物的方法，所述方法包括將所述凝集素與可藥用賦形劑混合。第四方面的優(yōu)選特征同第一到第三方面所述。
本發(fā)明第五方面提供了刺槐凝集素在制備藥物中的用途，所述藥物用于控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療細(xì)胞損傷劑造成的損傷、減輕和/或治療代謝性疾病或其組合。本發(fā)明第一至第四方面的特征和優(yōu)選特征也適用于第五方面。
本發(fā)明第六方面提供了在需要的患者中控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療細(xì)胞損傷劑造成的損傷、減輕和/或治療代謝性疾病或其組合的治療方法，所述方法包括給患者施用有效量的刺槐凝集素。本發(fā)明第一至第五方面的特征和優(yōu)選特征也適用于第六方面。具體地，將要、正在或已經(jīng)經(jīng)歷放療和/或化療的尤其是正患有癌癥的患者被認(rèn)為需要這種方法的治療。
本發(fā)明第七方面提供了含有刺槐凝集素的食物或食物添加劑。所述食物和/或食物添加劑具有本發(fā)明第一方面的用途。所述食物和/或食物添加劑可有助于非醫(yī)學(xué)目的的體重減輕。所述食物和/或食物添加劑適用于任何動(dòng)物，包括人。
根據(jù)本發(fā)明第七方面的食物或食物添加劑優(yōu)選用于2到5天的期間，或一個(gè)不確定(長(zhǎng)期)期間。上述本發(fā)明第一至第六方面的特征也適用于第七方面。所述食物或食物添加劑優(yōu)選含有總量達(dá)0.3g/kg體重/天、優(yōu)選0.2g/kg體重/天的凝集素。所述凝集素至少一些應(yīng)來(lái)自于刺槐(優(yōu)選占此食物或食物添加劑凝集素含量的1％至100％)。如上所述，刺槐凝集素可以是本發(fā)明第一方面的任何一種凝集素，或者其兩種或多種凝集素的組合。這種食物或食物添加劑在醫(yī)學(xué)中，尤其在控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療細(xì)胞損傷劑造成的損傷、減輕和/或治療代謝性疾病、或以上兩種或多種方面的組合中非常有用。
在接著供給一段時(shí)期的高質(zhì)量食物時(shí)，本發(fā)明第七方面的食物和/或食物添加劑是特別有用的。根據(jù)本發(fā)明，可將高質(zhì)量食物定義為可提供動(dòng)物正常生長(zhǎng)所需的所有必需蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、礦物質(zhì)和維生素的食物。高質(zhì)量食物的必需成分優(yōu)選是最佳比例的。高質(zhì)量食物不應(yīng)含有會(huì)延緩或抑制動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的任何成分。高質(zhì)量食物的優(yōu)選特征是被攝入的食物可完全轉(zhuǎn)化成瘦體重。
在本發(fā)明第七方面的凝集素食物和/或食物添加劑后，優(yōu)選立即或相隔很短的時(shí)間(最多2天)就繼續(xù)供給所述高質(zhì)量食物。所述高質(zhì)量食物對(duì)于達(dá)7天的期間來(lái)說(shuō)是最有用的，對(duì)于達(dá)5天的期間也是有利的。所述食物和/或食物添加劑還可用于長(zhǎng)期(一個(gè)月以上，優(yōu)選一年以上)治療代謝性疾病和美容目的的體重減輕。
當(dāng)與細(xì)胞損傷劑聯(lián)用時(shí)(盡管不需同時(shí)給藥)，最好將飲食中供給凝集素的部分限于達(dá)5天的時(shí)間，因?yàn)?8-72小時(shí)通常不足以完成一個(gè)完整的腸更新循環(huán)并由此在所述食物的控制供食部分產(chǎn)生較高的營(yíng)養(yǎng)吸收和利用率。最好將所述循環(huán)的高質(zhì)量供食部分限于約5天的時(shí)間以便對(duì)食物轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)生最大的提高。
優(yōu)選將包括供給刺槐凝集素時(shí)期、然后是供給高質(zhì)量食物時(shí)期的食物和/或食物添加劑重復(fù)至少兩次以形成周期性的飲食?？蓪⑺鲲嬍持芷谥貜?fù)達(dá)20次，優(yōu)選達(dá)10次，最佳達(dá)6次。
所述周期性的飲食提供了由刺槐凝集素施用介導(dǎo)的暫時(shí)的營(yíng)養(yǎng)攝入效率增加。因此，含凝集素和不含凝集素食物的周期性供給，可使?fàn)I養(yǎng)依賴性狀態(tài)提高。例如，通過(guò)適宜食物的定時(shí)供給，運(yùn)動(dòng)員可優(yōu)化主要項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)能力。
在用輻射和/或化療進(jìn)行治療前或之后，本發(fā)明第七方面的食物和/或食物添加劑是特別有用的。在這種情形中，當(dāng)與細(xì)胞保護(hù)劑，例如本發(fā)明第一方面所述的那些聯(lián)用時(shí)，所述食物甚至更有效。第一至第六方面的特征和優(yōu)選特征也可適用于第七方面。
本發(fā)明第八方面提供了制備上述本發(fā)明第二、第四和第七方面的產(chǎn)品的方法。根據(jù)本發(fā)明第二方面的純化凝集素的制備包括從刺槐(例如從植物或組織培養(yǎng)物)中分離和純化刺槐凝集素，或者合成制備(如通過(guò)重組技術(shù))。根據(jù)第四方面的組合物的制備包括結(jié)合所述凝集素和用于該組合物的任何一種或多種成分。所述食物和/或食物添加劑的制備包括刺槐凝集素的獲得和選擇性地與用于食物和/或食物添加劑的任何一種或多種成分結(jié)合。本發(fā)明一至七方面的優(yōu)選特征也適用于第八方面。
對(duì)于可能涉及醫(yī)學(xué)或給生物學(xué)組織給藥的本發(fā)明每一方面，具體劑量方案由主治醫(yī)生最終確定并考慮下列因素，例如所使用的凝集素、動(dòng)物類型、年齡、體重、癥狀嚴(yán)重程度和/或正在或?qū)⑹┯玫闹委煼椒ǖ膰?yán)重性、給藥方法、不利反應(yīng)和/或其它禁忌癥等。具體確定的劑量范圍可根據(jù)被完全監(jiān)測(cè)之患者的疾病發(fā)展和恢復(fù)情況，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)來(lái)確定。所述試驗(yàn)可使用逐步升高的劑量方案，所述方案以動(dòng)物中最大耐受劑量的低百分?jǐn)?shù)作為人中的開(kāi)始劑量?？梢詮脑诒疚脑囼?yàn)部分給出的結(jié)果并通過(guò)已經(jīng)外推至人的下列范圍得出有關(guān)劑量范圍的初步指導(dǎo)。
適宜的上限可以是高達(dá)約0.3g/kg體重/天的凝集素濃度。0.3g/kg體重/天的濃度可能會(huì)使患者發(fā)生胃腸道不適，但對(duì)于所述患者從疾病例如癌癥中存活下來(lái)的機(jī)會(huì)提高來(lái)說(shuō)，這些癥狀是可接受的。適宜的下限可以是0.0001mg(0.1μg)/kg體重/天左右的凝集素。優(yōu)選的中間劑量濃度包括存在高達(dá)約0.2g、0.15g和0.05g/kg體重/天的凝集素，此后，存在濃度約1mg、0.5mg、0.1mg、0.01mg和0.005mg/kg體重/天的凝集素。
本發(fā)明所有方面的藥物均可用于提供在每天的一次或多次“攝取”(“攝取”包括任何形式的給藥并描述劑量單位)中所需的凝集素濃度。本發(fā)明的某些方面適于一次攝入高濃度凝集素，而其他方面適于在同一時(shí)期內(nèi)以均勻的或不均勻的間隔多次攝入，但是每次攝入較低濃度的凝集素。
可將用于本發(fā)明任何藥物(包括藥物的制備)的凝集素與適宜的藥物載體和/或賦形劑結(jié)合。所述載體和賦形劑是本領(lǐng)域熟知的(例如藥物賦形劑手冊(cè)(Handbook of PharmaceuticalExcipients)(1994)第二版，A.Wade/P.J.Weller編，藥物出版社，美國(guó)藥物協(xié)會(huì)(The Pharmaceutical Press，American PharmaceuticalAssociation))。根據(jù)本發(fā)明，特別有用的是使用以結(jié)腸藥物傳遞系統(tǒng)、漱口劑、乳膏劑、糊劑或膠囊劑配制的組合物和/或藥物。
根據(jù)本發(fā)明任何方面制備的藥物，盡管也可以將藥物通過(guò)胃腸外途徑或靜脈內(nèi)途徑給藥，但優(yōu)選通過(guò)口、鼻(如通過(guò)鼻內(nèi)噴霧)或直腸(對(duì)于消化道的一個(gè)或多個(gè)部分的方便的途徑)給藥。
現(xiàn)在通過(guò)如下實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例從刺槐樹(shù)皮制備凝集素刺槐屬樹(shù)皮凝集素可基本上按Van Damme等(1995a)所述從固定化胎球蛋白上的部分純化的樹(shù)皮提取物中制備。
將樹(shù)皮組織用混和器在含有200mg/l抗壞血酸的20mM乙酸(10ml/g鮮重)中勻漿。勻漿液通過(guò)粗棉布(cheesecloth)榨出，(用1MNaOH)調(diào)節(jié)pH值至5.0，于10,000g離心10分鐘。所得上清液通過(guò)玻璃棉過(guò)濾去除漂浮顆粒。提取物中加1.5g/l CaCl2后，(用1MNaOH)調(diào)節(jié)pH值至9.0，放置在4℃過(guò)夜。離心除去所得沉淀，澄清的提取物用1M HCl調(diào)節(jié)pH值至3.8。再次于4℃放置過(guò)夜后，將提取物離心澄清，用1M NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0，加硫酸銨固體鹽至1M。然后將所得溶液脫氣并再次離心。將澄清的上清液上樣至1M硫酸銨(pH7.0)平衡過(guò)的胎球蛋白瓊脂糖柱上。提取物通過(guò)后，用硫酸銨洗柱至A280降至0.01以下。然后用20mM二氨基丙烷(pH11)解吸凝集素。解吸之凝集素用1M HCl調(diào)節(jié)pH值至7.0，加硫酸銨固體鹽至1M。于15,000g離心20分鐘后，將上清液上樣至1M硫酸銨(pH7.0)平衡過(guò)的苯基Sepharose柱上。用1M硫酸銨洗脫除去雜質(zhì)，用從1M硫酸銨到水的線性梯度解吸凝集素。收集各餾分，根據(jù)測(cè)得的A280確定含有凝集素的餾分。
已知刺槐隨著日長(zhǎng)的縮短即冬天開(kāi)始而產(chǎn)生樹(shù)皮凝集素。通過(guò)使用冬天的樹(shù)皮材料，可以得到大約10mg/g的凝集素產(chǎn)量。
A4和B4RPA樹(shù)皮凝集素同種型的制備A4和B4同型四聚體同種型可采用分級(jí)梯度離子交換層析法制備。100ml的Hyper-D S柱(BioSepra)用5倍柱體積50mM乙酸鈉(pH4.75)平衡。將冷凍干燥的RPA(按上述制備所述得到)溶解在乙酸緩沖液(50mM乙酸鈉，pH4.75)中，于20,000g離心10分鐘。將澄清的上清液上樣于上述層析柱，接著用乙酸緩沖液以3ml/min的流速洗脫。用50mM乙酸鈉(pH4.75)+NaCl構(gòu)建分級(jí)梯度。以遞增濃度加入NaCl至5、7、9、12和100％的分級(jí)梯度。通過(guò)測(cè)量280nM的吸光度來(lái)選擇含有凝集素的餾分。A4四聚體洗脫在5.7％NaCl的餾分中，而B(niǎo)4四聚體洗脫在9-12％NaCl的餾分中。
用傳統(tǒng)PAGE和SDS-PAGE方法進(jìn)一步確認(rèn)了含有純A4或B4的餾分。
刺槐樹(shù)皮凝集素的特性分析刺槐樹(shù)皮凝集素可用離子交換層析、凝膠過(guò)濾和體外細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步進(jìn)行特性分析。這些方法是本領(lǐng)域熟知的并在Van Damme等1995a和b有描述。
動(dòng)物處理35只年輕雄性Hooded Lister(Rowett系)大鼠(出生19天，重30-40克)各個(gè)單獨(dú)安置在網(wǎng)格底籠子中。給它們飼喂含10％乳白蛋白的高質(zhì)量半合成食物(表1)。
表1.食物組成(g/kg食物)玉米淀粉 373馬鈴薯淀粉 100葡萄糖 150玉米油 150維生素混合物 50礦物質(zhì)混合物 50乳白蛋白 127硅酸 0.4
有關(guān)維生素和礦物質(zhì)混合物的組成見(jiàn)Carvalho(1992)。
除第19天所給食物量限制到10g/只大鼠外，其它所有時(shí)間自由供給食物和水。第19天大鼠體重為100-104克。
施用RPA預(yù)先施用RPA的動(dòng)物用管飼法給予相當(dāng)于25、50或100mg/kg體重的溶于0.9％生理鹽水中的RPA(表2)。這些動(dòng)物在注射5-氟尿嘧啶之前預(yù)先連續(xù)施用3天。
施用生理鹽水不預(yù)先施用RPA的動(dòng)物用管飼法施用1ml 0.9％生理鹽水。
施用5-FU將300毫克5-氟尿嘧啶(5-FU)在14毫升蒸餾水中攪拌。緩慢加入1M氫氧化鈉直到5-FU溶解。將溶液配成20毫升的終體積。所述溶液的最終pH為8.3。通過(guò)腹腔內(nèi)注射，按150mg/kg體重的劑量施用給動(dòng)物。注射后，立即給大鼠提供15克的對(duì)照食物。
口服刺槐凝集素保護(hù)大鼠免于高劑量化療危害的能力，特別是其對(duì)腸的組織保護(hù)作用對(duì)5組、每組5只大鼠喂給含乳白蛋白的標(biāo)準(zhǔn)食物(表1)。一組大鼠每天喂給8克標(biāo)準(zhǔn)食物，持續(xù)3天，然后按150mg/kg體重注射5-FU(表2)。
表2 食物方案處理 食物方案1 LA3天，注射5-FU，LA6天2 25mg/kg RPA3天，注射5-FU，LA6天3 50mg/kg RPA3天，注射5-FU，LA6天4 100mg/kg RPA3天，注射5-FU，LA6天5 100mg/kg RPA3天，LA6天關(guān)鍵詞LA＝乳白蛋白R(shí)PA＝刺槐凝集素5-FU＝5-氟尿嘧啶所述大鼠頭三天配對(duì)飼喂，注射5-FU之后無(wú)限制飼喂。
三組動(dòng)物用管飼法喂給25、50或100mg/kg體重/天的刺槐凝集素(RPA)3天，然后在第4天注射150mg/kg的5-FU。剩下的一組動(dòng)物預(yù)先施用100mg/kg體重的RPA，然后回到喂給含乳白蛋白的食物，而不注射5-FU。注射5-FU后，所述動(dòng)物回到無(wú)限制地喂給含乳白蛋白的食物。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始7天后將動(dòng)物殺死，解剖尸體，記錄小腸、空腸和回腸的鮮重。結(jié)果顯示在表3。
表3.預(yù)先施用刺槐凝集素3天對(duì)小腸、空腸和回腸之鮮重的影響(克)處理劑量方案 小腸(克) 空腸(克) 回腸(克)1 LA+5-FU 5.62 1.0 1.02 25mg/kg RPA+5-FU 5.41 1.03 0.983 50mg/kg RPA+5-FU 5.74 1.12 1.084 100mg/kgRPA+5-FU 6.33 1.27 1.125 100mg/kg RPA 6.99 1.27 1.17
結(jié)果表明隨著RPA劑量的增加所有檢測(cè)組織的鮮重均呈劑量依賴性增加。因此，預(yù)施用RPA能保護(hù)小腸、空腸和回腸的組織免受5-FU引起的損傷。與僅飼喂乳白蛋白的動(dòng)物(處理1)相比，預(yù)施用100mg/kg的RPA(處理4)產(chǎn)生了最佳組織保護(hù)作用。預(yù)施用100mg/kg的RPA并注射5-FU的動(dòng)物(處理4)與僅飼喂100mg/kg RPA的動(dòng)物(處理5)有類似的小腸、空腸和回腸鮮重。
對(duì)小腸、空腸和回腸的視診表明僅用5-FU處理的動(dòng)物(處理1)其腸組織上沒(méi)有或只有非常薄的粘膜層。而用5-FU和RPA處理的動(dòng)物其腸組織狀態(tài)健康，有正常的粘膜層。
本實(shí)施例說(shuō)明在注射5-FU之前口服刺槐凝集素(RPA)對(duì)小腸、空腸和回腸產(chǎn)生了顯著的組織保護(hù)作用。
口服刺槐同型四聚體凝集素A4和B4保護(hù)大鼠免干高劑量化療危害的能力，特別是其對(duì)腸的組織保護(hù)作用對(duì)5組、每組5只大鼠喂給含乳白蛋白的標(biāo)準(zhǔn)食物(表1)并按下列食物方案(表4)飼喂。
表4.食物方案處理 食物方案1 LA7天2 LA3天，注射5-FU，LA4天3 200mg/kg A4同型四聚體3天，注射5-FU，LA4天4 200mg/kg B4同型四聚體3天，注射5-FU，LA4天一組動(dòng)物(處理1)全過(guò)程均喂給標(biāo)準(zhǔn)食物。第2組用管飼法每天施用生理鹽水，持續(xù)3天，然后按150mg/kg體重注射5-FU(處理2)。剩下兩組(處理3和4)動(dòng)物用管飼法每天喂給A4或B4RPA同型四聚體，持續(xù)3天，然后按150mg/kg體重注射5-FU。注射5-FU之后，處理2-4組動(dòng)物回到飼喂無(wú)限制的標(biāo)準(zhǔn)食物，持續(xù)4天。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始7天后殺死動(dòng)物，解剖尸體并記錄小腸、空腸和回腸干重。結(jié)果顯示于表5。
表5.預(yù)施用刺槐A4或B4同型四聚體凝集素3天對(duì)小腸、空腸和回腸干重(毫克)的影響處理 施藥方案 小腸空腸回腸(毫克) (毫克) (毫克)1LA2531 519 4152LA+5-FU 1789 336 4053200mg/kg A42597 632 4214200mg/kg B42093 439 419所有干重均以100克干體重標(biāo)準(zhǔn)化。
結(jié)果表明用5-FU處理對(duì)小腸特別是空腸有很大影響。用5-FU處理的動(dòng)物比未處理的對(duì)照(處理1和2)其組織干重顯著減少。而用A4或B4同型四聚體凝集素預(yù)處理產(chǎn)生了顯著的組織保護(hù)作用(處理3和4)。特別地，用A4同型四聚體凝集素處理的動(dòng)物其組織干重和未處理動(dòng)物基本上相同。
對(duì)小腸、空腸和回腸的視診表明僅用5-FU處理的動(dòng)物其腸組織粘膜大面積損傷，但用A4或B4同型四聚體凝集素處理的動(dòng)物基本上具有正常狀態(tài)的粘膜層。
本實(shí)施例說(shuō)明刺槐A4和B4同型四聚體凝集素在注射5-FU之前施用均能產(chǎn)生對(duì)腸的顯著保護(hù)作用。
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權(quán)利要求
1.具有醫(yī)學(xué)用途的刺槐凝集素。
2.權(quán)利要求1的刺槐凝集素，其中所述用途是為了控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療由細(xì)胞損傷劑造成的損傷、減輕和/或治療代謝性疾病或其兩種或多種方面的組合。
3.權(quán)利要求2的刺槐凝集素，其中所述用途是為了控制或減輕和/或治療粘膜炎。
4.權(quán)利要求1至3之任一項(xiàng)的刺槐凝集素，其用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞和/或組織，特別是人細(xì)胞和/或組織。
5.權(quán)利要求4的刺槐凝集素，其中所述細(xì)胞和/或組織是粘膜細(xì)胞，包括粘膜層。
6.權(quán)利要求1至5之任一項(xiàng)的刺槐凝集素，其包含樹(shù)皮、種子、根、根瘤、韌皮部、木質(zhì)部或葉的凝集素，或其兩種或多種的組合。
7.權(quán)利要求1至6之任一項(xiàng)的刺槐凝集素，其包含至少一種來(lái)自任何刺槐凝集素的多肽亞基。
8.權(quán)利要求1至7之任一項(xiàng)的刺槐凝集素，其包含凝集素亞基的二聚體、三聚體或四聚體，或其兩種或多種的組合。
9.權(quán)利要求8的刺槐凝集素，其包含由4個(gè)樹(shù)皮多肽a亞基或4個(gè)樹(shù)皮多肽b亞基或樹(shù)皮a和b亞基的混合物組成的四聚體。
10.刺槐凝集素，其包含同型四聚體、同型三聚體、同型二聚體或單亞基，純化至60％或以上水平。
11.權(quán)利要求10的剌槐凝集素，其包含樹(shù)皮亞基a或b。
12.含有優(yōu)選純化至60％或以上水平的或者按權(quán)利要求10或11的刺槐凝集素的組合物。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述組合物包含可藥用賦形劑。
14.用作藥物的權(quán)利要求12或13的組合物。
15.權(quán)利要求13或14的組合物的生產(chǎn)方法，所述方法包括混合所述凝集素和可藥用賦形劑。
16.刺槐凝集素在制備用于控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療由細(xì)胞損傷劑造成的損傷、減輕和/或治療代謝性疾病或其組合的藥物中的用途。
17.權(quán)利要求16的刺槐凝集素的用途，其中所述用途是用于控制或減輕和/或治療粘膜炎。
18.權(quán)利要求16或17的用途，其中所述刺槐凝集素包含樹(shù)皮、種子、根、根瘤、韌皮部、木質(zhì)部、葉凝集素或其兩種或多種的組合。
19.權(quán)利要求16至18之任一項(xiàng)的用途，其中所述凝集素包含亞基的二聚體、三聚體或四聚體，或其兩種或多種的組合。
20.權(quán)利要求20的用途，其中所述凝集素含有一種同聚多肽。
21.權(quán)利要求16至21之任一項(xiàng)的用途，其中所述凝集素是樹(shù)皮亞基a或b的同型四聚體。
22.權(quán)利要求16至21之任一項(xiàng)的用途，其中所述凝集素是權(quán)利要求10至11之任一項(xiàng)的凝集素，或權(quán)利要求12至14之任一項(xiàng)的組合物。
23.一種在需要的患者中控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療由細(xì)胞損傷劑造成的損傷、減輕和/或治療代謝性疾病或其組合的方法，所述方法包括給個(gè)體施用有效量的刺槐凝集素。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述患者患有或可能會(huì)患有粘膜炎。
25.權(quán)利要求24或25的方法，其中所述患者正在接受或?qū)⒁邮芗?xì)胞損傷劑治療。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述患者患有癌癥。
27.權(quán)利要求23至26之任一項(xiàng)的方法，其中所述刺槐凝集素是權(quán)利要求1至14之任一項(xiàng)的凝集素。
28.一種含有刺槐凝集素的食物或食物添加劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于醫(yī)藥方面的刺槐(Robinia pseudoacacia,RPA)凝集素,涉及分離的刺槐凝集素同聚多肽,涉及含有刺槐凝集素的組合物,涉及刺槐凝集素在制備用于減輕和/或治療疾病之藥物中的用途,涉及控制、減輕和/或治療疾病的方法,還涉及含有刺槐凝集素的食物或食物添加劑。
文檔編號(hào)A61K38/16GK1273533SQ9880988
公開(kāi)日2000年11月15日 申請(qǐng)日期1998年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月29日
發(fā)明者A·J·普茲泰, Z·M·巴爾多茲, R·M·J·帕爾莫, N·W·費(fèi)史 申請(qǐng)人:阿利茨默治療學(xué)有限公司