專利名稱：新的含三(噁唑)的細(xì)胞毒性大環(huán)內(nèi)酯化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過化學(xué)修飾海洋天然產(chǎn)物得到的新的含三(噁唑)的細(xì)胞毒性大環(huán)內(nèi)酯化合物。
此后，又公開了30多種含三(噁唑)的大環(huán)內(nèi)酯化合物(參考文獻(xiàn)4)。
在式(Ⅰ)基團(tuán)的定義中，低級烷基和低級鏈烷?；虻图壨檠趸牡图壨榛糠质侵负?-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、低級烷基部分是指含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。
更具體地講，本發(fā)明涉及HA-1和TH-2，其結(jié)構(gòu)式如下 HA-1和TH-2分別通過化學(xué)修飾已知的Kabiramide B和C制得。
HA-1和TH-2具有抗腫瘤活性。具體地講，HA-1和TH-2對于從人實體瘤如人肺癌、人結(jié)腸癌和人黑素瘤等衍生的細(xì)胞系具有抗腫瘤活性，它們對其它腫瘤細(xì)胞系如白血病和淋巴瘤也具有活性。這些化合物，HA-1和TH-2，對實體瘤具有體外抗腫瘤選擇性。
本發(fā)明還涉及對患有對式(Ⅰ)化合物敏感的惡性腫瘤的哺乳動物進(jìn)行治療的方法，該方法包括，向感染的個體施用治療有效量的式(Ⅰ)化合物或其藥物組合物。
本發(fā)明還提供含有作為活性成分的式(Ⅰ)化合物的藥物組合物及其制備方法。
另一方面，本發(fā)明涉及制備化合物HA-1和TH-2的方法，該方法包括，分別對Kabiramide B和C進(jìn)行化學(xué)修飾。
藥物組合物的例子包括適于口服、局部或胃腸外給藥的任何固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等)或液體(溶液、混懸液或乳液)制劑，它們可以含有純的化合物或同時含有任何載體或其它的藥理學(xué)活性化合物。當(dāng)進(jìn)行胃腸外給藥時，這些組合物必需是無菌的。
含有式(Ⅰ)化合物的藥物組合物的適宜劑量取決于藥物制劑、給藥方式、具體部位、所治療患者以及腫瘤。其它因素如年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排泄速率、患者的病情、藥物聯(lián)用、疾病的反應(yīng)敏感性和嚴(yán)重程度也應(yīng)考慮。給藥可以在最大耐受劑量范圍內(nèi)連續(xù)地或周期性地進(jìn)行?？鼓[瘤活性將細(xì)胞在Eagle’s最低基本培養(yǎng)液中保持在對數(shù)生長期，所述培養(yǎng)液含有Eagle’s平衡鹽、2.0mM L-谷氨酰胺、非基礎(chǔ)氨基酸，不含碳酸氫鈉(EMEM/neaa)；用10％胎牛血清(FCS)、10-2M碳酸氫鈉和0.1g/l青霉素-G+硫酸鏈霉素補充。
采用Bergeron等所述方法(參考文獻(xiàn)5)的改良形式進(jìn)行篩選，以確定并比較這些化合物的抗腫瘤活性。所采用的抗腫瘤細(xì)胞為P-388(來自DBA/2小鼠的淋巴瘤懸浮培養(yǎng)物)、A-549(人肺癌的單層培養(yǎng)物)、HT-29(人結(jié)腸癌的單層培養(yǎng)物)和MEL-28(人黑素瘤的單層培養(yǎng)物)。
將P-388細(xì)胞用1ml含有給定藥物濃度的MEM 5FCS等份液以每孔1×104細(xì)胞接種到16mm孔中。接種另外一組不含藥物的培養(yǎng)物作為對照生長以確保細(xì)胞保持在生長的指數(shù)期。所有測定均一式兩份地進(jìn)行。于37℃、10％CO2下在98％潮濕氣氛中溫育3天后，通過將含藥物孔中的生長與對照孔中的生長相比較確定IC50的近似值。
將A-549、HT-29和MEL-28細(xì)胞用1ml含有給定藥物濃度的MEM10FCS等份液以每孔2×104細(xì)胞接種到16mm孔中。接種另外一組不含藥物的培養(yǎng)物作為對照生長以確保細(xì)胞保持在生長的指數(shù)期。所有測定均一式兩份地進(jìn)行。于37℃、10％CO2下在98％潮濕氣氛中溫育3天后，將孔用0.1％結(jié)晶紫染色。通過將含藥物孔中的生長與對照孔中的生長相比較確定IC50的近似值。
在下表中給出了用細(xì)胞系P-388、A-549、HT-29和MEL-28進(jìn)行的HA-1和TH-2體外細(xì)胞毒性試驗的結(jié)果
以上結(jié)果表明，帶有末端醛甲基的化合物HA-1和TH-2對A-549、HT-29和MEL-28等實體瘤具有體外抗腫瘤選擇性。已知的Kabiramide B和C的分離于1997年5月從Sichang島采集未鑒定的黑色海綿(濕重，13.2kg)。將其二氯甲烷部分(67g)首先通過硅膠真空快速色譜(VFC，分步洗脫)分離，然后通過Sephadex(二氯甲烷-甲醇，1-1)分離，最后通過反相HPLC(甲醇-水-乙酸乙酯，3-2-1)分離得到Kabiramide B(參考文獻(xiàn)6)(24.0mg)和Kabiramide C(參考文獻(xiàn)3)(35.0mg)。
將Kabiramide B(24.0mg)在10ml酸性二氧六環(huán)水溶液(0.5N HCl-二氧六環(huán)，2-3)中于50℃處理2小時制備化合物HA-1。將粗產(chǎn)物在反相HPLC上分離得到6.4mg(28％)玻璃樣的化合物HA-1和7.1mg(30％)回收的Kabiramide B。
HA-1的NMR數(shù)據(jù)為所有化學(xué)位移均是相對于TMS(δ=0ppm)。1H NMR(CDCl3):δ9.75(1H,t,J=2.5Hz),8.10(1H,s),8.04(1H,s),7.59(1H,s),7.29(1H,m),6.33(1H,d,J=16.0Hz),5.18(1H,dt,J=2.0,10.0Hz),5.02(1H,dd,J=8.0,12.0Hz),4.85(1H,s),4.15(1H,m),3.84(1H,m),3.45(3H,s),3.37(3H,s),3.30(3H,s),3.27(1H,dd,J=4.0,7.5Hz),3.07(1H,m),2.73(1H,m),2.62(1H,m),2.57(1H,m),2.53(2H,m),2.45(1H,m),2.43(2H,m),2.36(1H,dd,J=2.0,8.0Hz),2.25(1H,m),2.09(1H,m),1.85(3H,m),1.75(1H,m),1.72(3H,m),1.46(2H,m),1.35(1H,m),1.05(3H,d,J=7.0Hz),1.02(3H,d,J=7.0Hz),1.01(3H,d,J=7.0Hz),0.97(3H,d,J=7.0Hz),0.93(3H,d,J=7.0Hz),0.83(3H,d,J=7.0Hz).13C NMR(CDCl3):δ213.3s,201.8d,172.0s,163.9s,157.7s,156.5s,155.4s,145.5d,141.7s,137.2d,136.9d,135.7d,131.1s,129.8s,115.1d,87.5d,82.2d,78.2d,74.4d,73.5d,70.4d,68.2d,60.6q,57.9q,57.6q,48.7t,46.1t,45.3t,43.4t,42.8t,42.7d,41.7t,37.8t,37.3d,34.7d,34.6t,31.0d,25.3t,25.1d,18.3q(2C),15.6q,13.4q,10.6q,9.2q.IR(CHCl3)3470,3015,1720,1650,1460,1315,1215,915,665cm-1.TH-2的合成將Kabiramide C(35.0mg)在10ml 0.5N HCl-二氧六環(huán)(2-3)中的混合物于50℃攪拌2小時。將混合物在乙酸乙酯和水之間進(jìn)行分配，然后將有機層濃縮。將粗產(chǎn)物在反相HPLC(乙腈-水-乙酸乙酯，6-4-1)上分離得到11.0mg(33％)玻璃樣的化合物TH-2和18.3mg(52％)回收的Kabiramide C。TH-2的NMR數(shù)據(jù)為所有化學(xué)位移均是相對于TMS(δ=0ppm)。1H NMR(CDCl3)δ9.75(1H,t,J=2.3Hz),8.09(1H,s),8.03(1H,s),7.58(1H,d,J=1.0Hz),7.46(1H,ddd,J=16.0,9.5,5.0Hz),6.29(1H,d,J=16.0Hz),5.32(1H,m),5.17(1H,t,J=10.5Hz),4.80(1H,s),3.84(1H,m),3.67(1H,m),3.45(3H,s),3.43(3H,s),3.33(3H,s),3.30(3H,s),3.27(1H,m),3.01(1H,m),2.81(1H,m),2.72(1H,t,J=8.0Hz),2.59(1H,dd.J=14.3,9.7Hz),2.52(1H,m)2.44(1H,m),2.41(1H,m),2.36(1H,m),2.32(1H,m),2.15(1H,m),1.85(1H,m),1.46(1H,m),1.34(1H,m),1.04(3H,d,J=6.7Hz),1.01(3H,d,J=7.0Hz),0.99(3H,d,J=7.0Hz),0.94(3H,d,J=7.0Hz),0.87(3H,d,J=6.4Hz),0.83(3H,d,J=7.0Hz).13C NMR(CDCl3)δ213.4s,201.8d,171.6s,163.2s,157.3s,156.4s,155.4s,142.0d,141.4s,137.1d,136.8d,135.6d,131.1s,129.9s,115.5d,87.4d,82.0d,79.2d,78.3d,74.0d,73.3d,69.3d,60.6q,57.9q,57.6q,57.5q,48.6t,46.0t,45.0t,43.6t,42.9t,41,7t,40.4d,37.3d,34.5d,33.9t,32.9t,30.9d,25.0d(2C),18.2q(2C),15.5q,13.3q,10.7q,8.4q.
參考文獻(xiàn)1．Faulkner,D.天然產(chǎn)物報道(Nat.Prod.Rep.)1997,14,259-302以及其中的參考文獻(xiàn)。2．Scheuer,P.J.等，美國化學(xué)會志(J.Am.Chem.Soc.)1986,108,846-847。3．Fusetani,N.等，美國化學(xué)會志(J.Am.Chem.Soc.)1986,108,847-849。4．海洋生物技術(shù)(Marine Biotechnology)，第一卷，David H.Attaway和Oskar R.Zaborsky編，Plenum Press,New York 1993,211-213以及其中的參考文獻(xiàn)。5．Raymond J.Bergeron,Paul F.Cavanaugh,Jr.,Stever J.Kline,Robert G.Hughes,Jr.,Gary T.Elliot和Carl W.Porter。亞精胺兒茶酚胺酰胺(catecholamide)鐵螯合劑的的抗腫瘤和抗皰疹活性。生物化學(xué)生物物理學(xué)研究通訊(Biochem.Bioph.Res.Comm.)1984.121.848-854。6．Fusetani,N.等，有機化學(xué)雜志(J.Org.Chem.)1989,54,1360-1363。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)化合物 其中X表示低級烷基；R1和R2表示氫或低級烷基；R3a表示氫，R3b表示 或 或R3a和R3b合在一起表示氧；R4表示氫、低級烷氧基或低級烷基；R5表示氫、氨基甲?；虻图夋溚轷；?；R6a表示氫，R6b表示羥基，或者R6a和R6b合在一起表示氧；R7表示氫、低級烷基或羥基甲基；R8表示低級烷氧基或低級烷基；Y1表示氫或甲基，Y2表示氫，或者Y1和Y2合在一起表示雙鍵；在式(Ⅰ)基團(tuán)的定義中，低級烷基和低級鏈烷?；虻图壨檠趸械牡图壨榛糠质侵负?-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。
2．權(quán)利要求1所述的化合物，該化合物為HA-1，其結(jié)構(gòu)式如下
3．權(quán)利要求1所述的化合物，該化合物為TH-2，其結(jié)構(gòu)式如下
4．對患有對權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物敏感的惡性腫瘤的哺乳動物進(jìn)行治療的方法，該方法包括，向感染的個體施用治療有效量的化合物或其藥物組合物。
5．對患有對權(quán)利要求2所定義的HA-1敏感的惡性腫瘤的哺乳動物進(jìn)行治療的方法，該方法包括，向感染的個體施用治療有效量的HA-1或其藥物組合物。
6．對患有對權(quán)利要求3所定義的TH-2敏感的惡性腫瘤的哺乳動物進(jìn)行治療的方法，該方法包括，向感染的個體施用治療有效量的TH-2或其藥物組合物。
7．含有作為活性成分的權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物的藥物制劑。
8．含有作為活性成分的權(quán)利要求2所定義的HA-1或權(quán)利要求3所定義的TH-2藥物制劑。
9．對患有惡性腫瘤的哺乳動物進(jìn)行治療的方法，該方法包括，向感染個體施用治療有效量的權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物和其它抗腫瘤化合物。
10．權(quán)利要求2所定義的HA-1或權(quán)利要求3所定義的TH-2的制備方法，該方法包括，分別對已知的Kabiramide B和C進(jìn)行化學(xué)修飾。
全文摘要
給出了兩種新的含三(噁唑)的細(xì)胞毒性大環(huán)內(nèi)酯化合物,HA－1和TH－2。這些化合物通過化學(xué)修飾海洋天然產(chǎn)物制得。根據(jù)NMR數(shù)據(jù)確定了這些化合物的結(jié)構(gòu)。
文檔編號A61P35/00GK1320127SQ9980456
公開日2001年10月31日 申請日期1999年1月27日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月27日
發(fā)明者比嘉辰雄, D·加西亞格拉瓦洛斯, J·L·弗曼德茲－普思特斯 申請人:格雷厄姆·基思·拉夫爾斯