專利名稱：：鑒別促進黑色素生成的化合物的檢定法及有關(guān)化合物的制作方法
背景技術(shù)：
：正常皮膚顏色是由不同色素的混合物聯(lián)合表達的結(jié)果，其中黑色素，一種褐色色素，是其主要成分。黑色素是由專門的、可在表皮內(nèi)發(fā)現(xiàn)的黑素細胞合成的。黑素細胞在被稱為黑素體的細胞器內(nèi)合成黑色素。當(dāng)黑素體被黑色素飽和時，它們被轉(zhuǎn)運到黑素體的樹狀分支上并轉(zhuǎn)化為外層角質(zhì)形成細胞。隨后這些角質(zhì)形成細胞遷移到皮膚表面，導(dǎo)致皮膚呈現(xiàn)出褐色色素沉著。角質(zhì)形成細胞中的黑色素的量決定了皮膚和頭發(fā)色素沉著的程度。由于黑色素對皮膚和頭發(fā)色素沉著的作用，已經(jīng)進行了旨在鑒別影響黑色素生成和/或?qū)⒑谏剞D(zhuǎn)運到外層角質(zhì)形成細胞的化合物的研究。這些化合物在改變頭發(fā)和皮膚色素沉著方面有潛在的應(yīng)用價值。例如，大家都知道，促黑激素(MSH)以及諸如茶堿的化合物能誘導(dǎo)色素沉著。此外，也已測試了MSH類似物促進皮膚色素沉著的臨床效能。同時也有報道，α-脂蛋白可以刺激皮膚內(nèi)黑色素的生成。(Jpn.kokaiTokyo,Koho,JP82-153348,GB2124900，由古巴的EmpresaCubanaImportadorayExportadoradeProductosMedicos公司申請)。相反，也已經(jīng)知道使用一些化合物來抑制色素沉著，例如來治療黑斑病，如使用氫醌(HQ)和單苯醚(Pathak等人，《美國皮膚病學(xué)學(xué)會志》15:849-899(1986)；Smith等人，《色素細胞研究》1:386-389(1988))以及HQ的一種葡糖綴合物-熊果苷(《日本皮膚病研究學(xué)會論文匯編》12:138-139(1998))。并且，還有報道說，曲酸及其衍生物和/或戊酸能抑制黑色素形成(Jpn.kokaiTokyo,Koho,JP03011010；日本Oyama,Yasuaki,Sansei藥品有限公司)。另外，還有報道說，丙酸、丁酸和戊酸及其鹽，與或不與不飽和脂肪酸結(jié)合，能抑制催化黑色素生成的酪氨酸酶的形成(Mishima等人，EPA345081，日本Hayashibara生化實驗室)。EP0509241和WO93/19729描述了通過在一段足夠長的時間內(nèi)局部施用有效量的反式視黃酸可以進行過度色素沉著或者把皮膚曬黑。無論如何，這些辦法中所使用的化合物會引起刺激。Dooley等人在《藥理學(xué)》7:188-200(1994)中報道了一種旨在適于鑒別能抑制黑色素重新合成和潛在的抗黑素體的、細胞毒性化合物的體外方法。這種方法利用了兩種永生化的黑素細胞來源的鼠細胞系，Mel-Ab(Dooley等人，《致癌基因》3:531-535(1988))以及其他成纖維細胞來源的鼠細胞系。Mel-Ab細胞來源于自發(fā)永生化的鼠C57BL/6黑素細胞系，這一細胞系在培養(yǎng)物中迅速生長并產(chǎn)生大量的黑色素。據(jù)報道該檢定法用于篩選與在黑色素生物合成途徑中的中間體具有類似結(jié)構(gòu)的化合物，它們對于黑素細胞是唯一的。特別是篩選了與酪氨酸有關(guān)的對位取代的酚和與多巴有關(guān)的1,2-二羥基苯，以及1,3-二羥基苯、1,4-二羥基苯、1,4-二甲氧基苯和1,4-苯醌。利用這種篩選方法鑒別了幾種旨在改變色素沉著的化合物。但是，與本發(fā)明不同，這種體外篩選方法利用的是永生化的鼠細胞系，而不是正常的人黑素細胞。不過，如果能鑒別出其他影響色素沉著和黑色素生成和/或轉(zhuǎn)運的化合物將是有益的。如果能鑒別出可良好耐受且對皮膚無刺激性的化合物也將是有益的。此外，如果開發(fā)出一種用于鑒別這些化合物的改進的體外篩選檢定法將是有用的。本發(fā)明的目的及簡要描述最終，本發(fā)明的一個目的是提供一種新的用于鑒別能改變(增強或抑制)由黑素細胞、優(yōu)選人黑素細胞表達的黑色素的化合物的檢定法。本發(fā)明的另一個目的是提供皮膚病學(xué)/化妝品/藥物組合物，該組合物包含由這種檢定法確定的至少一種促進或抑制黑色素量的化合物。本發(fā)明更特別的一個目的是提供能局部施用的皮膚病學(xué)/化妝品/藥物組合物，該組合物包含增強或抑制黑色素量的至少一種能改變(增強或抑制)人黑素細胞生成黑色素的化合物。本發(fā)明的甚至更特別的一個目的是提供皮膚病學(xué)/化妝品/藥物組合物，該組合物包含增強或抑制黑色素量的至少一種取代的芳族或雜環(huán)羧酸或其衍生物，條件是所述羧酸不包含游離的或被保護基保護的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。本發(fā)明的另一個特別目的是提供一種改變需要這種治療的受治療者的皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的方法，該方法包含在一段足夠長的時間內(nèi)局部施用一種有效量的含有至少一種影響(增強或抑制)黑色素的類視色素樣化合物的組合物，以誘導(dǎo)皮膚和/或頭發(fā)色素沉著。本發(fā)明的更特別的一個目的是提供一種改變-增加或減少-需要這種治療的受治療者的皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的方法，該方法包含在一段足夠長的時間內(nèi)局部施用一種有效量的含有至少一種取代的芳族或雜環(huán)羧酸或其衍生物的組合物，以影響皮膚和/或頭發(fā)的色素沉著，但條件是所述羧酸不包含游離或被保護的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚基。附圖的簡要描述圖1含有按照本發(fā)明確定的能影響黑色素生成的化合物的結(jié)構(gòu)；圖2至4列出了可以使用本發(fā)明的化合物治療的色素性疾病。發(fā)明詳述在第一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種新的用于鑒別能改變(增加或抑制)人黑素細胞表達黑色素的化合物的檢定法，優(yōu)選能增加人黑素細胞生成黑色素的化合物。一般說來，該檢定法將檢驗特定化合物或化合物的組合物對培養(yǎng)物中人黑素細胞生長或增殖的作用，以及所述相同化合物對所述培養(yǎng)的人黑素細胞生成黑色素的作用，在所述培養(yǎng)的人黑素細胞(增殖)數(shù)量的基礎(chǔ)上校準黑色素含量，并在每個細胞中黑色素的生成增加或減少的基礎(chǔ)上確定影響黑色素生成的化合物。更具體地說，該檢定法將包括(ⅰ)使至少兩種人黑素細胞培養(yǎng)物與至少一種要就其對黑色素生成的作用進行篩選的化合物接觸；(ⅱ)測量某個所述人黑素細胞培養(yǎng)物中含有的黑素細胞的增殖情況；(ⅲ)測量第二個人黑素細胞培養(yǎng)物中含有的黑色素的量；(ⅳ)將步驟(ⅱ)和(ⅲ)中得到的數(shù)據(jù)進行對比，目的是確定這些化合物對黑色素生成的作用(增加或減少)，并在所述培養(yǎng)物中含有的黑素細胞的量的基礎(chǔ)上校準數(shù)據(jù)；(ⅴ)進一步將步驟(ⅱ)和(ⅲ)中得到的數(shù)據(jù)與在和前述培養(yǎng)物相同但是不加入所述化合物的條件下培養(yǎng)的對照人黑素細胞培養(yǎng)物的增殖和黑色素生成數(shù)據(jù)進行對比；(ⅵ)在有所述化合物存在下培養(yǎng)的黑素細胞產(chǎn)生的黑色素相對于未與所述化合物接觸的對照培養(yǎng)物中產(chǎn)生的黑色素的量增加或減少的基礎(chǔ)上，鑒別出所篩選的化合物中能改變(增加或減少)人黑素細胞表達黑色素的化合物。該方法將優(yōu)選通過從合適的來源獲得人黑素細胞、例如新生兒皮膚黑素細胞來完成。然后將這些黑素細胞同時種植到兩個細胞培養(yǎng)室、例如一個96孔平板和一個24孔平板中。當(dāng)這些細胞已被容許黏附到孔的表面上以后，用固定量的特定化合物培養(yǎng)各個孔，從而確定它們對黑色素表達的作用。這種培養(yǎng)將持續(xù)一段足以就這些化合物對由這些培養(yǎng)的黑素細胞生成黑色素的作用，如果有的話，進行評估的時間。然后培養(yǎng)將持續(xù)從約1分鐘至約1個月不等的時間，更優(yōu)選從約1小時至約兩周，首選從約12小時至約1周。培養(yǎng)結(jié)束后，評估其中一個所述培養(yǎng)物中細胞的增殖情況。這可以利用合適的方法、例如利用吸光度來完成。在一個優(yōu)選的實施方案中，96孔平板中的細胞用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(一種常用于比色確定細胞增殖情況的四唑鎓染料)(MTS)進行處理，并在490nm下讀取該平板的吸光度，以確定細胞在所述96孔平板中的增殖情況。然后將這些結(jié)果與在相同條件下培養(yǎng)、隨后用MTS溶液進行處理、但是未用測試化合物處理的對照黑素細胞培養(yǎng)物的結(jié)果進行對比。然后檢驗已在相同條件下用測試化合物培養(yǎng)的、含有人黑素細胞培養(yǎng)物的第二種培養(yǎng)物，例如24孔平板，以確定由其中含有的細胞表達的黑色素的量。這可以用已知方法完成。在本發(fā)明中，這將優(yōu)選用下述方法完成用例如磷酸緩沖鹽水(PBS)清洗這些細胞，用堿性溶液例如1NNaOH裂解所述清洗過的細胞，并通過例如在405nm下測量堿溶性黑色素的吸光度來測量其中所含有的堿溶性黑色素的量。然后此數(shù)據(jù)優(yōu)選與在相同條件但不存在所述測試化合物的條件下生長的對照黑素細胞培養(yǎng)物進行對比。之后在黑素細胞增殖(細胞數(shù))的基礎(chǔ)上校準從這兩種黑素細胞培養(yǎng)物得到的數(shù)據(jù)，為的是確定特定化合物對由黑素細胞生成黑色素和蓄積黑色素的作用，如果有的話。按照本發(fā)明改變黑色素表達的化合物是影響黑色素在所培養(yǎng)的人黑素細胞中的生成和蓄積的那些化合物。優(yōu)選這類化合物將改變相對于對照黑素細胞培養(yǎng)物來說至少10％的黑色素表達。更優(yōu)選這類化合物將影響至少20％的黑色素生成。首選該化合物將影響黑色素的生成和蓄積達到大約150％至250％，或更高。因此，本發(fā)明涉及能增加或減少由人黑素細胞生成和蓄積黑色素的化合物或其組合物的鑒別。增加黑色素生成和蓄積的化合物可以用于，例如促進皮膚曬黑或變成褐色，治療或預(yù)防頭發(fā)泛灰。這些化合物也可以用于治療與色素沉著不足有關(guān)的疾病和狀態(tài)，例如白斑。減少黑色素生成的化合物可以用于治療患有與色素沉著過度有關(guān)的疾病或狀態(tài)的患者。這類疾病和狀態(tài)包括黑斑病或與年齡有關(guān)的色素沉著過度，以及褐黃斑。抑制黑色素生成和/或蓄積的化合物也可以用于治療和/或預(yù)防與衰老有關(guān)的色素沉著過度，例如經(jīng)常在老年人的手上和臉上見到的“雀斑”。在《普通醫(yī)學(xué)中的皮膚病學(xué)》(Fitzpatric,T.B.等人)中可以找到與色素沉著紊亂有關(guān)的疾病和狀態(tài)的名單，該文獻全文引用在此作為參考。本發(fā)明的化合物可以用于治療色素沉著不足的苦惱，諸如白斑、炎癥后色素沉著不足或脫色素，用于治療皮膚移植后的色素沉著不足或脫色素，用于治療因過度接觸紫外線造成的色素沉著不足或脫色素，用于治療結(jié)瘢后的色素沉著不足或脫色素，或者用于治療因衰老或著色斑造成的色素沉著不足或脫色素。減少黑色素生成的化合物可以用于治療黑斑病或與年齡有關(guān)的色素沉著過度。另外，本發(fā)明的檢定法可以用于鑒別能影響(增加或減少)由人黑素細胞生成或蓄積黑色素的化合物的組合物，特別是對黑色素的生成或蓄積有協(xié)同作用的組合物。如上所述，在第二個實施方案中，本發(fā)明涉及含有至少一種本發(fā)明的影響黑色素的化合物的藥物/皮膚病學(xué)/化妝品化合物。在這點上，使用本發(fā)明的檢定方法已發(fā)現(xiàn)了一類新的促進由正常人黑素細胞生成和/或蓄積黑色素的化合物。這些化合物在良好耐受性和不刺激皮膚方面也是有利的。這是令人驚奇的，因為使用本發(fā)明的檢定法篩選的許多其他類視色素樣化合物在相似的條件下并不影響色素沉著。推測這些化合物經(jīng)類視色素樣信號途徑影響黑色素的生成和/或蓄積。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了包含適量的至少一種取代的芳族或雜環(huán)羧酸或其衍生物的藥物/化妝品/皮膚病學(xué)化合物，但條件是所述羧酸不含游離或被保護形式的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。舉例來說，這類羧酸包括苯甲酸、丙炔酸、煙酸、丙烯酸、丁烯酸和萘甲酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的取代的芳族或雜環(huán)羧酸將顯示出對RXR的活性。按照本發(fā)明，顯示RXR活性的化合物是呈現(xiàn)出對RXR的結(jié)合小于5000nM、優(yōu)選小于1000nM的化合物。對RXR的結(jié)合的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，在下列文獻中有報道，例如(1)“用于核視黃酸受體亞型的選擇性合成配體”，載于《類視色素-研究與臨床應(yīng)用進展》，第10章(261-267頁),MarcelDekker公司，由MariaA.LivreaetLesterPacker出版；(2)“合成類視色素受體選擇性和生物活性”，載于《PharmacolSkin,Basel,Karger,1993年，第5卷，117-127頁；(3)“用于人類核視黃酸受體的選擇性合成配體”，載于《皮膚藥理學(xué)》1992年，第5卷，57-65頁；(4)“對人類核視黃酸受體-γ具有選擇性的合成類視色素的鑒別”，載于《生物化學(xué)與生物物理學(xué)研究通訊》第186卷，第2期，1992年7月，977-983頁；和(5)“選擇性的高親合力RAR-α或RAR-β視黃酸受體配體”，載于《分子藥理學(xué)》第40卷，556-562頁。另外，在一個更優(yōu)選的實施方案中，對RXR顯示活性的化合物呈現(xiàn)出對RXR的興奮劑活性。對RXR的這種興奮劑活性可以利用例如美國專利第5,696,104號中報道的方法進行測定，該專利全文引用在此作為參考。更具體地說，按照本發(fā)明已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)能促進由人黑素細胞生成和/或蓄積黑色素的化合物包括4-[1-(5,6,7,8-四氫-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸(CDNo.2771)；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸(CDNo.2908)；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丁-2-烯酸(CDNo.3206)；6-[1-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-環(huán)丙基]-煙酸(CDNo.3127)；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸(CDNo.2915)；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-羰基)-苯甲酸(CDNo.2608)；4-(3-溴-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基氧)-苯甲酸(CDNo.2661)；5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-丙烯基]-噻吩-3-羧酸(CDNo.2425)；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基硫烷基)-苯基]-丙烯酸(CDNo.3132)；6-(3-丁基-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基硫烷基)-煙酸(CDNo.3292)；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基硫代)-苯甲酸(CDNo.2624)；3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)苯基丙炔酸(CDNo.2906)；和6-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基硫代)煙酸(CDNo.2809)。如上所述，這些藥物/皮膚病學(xué)/化妝品組合物將是適于局部施用于皮膚和/或頭發(fā)的形式。在-個優(yōu)選的實施方案中，這些組合物將是適于人工曬黑皮膚和/或使皮膚變成褐色的形式。這些組合物可以包含一般被配制到這些類型的組合物中的其他藥物學(xué)、化妝品學(xué)或皮膚病學(xué)上可接受的組分，諸如離子或非離子增稠劑、軟化劑、抗氧劑、不透明劑、穩(wěn)定劑、潤膚劑、在UV-A和/或UV-B區(qū)域內(nèi)有效的有機防曬劑、光照保護的無機顏料和非顏料、保濕劑、維生素、香料、防腐劑、填充劑、螯合劑、染料和著色劑。自然，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)仔細地選擇這些最佳的補充化合物和/或其用量，以使與本發(fā)明的組合物本質(zhì)相關(guān)的有利性能不會受到預(yù)想添加劑的不利影響。本發(fā)明的組合物可以包含一種或幾種影響黑素細胞生成和/或蓄積黑色素的化合物，例如協(xié)同組合物。并且，這些組合物可以包含其他促進或抑制色素沉著的化合物，例如二羥基丙酮(DHA)或其衍生物。在Tuloup等人于1997年3月18日申請并已頒發(fā)給歐萊雅公司的美國專利08/819,084中公開了合適的化合物。另外，也可以包括促進色素沉著的MSH及其類似物。相反，抑制色素沉著的化合物，諸如HQ、單苯醚和熊果苷，可以與使用本發(fā)明的檢定法確定的抑制色素沉著的化合物包含在一起。本發(fā)明的組合物將是適于局部施用于人的皮膚和/或頭發(fā)的形式。合適的劑型包括膏霜、奶液、乳油凝膠、液體乳液、水包油型乳劑或油包水型乳劑、囊泡分散體、或者本領(lǐng)域中常用的任何其他形式。本發(fā)明的組合物中含有的至少一種影響黑色素的化合物的量一般將在相對于該組合物總重的約0.0001％至約30％(重量)的范圍內(nèi)，優(yōu)選將在相對于該組合物總重的約0.5％至約15％(重量)的濃度范圍內(nèi)，更優(yōu)選將在相對于該組合物總重的約0.001％至約5％(重量)的濃度范圍內(nèi)。本發(fā)明也包括一種處理、美容、皮膚病學(xué)或治療方案，該方案包含局部施用適量的本發(fā)明的影響黑色素的化合物。有效量是足以影響(增加或減少)皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的量。這個方案可以與其他影響皮膚和或頭發(fā)色素沉著的化合物聯(lián)合完成。這個方案可以反復(fù)實行，直至對色素沉著達到了預(yù)期效果。長期給藥應(yīng)該是合適的，因為本發(fā)明的化合物對皮膚沒有刺激作用。如上所述，本發(fā)明包括，特別是，適于促進頭發(fā)著色的、含有至少一種本發(fā)明化合物的組合物。這類組合物可以包括發(fā)用制劑中常用的其他組分，例如調(diào)理劑、顏料和有色成分、頭發(fā)拉直劑、燙發(fā)劑、表面活性劑、香精、醇以及下列等等。為了更好地促進對本發(fā)明的理解，現(xiàn)提供下列實施例。實施例1將從新生兒皮膚獲得的正常人黑素細胞用于檢定。對于初次篩選，根據(jù)各孔的表面積適當(dāng)?shù)貙⒓毎瑫r種植到96孔平板和24孔平板中，用測試化合物處理5天。利用機器人將化合物加入到平板中以確保精確度(每個孔中的量相同)。5天的處理期結(jié)束時，用MTS溶液處理96孔平板中的細胞并在490nm下讀取平板的數(shù)據(jù)，以確定化合物對細胞生長的作用。24孔平板中的細胞用PBS沖洗，然后用1NNaOH裂解，在405nm下測量堿溶性黑色素的吸光度。分析從96孔平板得到的數(shù)據(jù)，以確定每種化合物對細胞增殖的作用，從24孔平板得到的數(shù)據(jù)用來確定化合物對細胞中黑色素含量的作用。然后將黑色素含量校準為細胞的增殖。利用此方法，本發(fā)明人已鑒別出下列增加正常人黑素細胞的黑色素含量的化合物。根據(jù)這些結(jié)果，預(yù)計可以鑒別出能改變(增加或減少)由人黑素細胞生成黑色素的其他化合物，例如類視色素。<tablesid="table1"num="001"><table>CDNo.黑色素含量的最大增加量(校準過的)評價</table></tables>因此，使用本發(fā)明的檢定法，發(fā)明人已鑒別出一類新的用于正常人黑素細胞的色素原化合物(由此增加黑色素的生成)。假定這些分子可以通過類視色素信號途徑起作用。具有色素原活性的一類類視色素樣分子的發(fā)現(xiàn)是非常令人驚奇的，因為其他類視色素樣信號分子在類似條件下并不誘導(dǎo)色素沉著。此發(fā)現(xiàn)進一步的好處在于這些化合物是耐受非常良好的，并且對皮膚沒有刺激性。因此，它們在改變?nèi)说钠つw和/或頭發(fā)的色素沉著方面具有潛在的應(yīng)用價值。實施例2制劑實施例1、口服途徑(a)制備0.8g片劑形式的下列組合物式(2)化合物0.005g預(yù)凝膠化淀粉0.265g微晶纖維素0.300g乳糖0.200g硬脂酸鎂0.030g為了治療炎癥后色素沉著不足，根據(jù)所治療病情的嚴重程度，成人個體每天給藥1-3片，給藥3-6個月。(b)制備計劃以5ml小瓶包裝的飲用懸浮液式(4)化合物0.050g甘油0.500g70％山梨糖醇0.500g糖精酸鈉0.010g對羥基苯甲酸甲酯0.040g調(diào)味劑加至足量凈化水適量5ml為了治療皮膚移植后色素沉著不足，根據(jù)所治療病情的嚴重程度，成人個體每天給藥1小瓶，給藥3個月。(c)制備計劃用明膠膠囊包裝的下列制劑式(5)化合物0.025g玉米淀粉0.060g乳糖適量0.300g所用的明膠膠囊由明膠、二氧化鈦和防腐劑組成。治療白斑時，成人個體每天給藥1粒膠囊，給藥30天。2、局部途徑(a)制備下列非離子油包水型膏霜式(8)化合物0.100g乳化羊毛脂醇、蠟和精制油的混合物，由BDF公司以“無水優(yōu)塞林”的名稱出售39.900g對羥基苯甲酸甲酯0.075g對羥基苯甲酸丙酯0.075g無菌軟化水適量100.000g將該膏霜施用于色素不足的移植皮膚，每天1-2次，持續(xù)30天。(b)制備下列凝膠制劑式(11)化合物0.050g紅霉素基質(zhì)4.000g丁基羥基甲苯0.050g由Hercules公司以“KlucelHF”名稱出售的羥丙基纖維素2.000g乙醇(95°)適量100.000g根據(jù)所治療病情的嚴重程度，將該凝膠施用于色素不足的移植皮膚，每天1-3次，持續(xù)6-12周。(c)通過將下列成分混合在一起而制備用于糾正炎癥后色素沉著不足的乳液式(2)化合物0.030g丙二醇5.000g丁基羥基甲苯0.100g乙醇(95°)適量100.000g該乳液每天使用2次，在2-6周內(nèi)可以觀察到明顯的改善。(d)通過將下列成分混合在一起而制備用于對抗日光傷害作用的化妝品組合物式(4)化合物1.000g亞芐基樟腦4.000g脂肪酸三甘油酯31.000g單硬脂酸甘油酯6.000g硬脂酸2.000g鯨蠟醇1.200g羊毛脂4.000g防腐劑0.300g丙二醇2.000g三乙醇胺0.500g香料0.400g軟化水適量100.000g每天使用該組合物，使其有可能對抗日光導(dǎo)致的老化。(e)制備下列非離子水包油型膏霜式(3)化合物0.500g維生素D30.020g鯨蠟醇4.000g單硬脂酸甘油酯2.500gPEG-50硬脂酸酯2.500g牛油果油9.200g丙二醇2.000g對羥基苯甲酸甲酯0.075g對羥基苯甲酸丙酯0.075g無菌軟化水適量100.000g將該膏霜施用于受白斑影響的皮膚，每天1或2次，持續(xù)30天。(f)通過將下列成分混合在一起而制備局部用凝膠式(17)化合物0.050g乙醇43.000gα-生育酚0.050g由“Goodrich”以Carbopol941_為名稱出售的羧乙烯基聚合物0.500g三乙醇胺的20重量％水溶液3.800g水9.300g丙二醇適量100.00g根據(jù)所治療病情的嚴重程度，將該凝膠施用于受白斑影響的皮膚，每天1-3次，持續(xù)6-12周。(g)通過將下列成分混合在一起而制備用于重新使頭發(fā)著色的發(fā)用乳液式(9)化合物0.05g以名稱Minoxidil_出售的化合物1.00g丙二醇20.00g乙醇34.92g聚乙二醇(分子量=400)40.00g丁基羥基茴香醚0.01g丁基羥基甲苯0.02g水適量100.000g將該乳液施用于已嚴重脫色素的頭皮，每天2次，持續(xù)3個月。(h)通過將下列成分混合在一起而制備結(jié)瘢后用的膏霜式(13)化合物0.050g視黃酸0.010g硬脂酸甘油酯和聚乙二醇硬脂酸酯(70mol)的混合物，由“Gattefosse”以名稱Gelot64_出售15.000g用6mol環(huán)氧乙烷聚氧乙烯化的種仁油，由“Gattefosse”以名稱LabrafilM2130CS_出售8.000g全氫化角鯊烯10.000g防腐劑適量聚乙二醇(分子量=400)8.000g乙二胺四乙酸的二鈉鹽0.050g凈化水適量100.000g該膏霜每天使用1-3次，持續(xù)6-12周。(ⅰ)制備下列水包油型膏霜制劑式(4)化合物0.020g倍他米松17-戊酸鹽0.050gS-羧甲基半胱氨酸3.000g聚氧乙烯硬脂酸酯(40mol環(huán)氧乙烷)，由“Atlas”以名稱Myrj52_出售4.000g脫水山梨糖醇一月桂酸酯，用20ml環(huán)氧乙烷聚氧乙烯化，由“Atlas”以名稱Tween20_出售1.800g單硬脂酸甘油酯和二硬脂酸甘油酯的混合物，由“Gattefosse”以名稱Geleol_出售4.200g丙二醇10.000g丁羥基茴香醚0.010g丁羥基甲苯0.020g鯨蠟硬脂醇6.200g防腐劑適量全氫化角鯊烯18.000g辛酸/癸酸三甘油酯的混合物，由“DynamitNobel”以名稱Miglyol812_出售4.000g三乙醇胺(99％重量)2.500g水適量100.000g將該膏霜施用于因衰老而受到色素沉著問題困擾的皮膚，每天2次。(j)制備下列水包油型膏霜乳酸5.000g式(13)化合物0.020g聚氧乙烯硬脂酸酯(40mol環(huán)氧乙烷)，由“Atlas”以名稱Myrj52_出售4.000g脫水山梨糖醇一月桂酸酯，用20mol環(huán)氧乙烷聚氧乙烯化，由“Atlas”以名稱Tween20_出售1.800g單硬脂酸甘油酯和二硬脂酸甘油酯的混合物，由“Gattefosse”以名稱Geleol_出售4.200g丙二醇10.000g丁羥基茴香醚0.010g丁羥基甲苯0.020g鯨蠟硬脂醇6.200g防腐劑適量全氫化角鯊烯18.000g辛酸/癸酸三甘油酯的混合物，由“DynamitNobel”以名稱Miglyol812_出售4.000g水適量100.000g(k)用于噴灑的皮膚乳液式(15)化合物5.000g乙醇30.000g軟化水適量100.000g(Ⅰ)發(fā)用乳液式(18)化合物3.000g丙二醇30.000g乙醇40.500g水適量100.000g該乳液以每次1ml的比率施用于頭皮，每天1或2次。(m)增稠乳液式(1)化合物5.000g卡法樹脂2.000g羥丙基纖維素(來自Hercules的KlucelG_)3.500g乙醇適量100.000g該增稠乳液以每次1ml的比率施用于頭皮，每天1或2次。(n)Niosomal乳液ChimexaneML_0.475g膽固醇0.475g硬脂酰谷氨酸一鈉0.050g式(3)化合物0.100g防腐劑適量染料適量香料適量軟化水適量100.000g該乳液以每次1ml的比率施用于頭皮，每天1或2次。(o)乳液式(17)化合物5.000g丙二醇一甲基醚(來自DowChemical的DowanolPM_)20.000g羥丙基纖維素(來自Hercules的KlucelG_)3.000g乙醇40.000g米諾地爾2.000g水適量100.000g該增稠乳液以每次1ml的比率施用于頭皮，每天1或2次。盡管本發(fā)明已用某些具體的實施方案進行了描述，但應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員在不背離本發(fā)明實質(zhì)的情況下可以對本發(fā)明進行許多修飾和改變。因此，所附的權(quán)利要求書將覆蓋在本發(fā)明實質(zhì)和范圍內(nèi)的所有修飾和改變。權(quán)利要求1.一種用于改變(促進或抑制)人的皮膚和/或頭發(fā)的色素沉著的美容、皮膚病學(xué)和/或治療方法，該方法包含在一段足夠長的時間內(nèi)局部施用有效量的至少一種取代的芳族或雜環(huán)羧酸、其衍生物或其可藥用鹽，從而誘導(dǎo)皮膚和/或頭發(fā)色素沉著，條件是所述羧酸不含游離的或被保護基保護的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。2.如權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物是一種能促進人皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的類視色素信號分子。3.如權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物選自4-[1-(5,6,7,8-四氫-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丁-2-烯酸；6-[1-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-環(huán)丙基]-煙酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-羰基)-苯甲酸；4-(3-溴-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基氧)-苯甲酸；5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-丙烯基]-噻吩-3-羧酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基硫烷基)-苯基]-丙烯酸；6-(3-丁基-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基硫烷基)-煙酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基硫代)-苯甲酸；3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)苯基丙炔酸；和6-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基硫代)煙酸。4.如權(quán)利要求1的方法，它用于促進人皮膚變成褐色或曬黑。5.如權(quán)利要求1的方法，它用于促進人頭發(fā)著色。6.如權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物包含在可局部施用的組合物中，所述組合物含有相對于該組合物總重來說0.001-30重量％的所述化合物。7.如權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物的量為組合物的0.5-15重量％。8.一種經(jīng)局部施用后能改變?nèi)似つw和/或頭發(fā)色素沉著的藥物/化妝品/皮膚病學(xué)組合物，它包含(ⅰ)適量的至少一種取代的芳族或雜環(huán)羧酸化合物、其衍生物或其可藥用鹽，條件是所述化合物不含游離或被保護的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚基，該化合物能有效地改變?nèi)似つw和/或頭發(fā)的色素沉著；和(ⅱ)一種藥物學(xué)、化妝品學(xué)或皮膚病學(xué)上可接受的載體。9.如權(quán)利要求8的組合物，其中所述化合物選自4-[1-(5,6,7,8-四氫-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丁-2-烯酸；6-[1-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-環(huán)丙基]-煙酸；3-[3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-苯基]-丙烯酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-羰基)-苯甲酸；4-(3-溴-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基氧)-苯甲酸；5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-丙烯基]-噻吩-3-羧酸；3-[3-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基硫烷基)-苯基]-丙烯酸；6-(3-丁基-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-萘-2-基硫烷基)-煙酸；4-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基硫代)-苯甲酸；3-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)苯基丙炔酸；和6-(3,5,5,8,8-五甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基硫代)煙酸。10.如權(quán)利要求8的組合物，其中所述化合物的量為相對于該組合物重量的0.001-30重量％。11.如權(quán)利要求8的組合物，其中所述化合物的量為相對于該組合物重量的0.5-15重量％。12.如權(quán)利要求8的組合物，它為適于局部施用的形式，所述形式選自膏霜、奶液、乳油凝膠、液體乳液、水包油型乳劑、油包水型乳劑和囊泡分散體。13.如權(quán)利要求8的組合物，它包含另外的影響皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的化合物。14.如權(quán)利要求8的組合物，它進一步包含至少一種選自下列成員的代替物離子或非離子增稠劑、軟化劑、抗氧劑、不透明劑、穩(wěn)定劑、潤膚劑、在UV-A和/或UV-B區(qū)域內(nèi)有效的有機防曬劑、光照保護的無機和毫微顏料、保濕劑、維生素、香料、防腐劑、填充劑、螯合劑、染料和著色劑。15.一種用于選擇能改變(增加或減少)人皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的化合物或化合物的組合物的體外方法，它包含下列步驟(ⅰ)用化合物或化合物的組合物培養(yǎng)至少兩個黑素細胞培養(yǎng)物，就它們對人皮膚和/或頭發(fā)色素沉著的作用進行評估；(ⅱ)測量所述化合物或化合物的組合物對其中一個所述培養(yǎng)物中含有的黑素細胞的增殖的作用，相對于對照黑素細胞培養(yǎng)物進行比較，該對照黑素細胞培養(yǎng)物已在與所述培養(yǎng)物相同但不存在所述化合物或化合物的組合物的條件下進行了培養(yǎng)；(ⅲ)與步驟(ⅱ)并行或大體并行地，測量已用所述化合物或化合物的組合物培養(yǎng)的第二個所述培養(yǎng)物中含有的細胞的黑色素含量，并將所述黑色素含量與在相同但不存在所述化合物或化合物的組合物的條件下生長的對照培養(yǎng)物的含量進行對比；(ⅳ)將步驟(ⅱ)和(ⅲ)中得到的數(shù)據(jù)進行對比，并在所述黑素細胞培養(yǎng)物增殖(細胞數(shù))的基礎(chǔ)上校準所述數(shù)據(jù)，目的是確定所述化合物或化合物的組合物對由黑素細胞生成黑色素的作用(如果有的話)。16.如權(quán)利要求15的方法，其中所述黑素細胞培養(yǎng)物包含人黑素細胞。17.如權(quán)利要求16的方法，其中所述人黑素細胞從新生兒皮膚獲得。18.如權(quán)利要求15的方法，其中步驟(ⅱ)包含利用吸光度確定所述第一個培養(yǎng)物中黑素細胞的增殖情況。19.如權(quán)利要求18的方法，其中步驟(ⅱ)包含用(MTS)3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓溶液處理所述細胞，并在490nm下測定所述MTS處理過的細胞的吸光度。20.如權(quán)利要求15的方法，其中步驟(ⅲ)中的黑色素含量是用下述過程確定的裂解細胞，用堿溶液處理細胞，在405nm下測量吸光度，從而確定其中所含的堿溶性黑色素的量。21.如權(quán)利要求15的方法，其中所述化合物或化合物的組合物的選擇基準是相對于未用所述化合物或化合物的組合物處理的對照黑素細胞培養(yǎng)物來說，它能改變黑色素含量達至少20％。22.如權(quán)利要求21的方法，其中所述化合物或化合物的組合物相對于對照黑素細胞培養(yǎng)物來說改變黑色素含量達至少50％。23.如權(quán)利要求22的方法，其中所述化合物或化合物的組合物相對于對照黑素細胞培養(yǎng)物來說改變黑色素含量達至少150％。24.如權(quán)利要求22的方法，其中所述化合物或化合物的組合物改變黑色素含量達至少250％。25.如權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物顯示出對RXR的活性。26.如權(quán)利要求8的組合物，其中所述化合物顯示出對RXR的活性。27.如權(quán)利要求25的方法，其中所述化合物顯示出對RXR的結(jié)合小于5000nM。28.如權(quán)利要求26的組合物，其中所述化合物顯示出對RXR的結(jié)合小于5000nM。全文摘要本發(fā)明提供了一種用于選擇能改變皮膚色素沉著的化合物的體外檢定法。本發(fā)明也提供了一類新的色素原化合物,它包含取代的芳族或雜環(huán)羧酸,或其衍生物,或其可藥用鹽,它們不含游離或被保護形式的酚、萘酚、苯硫酚或萘硫酚官能基。在一個優(yōu)選的實施方案中,這些化合物將顯示出對RXR的活性。這些化合物可以用于改變?nèi)祟惼つw和/或頭發(fā)色素沉著的化妝品或皮膚病學(xué)組合物中,并可用于治療影響皮膚或頭發(fā)色素沉著的病癥和疾病狀態(tài)。文檔編號A61K8/00GK1299274SQ99805885公開日2001年6月13日申請日期1999年5月6日優(yōu)先權(quán)日1998年5月6日發(fā)明者D·倫格塔申請人:蓋爾德馬研究及發(fā)展公司