專利名稱：一類新型降低血糖化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物化合物新用途領(lǐng)域，具體地說本發(fā)明涉及的是從從蓼科大黃屬植物中分離得到的二苯乙烯類成分的植物化合物在臨床上用于降血糖的用途。
糖尿病是臨床常見的內(nèi)分泌代謝性疾病。近年來，隨著社會的發(fā)展，人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，該病發(fā)病率在世界范圍內(nèi)正在迅速升高。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球患者總數(shù)可達(dá)一億兩千萬左右。可見糖尿病已成為繼心血管、腫瘤疾病之后的嚴(yán)重危害人類健康的又一嚴(yán)重疾病。糖尿病病程綿長，調(diào)治失當(dāng)常有并發(fā)癥發(fā)生，如慢性血管性并發(fā)癥(包括腦血管障礙、缺血性心臟病)、糖尿病腎病等，并發(fā)癥所致的死亡率正在逐年增加。因此，對糖尿病及其并發(fā)癥的防治是全球性的研究熱點(diǎn)課題。
目前臨床上應(yīng)用的降低血糖藥物如磺酰脲類、雙胍類藥物其作用慢，而且有一定的毒副作用。中藥復(fù)方雖有療效、無明顯毒副作用，但成藥出售的品種較少。而由天然藥物來源的單體化合物作為臨床應(yīng)用的降血糖藥物，迄今尚未見有公開報(bào)道。
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一類新型的降血糖藥物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種對于降低血糖具有良好作用的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明之目的，所提供的新型降血糖成分為二苯乙烯類化合物，該化合物主要系來自植物，可從天然藥物如蓼科大黃屬波葉組植物藏邊大黃、河套大黃等中提取分離。河套大黃等多種波葉大黃中提取分離。該類植物在我國分布廣、蘊(yùn)藏量大，且生長習(xí)性適于大量栽培種植，而上述降血糖類成分在該類植物中含量頗豐，獲取其有效單體成分的手段簡便、易行。
該化合物具有下述結(jié)構(gòu) R1=OH OCH3O glucosyl HR2=H glucosylR3=H glucosyl
根據(jù)本發(fā)明，二苯乙烯類衍生物可按已知方法配成腸道或非腸道組合藥的制劑。如片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等。
有益的效果本發(fā)明所述的化合物會有臨床應(yīng)用前景，其能降低血糖而無明顯的毒副作用。同時(shí)，該類化合物又有可能改善糖尿病的并發(fā)癥病情，則更有利于臨床應(yīng)用的前景。
下面的實(shí)施例將詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例1二苯乙烯類衍生物的提取與結(jié)構(gòu)鑒定取波葉大黃飲片，加8倍量95％乙醇回流提取三次，每次2小時(shí)。合并提取液，減壓濃縮。醇提物以硅藻土分散，干燥。以氯仿洗去脂溶性成分，繼以乙酸乙酯洗脫，得到乙酸乙酯可溶部分。該部分行硅膠柱層析(60-100目)，以乙酸乙酯洗脫，繼以乙酸乙酯/甲醇(4∶1∽2)洗脫，即得粗品，粗品經(jīng)水/丙酮重結(jié)晶即得。
鑒定化合物E為白色無定形粉末(稀丙酮)，mp.138-140℃。紫外燈光下呈藍(lán)紫色熒光，Molisch反應(yīng)陽性。1HNMR(acetone-d6)δppm7.14(1H，d，J=8.5Hz，H-5′)，7.06(1H，d，J=2.1Hz，H-2′)，6.97(1H，d，J=16.3Hz，H-β)，6.94(1H，dd，J=2.1/8.5Hz，H-6′)，6.89(1H，d，H=16.3Hz，H-α)，6.52(2H，d，J=2.1Hz，H-2，6)，6.24(1H，t，J=2.1Hz，H-4)，4.79(1H，d，J=7.5Hz，anomeric-H)，3.9-3.3(sugar-H)；13CNMR(acetone-d6)δppmaglycone159.5(C-3，5)，148.5(C-4′)，146.0(C-3′)，140.3(C-1)，134.2(C-1′)，128.6(C-αβ)，119.3(C-5′)，118.9(C-6′)，114.2(C-2′)，105.6(C-2，6)，104.0(C-4)，glucosy1102.9(C-1″)，77.8(C-3″)，77.1(C-5″)，74.4(C-2″)，70.9(C-4″)，62.2(C-6″)。1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)與Yoshiki Kashiwada等(1 YoshikiKashiwada et al.Chem.Pharm.Bull.1988，36(4)1545)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，化合物E鑒定為Piceatannol-4′-O-β-D-glucopyranoside。
化合物B50為白色針狀結(jié)晶(稀丙酮)，mp.222-224℃。紫外燈光下呈藍(lán)紫色熒光Molisch反應(yīng)陽性。1HNMR(acetone-d6)δppm7.46(1H，d，J=2Hz，H-2′)，7.10(1H，dd，J=2/8.3Hz，H-6′)，6.96(1H，d，J=16.3Hz，H-α)，6.87(1H，d，H=16.3Hz，H-α)，6.82(1H，d，J=8.2Hz，H-5′)，6.50(2H，d，J=2.1Hz，H-2，6)，6.22(1H，t，J=2.1Hz，H-4)，4.82(1H，d，J=7.5Hz，anomeric-H)，4.0-3.3(sugar-H)；13CNMR(acetone-d6)δ ppmaglycone159.5(C-3，5)，148.1(C-3′)，146.5(C-4′)，140.5(C-1)，130.5(C-1′)，128.7(C-β)，127.5(C-α)，123.3(C-6′)，116.8(C2′)，116.5(C-5′)，105.4(C-2，6)，104.1(C-4)；glucosy1102.6(C-1″)，78.0(C-3″)，77.2(C-″)，74.4(C-2″)，71.1(C-4″)，62.3(C-6″)。1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)與YoshikiKashiwada等(2 Yoshiki Kashiwada et al.Chem.Pharm.Bull.1984，32(9)3501)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，化合物B50鑒定為Piceatannol-3′-O-β-Dglucopyranoside。
化合物F為白色針狀結(jié)晶(稀甲醇)，mp.228-230℃。紫外燈光下呈藍(lán)紫色熒光，Molisch反應(yīng)陽性。1HNMR(acetone-d6)δH-β)，6.96(1H，dd，J=2/8.3Hz，H-6′)，6.90(1H，d，J=7.9Hz，H-5′)，6.89(1H，d，H=16.5Hz，H-α)，6.77(1H，br.s，H-2)，6.66(1H，br.s，H-2)，6.48(1H，t，J=1.8Hz，H-4)，4.90(1H，d，J=7.7Hz，anomeric-H)，3.82(3H，s，-OCH3)，4.0-3.3(sugar-H)；3CNMR(acetone-d6)δ ppmaglycone 160.1(C-5)，159.5(C-3)，148.4(C-4′)，147.5(C-3′)，140.5(C-1)，131.5(C-1′)，1295(C-β)，127.2(C-α)，119.7(C-6′)，11 3.3(C-2′)，112.5(C-5′)，108.0(C-2)，106.5(C-6)，103.8(C-4)，56.2(-OCH3)；glucosy1101.9(C-1″)，77.7(C-3″，5″)，74.4(C-2″)，71.1(C-4″)，62.5(C-6″)。1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)與YoshikiKashiwada等(2 Yoshiki Kashiwada et al.Chem.Pharm.Bull.1984，32(9)3501)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，化合物F鑒定為rhaponticin。實(shí)施例2 生物評價(jià)一、在下面生物實(shí)驗(yàn)中主要觀察上述化合物對四氧嘧啶造模的高血糖小鼠的治療作用，以二甲基雙呱(以下稱降糖片)作陽性對照藥，對其藥效進(jìn)行評價(jià)。1材料與方法1．1材料1．1．1藥品與動物降糖片，批號96064，中外合資正安制藥(天津)有限公司生產(chǎn)。
昆明種小鼠，體重22-24g，雄性，北京市藥品檢驗(yàn)所動物室提供，合格證號京動管準(zhǔn)字(1994)第037號1．1．2儀器與試劑UV-265分光光度計(jì)，日本島津公司生產(chǎn)；四氧嘧啶，批號42011-3E，香港生產(chǎn)；葡萄糖氧化酶(GOD)，北京百泰生化技術(shù)公司分裝；過氧化物酶(POD)，批號9712193，上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。1．2方法上述健康小鼠，禁食20hr.后，以四氧嘧啶生理鹽水溶液尾靜脈注射80mg/kg體重，使成高血糖模型。
以葡萄糖氧化酶法測定小鼠空腹血糖值，選血糖值在7-25mmol/L的小鼠隨機(jī)分為六組(組間血糖均值相差＜0.6mmol/L)，各組給藥劑量見表。每天灌胃給藥，連續(xù)12天，于末次給藥后30分鐘測各組小鼠的空腹血糖值，以各組小鼠血糖均數(shù)及給藥前后血糖差值進(jìn)行組間比較。2．結(jié)果組別 動物 給藥劑量 給藥前血糖值 給藥后血糖值 差 值數(shù)mg/kg mmol/L mmol/L mmol/L
注與空白組比較ΔΔΔp＜0.01；與模型組比較※p＜0.05、※※p＜0.01；負(fù)值表示血糖升高。
由上表可見，陽性對照藥降糖片顯示出很好的降糖作用，說明實(shí)驗(yàn)方法可靠?；衔顴的大、中劑量均能明顯降低高糖模型小鼠的血糖值，在同等用藥劑量時(shí)(500mg/Kg)其效果類似或略優(yōu)于降糖片組，說明該藥降糖作用明顯。二、上述化合物對正常小鼠糖耐量的影響2．材料與方法2．1材料2．1．1藥品與動物降糖片，批號96064.中外合資正安制藥(天津)有限公司生產(chǎn)。
動物昆明種小鼠，體重20-23g，雌雄皆用，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號921103。2．1．2儀器與試劑半自動生產(chǎn)分析儀，IMPACT 400型，美國GILFORD公司生產(chǎn)。
采用葡萄糖氧化酶法測定血糖值，由北京中生生物工程高技術(shù)公司提供血糖試劑盒。2．2方法上述健康小鼠，根據(jù)體重大小隨機(jī)分組。各組給藥劑量見下表。小鼠每天灌胃給藥，連續(xù)服用12天。糖耐量試驗(yàn)前，動物禁食12小時(shí)，測定各組動物空腹血糖值，然后給藥，1小時(shí)后腹腔注射葡萄糖2g/kg。測定給藥后即刻0，0.5，1.0及2.0小時(shí)的血糖值，并計(jì)算血糖曲線下面積，進(jìn)行組間比較。2．結(jié)果E對正常小鼠糖耐量的影響
注與空白對照組比較，*P＜0.01 #P＜0.001，與降糖片比較@P＜0.05由上表可見，正常小鼠灌服E 500mg/kg或降糖片500mg/kg，連續(xù)12天。經(jīng)葡萄糖負(fù)荷后30-120分鐘內(nèi)，血糖值明顯低于空白對照組(P＜0.005-0.001)血糖曲線下面積亦顯著小于空白對照組(P＜0.001)。說明降糖片及E均有很好的降糖作用。用同等藥物劑量(500mg/kg)，E的血糖曲線下面積比降糖片略小(P＜0.05)。說明E的降糖效果略優(yōu)于降糖片。當(dāng)用藥劑量降至250mg/kg時(shí)，也顯示一定的降糖作用，但其作用減弱。3毒性比較藥物毒性小鼠，昆明種，體重19-21g軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究中心供給，合格證號9211031．急性毒性試驗(yàn)腹腔注射LD50
1242.5mg/kg MTD 641.3mg/kgLD50
1139.2mg/kg MTD 641.3mg/kg口服LD50
9007.5mg/kg MTD 5625mg/kgLD50
8578.9mg/kg MTD 4219mg/kg2．累積毒性試驗(yàn)小鼠腹腔注射1/10 LD50劑量(123.5mg/kg)每日一次，共30天小鼠腹腔注射1/2 LD10劑量(336.5mg/kg)每日一次，共30天結(jié)果上述二組小鼠(每組10只)均無死亡，表明無明顯積蓄作用。但其對于小鼠體重及某些指標(biāo)的影響如下E對體重的影響
E對某些血清生化指標(biāo)的影響
對于某些指標(biāo)如體重、GOT、GPT.1/2 LD10劑量(336.5mg/kg)連給30天后與正常對照組比較有增高的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)差別。1/10LD50劑量連給30天，僅體重似比較對照者稍低，無統(tǒng)計(jì)差別。
由上述小鼠試驗(yàn)看來該化合物毒性頗低，一般來說小鼠口服LD50劑量大于5g/kg者，應(yīng)屬低毒或無毒類物質(zhì)，而且該化合物亦無累積效應(yīng)。
降糖片LD50為247mg/Kg(ip)而化合物E LD50約1100mg/Kg(ip)因此看來化合物E對小鼠的毒性比降糖片為低。
權(quán)利要求
1.具有下述結(jié)構(gòu)的二苯乙烯類衍生物，其特征是用于制備成降血糖藥物的用途。 R1=OH OCH3O glucosyl HR2=H glucosylR3=H glucosyl
2.一種用于降血糖的藥物組合物，其特征包括作為活性成份的權(quán)利要求1中的二苯乙烯類衍生物，及藥用賦形劑或載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，可被配成片劑、膠囊劑、注射劑或顆粒劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的降低血糖化合物,是從天然藥物蓼科大黃屬波葉組植物藏邊大黃、河套大黃等中提取分離的二苯乙烯類成分。該類成分具有降低血糖活性,從而可為臨床上糖尿病患者的治療提供一類新的藥物。
文檔編號A61K31/075GK1294912SQ99122378
公開日2001年5月16日 申請日期1999年11月5日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月5日
發(fā)明者王愛芹, 吳祖澤, 袁麗珍, 唐仲雄 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所