專利名稱：含花生葉提取物的制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬天然植物藥制劑，具體涉及一種含花生葉提取物的制劑及制備方法。
花生葉為花生的地上部分，含有多種揮發(fā)性成分，70年代開始已有文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于花生葉的研究。例如1973年美國DELAHOMA州立大學(xué)S.E.YOUNG等人將花生葉提取物進(jìn)行水蒸汽蒸餾，乙醚抽提、氣相色譜分析后，鑒定了8個化合物結(jié)構(gòu)，多為萜醇類化合物，見phytochemistry1973；12950。1987年中國廣西右江民族醫(yī)學(xué)院李國鋒等對花生葉的鎮(zhèn)靜催眠作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，采用乙醇、石油醚及水等提取液，結(jié)果表明對小白鼠有鎮(zhèn)靜催眠作用，并且毒性小，安全范圍大，服用方便，見《中草藥》1987年18卷2期第70頁。但至今未見報(bào)道分離其有效成份及用于治療失眠癥的有效部位。
本發(fā)明的目的在于從花生葉提取物中分離能用于治療失眠癥的有效部位及進(jìn)一步分離和確認(rèn)有效成份。
本發(fā)明提供了花生葉提取物的提取和分離方法，該方法是將花生葉粉碎后用水適量煮沸提取二次，過濾，提取液合并濃縮成浸膏，收率約10％(浸膏含水量約50％)，取浸膏，用惰性填料混合均勻，在70℃干燥后研成細(xì)粉，裝入索氏提取器，相繼用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇提取，也可根據(jù)花生葉中存在的化合物類型，應(yīng)用專用溶劑提取分離，制得不同類屬化合物部位。A為總體；B為蛋白質(zhì)；C為多糖；D為黃酮、鞣質(zhì)；E為脂溶物、揮發(fā)油。
上述化學(xué)成份進(jìn)行藥理活性試驗(yàn)結(jié)果如下用光電法測定小鼠自發(fā)活動，其結(jié)果見表1。
服藥劑量為折合生藥1.2克/10克體重(以下如不注明，均同)，灌胃。
表1花生葉5種提取物對小鼠自發(fā)活動的影響(t值)所含化合物 用藥后t值組別類屬 動物數(shù) 0～15’16～30’ 31～45’ 46～60’A 總體4 0.490.15 0.550.62B 蛋白質(zhì) 60.400.81 1.451.71C 多糖60.990.90 1.081.18D 黃酮、鞣質(zhì) 60.791.01 1.651.58E 脂溶物、揮發(fā)油 60.831.80 2.222.12生理鹽水6
從上表看出，E部位能明顯減少小鼠自發(fā)活動，其作用比其它提取物強(qiáng)，將此部位進(jìn)行擴(kuò)大試驗(yàn)，結(jié)果見表2。
表2 E提取物對小鼠自發(fā)活動的影響(t值)用藥后t值組別 動物數(shù) 0～15’16～30’ 31～45’ 46～60’E 10 2.253.15**1.21 0.196生理鹽水10由表2看出，用E后30分鐘內(nèi)可顯著或非常顯著減少小鼠自發(fā)活動。
對E部份進(jìn)一步氣相—紅外聯(lián)用分析結(jié)果見表3。
表3氣相—紅外分析結(jié)果譜 率 含 量 可能的化合物名稱序號 保留值％ VB值*化合物AVB值化合物B VB值 化合物C1 5.240.446 0.24 乙酸乙酯 0.33乙酸甲酯0.34 乙酸丙酯2 7.371.310 0.17 乙丁醚 0.22二丁醚 0.23 三丙醚3 12.08 1.356 0.42 二乙氨基 0.442-丁氧基0.45 4，4’二甲醇乙酸乙酯 乙基己二酸 丁酸4 22.40 2.976 0.13 5-庚烯-6 0.30戊酮-2 0.30 己酮-乙甲基-2酮5 41.38 4.698 0.15 檸檬醛 0.39D-香芹酮0.40 L-香芹酮6 43.73 7.149 0.10 檸檬醛**0.40D-香芹酮0.41 L-香芹酮附注*VB值為匹配系數(shù)，即計(jì)算機(jī)中，儲存的標(biāo)準(zhǔn)圖譜與被測物質(zhì)的相似程度，系數(shù)值越小，表示可信度越高。
5.6峰均表示為檸檬醛，可能為它們的異構(gòu)體結(jié)論(1)通過對有效部位E的藥理活性測定，表明其顯示一定的鎮(zhèn)靜、催眠活性。(2)有效部位E中含有芳樟醇，氣相—紅外圖譜中位于第8位的峰，該物質(zhì)為已知的具鎮(zhèn)靜催眠的化學(xué)組分。
本發(fā)明的又一目的是提供了一種花生葉提取物的制劑，該制劑是由花生葉提取物中的有效成份提取物與藥用輔料組成的，其中可以按含花生 葉有效成份提取物1～85％與含藥用輔料99％～15％的任意比例組成100％的制劑。
本發(fā)明還提供了上述花生葉有效成份提取物制劑的制備方法，該方法是將花生葉經(jīng)干燥、粉碎、通過10～40目篩孔后，置于帶夾套加熱并有回流，蒸餾裝置的多功能反應(yīng)鍋中，144份花生葉先用200～1000份非極性溶液(乙醚、石油醚)回流加熱1～3次，每次2～4h，也可用水蒸汽蒸餾法提取脂溶性成分A，殘葉再用200～1200份極性溶液(乙醇、水)回流提取1～3次，每次1～4h，兩種提取液在去除溶劑后合并，并按處方配以0～2％矯味劑、0～1％防腐劑和其它輔料0～10％后，分別制成口服液、膠囊、片劑、顆粒、沖劑、散劑。
本發(fā)明方法制備的制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制用下列方法1、制劑試樣液[定性鑒別]取花生葉制劑2g，溶于10ml水中，然后在分液漏斗中用5ml乙醚提取2次，合并乙醚液，濃縮至2ml，用作檢驗(yàn)及薄層色譜分析試樣。
取溴水1ml，加制劑的乙醚提取液振搖，溴水由紅色轉(zhuǎn)成灰色，隨著乙醚揮發(fā)，有少量絮狀固體出現(xiàn)。
2、對照藥材及化合物樣品的制備取花生葉對照藥材2g，加乙醚20ml浸漬1h，過濾、濾液蒸干、殘?jiān)靡颐?0ml分兩次提取，合并乙醚提取液、濃縮至2ml，制成對照藥材溶液。
另取芳樟醇及檸檬醛標(biāo)準(zhǔn)化合物1mg，溶于2ml乙醚中，作對照試樣。
3、薄層色譜檢驗(yàn)按中華人民共和國藥典，1995年一部附錄的要求，制備硅膠薄層板，吸取制劑試樣液，藥材及對照品試液各2μl，點(diǎn)于同一薄層板的起始線上，以石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1為展開劑展開(上行法)，碘或FeCl3-K4Fe(CN)6試劑顯色，在制劑與藥材試樣中應(yīng)顯示與標(biāo)準(zhǔn)對照品有相同Rf值的斑點(diǎn)。應(yīng)符合藥典附錄規(guī)定的所屬制劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(詳見中華人民共和國藥典一部1995年版，附錄IB、IC、ID、IJ、IL)。1、揮發(fā)油按中華人民共和國藥典一部，1995年版，附錄XD揮發(fā)油測定進(jìn)行，揮發(fā)油含量應(yīng)在0.01～0.1％之間。
應(yīng)用薄層色譜(附錄VIB)或氣相色譜法分析(附錄VIE)分析揮發(fā)油組成，應(yīng)含檸檬醛及芳樟醇。
檸檬醛含量≥0.01mg/g生藥2、膽堿含量測定芳樟醇含量≥0.001mg/g生藥按中華人民共和國藥典一部1995年版附錄VID規(guī)定，應(yīng)用高壓液相色譜測定花生葉制劑中膽堿含量。
其膽堿含量≥0.02mg/g生藥本發(fā)明的花生葉提取物制劑(落花安神合劑)對家兔皮層電活動和覺醒活動的研究如下一、落花安神合劑II對家兔皮層電活動的影響材料和方法動物新西蘭家兔雌雄皆用成年兔藥物落花安神合劑II，黃山制藥廠生產(chǎn)，結(jié)晶N由交通大學(xué)化學(xué)系提供，灌胃給藥每只兔4ml落花安神合劑(折合生藥12g)。方法實(shí)驗(yàn)前數(shù)天分別用外科手術(shù)預(yù)先在家兔頭部裝置不銹鋼電板，用Nihon Kohden g導(dǎo)記錄儀記錄EEG和呼吸，促眠效應(yīng)按國際公認(rèn)的Sigma和Delta指數(shù)作為評價(jià)的客觀指標(biāo)。結(jié)果用落花安神合劑II號4ml給家兔灌胃后與生理鹽水組比較家兔呈現(xiàn)顯著的Sigma指數(shù)增強(qiáng)效應(yīng)，同時(shí)也可見它若干delta指數(shù)增強(qiáng)效應(yīng)，見表6。給藥前后對比也可見Sigma指數(shù)增強(qiáng)效應(yīng)，同時(shí)也可見delta效應(yīng)增強(qiáng)效應(yīng)，一般口服45min左右可見效持續(xù)2～3h。見表7。
給藥后呈現(xiàn)睡眠效應(yīng)的同時(shí)，呼吸變慢而平穩(wěn)，從口服前的128.6±15.3次/min(N＝7)降低至116.4±12.8次/min(1h后)，(N＝7)2小時(shí)后為103.3±13.8次/min(2h后)(N＝7)口服后成年家兔大腦皮層未見任何異常電波。
表4 落花安神合劑II對家兔皮層Sigma和delta指數(shù)的影響組 別 Sigma指數(shù) Delta指數(shù)生理鹽水組6.2±0.9 2.4±1.1(N＝6) (N＝6)落花安神合劑II組 8.9±1.2*2.7±0.5*P＜0.05
表5 落花安神合劑II號給藥前后對Sigma和delta指數(shù)的影響給 藥 后指數(shù) 給藥前1h 2h 3hSigma指數(shù) 4.8±1.49.9±1.3**9.5±0.8**8.4±1.9**(N＝8)delta指數(shù) 1.7±0.52.6±0.4*2.4±0.4*1.9±1.0(N＝8)*P＜0.05**P＜0.01二、落花安神合劑II對家免覺醒水平的影響材料和方法動物藥物同上，劑量4ml一次灌胃方法用美國最新型專用微型計(jì)算機(jī)mini-logger 2000型將腕部固定傳感器縛于兔一肢體上，聯(lián)接微型計(jì)算機(jī)可記錄家兔24小時(shí)活動情況，表示其覺醒水平，結(jié)果比較給藥前后結(jié)果，見表8。
表6 落花安神合劑II對家兔警醒水平的影響給藥前 給藥后(1h)警醒水平(指數(shù))20.1±7.613.4±5.4*(N＝8)*P＜0.05由以上結(jié)果可見，給藥后第2小時(shí)至第3小時(shí)間指數(shù)顯著減少，故給藥前后有顯著差異。
本發(fā)明的花生葉提取物制劑(落花安神合劑)對豬離體基底動脈的影響如下材料和方法藥物落花安神合劑I(不揮發(fā)部份)上海黃山制藥廠供應(yīng) 批號970129揮發(fā)性部份上海黃山制藥廠供應(yīng)丹參注射液上海第九制藥廠供應(yīng)生產(chǎn)批號 970301去氧腎上腺素 上海第十一制藥廠生產(chǎn) 批號 811223儀器單筆記錄儀 上海自動化儀表廠生產(chǎn)張力換能器，上海職工醫(yī)學(xué)院藥理教研組自制方法豬離體基底動脈取自上海龍華肉類聯(lián)合加工廠，剛屠殺的豬切下豬頭后，立即自枕骨大孔內(nèi)用鑷子取出基底動脈，迅速用kreb’s-Ringer營養(yǎng)液把血液沖洗掉，盡快放入持續(xù)通氧的保溫瓶內(nèi)。20分鐘內(nèi)放入雙層浴槽內(nèi)，同置Kreb’s-Ringer溶液保持37±0.5℃，持續(xù)通氧，負(fù)重1g每30分鐘更換營養(yǎng)液一次，將標(biāo)本連接在張力換能器上，用單筆記錄儀記錄，待穩(wěn)定1.5小時(shí)后開始試驗(yàn)，每次用藥后需沖洗三遍，待穩(wěn)定后再用其他藥物。結(jié)果和討論由表9可見用10-3M去氧腎上腺素后各組標(biāo)本收縮幅度相近。用落花安神合劑I后基底動脈放松，且呈劑量依賴關(guān)系。隨即加入10-3M去氧腎上腺素，基收縮幅度大大減弱。如在標(biāo)本中加入落花安神合劑揮發(fā)性成份后，即使用10％、5％的濃度也未見放松基底動脈的作用，再用去氧腎上腺素基底動脈有明顯的收縮作用。標(biāo)本中加入丹參注射液，其濃度比落花安神合劑I高出一倍，仍未見動脈有放松作用，再用去氧腎上腺素后，動脈收縮作用比落花安神合劑I組明顯。由此可見落花安神合劑的非揮發(fā)性部份對豬離體基底動脈有松弛作用，而揮發(fā)性部份則無此作用，丹參注射液也無放松動脈的作用。但落花安神合劑I放松豬離體基底動脈的作用，尚需經(jīng)整體動物試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。
表7 藥物對豬離體基底動脈的影響10-3去氧腎上腺素n 藥 物10-3M去氧腎小腺素落5.88±2.228 花 3％-4.4±2.85 1.44±1.29安5.74±2.688 神 1.5％ -3.04±1.751.78±1.18合6.06±2.708 劑 0.38％ -1.28±0.953.4±2.59I落6.94±1.968 花 10％ -0.125±0.60 5.48±1.89揮發(fā)性6.33±3.468 成 5％0.06±0.3 6.44±3.0份5.91±1.928 丹 6％-0.63±0.762.16±0.62參7.66±2.128 注 3％0.19±1.71 2.35±2.36射6.96±2.788 液 1.5％ 0.31±1.28 4.05±2.36由于花生葉提取物制劑(落花安神合劑)對腦血管硬化及失眠癥有效，可能與提高免疫功能有關(guān)，其研究結(jié)果如下一、對小鼠非特異免疫功能的影響(一)免疫器官重量法由于免疫興奮劑多使動物脾臟、胸腺和淋巴結(jié)增重，而免疫抑制劑常使上述臟器重量減輕，故用此法觀察花生葉對機(jī)體免疫功能影響。
材料和方法動物小白鼠 昆明種雌雄各半，購自上海生物制品研究所。藥品
花生葉浸膏由上海趙巷中藥廠提供。
醋酸可的松注射液由上海第九制藥廠生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)方法將動物秤體重，隨機(jī)分組，花生葉浸膏經(jīng)稀釋后按折合生藥84.8g/kg體重，給小鼠灌胃，每日一次，連續(xù)七日，醋酸可的松按50mg/kg肌注。于給花生葉浸膏后第2、4、6日各肌注一次，共三次。對照組用生理鹽水按0.2ml/10g體重灌胃，每日一次，共七日。第八日用眶后靜脈放血法處死動物，立即取出脾臟、胸腺、淋巴結(jié)(頜下、腋窩、腹股溝)秤重，各臟器重量以每10克體重表示。所得結(jié)果見下表。
表8 脾臟重量法
表9 胸腺重量法
表10 淋巴結(jié)重量法
結(jié)論由以上結(jié)果可見花生葉浸膏對胸腺、淋巴結(jié)均有明顯增重作用。
(二)碳粒廓清法本法用于觀察單核巨噬細(xì)胞吞噬功能，免疫增強(qiáng)劑常能激活小鼠巨噬細(xì)胞并增強(qiáng)其吞噬功能，免疫抑制劑則抑制之。故兩類藥物可分別使K值增加或減少。
動物和藥品同上。
實(shí)驗(yàn)方法
連續(xù)七日給小鼠灌胃給藥，生量鹽水和肌注氫化可的松實(shí)驗(yàn)第八日給小鼠尾靜脈注射印度墨汁0.05ml/10g體重于注射后1分鐘和5分鐘，分別于眼眶靜脈取血20μl加到0.1％Na2CO3中搖勻，用72型分光光度計(jì)在波長680nm下比色測光密度，再計(jì)算出廓清數(shù)K值，將各組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用t測驗(yàn)求P值，結(jié)果見下表。
表11 碳粒廓清試驗(yàn)
由以上結(jié)果可見花生葉浸膏不能使單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能增強(qiáng)。
二、小鼠免疫特異玫瑰花形成細(xì)胞(RFC)法小鼠外周血，脾細(xì)胞玫瑰花形成法。本法用于觀察藥物免疫早期的抗原結(jié)合細(xì)胞的影響，用于篩選免疫抑制或免疫增強(qiáng)劑。
動物雄性。藥品如下，環(huán)磷酰胺上海第十二制藥廠產(chǎn)品，劑量7.5mg/kg腹腔注射，每日一次共七日。根據(jù)林志彬提出的免疫藥物篩選規(guī)程推薦的方法，各組給藥，小鼠腹腔注射綿羊紅細(xì)胞(SRBC)免疫，4日后取小鼠外周血及脾細(xì)胞懸液(脾細(xì)胞懸液約900萬個細(xì)胞/ml)加入1％SRBC及滅活小牛血清各0.1ml，加入管中混勻，低速離心10分鐘，然后沿管壁加入微量1％甲苯胺蘭，再用尖吸管輕輕分散沉積細(xì)胞使均勻，以混勻的細(xì)胞懸液滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤，在高倍鏡下統(tǒng)計(jì)在1mm3下的玫瑰花數(shù)。凡一個淋巴細(xì)胞外而圍有5個以上SRPC者可認(rèn)為是一個玫瑰花環(huán)。統(tǒng)計(jì)玫瑰花環(huán)百分?jǐn)?shù)如下表。
表12 小鼠外周血玫瑰花環(huán)試驗(yàn)
表13 小鼠脾血玫瑰花環(huán)試驗(yàn)
由以上結(jié)果可見，花生葉浸膏可增強(qiáng)小鼠外周血和脾細(xì)胞玫瑰花環(huán)的形成作用，與生理鹽水組比較可以認(rèn)為花生葉浸膏有明顯增強(qiáng)小鼠細(xì)胞特異免疫作用。
綜上結(jié)果可以認(rèn)為花生葉浸膏能增加小鼠胸腺和淋巴結(jié)重量，增加小鼠外周血和脾細(xì)胞玫瑰花環(huán)的形成，故有部分促進(jìn)小鼠非特異免疫和細(xì)胞免疫的功能。
本發(fā)明的花生葉提取物制劑(落花安神合劑)對老年大鼠學(xué)習(xí)、記憶的影響，見

圖1對照組及服藥組正式學(xué)習(xí)訓(xùn)練7天過程反應(yīng)正確比較示意圖。
材料與方法1、實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠雄性15月齡，正式學(xué)習(xí)訓(xùn)練前，先每鼠測定反應(yīng)正確率三次，然后按正確相近者隨機(jī)分為對照組及服藥組。二組除喂同樣飼料外，對照組每天給予飲水，服藥組于飲水中加入10ML藥/鼠/天。三周后，二組動物正式學(xué)習(xí)訓(xùn)練。
2、實(shí)驗(yàn)方法采用三臂等長Y型迷宮(張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠)，迷宮箱底鋪設(shè)直徑0.2cm，長14cm的銅棒，棒間距1cm，每臂長45cm，頂端各裝15W信號燈。
學(xué)習(xí)能力測試每天固定時(shí)間進(jìn)行一次測試，7天為一周期。實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠放入迷宮箱的一臂，靜置2分鐘后開始給予電刺激，同時(shí)順時(shí)針方向的另一臂給予燈光信號，表示安全區(qū)(不通電)，若大鼠受電擊后，直接逃至安全區(qū)，則記錄為“正確反應(yīng)”，若逃至無燈光的另一臂，則記錄為“錯誤反應(yīng)”，一次反應(yīng)結(jié)束后，間歇5秒鐘，仍按上述方法進(jìn)行第二次電擊，連續(xù)20次，計(jì)算其正確率。
記憶能力測試學(xué)習(xí)測試結(jié)束后，第15天、30天、45天、60天，再以同樣方法測試正確率。
本發(fā)明花生葉浸膏急性毒性試驗(yàn)動物
昆明種小自鼠雌雄各半，體重18-22g。
藥物891安神口服液(落花安神合劑)，劑量按最大劑量，最大灌胃容量，給小白鼠灌胃按相當(dāng)5.54g生藥/20g體重，一次灌胃，按公斤計(jì)為277g/kg，為人每日用量的277倍(按公斤體重計(jì)算)。
對照組5只動物，不給任何藥品。觀察記錄一次灌胃給藥后，給藥組小鼠活動較給藥前減少，但仍能走動，有探究及修飾動作，無昏睡。一小時(shí)后活動完全恢復(fù)到用藥前水平。
繼續(xù)飼養(yǎng)觀察7天，飲食正常活動自由，毛發(fā)光澤，體重增加，無一死亡，7天后進(jìn)行病理解剖，對照組活動正常。結(jié)果對照組(不給藥)雄性小白鼠5只觀察心臟漿膜面呈淡紅色，左右心房心室呈明顯擴(kuò)大，心瓣膜完好。肺左右肺淡紅色，無明顯水腫及充血現(xiàn)象。腎左右腎臟，表面光滑，淡紅色，無明顯腫大及充血現(xiàn)象。肝表面光滑，淡紅色，無腫大無充血現(xiàn)象。脾表面光滑，淡紅色，無充血腫及腫大現(xiàn)象。
給藥組雌性組10只，雄性組10只，小白鼠與對照組結(jié)合觀察心臟與對照組對照大小相仿，漿膜面淡紅色，左右心房，心室無明顯擴(kuò)張，心瓣膜完好。肺左右肺淡色，無明顯水腫及充血現(xiàn)象。腎左右腎臟與對照組大小相仿，表面光滑無明顯腫大充血現(xiàn)象。肝與對照組相仿，表面光滑，淡紅色，無明顯腫大現(xiàn)象。脾與對照組大小相仿，表面光滑，淡紅色，無明顯腫大現(xiàn)象。脾表面光滑，淡紅色，無充血腫大現(xiàn)象。
本發(fā)明的花生葉提取物制劑(落花安神合劑)灌胃對大鼠的長期毒性試驗(yàn)結(jié)果如下受試品 落花安神合劑動物上海市計(jì)劃生育研究所B-K公司繁殖的SD大鼠(6周齡)，體重80-120g，飼養(yǎng)一周后為116-155g。
方法動物在恒溫(20±1℃)室內(nèi)飼養(yǎng)一周，測定實(shí)驗(yàn)觀察的生理生化指標(biāo)一次，選擇各項(xiàng)指標(biāo)正常的動物60只，按體重分層，隨機(jī)分為三組，每組20只，雌雄各半。兩給藥組分別用安神合劑120g/kg和30g/kg(以落花生枝葉生藥量計(jì))灌胃，此高、低兩給藥組劑量分別相當(dāng)于擬用于臨床劑量的100倍和25倍(擬用于臨床劑量為60g/50kg體重，即1.2g/kg)?？瞻讓φ找哉麴s水10ml/kg灌胃(與給藥的容積相同)，每天一次，每周6次，周日休息，連續(xù)三月。停藥后宰殺一半做病檢，另一半繼續(xù)觀察，1個月后活殺做病檢。觀察大鼠一般狀況即行為活動、食量、體重和糞便等，體重一周測一次，食量每天記錄。血象指標(biāo)有RBC、Hb、WBC和DC。血液生化指標(biāo)有AST、ALT、BUN、Tch。給藥前(d0)、給藥期間(d45，d90)以及停藥后一個月d120各測定一次上述血象和血液生化指標(biāo)，病檢心、肺、胃、腸(大腸、回腸及十二指腸)、肝、胰、脾、腎、腦、膀胱、睪丸、附睪(或子宮、卵巢)、前列腺、胸腺、腎上腺、腸系膜淋巴結(jié)、脊髓等，進(jìn)行肉眼觀察，測定臟器系數(shù)和制作病理切片，高劑量組及對照組光鏡檢查結(jié)果如無與藥物有關(guān)的毒性損害，小劑量組即不再光鏡檢查。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以X±SD表示，組間比較用F檢驗(yàn)，P＜0.05作為有顯著性差異。
結(jié)論安神合劑，灌胃對大鼠的三個月長期毒性試驗(yàn)表明安神合劑在采用相當(dāng)于擬用臨床劑量的25和100倍的劑量灌胃大鼠后，與對照組比較，未見所有生理生化指標(biāo)及病理檢查的異常改變，且均在正常值范圍內(nèi)，說明安神合劑灌胃對大鼠基本無毒。
本發(fā)明的花生葉提取物制劑(落花安神合劑)臨床治療失眠癥的研究如下一、典型病案(一)胡××，女，16歲，學(xué)生，門診號0053，1992年2月11日就診，失眠近半年，患者去年秋季考入高中住讀，因宿舍環(huán)境嘈雜，且學(xué)業(yè)緊張，引起失眠，或難以入睡、或入睡但夢擾紛紜，易醒，醒后不能再入睡，時(shí)自服安定以佐睡，醒后頭昏腦脹，上課注意力不集中，情緒急躁，心煩、口干、面時(shí)烘熱，學(xué)習(xí)成績下降，胃納可，大便正常。苔薄少津、舌質(zhì)偏紅、脈細(xì)帶弦。診斷為原發(fā)性失眠癥。辨證肝陽偏亢，心陰不足。治療第一天晚停服安定，臨睡前服用落花安神合劑20毫升，夜間仍只能睡2～3小時(shí)。第二天患者考慮到安定已有一定的依賴性，改服落花安神合劑40毫升加安定半片，結(jié)果臥床半小時(shí)即入睡，中間醒一次，尚能再入睡，少夢，一夜能睡6小時(shí)以上，之后自覺睡眠逐日改善，晚間周圍環(huán)境雖未改變，但可睡7～8小時(shí)，白天精神基本恢復(fù)正常。第二周停服安定，繼續(xù)服用落花安神合劑，每晚臨睡前服50毫升，維持一個月。二個月后，其母親來院代訴，患者睡眠已恢復(fù)八小時(shí)以上，精神情緒均佳，學(xué)習(xí)成績上升，要求再配落花安神合劑八袋備用。(二)季××，女，42歲，工人，門診號0037，1992年9月1日就診，失眠三月余，三個月前因夫妻爭吵，情緒激動，過后精神抑郁，即引起失眠，一夜只能睡2～3小時(shí)，咽干不適、胸悶噯氣、時(shí)惡心、心慌不安、心煩易怒，時(shí)升火，目赤、口苦口干。苔黃膩、舌質(zhì)紅，脈細(xì)弦微數(shù)。診斷為原發(fā)性失眠癥。辨證肝心火旺，胃氣上逆。治療1、安神合劑，每日早晨服20毫升，晚上臨睡前服40毫升，2、平肝瀉火，和胃降逆復(fù)方(黃連、半夏、枳殼、桔梗、郁金、赤芍、柴胡、生牡蠣、靈磁石、釣藤、黃芩、生石斛、元參、麥冬)，七貼，一周后復(fù)診自訴藥后心煩減輕，睡眠稍安，能睡3～4小時(shí)，胃和氣舒，口干口苦均好轉(zhuǎn)，苔薄微黃膩，舌紅，脈細(xì)微弦。再繼續(xù)前方七貼，安神合劑60毫升/日，繼續(xù)服用。1992年9月22日失眠已愈，心慌、心煩亦消失，現(xiàn)一夜可睡7～8小時(shí)，近二天感冒，故來就診，安神合劑已停服，二周后復(fù)診，睡眠仍正常，未見復(fù)發(fā)。二、結(jié)語花生枝葉在我國資源甚豐富，以每年8～10月份為采集佳期，其藥用在古代文獻(xiàn)記載較少，現(xiàn)代民間單方中有零星記載，但多不詳，其性味功能亦未確定。我們以發(fā)掘整理民間單方草藥出發(fā)，回憶幼年在農(nóng)村生活朝夕觀察所見，根據(jù)其性能順乎自然界陰陽消長規(guī)律“晝開夜合”的生物特性，設(shè)想可能與人類睡眠功能存有某種相關(guān)關(guān)系。于是自1988年起，采用以花生葉枝葉制成的“落花安神合劑”，對其藥用功效主治進(jìn)行臨床和實(shí)驗(yàn)研究。臨床觀察對象為上海市中醫(yī)醫(yī)院和上海市中醫(yī)文獻(xiàn)館、中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院門診病人，先后共診治病例30000余次，其中系統(tǒng)觀察162例，均系經(jīng)常性失眠，而服用其他中西藥物效果不佳或有副反應(yīng)者。經(jīng)用統(tǒng)一的診斷辨證標(biāo)準(zhǔn)及觀察方法，表明其有效率在90％以上。一般在服藥后1～3天見效，一周后逐步增強(qiáng)，且連續(xù)服用無任何副作用或依賴性，實(shí)驗(yàn)研究采用小白鼠光電活動測定試驗(yàn)，觀察記錄亦顯示花生枝葉能使小白鼠自主活動次數(shù)減少，有鎮(zhèn)靜安眠作用。急性毒理試驗(yàn)安全，無毒性。根據(jù)上述研究結(jié)果，可以確定花生枝葉具有很好的治療失眠癥功效，花生枝葉還能降低血壓而可用于治療高血壓。
本發(fā)明的花生葉提取物制劑(落花安神合劑)對治療失眠癥效果顯著，并能增強(qiáng)免疫功能，改善腦血管功能，有較好的臨床作用，本發(fā)明制備方法簡便、宜于規(guī)模型生產(chǎn)。本發(fā)明的制劑可以是口服液、膠囊、片劑、顆粒、沖劑、散劑。
實(shí)例一、100g干燥花生葉粉碎或10目粗粉，用5倍量水浸漬24小時(shí)后，行水蒸汽蒸餾至餾出液呈透明狀，蒸餾液冷卻后密閉放置備用。殘葉中加入2倍量水煮沸2小時(shí)，過濾、濾渣，再同法提取一次。兩次提取液合并后真空濃縮至比重為1.2，在濃縮液中加入3倍量體積的95％乙醇，放置12小時(shí)后真空過濾，濾渣去除后回收酒精，在濃縮液中加入5％蔗糖、1％甜蜜素，然后加入揮發(fā)油，調(diào)整體積至3g生藥/ml，灌裝(10ml/瓶)后煮沸消毒，即為花生葉口服液制劑。
實(shí)例二、100克干燥花生葉粉碎或10目篩粗粉，按例1制得蒸去酒精的濃縮液，比重為1.1，噴霧干燥，再加入5％糊精，干法制粒，拌以揮發(fā)油后密封包裝即為顆粒沖劑。
實(shí)例三、100克花生葉粉碎成10目粗粉后，用5倍量石油醚(60～90℃)冷浸24小時(shí)，過濾，濾液在蒸去溶劑后得脂溶性部位，備用，殘?jiān)诩訜嵴舫兔押蠹尤?倍量70％乙醇，回流提取2次，每次2.5小時(shí)，過濾、合并濾液，真空回收乙醇使?jié)饪s液比重為14，真空烘干，粉碎或60目加入5％淀粉，5％微晶纖維，1％硬脂酸鎂后制粒整粒并拌以脂溶性部位，壓片、塑封、包裝。
實(shí)例四、例3所得之顆粒劑裝入膠囊，塑封包裝，即為花生葉膠囊制劑。
實(shí)例五、例2所得之噴霧干燥產(chǎn)物制粒粉碎，通過6號篩，密封包裝，即為散劑。
權(quán)利要求
1.一種含花生葉提取物的制劑(落花安神合劑)，其特征在于該制劑是由花生葉提取物與藥用輔料組成的，并且按含花生葉提取物1～85％與含藥用輔料99～15％的任意配比組成100％的制劑。
2.一種如權(quán)利要求1所述的一種含花生葉提取物的制劑的制備方法，其特征在于該方法是將花生莖葉經(jīng)干燥、粉碎、通過10～40目篩孔后，置于帶夾套加熱并有回流，蒸餾裝置的多功能反應(yīng)鍋中，144份花生葉先用200～1000份非極性溶液(乙醚、石油醚)回流加熱1～3次，每次2～4h，也可用水蒸汽蒸餾法提取脂溶性成分A，殘葉再用200～1200份極性溶液(乙醇、水)回流提取1～3次，再次1～4h，兩種提取液在去除溶劑后合并，并按處方配以0～2％矯味劑、0～1％防腐劑和其它輔料0～10％后，分別制成口服液、膠囊、片劑、顆粒、沖劑、散劑。
3.一種如權(quán)利要求1和2所述的含花生葉提取物的制劑的制備方法，其特征在于其中所述的花生葉提取和分離方法包括下列步驟花生葉粉碎后用水適量煮沸提取二次，過濾，提取液合并濃縮成浸膏，收率約10％(浸膏含水量約50％)，取浸膏，用惰性填料混合均勻，在70℃干燥后研成細(xì)粉，裝入索氏提取器，相繼用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇提取，也可根據(jù)花生葉中存在的化合物類型，應(yīng)用專用溶劑提取分離，制得不同類屬化合物部位，A為總體；B為蛋白質(zhì)；C為多糖；D為黃酮、鞣質(zhì)E為脂溶物、揮發(fā)油。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含花生葉提取物的制劑,該制劑是由花生葉提取物與藥用輔料制成的。本發(fā)明提供了花生葉有效成份的提取方法及花生葉提取物制劑的制備方法。
文檔編號A61K36/00GK1257730SQ9912420
公開日2000年6月28日 申請日期1999年12月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月2日
發(fā)明者王翹楚, 龐傳宇, 杜上鑒, 施明, 徐建, 張曉峰 申請人:王翹楚, 龐傳宇, 杜上鑒, 施明, 徐建, 張曉峰