專利名稱：載體基質(zhì)中活性物質(zhì)的摻入的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過形成各成分的乳液，并采用流化氣體技術(shù)使體系沉淀，來配制與載體相結(jié)合的活性物質(zhì)之制劑的方法。本發(fā)明也涉及由該方法獲得的制劑。
背景技術(shù)：
針對為獲得顆粒系統(tǒng)而使活性物質(zhì)摻入載體基質(zhì)所出現(xiàn)的問題，人們提出過幾種解決方案。所述系統(tǒng)例如可應(yīng)用于立即釋放制劑，變式釋放制劑、延遲釋放制劑、脈沖式釋放制劑等。
該技術(shù)的某些例子如下述文獻(xiàn)所述-熱熔化微囊包封(Schwope等人“生命科學(xué)”，1975,17,1877)-界面聚合法(Birrenbach and Speiser，“藥物科學(xué)”，1976,65,1763,Thies，“化學(xué)技術(shù)百科全書”4ed.Ed.Kirk-Othmer,1996,16,p.632)-溶劑蒸發(fā)法(Cleland，“疫苗設(shè)計(jì)，亞單元和輔藥法”，Eds:Powelland Newman Plenum Press,New York,1995,439)-溶劑萃取(Cleland，“疫苗設(shè)計(jì)，亞單元和輔藥法”，Eds:Powelland Newman Plenum Press,New York,1995,439)-噴霧干燥(WO94/15636)制備該系統(tǒng)的重要步驟是活性物質(zhì)的摻入。釋放系統(tǒng)制備方法的選擇，要視準(zhǔn)備摻入何種活性物質(zhì)，以及活性物質(zhì)從釋放系統(tǒng)中所希望的釋放比例來決定。所有上面列舉的技術(shù)，均有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)。就熱熔微囊包封法來說，不適用于熱敏感性活性物質(zhì)。界面聚合法的缺點(diǎn)是水混溶性溶劑中的高活性單體，既可以與核心材料反應(yīng)也可與被包封的活性物質(zhì)反應(yīng)。溶劑蒸發(fā)法的缺點(diǎn)是耗時(shí)，且只能批量生產(chǎn)，同樣，萃取法也耗時(shí)及只限于批量生產(chǎn)。噴霧干燥法的缺點(diǎn)是在納米級范圍內(nèi)難以形成顆粒。因?yàn)榧庸ぶ幸┞队跓岷涂諝?，因而該方法也不適宜于對熱、對氧化敏感的活性物質(zhì)。
近年來超臨界流體技術(shù)得到發(fā)展。簡單說來，所謂“超臨界流體”可以定義為同時(shí)處于其臨界壓力和臨界溫度、或其以上的流體。超臨界流體的物化性質(zhì)隨溫度和壓力具有靈活性，可以加以選擇以適應(yīng)給定的應(yīng)用?，F(xiàn)今已有幾種新技術(shù)得到應(yīng)用，一種稱之為“超臨界溶液的快速膨脹法”(RESS)，另一種稱之為“氣體抗溶劑沉淀法”(GAS)。GAS技術(shù)中，將所研究的物質(zhì)溶解于常規(guī)溶劑中，將二氧化碳之類的超臨界流體導(dǎo)入該溶液，導(dǎo)致該溶液體積快速膨脹。結(jié)果溶劑的溶解能力短時(shí)間內(nèi)急劇下降，使顆粒開始沉淀。參見Cf J.W.Tom和P.G.Debenedetti“氣溶膠科學(xué)雜志”，22(1991),555-584；P.G.Debenedetti等人，“有控釋放”，24(1993),27-44和J.W.Tom等人，ACS SympSer 514(1993)238-257；EP 437 451(Upjohn)和EP 322 687(Schwarz Pharma)。目前已開發(fā)出一種GAS體系的改良法(WO95/01221和WO96/00610)，稱之為SEDS(借助超臨界流體提高溶液分散性)法，該方法利用超臨界流體技術(shù)形成顆粒。
像其它活性物質(zhì)一樣，使用上述的包封法蛋白質(zhì)也可以摻入載體基質(zhì)中。蛋白質(zhì)可溶于水相，懸浮或直接溶于含載體相。而蛋白質(zhì)的缺點(diǎn)是在有機(jī)溶劑和超臨界流體/改性超臨界流體中的溶解性很低(見Stahl等人“高密度氣相研究結(jié)果”，《流體相平衡》1983,10,269)。直接溶于或懸浮于有機(jī)溶液中的蛋白質(zhì)的另一缺點(diǎn)是引起蛋白伸展和變性(見Dill和Shortle《生物化學(xué)年度綜述》1991,60,795-825)。這會(huì)使蛋白質(zhì)失去治療效果，例如喪失免疫效果。
超臨界技術(shù)中，為配制純蛋白顆粒，將蛋白質(zhì)直接溶于DMSO(見Winters等人《藥物科學(xué)雜志》，1996,85,586-594和《藥物研究》，1997,14,1370-1378)，或者在聚合物共沉淀法中，聚合物和蛋白質(zhì)都溶于DMSO(見WO9629998和Bertucco等人，《高壓化學(xué)工程》1996,217-222)。在SAS法中，甚至以乙醇和水的混合物用作蛋白質(zhì)和聚合物的溶劑(見EP0542314和Tom等人《超臨界流體工程學(xué)，ACS討論會(huì)論文集》，1993,514,238-257)。
在SEDS技術(shù)中，使用三元噴頭從水溶液中制備蛋白顆粒。其中，蛋白水溶液首先與乙醇一起共同引入，然后在噴頭中與超臨界二氧化碳混合(WO9600610)。即使水溶液與乙醇接觸時(shí)間很短，也可能引起蛋白質(zhì)構(gòu)象破壞。
以超臨界流體技術(shù)，低分子量物質(zhì)也可以與聚合物一起共沉淀。EP322687介紹了以抗溶劑技術(shù)和RESS，制備含活性物質(zhì)和載體的藥物(見Kim等人《生物技術(shù)進(jìn)展》，1996,12,650-661,Chou和Tomasko《第四屆超臨界流體國際討論會(huì)》，Sendai,Japan,1997,55)。此處，抗溶劑技術(shù)中，活性物質(zhì)與載體溶解或分散于相同液體介質(zhì)中，并與超臨界流體相結(jié)合。在這些文獻(xiàn)的例子中，只涉及L-PLA球形疏水化合物的摻入，未提及有關(guān)水相化合物的摻入，其它有關(guān)PCA(Bodmeier等人《藥物研究》，1995,12,121l-1217),SAS(Bertucco等人《高壓化學(xué)工程》，1996,217-222),GAS(Chou和Tomasko《第四屆超臨界流體國際討論會(huì)》Sendai,Japan.1997,55)or ASES(Bleich和Müller，《微包封雜志》，1996,13,131-139)的研究報(bào)告也未見介紹。
本發(fā)明介紹現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)可以通過形成各成分的乳液，并用流化氣體技術(shù)將該體系沉淀，而將活性物質(zhì)(一種或多種)與載體系統(tǒng)相結(jié)合。所述活性物質(zhì)(一種或多種)摻入載體系統(tǒng)中和/或圍繞其周圍，其中也包括載體包圍這些活性物質(zhì)(一種或多種)。
該制備含活性物質(zhì)的載體系統(tǒng)的改進(jìn)方法，系基于乳液的使用。該乳液是兩種不混溶性液體，或兩相的混合物，其中一種液體細(xì)分散于另一液體中。一種液體與另一液體相比極性較高，例如水或水相與有機(jī)溶劑或溶劑混合物(油相，此處稱為非水相)相比。該乳液可以是動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性的(粗乳化液)或熱力學(xué)穩(wěn)定性的(微乳化液)，或二者相結(jié)合。為使乳液穩(wěn)定，可使用一種乳化劑，或其與其它多種乳化劑相結(jié)合，例如表面活性劑、聚合物、脂類等，但不限于這些。乳化劑溶解于水相或非水相。準(zhǔn)備摻入或/和結(jié)合入載體系統(tǒng)的活性物質(zhì)(一種或多種)被溶解、懸浮或加溶于水相中。載體物質(zhì)溶解于非水相或水相，水相被乳化于非水相中，反之亦然。
非離子表面活性劑可以是(但不限于)聚氧亞乙基脫水山梨醇脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯、聚氧亞乙基烷基醚、蔗糖酯、正辛基-β,D-吡喃葡糖苷(n-OG)。
陰離子表面活性劑可以是(但不限于)十二烷基硫酸鈉、1,4-二(2-乙基己基)磺基琥珀酸鈉(AOT)，以及脂肪酸鹽。
陽離子表面活性劑可以是(但不限于)烷基三甲基銨鹽和二烷基二甲基銨鹽。
兩性離子表面活性劑可以是(但不限于)3((3-膽酰氨丙基)二甲基銨基)-1-丙烷磺酸鹽、十二烷基-N-甜菜堿。
聚合物乳化劑可以是(但不限于)聚乙烯吡咯烷酮、聚甘油多聚蓖酸酯、聚乙烯醇和嵌段共聚物。
脂類乳化劑可以是(但不限于)膽甾醇、卵磷酯、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸。
本發(fā)明中，水相定義為含水溶液(與非水相不混溶)和/或與非水相不混溶的其它溶液，及比非水相極性更高的其它溶液。
非水相包括(但不限于)常規(guī)有機(jī)溶劑，如二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯等，或有機(jī)溶劑的混合物。
載體可以是(但不限于)聚合物、填料、崩解劑、粘結(jié)劑、增溶劑及其它賦形劑，或其相結(jié)合。
聚合物可以是合成的或天然的?？梢允巧锟山到庑缘模虿皇?，例如聚苯乙烯?？梢杂米鬏d體的聚合物類如下(但不限于這些)多糖、聚酯、聚醚、聚酐和多肽。
多糖的例子是(但不限于)纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、乙基纖維素(EC)、果膠、藻酸鹽、脫乙酰殼多糖、瓊脂、羥乙基纖維素(HEC)、黃原膠、乙基羥基乙基纖維素(EHEC)。
聚酯的例子是(但不限于)聚交酯(PLA)、聚乙醇酸交酯(PGA)、以上這些的共聚物(PLG)、聚羥基丁酸酯(PHB)和聚己酸內(nèi)酯。
聚醚的例子是(但不限于)聚環(huán)氧乙烷、和聚環(huán)氧丙烷。
聚酐的例子是(但不限于)聚癸二酸、聚羰苯氧基丙烷、聚富馬酸或以上這些的共聚物。
活性物質(zhì)的例子是藥劑、毒素、殺蟲劑、病毒、診斷助劑、農(nóng)用化學(xué)品、市售化學(xué)劑、精細(xì)化學(xué)品、食品、染料、炸藥、油漆、聚合物、或化妝品等。所述活性物質(zhì)可以是高分子物(定義為分子量5000道爾頓以上)，例如蛋白質(zhì)、抗原(例如螺桿菌屬抗原)、多肽、聚核酸、多糖，但不限于這些，或者可以是低分子物(定義為分子量5000道爾頓或以下)，例如Bodipy、但不限于這些。蛋白質(zhì)的酶活性物及免疫活性物，通過使用本發(fā)明的方法可以維持其活性。
本文中流化氣體的定義包括處于其超臨界或近超臨界狀態(tài)的物質(zhì)，以及壓縮氣體。超臨界流體可以是(但不限于)二氧化碳、氧化氮、六氟化硫、氙、乙烯、一氯三氟甲烷、乙烷和三氟甲烷。近超臨界狀態(tài)定義為壓力和/或溫度在臨界值以下的狀態(tài)。例如，認(rèn)為近超臨界狀態(tài)的下限對于二氧化碳來說是0.65Tc(臨界溫度)，對于丙烷來說是0.30Tc。
所述乳液體系可以含一種或多種添加劑，例如下述物質(zhì)(但不限于這些)——緩沖劑，例如磷酸鹽、碳酸鹽、三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS)等；——提高活性物質(zhì)化學(xué)和/或物理穩(wěn)定性的物質(zhì)，例如海藻糖和聚乙二醇(PEG)；——進(jìn)一步提高活性物質(zhì)效果的助劑，例如脂質(zhì)A和其衍生物之類的免疫反應(yīng)刺激質(zhì)、霍亂毒素(CT)、或甘油單酯或二酯之類的吸收促進(jìn)劑、脂肪酸、膽鹽或抑肽酶之類的酶抑制劑、乙二胺四乙酸、聚丙烯酸、或靶向活性物質(zhì)的助劑，例如抗體；——增溶劑，如正辛基-β,D-吡喃葡糖苷(n-OG)本發(fā)明可以簡單地描述為制劑的配制方法，所述制劑包含與載體相結(jié)合的活性物質(zhì)(一種或多種)，其特征在于——將液態(tài)非水相和液態(tài)水相混合配制成乳液，所述水相中含活性物質(zhì)(一種或多種)，而載體存在于至少一個(gè)相中，——采用抗溶劑技術(shù)，以流化氣體與乳液接觸，——獲得從液相中分離出的單元。
挑選來制造載體系統(tǒng)的方法，由下面的一般介紹及實(shí)驗(yàn)部分舉例說明。
總的來說，這些方法是以下述步驟為基礎(chǔ)形成載體系統(tǒng)——配制含活性物質(zhì)(一種或多種)的水相；——配制非水相(一個(gè)或多個(gè)，不與水相混溶)；——將載體材料、乳化劑和/或添加劑溶于非水相和/或水相；——形成由至少一個(gè)水相和一個(gè)非水相形成的乳液；——使用流化氣體技術(shù)形成帶有活性物質(zhì)的載體系統(tǒng)。
該第一步可通過將活性物質(zhì)溶解、分散和/或加溶在水相中而完成。
該第四步可以使用不同乳化技術(shù)來完成，例如勻化法、超聲波和高壓勻化法。微乳液或粗乳液也可以是所謂的雙乳液，其中非水相分散在水相中(含活性物質(zhì))，而該水相又分散在另一非水相中，或者水相(含活性物質(zhì))分散在非水相中，而該非水相又分散在另一水相中。
第五步中，用來形成帶有活性物質(zhì)的載體系統(tǒng)的流化氣體技術(shù)是抗溶劑技術(shù)，例如(但不限于)SEDS、ASES、SAS、GAS和PCA等。如果水相是粗乳液或微乳液中的最外相，可能需要加改性劑與流化氣體混合，或在正要與流化氣體接觸之前將其與乳液一起引入。所述改性劑是有機(jī)溶劑，例如乙醇和丙酮等。
本發(fā)明含活性物(一種或多種)的載體系統(tǒng)可用于藥物領(lǐng)域，例如用于治療、預(yù)防和診斷之目的。
如果本發(fā)明涉及藥物應(yīng)用，則載有活性物質(zhì)的載體系統(tǒng)可由不同途徑給藥，例如口服、直腸給藥、舌下給藥、頰內(nèi)給藥、鼻內(nèi)給藥、陰道給藥、非腸道給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、眼內(nèi)給藥、肺部給藥、透皮給藥、植入給藥，或靜脈內(nèi)給藥等等。
以該技術(shù)配制的藥物劑量形式可以是固體、半固體或液體分散液，可使用已知制藥技術(shù)，例如摻混、造粒、壓片、包衣等來配制。此外，該制劑可以是單份的片或膠囊等，或者是多份制劑的片、膠囊或香粉等。
因?yàn)槿榛瘎┛梢栽谶B續(xù)相中溶解到一定程度，所以液滴的大小可能受乳化劑的影響。乳化劑一般降低表面能，這可使液滴變小。
乳化劑也可影響載體系統(tǒng)的聚集，因?yàn)樗鼈兛梢晕挥谝旱?超臨界界面中。當(dāng)液滴轉(zhuǎn)化成載體系統(tǒng)時(shí)，乳化劑可以仍位于載體系統(tǒng)表面上。由此，乳化劑在表面或載體上的位置，可以降低所形成的載體系統(tǒng)的聚集程度，正如已有文獻(xiàn)對聚合物顆粒的介紹(見Mawson等人《大分子》，1997,30,71)。
此外，摻入載體系統(tǒng)以及活性物質(zhì)的乳液所用的乳化劑，可以改善載體系統(tǒng)的釋放特征，例如通過使活性物增溶，以及加快水在載體系統(tǒng)中的滲透等來實(shí)現(xiàn)。
實(shí)驗(yàn)部分材料和方法在這一部分，介紹下述實(shí)施例中所用材料、分析方法和制備技術(shù)。
聚(3-羥基丁酸)(PHB，分子量(MW)63500g/mol，購自AstaTech,SWeden)或聚(DL-乳酸-共-乙醇酸)50∶50(PLG RG 502H,MW6000g/mol，購自Boehringer Ingelheim,Germany)用作載體材料。正辛基-β,D-吡喃葡糖苷(n-OG，購自Sigma,MO,USA)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP,MW10000g/mol，購自Aldrich,Germany)和1,4-二(2-乙基己基)磺基琥珀酸鈉(AOT，購自Sigma,MO,USA)用作穩(wěn)定劑。二氯甲烷(99.5％)用作溶劑，而二氧化碳用作超臨界流體。乙醇(99.5％)用作超臨界工藝的改性劑。
采用兩種不同的蛋白質(zhì)高水溶性碳酸酐酶(CA，購自Sigma,MO,USA)和類脂化的水不溶性幽門螺桿菌粘附蛋白A配成的貯備液(HpaA,購自CSL,Australia)。用作低分子量模型物質(zhì)的熒光材料是Bodipy(D3238，購自Molecular Probes Europe,Holland)。
在蛋白分析時(shí)，將1.25ml TRIS HCl 2M(pH6.8)緩沖液、5.05g甘油(99％)、0.8g十二烷基硫酸鈉(SDS)、1ml 2-巰基乙醇、1μl溴酚藍(lán)和10ml水組成的貯備液稀釋至四分之一濃度，配制SDSlaemmli試驗(yàn)溶液。顆粒分析用掃描電子顯微鏡研究顆粒粒度、形式和形態(tài)。載負(fù)的活性物質(zhì)測定PHB顆粒a)總蛋白含量將顆粒(3-10mg)溶解于300μl氯仿中。加入SDS-laemmli(400μl)并將蛋白質(zhì)從有機(jī)相提取到水相。樣品于60℃振蕩30分鐘。將水相加熱到95℃持續(xù)15分鐘，并通過聚丙烯酰胺凝膠電脈法(SDS-PAGE)分析蛋白含量。
b)Bodipy含量將水(5ml)加入到含Bodipy的2mg顆粒中(顆粒不溶解)。Bodipy從顆粒中釋放出來，用光譜法測定其濃度(吸收度97000M-1cm3GBCUV/VIS920,Australia)。PLG顆粒a)總蛋白含量將1ml丙酮加入到PLG顆粒(3-10mg)中。該聚合物溶解而蛋白質(zhì)沉淀出來。以17530xg條件，將該蛋白沉淀離心處理15分鐘，用Hamilton注射器移走2/3上清液，加入純丙酮(1ml)洗滌該沉淀二次。用真空離心處理法將殘留的丙酮蒸發(fā)。加入SDS-Laemmli(200μl)將樣品加熱至95℃持續(xù)15分鐘。以SDS-PAGE法分析蛋白含量。
b)分析表面結(jié)合的蛋白量按照Rafali等人(見《有控釋放雜志》，1997,43,89-102)的方法分析結(jié)合于表面的蛋白量。將2ml 2％(w/v)SDS水溶液加入到5-6mg PLG顆粒中，將該樣品振蕩4小時(shí)。于2700xg將樣品離心處理3分鐘，將上清液移至新試管中。真空離心蒸發(fā)出水，并加入1mlLaemmli(無SDS)。水相加熱至95℃持續(xù)15分鐘。用SDS-PAGE法分析蛋白含量。制備顆粒在SEDS裝置中(購自Bradford Particle Design,Bradford,UK)從含活性物質(zhì)及載體(WO9501221和WO9600610)的乳液中制備顆粒。
將乳液和抗溶劑(CO2)引入共軸噴頭中，該噴頭位于壓力容器中，而該壓力容器位于爐中。在控壓控溫條件下，抗溶劑從形成的乳液滴中萃取出溶劑。液滴中的載體含量由此提高，便很快形成顆粒。將顆粒收集于容器中，通過后壓力調(diào)節(jié)器，抗溶劑和提取出的溶劑流出。
所用噴頭是三成分噴頭，以夾層式或兩股溶液式連通，其開口直徑0.2mm。所述夾層式中，超臨界流體通過最里面和最外面的通道，而乳液通過中間通道。所述兩股溶液式中，乳液和改性劑(如乙醇)在正好要與超臨界流體接觸之前相混合；所述超臨界流體通過外通道，改性劑通過中間通道，而乳液通過里通道。實(shí)施例1HpaA于PHB中，乳液中水含量為20％(v/v)于2bar壓力，90℃下將PHB溶于二氯甲烷中，將等體積2％(w/w)PVP(水溶液)和HpaA貯備液〔1.11mg/ml HpaA的TRIS-HCl緩中液(10mM,pH8)和2％(w/w)n-OG〕混合。該混合物(3.8ml)被注入(于20000rpm勻化期間)25ml Kinematica分散液容器中的、含1％(w/w)PHB和0.4％(w/w)AOT的15.2ml二氯甲烷中?？倓蚧瘯r(shí)間是3分鐘，所用勻化器是Polytron PT3100,Rotor PT-DA3012/2(Kinematica AG,Switzerland制造)。整個(gè)過程在環(huán)境條件下進(jìn)行。
以SEDS裝置中的不同操作條件對該乳液進(jìn)行兩次實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)1以乙醇(流速0.5ml/分)作為改性劑，采用兩股溶液式，用三成分噴頭進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)2以夾層式進(jìn)行(列表1)。
表1實(shí)施例1中的乳液SEDS工藝
根據(jù)SEM圖，顆粒粒度是1-3μm(實(shí)驗(yàn)1和實(shí)驗(yàn)2)。
顆粒的理論組成應(yīng)是55.8％(w/w)PHB、43.5％(w/w)表面活性劑、0.6％(w/w)HpaA。對顆粒中的HpaA總量進(jìn)行分析，結(jié)果是0.4％HpaA(實(shí)驗(yàn)1和2)。實(shí)施例2Bodipy于PHB中，乳液中的水含量為33％(v/v)該實(shí)施例目的是使用含33％(v/v)水的乳液，將低分子量分子結(jié)合入載體基質(zhì)中。將PHB于2bar、90℃下溶于二氯甲烷，將等體積2％(w/w)PVP(水溶液)和2％(w/w)n-OG、1.0mg/ml Bodipy的TRIS-HCl緩沖液(10mM,pH8)混合。將該溶液(2ml)注入(于20000rpm勻化期間)25ml Kinematica分散液容器中的、含1％(w/w)PHB和0.4％(w/w)AOT的4ml二氯甲烷中?？倓蚧瘯r(shí)間是3分鐘，所用勻化器是Polytron PT3100,Rotor PT-DA3012/2(KinematicaAG,Switzerland)。整個(gè)程序在環(huán)境條件下進(jìn)行。以乙醇作改性劑(該三成分噴頭以兩股溶液式連通)，流速為0.5ml/分。操作條件列于表2。
表2實(shí)施例2中乳液的SEDS工藝
根據(jù)SEM圖，該顆粒粒度為1-3μm。
隨著二氧化碳流過、沒有熒光物質(zhì)痕跡留于容器中，這說明Bodipy未被超臨界流體或所用溶劑提取。實(shí)施例3Bodipy于PHB中，乳液中水含量為20％(v/v)如實(shí)施例2，該實(shí)施例目的是使用含20％(v/v)水的乳液，將低分子量分子結(jié)合入載體基質(zhì)中。將PHB于2bar、90℃下溶于二氯甲烷，將等體積2％(w/w)PVP(水溶液)和2％(w/w)n-OG、1.0mg/mlBodipy的TRIS-HCl緩沖液(10mM,pH8)混合。將該溶液(2ml)注入(于20000rpm勻化期間)25ml Kinematica分散液容器中的、含1％(w/w)PHB和0.4％(w/w)AOT的8ml二氯甲烷中。總勻化時(shí)間是3分鐘，所用勻化器是Polytron PT3100,Rotor PT-DA3012/2(Kinematica AG,Switzerland)。整個(gè)程序在環(huán)境條件下進(jìn)行。
使用兩股溶液式三成分噴頭，以乙醇(流速0.5ml/分)作改性劑，在SEDS裝置中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)4。而實(shí)驗(yàn)5采用夾層式(表3)。
表3實(shí)施例3中乳液的SEDS工藝
根據(jù)SEM圖，該兩實(shí)驗(yàn)的顆粒粒度為1-3μm。
顆粒的理論組成是55.8％(w/w)PHB、43.5％(w/w)表面活性劑和0.6％(w/w)Bodipy。對實(shí)驗(yàn)5中結(jié)合入顆粒中的Bodipy量分析，發(fā)現(xiàn)是0.7％(w/w)。實(shí)施例4碳酸酐酶于PLG中，乳液中水含量為20％(v/v)TRIS-SO4緩沖劑(0.1M,pH7.5)中的200μl 20mg/ml碳酸酐酶(93％)，在以超聲波探針(購自Sonics & Materials Inc.的CV26型)均化期間加入到800μl 8％(w/w)PLG、0.4％(w/w)Span85/Tween80(80∶20重量比)中，于約30-50W勻化3分鐘。乳液于冰上的4ml玻璃瓶中配制。
制備顆粒的操作條件列于表4，該實(shí)驗(yàn)用三成分噴頭以夾層式進(jìn)行。
表4實(shí)施例4中乳液的SEDS工藝
按照SEM圖，所制得的顆粒粒度為10-100μm。
該顆粒的理論組成是91.4％(w/w)PLG、4.6％(w/w)表面活性劑和4.0％(w/w)碳酸酐酶。對蛋白量分析得出有4％(w/w)碳酸酐酶，而沒有蛋白結(jié)合入顆粒表面。
權(quán)利要求
1．含有一種或多種活性物質(zhì)與載體相結(jié)合的制劑的制備方法，其特征在于——將液態(tài)非水相與液態(tài)水相混合配制成乳液，所述水相含一種或多種活性物質(zhì)，而載體存在于至少一個(gè)相中；——采用抗溶劑技術(shù)，使所述乳液與流化氣體接觸；和——獲得從液相中分離出的單元。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中活性物質(zhì)溶解于水相中。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中活性物質(zhì)分散于水相中。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中活性物質(zhì)加溶于水相中。
5．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中活性物質(zhì)是蛋白質(zhì)。
6．根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中活性物質(zhì)是抗原。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中活性物質(zhì)是螺桿菌屬抗原。
8．根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中活性物質(zhì)是類脂化水不溶性幽門螺桿菌粘附蛋白A。
9．根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中活性物質(zhì)是特異性全類脂化型幽門螺桿菌粘附蛋白A。
10．根據(jù)權(quán)利要求1-4的方法，其中活性物質(zhì)是低分子量物質(zhì)。
11．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中非水相含有機(jī)溶劑。
12．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中非水相含有機(jī)溶劑混合物。
13．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中水相的極性高于非水相。
14．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中乳液是粗乳化液。
15．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中乳液是微乳化液。
16．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中乳液是粗乳化液與微乳化液相結(jié)合。
17．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中乳液含有乳化劑。
18．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中乳化劑是非離子表面活性劑。
19．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中乳化劑是陰離子表面活性劑。
20．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中乳化劑是陽離子表面活性劑。
21．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中乳化劑是兩性離子表面活性劑。
22．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中乳化劑是聚合物。
23．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中乳化劑是脂類。
24．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中載體是聚(3-羥基丁酸酯)。
25．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中載體是聚(DL-乳酸-共-乙醇酸)。
26．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中通過采用流化氣體技術(shù)，使乳液與流化氣體接觸。
27．根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所采用的流化氣體技術(shù)是SEDS。
28．根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所采用的流化氣體技術(shù)是ASES。
29．根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所采用的流化氣體技術(shù)是SAS。
30．根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所采用的流化氣體技術(shù)是GAS。
31．根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所采用的流化氣體技術(shù)是PCA。
32．根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中流化氣體是二氧化碳。
33．前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所制備的制劑。
全文摘要
本發(fā)明是通過形成各成分的乳液,并使用流化氣體技術(shù)使系統(tǒng)沉淀,而將活性物質(zhì)滲入載體系統(tǒng)的方法。
文檔編號A61K47/34GK1309555SQ9980503
公開日2001年8月22日 申請日期1999年4月9日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月14日
發(fā)明者M·－L·安德松, C·波伊斯?fàn)? A·M·朱波, A·拉松 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司