專利名稱：：2－氨基1,2,3,4－四氫化萘、其制備方法及其預(yù)防和治療炎癥和/或自身免疫性疾病的藥...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及2-氨基1，2，3，4-四氫化萘衍生物及其藥用鹽、其制備方法以及適于預(yù)防和治療濃毒性休克及治療炎癥和/或自身免疫性疾病的藥物組合物，其更好的定義如下，其中炎性細(xì)胞因子的發(fā)病機(jī)理已被充分認(rèn)識(shí)。對(duì)膿毒性休克有治療活性的6，7-取代的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘是已知的。EP-A-0730861(將其引入作為參考)描述了一類6，7-取代的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘，特別是化合物(R，S)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘(ST626)。用本發(fā)明描述的組合物治療的炎癥和/或自身免疫性疾病為，例如，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰腺炎、炎性腸道疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球性腎炎及腦脊髓炎。下文中，只參照膿毒性休克，應(yīng)理解由炎性細(xì)胞因子所致的其它疾病也可按照本發(fā)明有效地治療。膿毒性休克是極其嚴(yán)重的臨床癥狀，感染可導(dǎo)致其發(fā)作，該感染主要由革蘭氏陰性或革蘭氏陽性細(xì)菌、原生動(dòng)物或病毒引起，且其特征為白細(xì)胞增多、發(fā)燒、心動(dòng)過速、低血壓及腎、呼吸系統(tǒng)、心臟和肝功能不全。但是，應(yīng)強(qiáng)調(diào)膿毒性休克的嚴(yán)重性不依賴于引起綜合征的微生物類型(ParrilloJ.E.，Pathogeneticmechanismsofsepticshock，NEnglJMed，3281471-1477，1993)，而是與對(duì)造成毒性后果的抗原的個(gè)體炎癥反應(yīng)有關(guān)。盡管在過去幾年中抗生素治療和特護(hù)方案的介入顯著改進(jìn)，但是休克是住院患者發(fā)病率和死亡率的主要原因。估計(jì)在美國(guó)其每年引起約100000例死亡(GlauserM.P.，ZanettiG.，BaumgartnerJ.D.和CohenJ.，SepticShockPathogenesis，Lancet，338732-736，1991)。膿毒性休克的首要決定因素和特征是機(jī)體對(duì)細(xì)胞溶解或微生物代謝產(chǎn)物的反應(yīng)。這些物質(zhì)中第一個(gè)被鑒定的且是在實(shí)驗(yàn)研究中最常使用的是脂多糖(LPS)，一種革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的組分，從化學(xué)角度講，存在隨細(xì)菌種類不同而改變的多糖部分以及不變的脂部分(脂A)，并以微膠粒的形式存在于敗血癥患者的血液中。如果給動(dòng)物使用LPS，可重現(xiàn)休克中發(fā)生的所有心血管循環(huán)和神經(jīng)癥狀(OlsonC.，SalzerW.L.，McCallC.E.，Biochemical，Physiologicalandclinicalaspectsofendotoxaemia，MolecAspectsMed，10511-629，1988)。因此，將其鑒定為級(jí)聯(lián)反應(yīng)的原動(dòng)力，其通過激活凝血級(jí)聯(lián)的內(nèi)在和外在途徑并分泌細(xì)胞因子導(dǎo)致臨床癥狀的產(chǎn)生，其中細(xì)胞因子主要來源于巨噬細(xì)胞，例如，TNF、IL-1和INF-γ(BoneR.C.，Acriticalevaluationofnewagentsforthetreatmentofsepsis，J.Am.Med.Ass.，2661686-1691，1991)。在過去的幾年中對(duì)此癥狀愈加重視，其嚴(yán)重性和現(xiàn)有的不適當(dāng)?shù)闹委熓侄未偈谷藗兗铀匍_發(fā)能有效抗此疾病惡化的治療劑，并將此作為迫在眉睫的目標(biāo)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，一類新的6，7-取代的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘在預(yù)防和治療上述疾病中具有有效的活性。本發(fā)明的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘可以是如下通式(I)的游離堿以及如下通式(II)的藥用鹽其中R和R1獨(dú)立地為鹵素，特別是氟；羥基；C1-C4烷氧基，特別是甲氧基，在ω位選擇性被基團(tuán)OH、NH2、NR3R4取代，其中R3和R4獨(dú)立地是H、C1-C4烷基，它們未取代或在ω位被基團(tuán)OH、NH2取代；C1-C4烷酰基，特別是乙?；籆1-C4烷基；氨基甲?；?；氨基甲?；趸?；氨基；被NR3R4取代的氨基，其中R3和R4定義如上；R2是氫原子；鹵素，特別是氟；羥基；甲氧基，其條件是排除(a)R＝R1＝CH3O；OH；R2＝H；或(b)R＝F；R1＝CH3O；OH；R2＝H的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘是外消旋體的情況；而X-是藥用酸的單價(jià)陰離子。式(II)化合物的藥用鹽指其與不產(chǎn)生不利的毒性或副作用的酸形成的任何鹽。這些酸是藥劑師和藥學(xué)劑藥物學(xué)技術(shù)人員熟知的。這些鹽的非限制性實(shí)例為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乳清酸鹽、酸式天門冬氨酸鹽、酸式枸櫞酸鹽、酸式磷酸鹽、富馬酸鹽及酸式富馬酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽和酸式馬來酸鹽、酸式草酸鹽、酸式硫酸鹽、葡萄糖磷酸鹽、酒石酸鹽和酸式酒石酸鹽。FDA允許的鹽列于IntJPharm33(1986)，201-217，將其引入作為參考。本發(fā)明優(yōu)選的特定化合物的實(shí)例為S(-)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1237)；R(+)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1238)；(R，S)-2-氨基-5，6-二氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1269)；(R，S)-2-氨基-6-氟-7-甲基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1275)；(R，S)-2-氨基-7-氟-6-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1267)；(R，S)-7-乙酰基-2-氨基-6-甲基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1274)；(R，S)-2-氨基-7-氟-6-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1262)。作為游離堿或藥用鹽描述于此的本發(fā)明化合物的制備方法見如下反應(yīng)方案反應(yīng)方案1反應(yīng)方案2對(duì)于上述反應(yīng)方案，下列實(shí)施例，其中X＝Cl-，非限制性地舉例說明了本發(fā)明。實(shí)施例1(方案1)制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1237)8aa)制備S(-)-三氟乙?；?天門冬氨酸酐1a將L-天門冬氨酸(100g，0.75mol)懸浮于三氟乙酸(300ml)中，將所得懸浮液攪拌并在冰/鹽浴中冷卻至-20℃。攪拌下緩慢加入三氟乙酸酐(300ml，2.16mol)。加畢，將所得混合物在45℃小心地回流過夜。反應(yīng)完全后，將此溶液在蒸發(fā)器中蒸干并攪拌下用己烷將固體殘余物洗滌三次，每次通過傾析除去己烷；再將此殘余物徹底干燥。最后，攪拌下用己烷-乙醚研磨此殘余物，將所得混合物過濾并將此殘余物真空干燥。得到150g化合物1a(收率95％)。M.P.140-142℃[α]D＝-40.7(c＝1％甲醇)1H-NMR(DMSOd6)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)2,85-3,3(2H，m，CH2)；4,95-5,1(1H，m，CHNH)；9,6-9,8(1H，bd，CHNHCOCF3).b)制備S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸3a將S(-)-三氟乙酰基天門冬氨酸酐(150g，0.712mol)懸浮于2-氟苯甲醚(300ml，2.67mol)中，劇烈攪拌所得混合物，然后以小批量緩慢加入無水氯化鋁(240g，1.57mol)。加畢，將此混合物在40-45℃下劇烈攪拌24小時(shí)。加入無水二氯甲烷并再加入60g三氯化鋁，并將此反應(yīng)混合物再攪拌48小時(shí)。然后，用1升二氯甲烷攪拌下通過研磨處理此固體殘余物。分離出含過量氟代苯甲醚的二氯甲烷。濾出固體殘余物并劇烈攪拌下將其分批加入到2升6M鹽酸中。加畢，將此混合物攪拌30分鐘。然后再用乙醚萃取此酸相。用水洗滌合并的醚相，用無水硫酸鈉干燥，然后蒸干。得到固體粗品，將其用1∶1乙酸乙酯/己烷結(jié)晶。得到188g化合物3a(收率78％)。M.P.113-115℃[α]D＝+27.5(c＝1％甲醇)1H-NMR(CD3OD)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)3,6(2H，m，CH2NH)；3,96(3H，S，PhOCH3)；4,88-5,01(1H，m，CH2CHNH)；7,18-7,22(1H，t，Ar)；7,7-7,8(1H，dd，Ar)；7,82-7,9(1H，bd，Ar).c)制備S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸4a將化合物3a(100g，0.297mol)溶解于三氟乙酸(500ml)中。將所得溶液冷卻至0℃并慢慢加入三乙基硅烷(300ml，1.89mol)。加畢，將此混合物慢慢加熱至其沸點(diǎn)，并在此沸點(diǎn)保持4小時(shí)。然后，在蒸發(fā)器中將此混合物徹底蒸干；用乙醚將此殘余物洗滌二次，每次將此混合物蒸干以徹底除去三氟乙酸。將所得油狀殘余物在冰/鹽浴中冷卻至-20℃，并攪拌下再用飽和碳酸氫鈉溶液處理，該碳酸氫鈉溶液已用4N氫氧化鈉將其pH調(diào)節(jié)至10。在0℃，用6N鹽酸將最終的堿相小心地酸化至pH3。得到沉淀，用二氯甲烷反復(fù)萃取此沉淀。用小量的水洗滌合并的有機(jī)萃取物，用無水硫酸鈉干燥并蒸干。將此油狀殘余物溶解于少量乙酸乙酯中并攪拌下用己烷沉淀。將此混合物攪拌下保持過夜，過濾并將此殘余物干燥。得到72g化合物4a(收率75％)。M.P.113-115℃[α]D＝+11.3(c＝1％甲醇)分析與標(biāo)準(zhǔn)相符。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)2,0-2,18(1H，m，CHHCHNH)；2,22-2,36(1H，m，CHHCHNH)；2,6-2,7(2H，t，PhCH2CH2)；3,84(3H，S，PhOCH3)；4,6-4,7(1H，m，CH2CHNH)；6,78(1H，bd，CHNHCOCF3)；6,8-6,92(2H，m，Ar).d)制備S(-)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1-四氫萘酮5a將化合物4a(70g，0.217mol)溶解于無水二氯甲烷(1400ml)中。將所得混合物在冰浴中冷卻至0℃，然后慢慢加入五氯化磷(70g，0.336mol)。加畢，將此混合物在0℃下攪拌約2小時(shí)，然后冷卻至-20℃。向此混合物中以小批量加入氯化鋁(56g，0.42mol)。加畢，將此混合物室溫下保持2小時(shí)，然后小心地加熱至沸點(diǎn)，并在沸點(diǎn)保持6小時(shí)。然后將此混合物冷卻至0℃，并在攪拌下分批加入碎冰(約300ml)以破壞過量的反應(yīng)物。用二氯甲烷將此混合物萃取三次。將此合并的有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥并蒸干。得到黃色固體，將其溶解于少量乙酸乙酯中，然后用己烷沉淀。得到40g化合物5a(收率60％)。M.P.184-185℃[α]D＝-55.4(c＝1％甲醇)1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，(p.p.m.)1,83-2,2(1H，m，CHHCHNH)；2,8-2,88(1H，m，CHHCHNH)；2,9-3,0(1H，mCHHCH2)；3,15-2,26(1H，m，CHHCH2)；3,92(3H，S，PhOCH3)；4,53-4,62(1H，m，CH2CHNHCOCF3)；6,88(1H，d，Ar.)；7,57(1H，d，Ar.)；7,43(1H，bs，CHNHCOCF3).e)制備S(-)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫化萘6a在0℃，將化合物5a(40g，0.131mol)懸浮于三氟化硼醚合物(340ml)中。向此懸浮液中在0℃下加入三乙基硅烷(90ml，0.567mol)，并室溫下將此懸浮液攪拌4天。反應(yīng)完畢后，向此反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉溶液(pH8-9)，并用二氯甲烷四次萃取水相。用水洗滌合并的有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，過量并蒸干。所得粗品化合物用異丙醚重結(jié)晶。得到30g化合物6a(收率78％)。M.P.45-47℃[α]D＝-80(c＝1％甲醇)1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(.p.m.)1,78-1,9(1H，m，CHHCNNH)；2,0-2,15(1H，m，CHHCHNH)；2,6-2,72(1H，dd，PhCHHCHNH)；2,73-2,9(2H，m，PhCHHCHNH，PhCHHCH2)；3,03-3,15(1H，dd，PhCHHCH2)4,2-4,35(1H，m，CHNH)；6,38(1H，bd，CHNHCOCF33)；66(1H，d，Ar)；6,8(1H，d，Ar).f)制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7a將化合物6a(30g，0.13mol)溶解于甲醇(225ml)和含有碳酸鉀(54g，0.391mol)的水(225ml)中。將所得溶液回流攪拌3小時(shí)。真空除去甲醇，并再向此溶液中加入100ml水。用二氯甲烷反復(fù)萃取水相。用無水硫酸鈉干燥合并的有機(jī)相，過濾并蒸干。將所得油狀固體溶解于用HCl(15％的乙醇溶液)酸化的乙醚中，并濾出固體沉淀，并再溶解于甲醇中，用活性炭脫色，過濾，真空濃縮并最后用正丙醇結(jié)晶。重復(fù)結(jié)晶兩次得到12.6化合物7(收率53％)。M.P.263-265℃[α]D＝-52.5(c＝1％H2O)1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δppm)1,6-1,8(1H，m，CHHCHN+)；2,0-2,15(1H，，m，CHHCHN+)；2,6-2,75(3H，m，PhCHHCHN+，PhCH2CH2)；2,95-3.05(1H，DD，PhCHHCHN+)；3,45-3,551H，m，CHN+)；6,7-6,7(2H，m，Ar).g)制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1237)8a將S(-)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7a(3g，0.13mol)在20ml氫溴酸(47％水溶液)中的溶液，回流過夜。回流完畢后，將此溶液濃縮并真空蒸干。將所得殘余物攪拌下用丙酮反復(fù)洗滌并過濾，將其再溶解于1∶1水/甲醇混合物中，并通過含60mlAmberlystA21樹脂柱洗脫，其以堿性形式活化。將此洗脫液用2N鹽酸酸化，再真空濃縮至干；將所得殘余物用丙酮洗滌，過濾并再溶解于1∶1水/甲醇中，并通過含60mlAmberlystA21樹脂柱洗脫，其以堿性形式活化。用活性炭將此洗脫液脫色，通過硅藻土板過濾并以小量濃縮。向其中加入丙酮，濾出沉淀，并在真空烘箱中干燥。得到2.2g化合物8a(收率78％)。M.P.259-261℃[α]D＝-55.4(c＝1％H2O)1H-NMR(D2O)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1.6-1.8(1H，m，CH2CHHCHN+)；2,0-2,1(1H，m，CH2CHHCHN+)；2,5-2,7(3H，m，PhCH2CH2)，PhCHHN+)；2.85-3,0(1H，m，PhCHHN+)；3,4-3,55(1H，m，CHN+)；6,55-6,8(2H，2d，Ar.).實(shí)施例2(方案1)R(+)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1238)8b的制備a)制備R(+)-三氟乙?；?天門冬氨酸酐1b按照基本類似于制備S(-)-三氟乙酰基-天門冬氨酸酐1a的方法，用D(-)-天門冬氨酸作為起始物(收率86％)。M.P.142-144℃[α]D＝+40.0(c＝1％甲醇)1H-NMR與產(chǎn)物1a所得相符。b)制備R(-)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸3b基本上類似于S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸3a所使用的方法，用酸酐1b作為起始物(收率57％)。M.P.86-88℃[α]D＝-28.0(c＝1％甲醇)1H-NMR與產(chǎn)物3a所得相符。c)制備R(-)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸4b按照基本類似于制備S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-(N-三氟乙酰基)-氨基丁酸4a的方法，用3b作為起始物(收率65％)。M.P.110-112℃[α]D＝-11.2(c＝1％甲醇)1H-NMR與產(chǎn)物4a所得相符。d)制備R(+)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1-四氫萘酮5b按照基本類似于制備S(-)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1-四氫萘酮5a的方法，用4b作為起始物(收率84％)。M.P.185-186℃[α]D＝+66.0(c＝1％甲醇)1H-NMR與產(chǎn)物5a所得相符。e)制備R(+)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫化萘6b按照基本類似于制備S(-)-2-(N-三氟乙酰基)氨基-6-氟-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫化萘6a的方法，用5b作為起始物(收率47％)。M.P.145-147℃[α]D＝+92.0(c＝1％甲醇)1H-NMR與產(chǎn)物6a所得相符。f)制備R(+)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7b按照基本類似于制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7a的方法，用6b作為起始物(收率64％)。M.P.260-262℃[α]D＝+48.5(c＝1％甲醇)1H-NMR與產(chǎn)物7a所得相符。g)制備R(+)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1238)8b按照基本類似于制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1237)8a的方法，用1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7b作為起始物(收率78％)。M.P.260-262℃[α]D＝+55.0(c＝1％H2O)1H-NMR(D2O)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,6-1,8(1H，m，CH2CHHCHN+)；2,0-2,1(1H，m，CH2CHHCHN+)；2,5-2,7(3H，m，PhCH2CH2)PhCHHCHN+)；2,85-3,0(1H，m，PhCHHCHN)；3,4-3,55(1H，m，CHN+)；6,55-6,8(2H，2d，Ar.).實(shí)施例3(方案1)制備(R，S)-2-氨基-5，6-二氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1269)7ca)制備(R，S)-三氟乙酰基-天門冬氨酸酐1c按照基本類似于制備S(-)-三氟乙?；?天門冬氨酸酐1a的方法，用D，L-天門冬氨酸作為起始物(收率96％)。M.P.133-134℃1H-NMR與產(chǎn)物1a所得相符。a′)制備2，3-二氟苯甲醚2室溫下，在6.24g氫氧化鈉在60ml水的溶液中，將20g(0.154mol)2，3-二氟苯酚成鹽，并通過搖動(dòng)產(chǎn)物徹底溶解。向冷卻至約10℃的此溶液中，緩慢加入14.4ml硫酸二甲酯；然后將此溶液加熱至回流溫度，并回流24小時(shí)。將此反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用二氯甲烷萃??；用水、N硫酸洗滌此有機(jī)相，再用水洗滌至pH中性。用無水硫酸鈉將此溶液干燥，并真空除去溶劑，得到21g化合物a′，為紅色油狀物，通過NMR分析并將其直接用于下步反應(yīng)(收率94％，為粗品)。1H-NMR(D2O)Varian300MHzδ(p.p.m.)3,9(3H，S，PhOCH3)；6,6-7,2(3H，m，芳香族).b)制備(R，S)-4-(2，3-二氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸3c基本上類似于S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸3a所使用的方法，用酸酐1c和2，3-三氟苯甲醚作為起始物，且2和72小時(shí)作為反應(yīng)時(shí)間代替48小時(shí)(收率23％)。1H-NMR(D2O)Varian300MHzδ(p.p.m.)3,9(3H，S，PhOCH3)；6,6-7,2(3H，m，芳香族).c)制備(R，S)-4-(2，3-二氟-4-甲氧基苯基)-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸4c按照基本類似于制備S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸4a的方法，用3c作為起始物(收率76％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)2,0-2,2(1H，m，CHHCHN+)2,2-2,4(1H，m，CHHCHCN)；2,6-2,8(2H，t，PhCH2CH2)；3,86(3H，S，PhOCH3)；4,6-4,72(1H，bq，CH2CHNH)；6,6-6,7(1H，bt，Ar)；6,75-6,88(2H，m，Ar，CHNHCOCF3).d)制備(R，S)-2-(N-三氟乙?；?氨基-5，6-二氟-7-甲氧基-1-四氫萘酮5c按照基本類似于制備S(-)-2-(N-三氟乙酰基)氨基-6-氟-7-甲氧基-1-四氫萘酮5a的方法，用4c作為起始物，氯化鋁加畢后反應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)，而不是6小時(shí)(收率26％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,85-2,0(1H，m，CHHCHN+)2,84-3,07(2H，m，CHHNH，PhCHHCH2)；3,13-3,24(1H，m，PhCHHCH2)；3,93(1H，S，PhOCH3)；4,55-4,65(1H，m，CH2CHNH)；7,38-7,42(1H，dd，Ar)；7,43-(1H，bs，，CHNHCOCF3).e)制備(R，S)-2-(N-三氟乙酰基)氨基-5，6-二氟-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫化萘6c按照基本類似于制備S(-)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫化萘6a(實(shí)施例1)的方法，用5c作為起始物，反應(yīng)時(shí)間為7天而不是4天(收率46％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,75-1,9(1H，m，CHHCHN+)2,04-2,16(2H，m，CHHCHNH)；2,6-2,9(3H，m，PhCH2CHNH，PhCHHCH2)；3,05-3,15(1H，dd，PhCHHCH2)；3,84(3H，s，PhOCH3)；4,2-4,33(1H，m，CHNHCOCF3)；6,22(1H，bs，CHNHCOCF3)；6,9-6,94(1H，bd，Ar).f)制備(R，S)-2-氨基-5，6-二氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽ST(1269)7c按照基本類似于制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7a的方法，用6c作為起始物并用異丙醇作為結(jié)晶溶劑(收率62％)。M.P.分解于210℃1H-NMR(D2O)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,6-1,8(1H，m，CH2CHHCHN+)2,0-2,2(1H，m，CH2CHHCHN+，2,5-2,9(3H，m，PhCHHCHN+，PhCH2CH2)；2,9-3,1(1H，m，PhCHCHN+)；3,4-3,6(1H，m，CHN+)；6,5-6,6(1H，d，Ar).實(shí)施例4(方案1)(R，S)-2-氨基-6-氟-7-甲基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1275)7da)制備(R，S)-三氟乙?；?天門冬氨酸酐1c(見實(shí)施例3)b)制備(R，S)-4-(3-氟-4-甲基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙酰基)-氨基丁酸3d基本上類似于S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-氧代-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸3a所使用的方法，用氟代甲苯作為起始物，且72小時(shí)作為反應(yīng)時(shí)間代替48小時(shí)(收率36％)。1H-NMR(CDCl3)Varian300MHz，δ(p.p.m.)2,15(3H，d，PhCH3)；3,35-3,42(1H，dd，CHHCHNH)；3,5-3,6(1H，dd，CHHCHNH)；4,68-4,76(1H，m，CH2CHNH)；6,85-6,95(1H，t，Ar)；7,55-7,65(2H，m，Ar)；8,0-8,1(1H，bd，CHNHCOCF3).c)制備(R，S)-4-(3-氟-4-甲基苯基)-2-(N-三氟乙酰基)-氨基丁酸4d按照基本類似于制備S(+)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-(N-三氟乙?；?-氨基丁酸4a的方法，用3d作為起始物(收率52％)。1H-NMR(CDCl3)Varian200MHz，δ(p.p.m.)2,15(3H，d，PhCH3)；2,0-2,4(2H，dd，CH2CHNH)；2,5-2,7(2H，t，PhCH2CH2)；4,5-4,7(1H，bq，CH2CHNH)；6,6-6,7(1H，m，Ar)；6,75-6,95(2H，m，Ar)；7,35-7,5(1H，bd，CHNHCOCF3).d)制備(R，S)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲基-1-四氫萘酮5d按照基本類似于制備S(-)-2-(N-三氟乙酰基)氨基-6-氟-7-甲氧基-1-四氫萘酮5a的方法，用4d作為起始物，并用回流1小時(shí)代替室溫下2小時(shí)，并氯化鋁加畢后反應(yīng)時(shí)間回流6小時(shí)作為反應(yīng)時(shí)間(收率80％)。1H-NMR(CDCl3)Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,83-2,0(1H，d，CHHCHNH)；2,3-(3H，d，PhCH3)；2,8-2,9(1H，m，CHHCHNH)；2,92-3,03(1H，m，CHHCH2)；3,13-3,25(1H，m，CHHCH2)；4,53-4,62(1H，m，CH2CHNHCOCF3)；7,2(1H，d，Ar)；7,6(1H，d，Ar)；7,45(1H，bs，CHNHCOCF3).e)制備(R，S)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲基-1，2，3，4-四氫化萘6d按照基本類似于制備S(-)-2-(N-三氟乙?；?氨基-6-氟-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫化萘6a的方法，用5d作為起始物(收率60％)。1H-NMR(CDCl3)Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,75-1,9(1H，m，CHHCHNH)；2,0-2,15(1H，m，CHHCHNH)；2,2(3H，s，PhCH3)；2,6-2,7(1H，dd，PhCHHCHNH)；2,7-2,9(2H，m，PhCHHCHNH，PhCHHCH2)；3,03-3,15(1H，dd，PhCHHCH2)4,25-4,35(1H，m，CHNH)；6,2(1H，b，s，NHCOCF3)；6,7(1H，d，Ar)；6,9(1H，d，Ar).f)制備(R，S)-2-氨基-6-氟-7-甲基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1275)7d按照基本類似于制備S(-)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽7a的方法，用6d作為起始物(收率67％)。M.P.分解于230℃1H-NMR(CD3OD)Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,7-1,9(1H，m，CH2CHHCHN+)；2,15-2,25(1H，m，CH2CHHCHN+)；2,19(3H，S，PhCH3)；2,7-2,9(3H，m，PhCHNH+，PhCH2CH2)；3,05-3,6(1H，m，PhCHHCHN+)；3,45-3,6(1H，m，CHNH3+)；6,75-6,8(1H，d，Ar)；6,95-7,0(1H，d，Ar).實(shí)施例5(方案2)(R，S)-2-氨基-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1262)6aa)制備4-(6-甲氧基-7-氟苯基)-3-甲氧羰基-3-丁酸1a將9.4g(0.061mol)3-氟-對(duì)甲氧基苯甲醛和10g(0.068mmol)瑚珀酸二甲酯溶解于15ml無水甲醇中。將所得溶液室溫下滴加到先制備的甲醇鈉1.66g(0.073mol)溶液中。將此反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障禄亓?小時(shí)，然后冷卻并真空濃縮至一半體積。用2N鹽酸將所得溶液酸化，在冰浴中冷卻，然后用水稀釋至產(chǎn)生產(chǎn)品沉淀。濾出此沉淀并溶解于飽和碳酸氫鈉溶液中。用乙醚反復(fù)搖動(dòng)此水溶液并用2N鹽酸再酸化，并在冰浴中冷卻。從此水溶液中反復(fù)萃取此產(chǎn)物，用無水硫酸鈉干燥，并真空萃取此溶劑，得到固體產(chǎn)物，用乙酸乙酯/正己烷混合物結(jié)晶，干燥并得到5.5g酸1a(收率33％)。M.P.141-144℃1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)3,55(2H，s，CH2COOH)；3,83(3H，s，COOCH3)；3,9(3H，s，PhOCH3)；6,95-7,2(3H，m，Ar)；7,8(1H，s，CH＝C).b)制備(R，S)-4-(6-甲氧基-7-氟苯基)-3-甲氧羰基丁酸2a將2g(0.0075mol)4-(6-甲氧基-7-氟苯基)-3-甲氧羰基-3-丁酸溶解于80ml乙酸乙酯中，然后在Parr儀器中用200mg鈀碳在5.5psi氫氣壓下氫化1.5小時(shí)。通過硅藻土板將此溶液過濾出催化劑，并真空下除去溶劑，得到1.9g油狀物，其自發(fā)結(jié)晶(收率93％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian200MHz，δ(p.p.m.)2,3-2,45(1H，m，CHCOOCH3)；2,5-2,75(2H，m，CH2COOH)；2,8-3,1(2H，m，PhCH2)；3,6(3H，s，COOCH3；3,8(3H，s，PhOCH3)；6,75-6,9(3H，m，Ar)c)制備(R，S)-6-甲氧基-7-氟-4-氧代-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸乙酯3a將5.6g(0.021mol)(R，S)-4-(6-甲氧基-7-氟苯基)-3-甲氧羰基丁酸2a溶解于100ml無水二氯甲烷中；加入5g(0.024mol)五氯化磷，并將溫度在0℃維持45分鐘。將此溫度降低到-10℃并向此溶液中加入3.6g(0.027mol)氯化鋁；在40分鐘內(nèi)將溫度升至20℃，然后將此溶液加熱回流1小時(shí)。真空蒸發(fā)此溶劑；向此混懸液中加入100ml冷水，用150ml乙酸乙酯將其萃取3次；用無水硫酸鈉干燥此有機(jī)溶液，并真空除去溶劑，得到4.3g固體產(chǎn)物(收率81％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian200MHz，δ(p.p.m.)2,3-2,45(1H，m，CHCOOCH3)；2,5-2,75(2H，m，CH2COOH)；2,8-3,1(2H，m，PhCH2)；3,6(3H，s，COOCH3；3,8(3H，s，PhOCH3)；6,75-6,9(3H，m，Ar)d)制備(R，S)-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯4a6g(0.024mol)(R，S)-6-甲氧基-7-氟-4-氧代-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯3a溶解于100ml無水乙醇和50ml冰醋酸組成的100ml混合物中；將此溶液置于Parr儀中用800mg鈀碳在50p.s.i.氫氣壓下氫化4小時(shí)。通過硅藻土板濾出催化劑，并真空除去溶劑，得到5.5g固體產(chǎn)物(收率98％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,75-1,9(1H，m，CHHCHCOOCH3)；2,1-2,22(1H，m，CHHCHCOOCH3)；2,6-2,8(3H，m，PhCH2CHCOOCH3，CHCOOCH3)；2,9(2H，d，PhCH2CH2)；3,7(3H，s，COOCH3)；3,83(3H，s，PhOCH3)；6,62(1H，d，Ar)；6,78(1H，d，Ar).e)制備(R，S)-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸5a將5.2g(0.022mol)(R，S)-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯4a懸浮于2.2g碳酸鉀在50ml50％甲醇水溶液中組成的溶液中；將所得溶液回流1小時(shí)。真空除去甲醇并用150ml水稀釋此溶液，用乙醚洗滌；用12N鹽酸酸化此水溶液。濾出所得沉淀，并干燥得到4.8g產(chǎn)物(收率97％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,8-1,95(1H，m，CHHCHCOOCH3)；2,1-2,25(1H，m，CHHCHCOOCH3)；2,65-2,85(3H，m，PhCH2CHCOOCH3，CHCOOCH3)；2,95(2H，d，PhCH2CH2)；3,82(3H，s，PhOCH3)；6,6(1H，d，Ar)；6,8(1H，d，Ar).f)制備(R，S)-2-氨基-6-甲氧基-7-氟1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1262)6a在氮?dú)夥障拢瑢?.11g(0.018mol)(R，S)-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸5a溶解于9ml亞硫酰氯中，并將此溶液加熱至60℃保持4小時(shí)；然后加入甲苯并在真空下將此溶液反復(fù)萃取。將所得綠色油狀物溶解于12ml無水丙酮中，并向此溶液中滴加疊氮化鈉1.75g(0.024mol)的12ml水溶液，將此反應(yīng)混合物冷卻至0℃。讓此混合物攪拌下反應(yīng)30分鐘，讓溫度升溫至20℃。再將此混合物冷卻至0-5℃，并加入150ml水。將所得沉淀真空干燥，得到3.9g疊氮化物。將所得產(chǎn)物溶解于12ml甲苯中并在30分鐘內(nèi)加熱至100℃；除去溶劑，得到稠油狀物，向其中加入10ml無水芐醇，同時(shí)再將此溶液加熱至100℃，保持6小時(shí)。將此溶液冷卻至5℃過夜；濾出所得沉淀并干燥，得到4.7g芐酯基衍生物。將此產(chǎn)物置于350ml無水乙醇中并通過稍加熱溶解，并用約2ml濃鹽酸酸化；加入500mg鈀碳并將所得混合物置于Parr儀中并以50p.s.i.氫氣壓氫化5小時(shí)。用硅藻土板濾出催化劑，并用熱乙醇反復(fù)洗滌；真空除去溶劑并將所得固體用乙醇/乙酸乙酯混合物結(jié)晶(收率58％)。M.P.分解于230℃1H-NMR(DMSOd6)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,6-1,8(1H，m，CHHCHN+)；2,0-2,2(1H，m，CHHCHN+)；2,6-3,0(4H，m，PhCH2CH2，PhCH2CHN+)；3,8(3H，s，OCH3)；6,8-7,0(2H，2d，Ar)實(shí)施例6(方案2)g)制備(R，S)-2-氨基-6-羥基-7-氟1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1267)7將0.6g(0.0026mol)(R，S)-2-氨基-6-甲氧基-7-氟1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽6a懸浮于8ml氫溴酸47％水溶液中，再加熱至130℃過夜。真空蒸發(fā)除去水；將所得暗色固體溶解于50％甲醇水溶液中，通過20mlA-21樹脂柱洗脫，該樹脂以堿性形式活化。用3N鹽酸將此洗脫液酸化至pH2，真空濃縮并通過20mlA-21樹脂組洗脫，該樹脂以鹽酸鹽的形式活化。真空徹底除去溶劑。用丙酮處理所得固體，過濾并通過加入乙醚從甲醇中結(jié)晶；得到350mg產(chǎn)物(收率62％)。M.P.分解于約200℃。1H-NMR，(CD3OD)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,7-1,9(1H，m，CHHCHN+)；2,1-2,3(1H，m，CHHCHN+)；2,7-3,1(4H，m，PhCH2CH2；PhCH2CHN+)；3,4-3,6(1H，m，CHN+)；6,6-6,85(2H，2d，Ar).實(shí)施例7(方案2)制備(R，S)-2-氨基-6-甲基-7-乙酰基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1274)10a)制備4-(6-甲基苯基)-3-甲氧羰基-3-丁酸1b按照基本類似于制備4-(6-甲氧基-7-氟苯基)-3-甲氧羰基-3-丁酸1a的方法，用對(duì)甲氧基苯甲醛作為起始物，回流反應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)，并用環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物作為結(jié)晶溶劑(收率27％)。1H-NMR(CDCl3)；Varian200MHz，δ(p.p.m.)2,35(3H，s，PhCH3)；3,58(2H，s，CH2COOH)；3,83(3H，s，COOCH3)；7,15-7,3(4H，m，Ar)；7,87(1H，s，CH＝C).b)制備4-(6-甲基苯基)-3-甲氧羰基-3-丁酸2b按照基本類似于制備(R，S)-4-(6-甲氧基-7-氟苯基)-3-甲氧羰基-3-丁酸2a的方法，用酸1b作為起始物，氫化時(shí)間為2.5小時(shí)(收率94％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian200MHz，δ(p.p.m.)2，23(1H，s，PhCH3)；2,28-2,45(1H，m，CHCOOCH3)；2,55-2,75(2H，m，CH2COOH)；2,9-3,1(2H，m，PhCH2)；3,62(3H，s，COOCH3)；6,9-7,1(4H，m，Ar)c)制備(R，S)-6-甲基-4-氧代-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯3b按照基本類似于制備(R，S)-6-甲氧基-7-氟-4-氧代-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯3a的方法，用酸2b作為起始物(收率94％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian200MHz，δ(p.p.m.)2,35(3H，s，PhCH3)；2,7-2,9(2H，m，PhCH2)；3,1-3,2(3H，m，PhCOCH2，CHCOOCH3)；3,7(3H，s，COOCH3)；7,1-7,35(2H，m，Ar)；7,8(1H，s，Ar).d)制備(R，S)-6-甲基-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯4b按照基本類似于制備(R，S)-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯4a的方法，用甲酯3b作為起始物(收率94％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian200MHz)，δ(p.p.m.)1,7-1,95(1H，m，CHHCHCOCCl3)；2,1-2,3(1H，m，CHHCHCOOCH3)；2,3(3H，s，PhCH3)；2,6-2,85(3H，m，PhCH2CHCOOCH3，CHCOOCH3)；2,9-3,0(2H，d，PhCH2CH2)；3,72(3H，s，COOCH3)；6,85-7,1(3H，m，Ar)h)制備(R，S)-6-甲基-7-乙?；?1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯8將3.8g(0.0186mol)(R，S)-6-甲基-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸甲酯4b溶解于30ml二氯甲烷中；在氮?dú)夥障拢蚶鋮s至5℃的此溶液中加入氯化鋁，并在相同溫度下在攪拌下滴加1.6ml乙酰氯。將此反應(yīng)混合物室溫下放置1.5小時(shí)，同時(shí)攪拌下緩慢通過加入100ml冷水將此混合物冷卻。將此溶液反復(fù)用100ml(總體積)二氯甲烷萃取，并用冷水反復(fù)洗滌。用無水硫酸鈉干燥此有機(jī)相，并真空除去溶劑得到暗色固體，將其干燥得到3.8g粗品，通過硅膠色譜柱(50ml)，用正己烷/乙酸乙酯作為溶劑洗脫純化。真空除去溶劑，得到1.8g產(chǎn)物(收率40％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1,78-2,0(1H，m，CHHCHCOCOOCH3)；2,1-2,3(1H，m，CHHCHCOOCH3)；2,45(3H，s，COCH3)；2,55(3H，s，PhCH3)；2,65-2,85(3H，m，PhCH2CHCOOCH3，CHCOOCH3)；2,95(2H，d，PhCH2CH2)；6,95(1H，s，Ar)；7,45(1H，s，Ar).i)制備(R，S)-6-甲基-7-乙酰基-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸9基本類似于制備(R，S)-6-甲氧基-7-氟-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸5的方法，用甲酯8作為起始物，在回流溫度下反應(yīng)時(shí)間為1.5小時(shí)，并用正己烷/乙酸乙酯作為結(jié)晶混合物(收率82％)。1H-NMR(CDCl3)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)2,78-2,92(1H，m，CHHCHCOOH)；2,1-2,25(1H，m，CHHCHCOOH)；2,4(3H，s，COCH3)；2,5(3H，s，PhCH3)；2,7-2,9(3H，m，PhCH2CHCOOH，CHCOOH)；2,9-3,0(2H，d，PhCH2CH2)；6,9(1H，s，Ar)；7,4(1H，s，Ar).1)制備(R，S)-2-氨基-6-甲基-7-乙?；?，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1274)10將6.5g(0.028mol)(R，S)-6-甲基-7-乙酰基-1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸9懸浮于40ml無水丙酮中；將4.3ml(0.0307mol)三乙胺緩慢滴加至懸浮液中。將溶液溫度降至-5℃，并將2.95ml(0.0307mol)ethyl-chlorophormiate溶解于4ml丙酮中，再將其緩慢滴加到上述溶液中。將溶解于80ml水的3.65g(0.056mol)疊氮化鈉滴加到此溶液中，維持溫度在0℃；將所得混合物在0℃攪拌1小時(shí)，得到沉淀。再加入80ml冷水后，用100ml甲苯萃取此溶液，并用無水硫酸鈉干燥此有機(jī)溶液。將此溶液加入到加熱至100℃的30ml甲苯中，并再在100℃下維持1.5小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑，得到4.9g稠的淡色油狀物，將其懸浮于50ml8N鹽酸中，并在攪拌下加熱至100℃，并維持1.5小時(shí)。真空蒸發(fā)除去溶劑；然后加入100ml水，并在冰浴冷卻下在攪拌下用4N碳酸鈉將此懸浮液的pH調(diào)節(jié)至10。將此水溶液分為較小的量，并用120ml乙醚萃取。用無水硫酸鈉干燥有機(jī)相，并向此醚溶液中通入氯化氫氣體。所得沉淀將真空過濾并在空氣中干燥，得到2.3g淡色固體，用乙酸乙酯/甲醇混合物將其結(jié)晶。在烘箱中將此固體干燥，得到2g無色結(jié)晶產(chǎn)物(收率30％)。M.P.195-197℃，分解。1H-NMR，(CD3OD)，Varian300MHz，δ(p.p.m.)1.75-1.85(1H，m，CHHCHN+)；2,15-2,3(1H，m，CHHCHN+)；2,42(3H，s，CH3CO)；2,53(3H，s，CH3Ph)；2,8-3,0(4H，m，PhCH2CHN+)，PhCH2CH2)；3,5-3,65(1H，m，CHN+)；7,05(1H，s，Ar)；7,6(1H，s，Ar).在預(yù)臨床研究中，為了評(píng)價(jià)物質(zhì)對(duì)膿毒性休克可能的保護(hù)作用，最廣泛使用的方法是用毒性物質(zhì)(外毒素或內(nèi)毒素)造成的中毒實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，該物質(zhì)直接給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射或用大量的感染細(xì)胞給動(dòng)物接種。下列藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的描述顯示了本發(fā)明一些化合物與對(duì)照化合物(R，S)-2-氨基-6-氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST626)比較，所得的結(jié)果。如上所述，化合物ST626是已知的與本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)最相近的化合物，并還已知其具有相似的藥理活性。這些結(jié)果表明了本發(fā)明化合物的治療效果，還提供了這些化合物的有利藥理特性的可能機(jī)理急劇降低炎性細(xì)胞因子(TNF、IL-1β、IL-6和IFN-γ)的血液濃度。在膿毒性休克小鼠模型中ST1238、ST1274和ST1275作用的評(píng)價(jià)使用約6周齡的雄性BALB/C小鼠(C.River)，每實(shí)驗(yàn)組10只動(dòng)物。將這些動(dòng)物置于常溫22±2℃和50±15％相對(duì)溫度下，光照12小時(shí)(早7點(diǎn)至晚7點(diǎn))，12小時(shí)黑暗(晚7點(diǎn)至早7點(diǎn))，不嚴(yán)格限制食物和飲用水。用下列物質(zhì)LPS(大腸埃希氏桿菌血清型026B6)，批號(hào)73570JB(Difco)、LPS(傷寒沙門氏菌)，批號(hào)81H4018(Sigma)、SEB(金黃色葡萄球菌)，批號(hào)144H4024(Sigma)和D-半乳糖胺批號(hào)031EE002485(Merck)。被測(cè)化合物為ST1238、ST1274和ST1275。如果需要，用0.1N氫氧化鈉校正化合物溶液的pH(維持溶液冷卻并攪拌)，使pH不低于5.5。傷寒沙門氏菌引起的死亡用得自傷寒沙門氏菌的LPS腹膜內(nèi)(i.p.)處理動(dòng)物。用內(nèi)毒素前，先將其溶解于滅菌鹽水中，然后注射，注射量為200μL，劑量為27.0mg/kg，大約相應(yīng)于LD80。在內(nèi)毒素(LPS)刺激30分鐘前或5分鐘后，將被測(cè)化合物靜脈內(nèi)給藥(i.v.)，體積為200μL滅菌鹽水，相當(dāng)于相應(yīng)LD50的約1/10。D-半乳糖胺致敏小鼠被大腸埃希氏桿菌LPS引起的死亡用D-半乳糖胺(1000mg/kg，i.p.)將動(dòng)物致敏，同時(shí)用大腸埃希氏桿菌LPS(0.30mg/kg，i.p.)處理，總量為200μL。使用的LPS的劑量約相當(dāng)于被D-半乳糖胺致敏動(dòng)物的內(nèi)毒素LD50的1/10。在用LPS處理30分鐘前以及5分鐘后，或在LPS刺激5分鐘或30分鐘后，將被測(cè)化合物靜脈內(nèi)給藥(i.v.)，體積為200μL滅菌鹽水，相當(dāng)于相應(yīng)LD50的約1/10。D-半乳糖胺致敏小鼠被SEB(金黃色葡萄球菌)引起的死亡用D-半乳糖胺(1000-1500mg/kg，i.p.)將動(dòng)物致敏，同時(shí)用腸毒素SEB(3mg/kg，i.p.)處理，總量為200μL。使用的SEB的劑量約相當(dāng)于LD80并在預(yù)實(shí)驗(yàn)中確定。在用SEB處理30分鐘前以及5分鐘后，或在內(nèi)毒素刺激5分鐘或30分鐘后，將被測(cè)化合物靜脈內(nèi)給藥(i.v.)，體積為200μL滅菌鹽水，相當(dāng)于相應(yīng)LD50的約1/10。在所有實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物被觀察10天，每天記錄死亡情況。用單側(cè)Fisher′s精確檢驗(yàn)評(píng)價(jià)被測(cè)化合物保護(hù)作用的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果由傷寒沙門氏菌LPS引起的死亡在傷寒沙門氏菌LPS內(nèi)毒素休克的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?dāng)刺激前和后(分別為p＜0.01和p＜0.05)給藥時(shí)，化合物ST1274和ST1275顯著降低了死亡率(表2)。表1ST1274和ST1275靜脈給藥對(duì)注射傷寒沙門氏菌LPS小鼠死亡的保護(hù)作用。刺激前和后方案(-30分鐘和+5分鐘)。a＝與LPS對(duì)照相比被治療動(dòng)物存活率(％)的增加。b＝用單側(cè)Fisher′s精確檢驗(yàn)計(jì)算的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在用D-半乳糖胺致敏的小鼠中大腸埃希氏桿菌LPS誘發(fā)的死亡化合物ST1238顯著降低了暫時(shí)處理方案的死亡率(p＜0.001hp＜0.01)(表2和3)，而化合物ST1274和ST1275只是對(duì)于刺激前和后給藥方案不顯著增加其存活率(20％)(表2)。表2ST1238、ST1274和ST1275靜脈給藥對(duì)用D-半乳糖胺致敏小鼠中注射大腸埃希氏桿菌LPS誘發(fā)的死亡的保護(hù)作用。刺激前和后(-30和+5分鐘)。a＝與對(duì)照相比被治療動(dòng)物存活率(％)的增加。b＝用單側(cè)Fisher′s精確檢驗(yàn)計(jì)算的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。表3ST1238靜脈給藥對(duì)用D-半乳糖胺致敏小鼠中注射大腸埃希氏桿菌LPS誘發(fā)的死亡的保護(hù)作用。只在刺激后處理方案(+5分鐘和+30分鐘)。</tables>a＝與對(duì)照相比被治療動(dòng)物存活率(％)的增加。b＝用單側(cè)Fisher′s精確檢驗(yàn)計(jì)算的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在用D-半乳糖胺致敏的小鼠中由SEB(金黃色葡萄球菌)誘發(fā)的死亡當(dāng)刺激前30分鐘和后5分鐘(表4)，與對(duì)照組相比所有化合物降低了死亡率(70％至90％)(表5)。在只在刺激后處理的方案中ST1238仍極顯著地保持了保護(hù)效果(p＜0.001)(表5)。表4ST1238、ST1274和ST1275靜脈給藥對(duì)D-半乳糖胺致敏小鼠中由注射腸毒素SEB的LPS引起的死亡的保護(hù)作用。刺激前和刺激后治療(-30和+5分鐘)。</tables>a＝與對(duì)照相比被治療動(dòng)物存活率(％)的增加。b＝用單側(cè)Fisher′s精確檢驗(yàn)計(jì)算的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。表5ST1238靜脈給藥對(duì)D-半乳糖胺致敏小鼠中由注射腸毒素SEB的LPS引起的死亡的保護(hù)作用。刺激后治療(+5和+30分鐘)。<a＝與LPS對(duì)照相比被治療動(dòng)物存活率(％)的增加。b＝用單側(cè)Fisher′s精確檢驗(yàn)計(jì)算的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。評(píng)價(jià)ST1238對(duì)鼠全血培養(yǎng)物中LPS誘發(fā)的血清TNF(腫瘤壞死因子)水平的作用近幾年來，已經(jīng)使用LPS刺激的全血細(xì)胞培養(yǎng)物作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，其雖然存在一定的局限性，來模擬內(nèi)毒素血癥的病生理狀況，該情況下革蘭氏陰性菌的脂多糖釋放到血流中，于是與免疫系統(tǒng)細(xì)胞接觸。實(shí)際上，此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥罱挥脕碓u(píng)價(jià)TNF和IL-1釋放的潛在抑制劑(GCRice等，Shoek，4254-266，1994；AJHGearing等，Nature，370555-557，1994；KTschaikowsky，BiochimBiophysActa，1222113-121，1994；AHaziot等，JImmunol，1525868-5876，1994)。在此實(shí)驗(yàn)中，使用重175-200克的雄性Wistar鼠(C.River)。將這些動(dòng)物置于常溫22±2℃和50±15％相對(duì)濕度下，光照12小時(shí)(早7點(diǎn)至晚7點(diǎn))的籠中，不嚴(yán)格限制食物和飲用水。被測(cè)化合物是ST1238。使用的內(nèi)毒素是得自傷寒沙門氏菌的LPS，批號(hào)81H4018(Sigma)。處理血樣斷頭處死Wistar鼠，收集肝素抗凝的血樣(0.450ml/小瓶)。將溶解于滅菌鹽水中的體積為0.025ml(20×溶液)的被測(cè)化合物(最終濃度0.050mM)，加入到裝有血樣的小瓶中。向在37℃下在5％二氧化碳濕空氣中孵育1小時(shí)的上述試管中，加入得自傷寒沙門氏菌的LPS0.025ml(20×溶液)(最終LPS濃度等于1μg/ml)。將這些樣本在相同的條件下孵育4小時(shí)，然后以10000rpm離心5分鐘，并將上清液在-80℃下保存以備TNF實(shí)驗(yàn)。在加了1％胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中測(cè)定TNF生物活性。TNF生物學(xué)檢測(cè)在TNF檢測(cè)中，將含TNF的樣本(50μL)系列稀釋，并直接加入到96孔Primaria微量板中。在含1％胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中制備最終濃度為4μg/ml的放線菌素D-甘露醇(50μl)，將其加入到這些孔中。此抑制劑提高了細(xì)胞對(duì)TNF的敏感性。向每個(gè)孔中，加入100μlL929(對(duì)TNF毒性作用敏感的鼠纖維肉瘤)的標(biāo)準(zhǔn)化懸液，濃度為4×105/ml。還制備適當(dāng)?shù)膶?duì)照即放線菌素D對(duì)照(細(xì)胞+放線菌素但是沒有TNF)及細(xì)胞對(duì)照(培養(yǎng)基中只存在細(xì)胞)。在37℃，5％二氧化碳?xì)夥障拢M(jìn)一步孵育18小時(shí)后，用新制備的1mg/mlXTT(3′-[1-[(苯基氨基)-羰基]-3，4-四唑鎓]-雙)4-甲氧基-6-硝基)苯-磺酸鈉水合物)和125μMPMS(甲基硫酸吩嗪)的溶液染色，染色方法如下。在60℃將XTT溶解于RPMI培養(yǎng)基(1mg/ml)。PMS母液為100mM(在+4℃黑暗中穩(wěn)定約20天)，并通過將PMS溶解于PBS制備，然后通過簡(jiǎn)單的聲波處理使PMS徹底溶解。然后，在XTT中將100mM的PMS溶液1∶800稀釋，這樣在1mg/mlXTT中PMS濃度就為125μM。XTT-PMS染色混合物使用前必須過濾。通過向每個(gè)孔中加入50μL的XTT-PMS染色溶液對(duì)細(xì)胞染色，于是最終體積為250μL，其中XTT和PMS的最終濃度分別為0.2mg/ml和25μM。還制備了“空白”孔，其中含200μL培養(yǎng)基+50μL的XTT-PMS染色溶液。將微量板在37℃，5％二氧化碳下孵育2-2.5小時(shí)(總孵育時(shí)間＝約20小時(shí))。用微量板讀數(shù)器在450nm波長(zhǎng)和620參考波長(zhǎng)檢測(cè)每個(gè)樣本的吸收值(比色微量板讀數(shù)器從樣本值中自動(dòng)扣除“空白”吸收值)。TNF滴度計(jì)算如下。按照定義，由放線菌素-D吸收值的半最大值(＝50％)給出生物活性的1個(gè)單位。樣本稀釋給出了吸收值曲線，其直線部分由方程y＝ax+b描述。插入a和b值后(由計(jì)算機(jī)線性回歸分析得到)并用放線菌素-D對(duì)照的半最大吸收值(相應(yīng)于一個(gè)生物單位)代替y后，就你從此方程中解出x，x代表了樣本稀釋度的倒數(shù)。所得此值給出了以U/ml表示的TNF滴度。用雙尾Student’st檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。結(jié)果所得結(jié)果(表6)顯示了化合物ST1238降低了(39％)用LPS刺激鼠血液培養(yǎng)物產(chǎn)生的TNF。表6化合物ST1238對(duì)由傷寒沙門氏菌LPS(1μg/ml)刺激鼠血液培養(yǎng)物(n＝5)誘發(fā)TNF產(chǎn)生的作用。這些化合物的實(shí)驗(yàn)濃度是50μM。實(shí)驗(yàn)條件描述于“材料和方法”中。用雙尾Student’st檢驗(yàn)計(jì)算統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在兩個(gè)小鼠休克模型中評(píng)價(jià)ST1238對(duì)鼠血清TNF水平的作用使用約6周齡的雄性BALB/C小鼠(C.River)，每實(shí)驗(yàn)組10只動(dòng)物。將這些動(dòng)物置于常溫22±2℃和50±15％相對(duì)濕度下，光照12小時(shí)(早7點(diǎn)至晚7點(diǎn))，12小時(shí)黑暗(晚7點(diǎn)至早7點(diǎn))的籠中，不嚴(yán)格限制食物和飲用水。被測(cè)化合物為ST1238。用下列物質(zhì)LPS(大腸埃希氏桿菌血清型026B6)，批號(hào)73570JB(Difco)、LPS(傷寒沙門氏菌)，批號(hào)81H4018(Sigma)、SEB(金黃色葡萄球菌)，批號(hào)144H4024(Sigma)和D-半乳糖胺批號(hào)031EE002485(Merck)。大腸埃希氏桿菌引起的D-半乳糖胺致敏的小鼠的死亡完全按照上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行。被D-半乳糖胺致敏小鼠被SEB(金黃色葡萄球菌)引起的死亡實(shí)驗(yàn)條件完全如上所述。血樣在這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中，在刺激90分鐘后采集血樣(TNF血清峰濃度)。將乙醚麻醉的小鼠通過后眼眶竇穿刺放血。將血樣在室溫下孵育2小時(shí)并將所得血清在3000rpm離心20分鐘，并在-80℃下保存以備TNF實(shí)驗(yàn)。TNF生物學(xué)檢測(cè)在含1％胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中檢測(cè)TNF生物活性。將連續(xù)稀釋的含TNF樣本50ul/孔加入到Primaria微量板中。使用與上述相同的實(shí)驗(yàn)條件。數(shù)據(jù)用單尾Student’st檢驗(yàn)分析。結(jié)果大腸埃希氏桿菌和傷寒沙門氏菌LPS引起的D-半乳糖胺致敏的小鼠的死亡此實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告于表7。在兩種治療方案中化合物ST1238顯著降低大腸埃希氏桿菌誘發(fā)的TNF水平(刺激前/后及只在刺激后；分別p＜0.008和p＜0.0001)。表7通過給D-半乳糖胺致敏的小鼠注射大腸埃希氏桿菌，ST1238給藥(18mg/kg，i.v.)對(duì)TNF產(chǎn)生的作用。刺激前和后治療方案(-30和+5分鐘)及至在刺激后治療方案(+5分鐘和+3-分鐘)。>*實(shí)驗(yàn)用傷寒沙門氏菌LPS進(jìn)行。在D-半乳糖胺致敏小鼠中由腸毒素SEB誘發(fā)的死亡用D-半乳糖胺致敏小鼠中由腸毒素SEB的LPS誘發(fā)TNF產(chǎn)生的此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ退媒Y(jié)果顯示化合物ST1238顯著降低了刺激前/或方案(p＜0.0001)及至在刺激后方案(p＜0.0002)中TNF產(chǎn)生(表8)。表8ST1238給藥(18mg/kg，i.v.)對(duì)D-半乳糖胺致敏的小鼠由得自SEB腸毒素的LPS所引起TNF產(chǎn)生的作用。刺激前和后治療方案(-30和+5分鐘)及至在刺激后治療方案(+5分鐘和+3-分鐘)。評(píng)價(jià)ST1238對(duì)SEB腸毒素誘發(fā)的鼠血清白細(xì)胞介-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和干擾素-γ水平的作用使用約6周齡的雄性BALB/C小鼠(C.River)，每實(shí)驗(yàn)組10只動(dòng)物。將這些動(dòng)物置于常溫22±2℃和50±15％相對(duì)濕度下，光照12小時(shí)(早7點(diǎn)至晚7點(diǎn))，12小時(shí)黑暗(晚7點(diǎn)至早7點(diǎn))的籠中，不嚴(yán)格限制食物和飲用水。被測(cè)化合物是ST1238。用下列物質(zhì)SEB(金黃色葡萄球菌)，批號(hào)144H4024(Sigma)和D-半乳糖胺批號(hào)031EE002485(Merck)。用金黃色葡萄球菌引起D-半乳糖胺致敏的小鼠死亡。完全按照上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行。血樣在這兩個(gè)模型中，采集血樣的時(shí)間IL-6為刺激后2小時(shí)、IL-1β為刺激后4小時(shí)及IFN-γ為刺激后6小時(shí)。將乙醚麻醉的小鼠通過后眼眶竇穿刺放血。將血樣在室溫下孵育2小時(shí)并將所得血清在3000rpm離心20分鐘，并在-80℃下保存至檢測(cè)。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)按照所用檢測(cè)試劑盒中說明的方法進(jìn)行生物檢測(cè)—小鼠IL-1β免疫檢測(cè)(MLB00，R&amp;D系統(tǒng))—小鼠IL-6EIA試劑盒(8-6706，PerSeptiveDiagnostics)—小鼠IFN-γEIA試劑盒(8-6716，PerSeptiveDiagnostics)。數(shù)據(jù)用單尾Student’st檢驗(yàn)分析。結(jié)果化合物ST1238顯著降低了被測(cè)炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生(對(duì)IL-1βp＜0.001；對(duì)IL-6p為0.0001；對(duì)INF-γp為0.01)；所得結(jié)果見表9。表9ST1238給藥(19mg/kg，i.v.)對(duì)金黃色葡萄球菌LPS刺激D-半乳糖胺致敏小鼠中毒模型中IL-1β、IL-6和IFN-γ血清水平的作用。權(quán)利要求1.通式(I)的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘或通式(II)的其藥用鹽其中R和R1獨(dú)立地為鹵素，特別是氟；羥基；C1-C4烷氧基，特別是甲氧基，在ω位選擇性被基團(tuán)OH、NH2、NR3R4取代，其中R3和R4獨(dú)立地是H、C1-C4烷基，它們未取代或在ω位被基團(tuán)OH、NH2取代；C1-C4烷?；?，特別是乙酰基；C1-C4烷基；氨基甲酰基；氨基甲酰基氧基；氨基；被NR3R4取代的氨基，其中R3和R4定義如上；R2是氫原子；鹵素，特別是氟；羥基；甲氧基，其條件是排除(a)R＝R1＝CH3O；OH；R2＝H；或(b)R＝F；R1＝CH3O；OH；R2＝H的2-氨基1，2，3，4-四氫化萘是外消旋體的情況；而X-是藥用酸的單價(jià)陰離子。2.權(quán)利要求1的化合物，其中藥用酸的單價(jià)陰離子選自鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乳清酸鹽、酸式天門冬氨酸鹽、酸式枸櫞酸鹽、酸式硫酸鹽、富馬酸鹽及酸式富馬酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽和酸式馬來酸鹽、酸式草酸鹽、酸式磷酸鹽、葡萄糖磷酸鹽、酒石酸鹽和酸式酒石酸鹽。3.權(quán)利要求1的化合物，選自S(-)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1237)；R(+)-2-氨基-6-氟-7-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1238)；(R，S)-2-氨基-5，6-二氟-7-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1269)；(R，S)-2-氨基-6-氟-7-甲基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1275)；(R，S)-2-氨基-7-氟-6-羥基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1267)；(R，S)-7-乙?；?2-氨基-6-甲基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1274)；(R，S)-2-氨基-7-氟-6-甲氧基1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(ST1262)。4.口服或非腸道給藥藥物組合物，其中含有式I或II的化合物以及藥用載體和/或稀釋劑。5.用于預(yù)防和治療炎性細(xì)胞因子引起的炎癥和/或自身免疫性疾病的口服或非腸道給藥藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1、2或3的化合物作為活性組分，以及藥用賦形劑。6.權(quán)利要求5的組合物，用于預(yù)防和治療膿毒性休克。7.權(quán)利要求5的組合物，用于制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰腺炎、炎性腸疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球性腎炎和腦脊髓炎的藥物。全文摘要2－氨基1,2,3,4－四氫化萘、其制備方法以及其藥物組合物,用于預(yù)防和治療炎性疾病(特別是膿毒性休克)和/或自身免疫性疾病,其中確定了炎性細(xì)胞因子的初致病作用。文檔編號(hào)A61P17/00GK1276782SQ98810459公開日2000年12月13日申請(qǐng)日期1998年9月22日優(yōu)先權(quán)日1997年9月22日發(fā)明者N·芳托,G·P·默勒提,P·福雷斯塔申請(qǐng)人:希格馬托制藥工業(yè)公司