專利名稱：鯊魚(yú)軟骨中抗腫瘤活性成分的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從鯊魚(yú)軟骨中提取抗腫瘤活性成分的工藝。
鯊魚(yú)軟骨中含有中性糖、酸性粘多糖、硫酸軟骨素、蛋白質(zhì)及多種酶的成分，鯊魚(yú)軟骨的提取物中含有高濃度的抑制新生血管生成的活性成分，具有抗腫瘤生長(zhǎng)作用，因而常用于腫瘤的治療。有關(guān)鯊魚(yú)軟骨中活性成分的研究有大量的報(bào)道，鯊魚(yú)軟骨中有效成分的提取也有不少方法，比如海軍醫(yī)學(xué)研究所(該所沈先榮、賈福星的鯊魚(yú)軟骨制劑抗腫瘤作用的研究，發(fā)表在第四次中國(guó)海洋湖沼藥物學(xué)術(shù)開(kāi)發(fā)研討會(huì)論文集下冊(cè)，煙臺(tái)，1994.4)以鯊魚(yú)軟骨為原料，經(jīng)鹽酸抽提，丙酮分級(jí)沉淀、超濾、柱層析等步驟制得鯊魚(yú)軟骨制劑，經(jīng)小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，該制劑具有較強(qiáng)的抑制腫瘤生成的活性；再如加拿大萊斯實(shí)驗(yàn)特納公司的專利(E.杜邦，P.布拉澤奧，C.朱尼奧，具有抗血管生成活性和腫瘤消退作用的鯊魚(yú)軟骨提取物及其制備方法；中國(guó)專利97年CN 1153477)中，將鯊魚(yú)軟骨加入中性水中混合、離心，將上清液凍干后得到了鯊魚(yú)軟骨提取物，該提取物具有抗血管生成特性和體內(nèi)腫瘤消退的活性，并且對(duì)腫瘤細(xì)胞顯示直接的抑制作用，這些提取方法多以提取某種或某類成分為目的，生產(chǎn)得率較低。
由于鯊魚(yú)軟骨原料價(jià)格昂貴，在大生產(chǎn)中需要考慮生產(chǎn)得率，并最大限度地保留其活性成分，本發(fā)明的目的在于提供一種新的對(duì)鯊魚(yú)軟骨成分進(jìn)行提取的工藝，可有較高的收率。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的鯊魚(yú)軟骨中抗腫瘤活性成分的提取工藝，它主要包括將鯊魚(yú)軟骨粉碎后混合，再勻槳或研磨，然后經(jīng)攪拌提取、離心分離、濃縮、凍干、粉碎、過(guò)篩后保藏，其特征在于將粉碎后的鯊魚(yú)軟骨加入到按重量比的1∶2-1∶15的堿式鹽水溶液中，該堿式鹽水溶液的重量濃度為0.5-5％，勻槳或研磨是將軟骨渣與堿式鹽溶液形成的混合物在勻槳器、研磨機(jī)或膠體磨中進(jìn)行充分分散，達(dá)到20目以下的細(xì)度；離心分離是將攪拌提取后的混合物通過(guò)冷凍離心或常溫離心將固體和液體分開(kāi)，濃縮是將離心分離骨渣所得的液體通過(guò)超濾或納濾手段進(jìn)行濃縮，保留分子量在500道爾頓以上物質(zhì)，所有操作都在低于60度的溫度下進(jìn)行。
本發(fā)明由于將粉碎后的鯊魚(yú)軟骨加入到堿式鹽中，并采用相應(yīng)的勻槳或研磨和濃縮手段，對(duì)鯊魚(yú)軟骨進(jìn)行了提取，既可保留這些成分的活性，又保障了較高的收率。
下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述并給出實(shí)施例。
本發(fā)明主要包括將鯊魚(yú)軟骨粉碎后混合，再勻槳或研磨，然后經(jīng)攪拌提取、離心分離、濃縮、凍干、粉碎、過(guò)篩后保藏，其特征在于將粉碎后的鯊魚(yú)軟骨加入到按重量比的1∶2-1∶15的堿式鹽水溶液中，該堿式鹽的水溶液的重量濃度為0.5-5％，以下的濃度均為重量濃度，也可將骨粉、堿式鹽混合后加到水中，使該堿式鹽的濃度達(dá)到0.5-5％，堿式鹽包括鈉、鉀的碳酸鹽，堿式磷酸鹽和有機(jī)酸鹽，在實(shí)施例中堿式磷酸鹽為磷酸氫二鈉和磷酸氫二鉀，有機(jī)酸鹽為乙酸、丙酸及檸檬酸的鈉鹽和鉀鹽；勻槳或研磨是將軟骨渣與堿式鹽溶液形成的混合物在勻槳器、研磨機(jī)或膠體磨中進(jìn)行充分分散，使骨渣的細(xì)度小于5μm；攪拌提取一般在攪拌式反應(yīng)器中進(jìn)行，需攪拌2-12小時(shí)，離心分離是將攪拌提取后的混合物通過(guò)冷凍離心或常溫離心將固體和液體分開(kāi)，濃縮是將離心分離骨渣所得的液體通過(guò)超濾(分子截留量4000道爾頓)或納濾(分子量截留量300道爾頓)方法進(jìn)行濃縮，體積濃縮比為2∶1-10∶1，下面的濃縮比均為體積濃縮比，再采用冷凍真空干燥機(jī)對(duì)濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，溫度為攝氏負(fù)50度至負(fù)10度，以下均為攝氏度，即可得到鯊魚(yú)軟骨的活性提取物，所有操作都在低于60度的溫度下進(jìn)行，據(jù)檢驗(yàn)采用本發(fā)明得到的提取物含有鯊魚(yú)軟骨素、酸性粘多糖、中性糖及蛋白質(zhì)等活性成分，能溶于水，易于吸收，無(wú)任何毒副作用，對(duì)癌細(xì)胞(肝癌、子宮頸癌等)血管內(nèi)皮細(xì)胞的DNA合成及細(xì)胞增殖有明顯抑制，對(duì)實(shí)體瘤(肺癌、骨肉瘤等)的抑制率為40-70％，同時(shí)由于含有粘多糖，還具有提高機(jī)體免疫功能的作用。
實(shí)施例1將20公斤鯊魚(yú)軟骨粉碎至20目，加入到200公斤濃度為1％的碳酸鈉溶液中進(jìn)行混合，將混合物用勻槳器勻槳至＜5μm得到料液，再將該料液加到攪拌器中攪拌，溫度為室溫25度，攪拌時(shí)間6小時(shí)，然后采用冷凍離心機(jī)在4度下，進(jìn)行固液分離，得到上清液，再用超濾機(jī)將該上清液濃縮，濃縮比為1∶0.3，分子截留量為4000道爾頓，再經(jīng)負(fù)40度冷凍真空干燥后，得提取物3.21公斤，產(chǎn)品得率16％。
實(shí)施例2將10公斤鯊魚(yú)軟骨粉碎至20目，加入到130公斤濃度為1.5％的醋酸鉀溶液中進(jìn)行混合，采用膠體磨將骨渣研磨，并使之充分分散，將該料液加到攪拌器中攪拌，在室溫下攪拌12小時(shí)，再經(jīng)離心機(jī)在室溫下進(jìn)行固液分離后，得到上清液，采用納濾機(jī)將上清液進(jìn)行濃縮，濃縮比8∶1，將濃縮液在負(fù)40度下冷凍真空干燥，最后可得到1.8公斤的提取物，得率為18％。
實(shí)施例3將10公斤鯊魚(yú)軟骨粉碎，加入到80公斤0.5％的磷酸氫二鈉水溶液中，用研磨機(jī)將骨渣研細(xì)并與水溶液充分混合得到料漿，將該料漿加到攪拌槽中，室溫下攪拌3小時(shí)，用冷凍離心機(jī)在溫度為4度下進(jìn)行固液分離得到上清液，再用納濾機(jī)將上清液濃縮，濃縮至濃縮比為2∶1，將濃縮液在負(fù)30度下冷凍真空干燥，得提取物1.72公斤，得率為17.2％。
實(shí)施例4將20公斤鯊魚(yú)軟骨粉碎，加入到240公斤濃度為4.5％的醋酸鈉溶液中，采用膠體磨研磨骨渣并使之與水溶液充分混合得到料漿，將該料漿加到攪拌器中，在室溫下攪拌2小時(shí)，再用冷凍離心機(jī)在3度下進(jìn)行離心分離得到上清液，然后用納濾機(jī)將上清液濃縮，濃縮比為5∶1，將濃縮液在負(fù)40度下冷凍真空干燥，得提取物3.56公斤，得率為17.8％。
實(shí)施例5按實(shí)施例2的方法，采用濃度為1.5％的碳酸鉀溶液對(duì)鯊魚(yú)軟骨進(jìn)行活性成分提取，得提取物1.88公斤，得率18.8％。
權(quán)利要求
1.鯊魚(yú)軟骨中抗腫瘤活性成分的提取工藝，它主要包括將鯊魚(yú)軟骨粉碎后混合，再勻槳或研磨，然后經(jīng)攪拌提取、離心分離、濃縮、凍干、粉碎、過(guò)篩后保藏，其特征在于將粉碎后的鯊魚(yú)軟骨加入到按重量比的1∶2-1∶15的堿式鹽水溶液中，該堿式鹽水溶液的濃度為0.5-5％，勻槳或研磨是將軟骨渣與堿式鹽溶液形成的混合物在勻槳器、研磨機(jī)或膠體磨中進(jìn)行充分分散，達(dá)到20目以下的細(xì)度；離心分離是將攪拌提取后的混合物通過(guò)冷凍離心或常溫離心將固體和液體分開(kāi)，濃縮是將離心分離骨渣所得的液體通過(guò)超濾或納濾手段進(jìn)行濃縮，保留分子量在500道爾頓以上物質(zhì)，所有操作都在低于60度的溫度下進(jìn)行。
2.按權(quán)利要求1所述的鯊魚(yú)軟骨中抗腫瘤活性成分的提取工藝，其特征在于堿式鹽包括鈉、鉀的碳酸鹽，堿式磷酸鹽和有機(jī)酸鹽。
3.按權(quán)利要求1所述的鯊魚(yú)軟骨中抗腫瘤活性成分的提取工藝，其特征在于堿式磷酸鹽為磷酸氫二鈉和磷酸氫二鉀，有機(jī)酸鹽為乙酸、丙酸及檸檬酸的鈉鹽和鉀鹽。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鯊魚(yú)軟骨中抗腫瘤活性成分的提取工藝,其特征為:將粉碎后的鯊魚(yú)軟骨加入到按重量比的1∶2—1∶15的堿式鹽水溶液中,該堿式鹽水溶液的濃度為0.5—5%,勻漿或研磨是將軟骨渣與堿式鹽溶液形成的混合物在勻槳器、研磨機(jī)或膠體磨中進(jìn)行充分分散,達(dá)到20目以下的細(xì)度;濃縮是將離心分離骨渣所得的液體通過(guò)超濾或納濾手段進(jìn)行濃縮,保留分子量在500道爾頓以上物質(zhì),所有操作都在低于60度的溫度下進(jìn)行。本發(fā)明既保留了鯊魚(yú)軟骨中的有效成分的活性,又可提高產(chǎn)品的得率。
文檔編號(hào)A61K35/56GK1297739SQ99124188
公開(kāi)日2001年6月6日 申請(qǐng)日期1999年12月1日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月1日
發(fā)明者唐永范, 王焱, 劉振青, 袁玲虹, 金長(zhǎng)根, 高瑞棟, 高明光, 景國(guó)安, 薛國(guó)華 申請(qǐng)人:上海國(guó)寶企業(yè)發(fā)展中心