專利名稱：用于治療咳喘病及肺動(dòng)脈高壓的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療咳喘病和肺動(dòng)脈高壓的藥物組合物，更具體而言，該組合物包括澤蘭提取物作為活性成分，而所述的咳喘疾病例如是慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺心病、慢性支氣管炎等久咳入絡(luò)所致的疾病。
慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘疾患以及此類疾病中涉及的肺動(dòng)脈高壓發(fā)病率高、死亡率亦高。在根據(jù)衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)的城市地區(qū)前10位死因順序中，呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率為9.254萬/10萬，在城市居第三位，而在農(nóng)村則居首位。在我國北方、南方部分地區(qū)10萬≥15歲以上人群的進(jìn)一步調(diào)查，COPD仍占人群的3.17％，其中COPD疾病的23.4％繼發(fā)了肺心病。即使在諸如美國等的發(fā)達(dá)國家或地區(qū)，肺動(dòng)脈高壓占34歲以上男性人群的13.4％。呼吸系統(tǒng)疾病呈上升趨勢，可能與工業(yè)發(fā)展中的環(huán)境污染有關(guān)，應(yīng)作為我國的前車之鑒。這說明防治肺動(dòng)脈高壓、慢性支氣管炎、COPD和肺心病等呼吸系統(tǒng)疾病的重要性、有十分重要的戰(zhàn)略意義。特別是尋找高效低毒、純天然藥物則更為重要。
目前防治慢性支氣管炎、COPD、肺心病、和肺動(dòng)脈高壓的常用藥為抗炎藥、解痙藥、一氧化氮(NO)等。中藥有益氣養(yǎng)陰沖劑、固本咳喘片、氨茶堿、雙黃蓮等。但是，仍尚無令人滿意的藥物。近年推出的NO的缺陷是半衰期短，而且停藥后2分鐘，肺動(dòng)脈壓立即回升。某些膠原抑制劑如β氨基丙腈和順-4羥-L-脯氨酸酶等，因副作用大而不能廣泛應(yīng)用。中醫(yī)中藥雖有一定療效，但尚不十分滿意或無成方推出。
因此，本發(fā)明的目的就在于尋找效果好、副作用小的高效低毒藥物用于上述疾病的治療。
令人驚奇的是，本發(fā)明的上述目的通過包括澤蘭水提取物的藥物組合物即可實(shí)現(xiàn)。該提取物的制備方法如下用水浸沒澤蘭，在98℃至沸騰的溫度下進(jìn)行提取，然后按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行后處理。
澤蘭拉丁名為Lycopus Lucydus Turcy，文獻(xiàn)記載其功用為活血、通經(jīng)行水、為婦科調(diào)經(jīng)用藥、用于經(jīng)閉、產(chǎn)后腹痛、小便不利等癥。其功能主治活血、行水。治經(jīng)閉癥瘕、產(chǎn)后瘀滯腹痛、身面浮腫、跌打損傷、金瘡、痛腫。《本經(jīng)》中記載為“主乳婦內(nèi)，中風(fēng)余疾，大腹水腫、身面四肢浮腫、骨節(jié)中水、金瘡、痛腫瘡膿”?！度杖A子本草》中記載為“通九竅、利關(guān)脈、養(yǎng)血?dú)?，破宿血、清癥瘕、產(chǎn)前產(chǎn)后百病……”。未曾記載或報(bào)道用于肺動(dòng)脈高壓、慢性支氣管炎、COPD、肺心病等呼吸系統(tǒng)疾病防治。目前為止，未發(fā)現(xiàn)用澤蘭及其有效成份防治慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘病和肺動(dòng)脈高壓。85版、95版藥典及有關(guān)中醫(yī)藥書藉、文獻(xiàn)尚無記載，也未見文獻(xiàn)報(bào)道。
經(jīng)過我們的研究首次發(fā)現(xiàn)澤蘭有抗缺氧、抗自由基、降低羥脯氨酸、降低肺動(dòng)脈高壓、改善肺血流及肺功能等作用。并基于此機(jī)理在國內(nèi)外首次將澤蘭的水提取物用于治療肺動(dòng)脈高壓、慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘病，打破了中醫(yī)藥認(rèn)為澤蘭僅僅作為血藥，而只有氣藥才能治療呼吸系統(tǒng)疾病的傳統(tǒng)觀念。實(shí)驗(yàn)表明慢性阻塞性肺疾病、肺心病等疾患有缺血、缺氧、血脈瘀阻、久咳入絡(luò)等癥狀，因此采用血藥可收到良好的效果。
所述澤蘭的水提取物是如下制備的用水浸沒澤蘭，加熱至98℃-沸騰的溫度進(jìn)行提取，然后按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行后處理，由此得到粉末狀的提取物。其中水的用量沒有具體限制，只要其浸沒澤蘭即可，但優(yōu)選為澤蘭量的6-10倍。所用的水最好為蒸餾水。
本發(fā)明的藥物組合物包括該提取物作為活性成分，并任選地包括本領(lǐng)域已知的藥物學(xué)上可接受的載體。所述提取物在該組合物中的含量優(yōu)選為大于80重量％，最優(yōu)選為90重量％。
可用本領(lǐng)域已知的方法及輔料將上述組合物加工成片劑、膠囊劑、針劑等劑型。
另一方面，我們還從澤蘭的水提取物中進(jìn)一步分離了其中的有效成份樺木酸和熊果酸，并首次發(fā)現(xiàn)它們有抗缺氧、降低血小板聚集、以及改善微循環(huán)的作用。
本發(fā)明的澤蘭提取物及其中的有效成分(樺木酸和熊果酸)對慢性支氣管炎、COPD、肺心病有較好的療效，并能改善臨床癥狀、體征；改善肺血流動(dòng)力學(xué)；改善肺功能；提高氧分壓、降低二氧化碳分壓；降低血小板聚集。其有效率為80-86％。在治療上述病癥時(shí)，本發(fā)明的澤蘭提取物的用量對于成人為相當(dāng)于生藥20-40g/日(60kg體重)。
以下將通過實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，但應(yīng)理解的是，本發(fā)明并僅局限于此。實(shí)施例1澤蘭提取物的制備將澤蘭1kg放入在一個(gè)適當(dāng)?shù)娜萜髦校尤胝麴s水至浸沒澤蘭，然后加熱至沸騰進(jìn)行提取。提取完成后，進(jìn)行粗濾，然后減壓濃縮出浸膏、干燥、粉碎，最后得到粉末狀的提取物180g。實(shí)施例2樺木酸和熊果酸的分離和鑒定用95％乙醇回流提取實(shí)施例1中制得的粉末100g，然后將由此得到的提取物吸附于60目硅膠上。待溶劑揮發(fā)后，將吸附有提取物的硅膠置于索氏提取器中，并依次用石油醚、氯仿和甲醇回流提取，分別得到石油醚部分、氯仿部分和甲醇部分。然后傾倒出殘?jiān)?，待甲醇完全揮發(fā)后用蒸餾水煮提，得到水提取部分。
石油醚部分進(jìn)行硅膠柱層離，其中以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑，并逐漸擴(kuò)大乙酸乙酯的含量進(jìn)行梯度洗脫，同時(shí)用薄層色譜進(jìn)行鑒定。由62-66份(25％乙酸乙酯-石油醚洗脫)得到無色結(jié)晶狀物質(zhì)。該結(jié)晶狀物質(zhì)的熔點(diǎn)為299-300℃，Lieberman-Burchard反應(yīng)呈陽性。元素分析實(shí)測值(％)C76.37H10.52,與分子式C30H48O3·CH3OH的計(jì)算值相同。IR(KBr)cm-13500,2970,2900,1690,1650,1385,1375,880。MSm/2456 (M+),438,423,411,248,207,189(100％)。與樺木酸標(biāo)準(zhǔn)品對照Rf相同，混合熔點(diǎn)不降低。由此確定此結(jié)晶狀物質(zhì)為樺木酸。
并對氯仿部分進(jìn)行分離。取500g的硅膠，滴加10％蒸餾水，攪拌后以氯仿為溶劑進(jìn)行濕法裝柱，并用氯仿-丙酮為洗脫劑，其中逐漸加大丙酮的含量進(jìn)行梯度洗脫。薄層條件為中性硅膠G薄層，以6％丙酮-氯仿展開，用磷鉬酸顯色。由34-55份得到結(jié)晶，在61-74份得到淡綠色粉末狀晶體。再以乙醇為溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，并用活性炭脫色，最后得到無色簇針狀晶體。該簇針狀晶體的熔點(diǎn)為270-272℃，Lieberman-Burchard反應(yīng)呈陽性。元素分析的實(shí)測值(％)為C78.35H10.67(C30H48O3的值為C78.95H10.61)。IR(KBr)cm-13532,2956,2876,1718,1390,1380,1362(A區(qū)三個(gè)吸收峰)，1326,1286,1246(B區(qū)有三個(gè)吸收峰)。MS m/2456(M+),438,410,248(％),208,207,190,189,133。與熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品對照Rf相同，混合熔點(diǎn)不降低。由此確定此結(jié)晶狀物質(zhì)為熊果酸。實(shí)施例3澤蘭提取物對降低肺動(dòng)脈高壓的作用1、材料和方法1.1動(dòng)物Wister大鼠，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，雌雄各半體重130-170g，設(shè)正常對照組、肺動(dòng)脈高壓模型組、小劑量測試組、大劑量測試組、預(yù)防組、和陽性藥對照組共六組，每組6-8只，隨機(jī)分組。
1.2方法1.2.1肺動(dòng)脈高壓大鼠模型復(fù)制(1)常壓缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠模型采用自制常壓缺氧艙，艙內(nèi)充以氧氮混合氣體，氧濃度為10±0.5％，每日缺氧6小時(shí)，每周6天，共3周，對照置于室內(nèi)艙外相同條件飼養(yǎng)。
(2)野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓大鼠模型將野百合堿配成2％溶液，實(shí)驗(yàn)各組大鼠50mg/kg一次性肩胛區(qū)皮下注射，正常對照組注入等量生理鹽水，觀察周期為45天。
1.2.2給藥劑量、途徑和時(shí)間缺氧性肺動(dòng)脈高壓分以下六組(1)小劑量測試組自實(shí)驗(yàn)開始后第10天起每日以25g/kg體重的劑量在進(jìn)艙前一次灌胃給藥實(shí)施例1中得到的澤蘭提取物，并缺氧飼氧。
(2)大劑量測試組自實(shí)驗(yàn)開始后第10天起，每日以50g/kg體重的劑量分別在進(jìn)艙前和出艙后分兩次灌胃給藥實(shí)施例1中得到的澤蘭提取物，并缺氧飼養(yǎng)。
(3)預(yù)防給藥組自實(shí)驗(yàn)開始當(dāng)日起，每日按50g/kg體重的劑量分別在進(jìn)艙前和出艙后分兩次給藥實(shí)施例1中得到的澤蘭提取物，并缺氧飼養(yǎng)。
(4)陽性藥對照組自實(shí)驗(yàn)開始第10天起，每日按50g/kg體重的劑量給予氨茶堿，3g/kg體重的劑量給予麥迪霉素，它們分兩次分別在進(jìn)艙前和出艙后給予，并缺氧飼氧。
(5)肺動(dòng)脈高壓模型組缺氧飼養(yǎng)，不給藥，(6)正常對照組給予等量生理鹽水，不缺氧，常規(guī)飼養(yǎng)。
1.2.3測定方法(1)肺動(dòng)脈壓測量參照孫波等的方法(孫波，劉文列，右心導(dǎo)管測定大鼠肺動(dòng)脈壓的實(shí)驗(yàn)方法，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)19846466)，將聚乙烯動(dòng)脈插管經(jīng)頸外靜脈向近心端插入，插管另一端的換能器連接于生理記錄儀上，依次經(jīng)上腔靜脈、右心房、右心室進(jìn)入肺動(dòng)脈，分別描述并計(jì)算右心室和肺動(dòng)脈的壓力。
(2)右心肥大指標(biāo)測定游離心臟，剪去心房，以室間隔為界將心室剪為右心室和左心室加室間隔兩部分，分別稱重，并計(jì)算右心室/體重(RV/BW)和右心肥大指數(shù)值(RVHI，即右心室重/左室+室間隔重)，以RVHI＞0.33作為判斷右心肥大的指標(biāo)。
(3)丙二醛(MDA)測定參照OhKawa等介紹的硫代巴比妥酸(TBA)法(Ohkawa H.等人，Assay for lipidperoxidation in animal tissuesby thiobarbituric acid reaction,Anal.Biochem.1979 95351)測定肺組織中的MDA含量。
(4)羥脯氨酸(HYP)測定；肺組織中HYP含量測定采用Switzer氏法進(jìn)行。
(5)病理觀察常規(guī)制作切片，HE染色。
(6)超微結(jié)構(gòu)觀察常規(guī)制作超薄切片，透射電鏡觀察。
1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，t檢驗(yàn)直線相關(guān)分析。2、結(jié)果2.1本發(fā)明的澤蘭提取物對缺氧性肺動(dòng)脈高壓的防治效果2.1.1血液動(dòng)力學(xué)觀察不同劑量的澤蘭提取物和陽性藥均能明顯降低右心室壓和肺動(dòng)脈壓，使肺血管阻力降低，而且右心肥大程度明顯減輕(見表1)。
2.1.2病理觀察正常對照組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)正常，肺泡壁薄，相鄰肺泡壁緊密相貼。缺氧模型組大鼠肺有彌漫性增生性病變，肺泡壁明顯增厚，肺泡壁內(nèi)有血性滲出物，周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤，部分肺泡閉塞。小劑量測試組大鼠肺泡壁增厚明顯減輕，血管及支氣管周圍有少量淋巴細(xì)胞浸潤。大劑量測試組大鼠肺泡壁稍增厚，少許淋巴細(xì)胞浸潤。預(yù)防組大鼠大部分肺泡結(jié)構(gòu)正常，散在肺泡壁輕度增厚和周圍淋巴細(xì)胞浸潤。陽性藥組大部分肺泡壁增厚，但較模型組減輕，間質(zhì)細(xì)胞增多，肺泡壁充血。
2.1.3超微結(jié)構(gòu)觀察正常對照鼠未見明顯異常。缺氧模型對照組肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞，肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞肺泡間質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)較模糊，其線粒體腫脹，嵴減少，部分線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生空泡化(水腫)，間質(zhì)Ⅰ型膠原纖維增多，使肺泡間隔變厚。大劑量測試組肺泡上皮細(xì)胞、肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及氣血屏障無明顯病損。小劑量測試組肺泡上皮細(xì)胞、肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺間質(zhì)細(xì)胞的線粒體較多發(fā)生腫脹、空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大。預(yù)防組無明顯病變，但少數(shù)線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化。陽性藥對照組肺泡上皮細(xì)胞多數(shù)線粒體腫脹，嵴溶解，空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞，肺間質(zhì)細(xì)胞亦見上述明顯病變，間質(zhì)Ⅰ型膠原及纖維增多。
2.1.4對肺組織丙二醛含量的影響澤蘭提取物可以降低肺組織MDA，降低脂質(zhì)過氧化(見表1)。
2.1.5羥脯氨酸含量測定澤蘭可降低肺組織羥脯氨酸含量(見表1)。
2.2澤蘭提取物對野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓的防治作用2.2.1對肺血流動(dòng)力學(xué)影響各治療組右心室壓和肺動(dòng)脈壓顯著降低，肺血管阻力下降，右心肥大程度減輕，肺組織MDA和羥脯氨酸含量降低(見表2)。
2.2.2病理改變正常對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常。模型組大鼠肺泡壁充血、增厚、融合，正常肺泡結(jié)構(gòu)破壞，有大量的中性分葉核細(xì)胞浸潤，小動(dòng)脈壁增厚。小劑量測試組肺泡壁稍增厚、充血，周圍有淋巴細(xì)胞浸潤。大劑量測試組變化基本同小劑量組。預(yù)防給藥組大鼠僅少部分肺泡壁輕度增厚，充血，無其它異常。陽性藥組大鼠肺泡壁輕度充血、增厚，支氣管周圍有大量的淋巴細(xì)胞浸潤，小動(dòng)脈壁增厚。
2.2.3超微結(jié)構(gòu)改變模型組肺泡上皮細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡間質(zhì)線粒體大部分腫脹，嵴減少，空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大，肺泡上皮細(xì)胞表面附有少量壞死，肺間質(zhì)疏松，有小水泡出現(xiàn)。陽性藥對照組肺泡上皮、支氣管上皮細(xì)胞及肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的大多數(shù)線粒體腫脹，空泡化，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，未見壞死。
小劑量測試組肺組織結(jié)構(gòu)欠清晰，但未見壞死，內(nèi)皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中部分線粒體腫脹，空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大，病變比大劑量組明顯廣泛，但比陽性藥組及模型組輕。預(yù)防組肺泡上皮細(xì)胞、肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞部分線粒體腫脹，空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大。3、結(jié)論由表1和2的結(jié)果可以看出，本發(fā)明的澤蘭提取物有降低缺氧性肺動(dòng)脈高壓和野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓的作用，并對它們具有明顯的防治效果，預(yù)防組下降30％，治療組下降26.8％。而且還能顯著降低平均肺動(dòng)脈壓和右心室壓，降低肺血管阻力，減輕右心肥厚程度，預(yù)防組和治療組分別下降21.3％和16.6％。
另外，本發(fā)明的澤蘭提取物可降低肺組織MDA，減輕脂質(zhì)過氧化；并降低肺組織羥脯氨酸含量。
澤蘭提取物的小劑量組、大劑量組和預(yù)防給藥組大鼠平均肺動(dòng)脈壓mPAP與肺組織MDA含量呈顯著正相關(guān)(r分別為0.91、0.92和0.93，P＜0.01)，而且與肺組織HYP的含量亦呈正相關(guān)(r分別為0.87、0.87和0.89，P＜0.01)。
進(jìn)一步分析可以看出，對缺氧性肺動(dòng)脈高壓的作用，預(yù)防組和大劑量測試組優(yōu)于小劑量測試組和陽性藥組。而小劑量測試組優(yōu)于陽性藥組，但比大劑量測試組病變重。
對野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓的作用，大劑量測試組效果最佳，其次為預(yù)防組、小劑量組和陽性藥組。
表1澤蘭提取物對缺氧性肺動(dòng)脈高壓的作用(X±S)
***與對模型組相比p＜0.001#與陽性-藥相比p＜0.051Kpa=7.5mmHg
表2澤蘭提取物對野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓的作用(X±S)
***與對模型組相比p＜0.001#與陽性一藥相比p＜0.05，1Kpa=7.5mmHg實(shí)施例4用實(shí)施例2中分離出的樺木酸和熊果酸進(jìn)行與實(shí)施例3類似的實(shí)驗(yàn)，得到類似的結(jié)果，這表明樺木酸和熊果酸也同樣具有降低缺氧性肺動(dòng)脈高壓和野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓的作用。
權(quán)利要求
1.一種用于治療咳喘病和肺動(dòng)脈高壓的藥物組合物，其包括作為活性成分的澤蘭水提取物以及藥物學(xué)上可接受的載體。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述提取物是通過在98℃-沸騰的溫度下用水提取澤蘭、然后進(jìn)行后處理而制得的。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述咳喘疾病是慢性阻塞性肺疾病、肺心病、慢性支氣管炎。
4.如權(quán)利要求1-3之一所述的藥物組合物，其中，所述澤蘭提取物中的有效成分為樺木酸。
5.如權(quán)利要求1-3之一所述的藥物組合物，其中，所述澤蘭提取物中的有效成分為熊果酸。
6.如權(quán)利要求1-3之一所述的藥物組合物，其為片劑、膠囊或針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘病和肺動(dòng)脈高壓的藥物組合物,其包括澤蘭水提取物以及藥物學(xué)上可接受的載體。所述提取物是通過在98℃－沸騰的溫度下用水提取澤蘭、然后進(jìn)行后處理而制得的。本發(fā)明的組合物具有良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益,有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P11/00GK1298739SQ9912559
公開日2001年6月13日 申請日期1999年12月7日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月7日
發(fā)明者朱明娟, 應(yīng)榮多, 馮菊仙 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所