專利名稱：卡斯帕酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為卡斯帕酶(caspase)抑制劑的新型化合物，具體地講是白介素-1β轉(zhuǎn)化酶(“ICE”)抑制劑。本發(fā)明還涉及含這些化合物的藥物組合物。本發(fā)明的化合物和藥物組合物特別適于抑制卡斯帕酶活性并因而可以有利地用作抗白介素-1(“IL-1”)，編程性細(xì)胞死亡，干擾素-γ誘導(dǎo)因子(IGIF)或干擾素-γ(“IFN-γ”)介導(dǎo)的疾病的制劑，這些疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞骨的疾病、增殖性疾病，感染性疾病和變性疾病。本發(fā)明還涉及用本發(fā)明的化合物和組合物抑制卡斯帕酶活性及降低IGIF產(chǎn)生和IFN-γ產(chǎn)生的方法，以及治療白介素-1，編程性細(xì)胞死亡和干擾素-γ介導(dǎo)的疾病的方法。本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明化合物的方法。
背景技術(shù)：
白介素1(“IL-1”)是主要的促炎蛋白和免疫調(diào)節(jié)蛋白，其刺激成纖維細(xì)胞分化和增殖，刺激由滑液細(xì)胞產(chǎn)生前列腺素、膠原酶和磷脂酶以及軟骨細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞的脫粒和中性白細(xì)胞的激活。Oppenheim,J.H.等，Immunology Today,7,pp.45-56(1986)。因此其參與了慢性和急性炎性和自身免疫性疾病的病理過程。例如，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，IL-1是患病關(guān)節(jié)中炎癥和軟骨蛋白聚糖破壞的介體。Wood,D.D.等，Arthritis Rheum.26,975,(1983)；Pettipher,E.J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 71,295(1986)；Arend,W.P.和Dayer,J.M.,Arthritis Rheum.38,151(1995)。IL-1還是高效的骨吸收劑。Jandiski,J.J.,J.Oral Path 17,145(1988)；Dewhirst,F.E.等，J.Immunol.8,2562(1985)。在破壞骨的疾病如骨關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性骨髓瘤中另將其稱為“破骨細(xì)胞激活因子”。Bataille,R.等，Int.J.Clin.Lab.Res.21(4),283(1992)。在某些增殖疾病如急性骨髓性白血病和多發(fā)性骨髓瘤中，IL-1可以提高腫瘤細(xì)胞的生長和粘附。Bani,M.R.,J.Natl.Cancer Inst.83,123(1991)；Vidal-Vanaclocha,F.,Cancer Res.54,2667(1994)。在這些疾病中，IL-1還刺激其它細(xì)胞因子如IL-6的產(chǎn)生，IL-6可以調(diào)整腫瘤的發(fā)育(Tartour等，Cancer Res.54,p.6243(1994)。IL-1主要由外周血單核細(xì)胞作為炎性反應(yīng)的一部分產(chǎn)生并存在兩種不同形式的激動劑，IL-1α和IL-1β。Mosely,B.S.等，Proc.Nat.Acad.Sci.,84,pp.4572-4576(1987)；Lonnemann,G.等，Eur.J.Immunol.,19,pp.1531-1536(1989)。
IL-1β以生理性失活的前體pIL-1β的形式合成。pIL-1β缺乏常規(guī)的前導(dǎo)序列且不被信號肽酶處理。March,C.J.,Nature,315,pp.641-647(1985)。相反，pIL-1β被白介素-1β轉(zhuǎn)化酶(“ICE”)在Asp-116和Ala-117之間裂解，產(chǎn)生生物活性C-末端片斷，該片斷發(fā)現(xiàn)于人血清和滑液中。Sleath,P.R.等，J.Biol.Chem.,265,pp.14526-14528(1992)；A.D.Howard等，J.Immunol.,147,pp.2964-2969(1991)。ICE是主要位于單核細(xì)胞中的半胱氨酸蛋白酶。它將前體IL-1β轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓男问?。Black,R.A.等，F(xiàn)EBS Lett.,247,pp.386-390(1989)；Kostura,M.J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,86,pp.5227-5231(1989)。由ICE加工對成熟IL-1β的透細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)也是必需的。
ICE(或卡斯帕酶-1)是稱作卡斯帕酶的一族同源酶的一員。這些同系物在酶活性位點(diǎn)區(qū)域具有類似的序列。這些同系物(卡斯帕酶)包括TX(或ICErel-Ⅱ或ICH-2)(卡斯帕酶-4)(Faucheu，等，EMBO J.,14,p.1914(1995)；Kamens J.，等，J.Biol.Chem.,270,p.15250(1995)；Nicholson等，J.Biol.Chem.,270 15870(1995)),TY(或ICErel-Ⅲ)(卡斯帕酶-5)(Nicholson等，J.Biol.Chem.,270,p.15870(1995)；ICH-1(或Nedd-2)(卡斯帕酶-2)(Wang,L.等，Cell,78,p.739(1994),MCH-2(卡斯帕酶-6),(Fernandes-Alnemri,T.等，Cancer Res.,55,p.2737(1995),CPP32(或YAMA或apopain)(卡斯帕酶-3)(Fernandes-Alnemri,T.等，J.Biol.Chem.,269,p.30761(1994)；Nicholson,D.W.等，Nature,376,p.37(1995)),CMH-1(或MCH-3)(卡斯帕酶-7)(Lippke等，J.Biol.Chem.,271(4),p1825-1828(1996))；Fernandes-Alnemri,T.等，CancerRes.,(1995)),Mch5(卡斯帕酶-8)(Muzio,M.等，Cell 85(6),817-827,(1996),MCH-6(卡斯帕酶-9)(Duan,H.等，J.Biol.Chem.,271(34),p.16720-16724(1996))Mch4(卡斯帕酶-10)(Vincenz,C.等，J.Biol.Chem.,272,p.6578-6583(1997)；Fernandes-Alnemri,T.等，Proc.Natl.Acad.Sci.93,p.7464-7469(1996)),Ich-3(卡斯帕酶-11)(Wang,S.等，J.Diol.Chem.,271,p.20580-20587(1996)),mCASP-12(卡斯帕酶-12),(Van de Craen,M.等，F(xiàn)EBS Lett.403,p.61-69(1997)；Yuan,Y.和Miura,M.PCT公開號WO95/00160(1995)),ERICE(卡斯帕酶-13),(Humke,E.W.,等，J.Biol.Chem.,273(25)p.15702-15707(1998))及MICE(卡斯帕酶-14)(Hu,S.等，J.Biol.Chem.,273(45)p.29648-29653(1998))。
當(dāng)在轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中過度表達(dá)時，這些IEC同系物的每個成員以及IEC本身能誘發(fā)編程性細(xì)胞死亡。用肽基ICE抑制劑Tyr-Val-Ala-Asp-氯甲基酮抑制一種或多種這樣的同系物，導(dǎo)致原代細(xì)胞或細(xì)胞系中編程性細(xì)胞死亡的抑制。Lazebnik等，Nature,371,p.346(1994)。
卡斯帕酶似乎還參與編程性細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)。Yuan,J.等，Cell,75,pp.641-652(1993)；Miura,M.等，Cell,75,pp.653-660(1993)；Nett-Fiordalisi,M.A.等，J.Cell Biochem.,17B,p.117(1993)。特別是，人們認(rèn)為ICE或ICE同系物與神經(jīng)變性疾病如早老性癡呆和帕金森氏病中編程性細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)有關(guān)。Marx,J.和M.Baringa,science,259,pp.760-762(1993)；Gagliardini,V.等，Science,263,pp.826-828(1994)。抑制編程性細(xì)胞死亡的治療應(yīng)用可包括治療早老性癡呆、帕金森氏病、中風(fēng)、心肌梗塞、脊柱萎縮和衰老。
已表明ICE介導(dǎo)某些組織類型中的編程性細(xì)胞死亡(programmedcell death)。Steller,H.,Science,267,p.1445(1995)；Whyte,M.和Evan,G.,Nature,376,p.17(1995)；Martin,S.J.和Green,D.R.,Cell,82,p.349(1995)；Alnemri,E.S.，等，J.Biol.Chem.,270,p.4312(1995)；Yuan,J.Curr.Opin.Cell Biol.,7,p.211(1995)。一只ICE基因被破壞的轉(zhuǎn)基因小鼠的Fas介導(dǎo)的編程性細(xì)胞死亡的水平不足(Kuida,K.等，Science 267,2000(1995))。ICE的此活性與其作為IL-1β原的加工酶的作用不同?？梢韵胂笤谀承┙M織類型中，ICE的抑制可能不影響成熟IL-1β的分泌，但是可能抑制編程性細(xì)胞死亡。
具有酶活性的ICE以前被描述為雜二聚體，其由兩個亞單位組成p20和p10(分子量分別為20kDa和10kDa)。這些亞單位是經(jīng)由p30的形式，通過自身催化的活化機(jī)理，由45kDa的酶原(p45)產(chǎn)生的。Thornberry,N.A.等，Nature,356,pp.768-774(1992)。此ICE酶原分為若干功能域功能域原(p14)，一個p22/20亞單位，多肽連接劑和p10亞單位。Thornberry等，出處同上；Casano等，Genomics,20,pp.474-481(1994)。
全長p45由其cDNA和氨基酸序列定性。PCT專利申請WO 91/15577和WO 94/00154。p20和p10 cDNA及氨基酸序列也是已知的。Thornberry等，出處同上。小鼠和大鼠ICE也已測序和克隆。它們具有高度類似于人ICE的氨基酸和核酸序列。Miller,D.K.等，Ann.N.Y.Acad.Sci.,696,pp.133-148(1993)；Molineaux,S.M.等，Proc.Nat.Acad.Sci.,90,pp.1809-1813(1993)。通過X射線結(jié)晶學(xué)技術(shù)以原子拆分確定了ICE的三維結(jié)構(gòu)。Wilson,K.P.，等，Nature,370,pp.270-275(1994)。此活性酶以兩個p20和兩個p10亞單位的四聚體的形式存在。
最近，已將ICE及ICE/CED-3族的其它成員與體內(nèi)IGIF原pro-IGIF向IGIF的轉(zhuǎn)化或IFN-γ的產(chǎn)生相聯(lián)系(PCT申請PCT/US96/20843，公開號WO97/22619，將其引入本文作為參考)。IGIF是以前體蛋白“IGIF原”的形式在體內(nèi)合成的。
干擾素-γ誘導(dǎo)因子(IGIF)是約18kDa的多肽，其刺激T細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)。IGIF在體內(nèi)由被激活的Kupffer細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞產(chǎn)生，并由于內(nèi)毒素刺激而輸出。因此，降低IGIF產(chǎn)生的化合物會有利地用作此種T細(xì)胞刺激的抑制劑，進(jìn)而會降低這些細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的水平。
IFN-γ是對多種免疫細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子。具體地講，IFN-γ參與巨嗜細(xì)胞的激活和Th1細(xì)胞選擇(F.Belardelli,APMIS,103,p.161(1995))。IFN-γ經(jīng)STAT和IRF路徑通過調(diào)節(jié)基因的表達(dá)發(fā)揮其部分作用(C.Schindler和J.E.Darnell,Ann.Rev.Biochem.,64,p.621(1995)；T.Taniguchi,J.Cancer Res.Clin.Oncol.,121,p.516(1995))。
缺乏IFN-γ或其受體的小鼠在其免疫細(xì)胞功能方面具有多種缺陷并抗內(nèi)毒性休克(S.Huang等，Science,259,p.1742(1993)；D.Dalton等，Science,259,p.1739(1993)；B.D.Car等，J.Exp.Med.,179,p.1437(1994))。同IL-12一起，IGIF似乎是T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的有效誘導(dǎo)劑(H.Okamura等，Infection and Immunity,63,p.3966(1995)；H.Okamura等，Nature,378,p.88(1995)；S.Ushio等，J.Immunol.,156,p.4274(1996))。
IFN-γ顯示了與多種炎性疾病、感染性疾病和自身免疫性疾病的病理有關(guān)。因此，能降低IFN-γ產(chǎn)生的化合物可用于改善與IFN-γ相關(guān)病理的作用。
因此，能調(diào)節(jié)IGIF原轉(zhuǎn)化為IGIF的組合物和方法可用于降低體內(nèi)IGIF和IFN-γ的產(chǎn)生，并因此用于改善與人疾病相關(guān)的這些蛋白的有害作用。
卡斯帕酶抑制劑代表了一類用于控制炎癥或編程性細(xì)胞死亡或二者兼而有之的化合物。已有對ICE的肽或肽基抑制劑的描述(PCT專利申請WO 91/15577,WO 93/05071,WO 93/09135,WO 93/12076,WO93/14777,WO 93/16710,WO 95/35308,WO 96/30395,WO 96/33209和WO 98/01133；歐洲專利申請503 561,547 699,618 223,623 592和623 606；以及美國專利5,434,248,5,710,153,5,716,929和5,744,451)。已觀察到這種ICE的肽基抑制劑在炎癥的小鼠模型中阻斷成熟IL-1β的產(chǎn)生(參見下文)并抑制體外白血病細(xì)胞的生長(Estrov等，Blood,84,380a(1994))。但是，由于其肽的特性，這些抑制劑一般表現(xiàn)出不需要的藥理學(xué)性質(zhì)，如細(xì)胞透過性和細(xì)胞活性差、口腔吸收性差、不穩(wěn)定及代謝快。Plattner,J.J.和D.W.Norbeck,Drug Discovery Technoloqies,C.R.Clark and W.H.Moos編輯(EllisHorwood,Chichester,England,1990),pp.92-126。這些性質(zhì)妨礙了它們發(fā)展為有效的藥物。
也已報告了非肽基化合物在體外抑制ICE。見PCT專利申請WO95/26958；美國專利5,552,400；Dolle等，J.Med.Chem.,39,pp.2438-2440(1996)。
但是，尚不清楚這些化合物是否具有用于治療的適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)特性。
因此，需要能有效抑制卡斯帕酶并具有有利的體內(nèi)活性，以用作預(yù)防和治療慢性和急性IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)的疾病，以及炎癥、自身免疫性疾病、骨破壞、增殖疾病、傳染病或變性疾病的化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了新型化合物及其藥用衍生物，它們用作卡斯帕酶抑制劑，特別是ICE抑制劑。這些化合物可以單獨(dú)或與其它治療或預(yù)防制劑如抗生素、免疫調(diào)節(jié)劑或其它抗炎藥聯(lián)合使用，以治療或預(yù)防IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)的疾病。按照優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物能結(jié)合卡斯帕酶的活性位點(diǎn)并抑制該酶的活性。
本發(fā)明的主要目的是提供式Ⅰ表示的、具有有利的體內(nèi)特性的新型化合物 其中各個取代基在本文中有述。
本發(fā)明的另一個目的是提供藥物組合物，包括多組份組合物。本發(fā)明還提供了使用和制備本發(fā)明化合物及相關(guān)化合物的方法。
發(fā)明詳述為了使此處所描述的本發(fā)明得到充分理解，給出下列詳細(xì)描述。
下列縮寫和定義用于整個申請中。
縮寫

術(shù)語“卡斯帕酶”指作為包括ICE的酶系的一員的酶(見H.Hara,Natl.Acad.Sci.,94,pp.2007-2012(1997))。
術(shù)語“HBV”、“HCV”和“HGV”分別指乙型肝炎、丙型肝炎和庚型肝炎(hepatitis-G)病毒。
術(shù)語“Ki”指化合物對靶酶如ICE活性的抑制作用的數(shù)據(jù)檢測值。Ki的值越低，療效越高。此Ki值是將實(shí)驗(yàn)測定的速率數(shù)據(jù)代入標(biāo)準(zhǔn)酶動力學(xué)方程式得出的(見I.H.Segel,Enzyme Kinetics,Wiley-Interscience,1975)。
術(shù)語“干擾素γ誘導(dǎo)因子”或“IGIF”指能刺激IFN-γ內(nèi)源性產(chǎn)生的因子。
術(shù)語“卡斯帕酶抑制劑”指能顯示出可檢測的對一種或多種卡斯帕酶的抑制作用的化合物。術(shù)語“ICE抑制劑”指能顯示出對ICE及選擇性地對一種或多種其它卡斯帕酶的可檢測的抑制作用的化合物。對這些酶的抑制可以用本文中描述的方法及引用的方法測定。
本領(lǐng)域技術(shù)人員能意識到在體內(nèi)的酶抑制劑并不一定是在體外的酶抑制劑。例如，化合物的前藥形式一般在體外實(shí)驗(yàn)中顯示極小活性或沒有活性。這種前藥形式可以通過患者體內(nèi)的代謝或其它生化過程改變?yōu)轶w內(nèi)的ICE抑制劑。
術(shù)語“細(xì)胞因子”指介導(dǎo)細(xì)胞之間相互作用的分子。
術(shù)語“病癥”指在對象中產(chǎn)生有害生物后果的任何疾病、紊亂或作用。
術(shù)語“對象”指動物，或得自動物的一種或多種細(xì)胞。優(yōu)選，此動物是哺乳動物，首選是人。細(xì)胞可以是任何形式的，包括但不限于保持在組織、細(xì)胞簇、無限增殖化細(xì)胞、轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化細(xì)胞及得自已進(jìn)行了物理或表型改變的動物的細(xì)胞。
術(shù)語“患者”在本申請中指任何動物，優(yōu)選人。
術(shù)語“烷基”指含1至6個碳原子的直鏈或支鏈飽和脂族烴。
術(shù)語“鏈烯基”指含2至6個碳原子及至少一個雙鍵的直鏈或支鏈不飽和烴。
術(shù)語“炔基”指含2至6個碳原子和至少一個三鍵的直鏈或支鏈不飽和烴。
術(shù)語“環(huán)烷基”指單或多環(huán)的、非芳族烴環(huán)系，其可以選擇性地在環(huán)系中含不飽和鍵。實(shí)例包括環(huán)己基、金剛烷基、降冰片烷基和螺環(huán)戊基。
術(shù)語“芳基”指含6、10、12或14個碳原子的、環(huán)系的至少一個環(huán)是芳環(huán)的、單或多環(huán)環(huán)系。本發(fā)明的芳基選擇性地被R11單或多取代。芳基環(huán)系的例子包括苯基、萘基、和四氫萘基。
術(shù)語“雜芳基”指含1至15個碳原子和1至4個雜原子，且該環(huán)系的至少一個環(huán)是芳環(huán)的單或多環(huán)環(huán)系。雜原子是硫原子、氮原子或氧原子。本發(fā)明的雜芳基選擇性地被R11單或多取代。
術(shù)語“雜環(huán)”指含1至15個碳原子和1至4個雜原子，且其中單或多環(huán)環(huán)系可以選擇性地含不飽和鍵但不是芳環(huán)的單或多環(huán)環(huán)系。雜原子獨(dú)立地選自硫原子、氮原子或氧原子。
術(shù)語“烷芳基”指烷基的某個氫原子被芳基代替的烷基。
術(shù)語“烷基雜芳基”指烷基的某個氫原子被雜芳基代替的烷基。
術(shù)語“氨基酸側(cè)鏈”指連接天然或非天然氨基酸的α碳上的任何基團(tuán)。
術(shù)語“取代”指用取代基代替化合物中的某個氫原子。
術(shù)語“直鏈”指共價結(jié)合的原子的不分支連接的鏈。該直鏈可以被取代，但是此取代基不是此直鏈的一部分。
在化學(xué)式中，其中使用的括號表示分子或基團(tuán)的連接。具體地講，括號用來表明1)一個以上的原子或基團(tuán)鍵接在特定的原子上；或2)分支點(diǎn)(即恰在左括號前的原子與括號中的原子或基團(tuán)以及恰在右括號后的原子或基團(tuán)鍵接)。第一個應(yīng)用的實(shí)例為“-N(烷基)2”，表示兩個烷基鍵接一個氮原子。第二個應(yīng)用的實(shí)例是“-C(O)NH2”，表示羰基和氨基(“NH2”)都與指定的碳原子鍵接。“-C(O)NH2”基團(tuán)可以用其它方式表示，包括下式 取代基可以用多種形式表示。這些形式是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并可以互換。例如，苯環(huán)上的甲基取代基可以以下列任何形式表示
取代基如甲基的多種表示形式在本文中交互使用。
其它定義在說明書的必要處給出。
本發(fā)明的化合物本發(fā)明的一個實(shí)施方案A的化合物是式Ⅰ的化合物 其中Y是(a) 條件是當(dāng)R7是羥基時，Y也可以是(b) X是-C(R3)2-或-N(R3)-；m是0或1；R1是H、-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或者R2和一個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R4是-H而每個R5獨(dú)立地是H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或者R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R6是-H；R7是-OH,-OR8或-N(H)OH；每個R8獨(dú)立地是-烷基，-環(huán)烷基，-芳基，雜芳基，-雜環(huán)基，-烷基環(huán)烷基，-烷基芳基，-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R9獨(dú)立地是-芳基，-雜芳基，環(huán)烷基或-雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷基芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷基芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷基芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷基芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；而每個R11獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-烷基、-環(huán)烷基、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2。
在實(shí)施方案A的另一個形式中R1是H、-R8、-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或者每個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)環(huán)系，或者R2和一個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷基芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷基芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)O烷基、-N(H)C(O)O芳基、-N(H)C(O)O烷芳基、-N(H)C(O)O雜芳基、-N(H)C(O)O烷基雜芳基、-N(H)C(O)O環(huán)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)N(H)芳基、-N(H)C(O)N(H)烷芳基、-N(H)C(O)N(H)雜芳基、-N(H)C(O)N(H)烷基雜芳基、-N(H)C(O)N(H)環(huán)烷基、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；其它取代基定義如上。
在任何上述方案中，優(yōu)選m是0；R2是-H；一個R3是-H而另一個R3是-R8，-鏈烯基-R9或-炔基-R9；或R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替，其中此環(huán)系是 或
在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是C(R3)2或一個R3是氨基酸側(cè)鏈，-R8鏈烯基-R9或炔基-R9。
更優(yōu)選一個R3是-H而另一個R3是-烷基；或R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在該環(huán)系上的任何氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替，選自 或 首選一個R3是-H而另一個R3是-C(H)(CH3)2或-C(CH3)3；而R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在該環(huán)系上的任何氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替，選自
在另一個首選的實(shí)施方案中，一個R3是-H而另一個R3是-CH3,-C(H)(CH3)2或-C(CH3)3而R4和R5就定義如上。
按照另一個實(shí)施方案B，本發(fā)明提供了式Ⅰ的化合物，其中Y是 條件是當(dāng)R6不是氫原子時，R6和Y與它們連接的氮原子一起形成環(huán)(g) R12是-C(O)烷基、-C(O)環(huán)烷基、-C(O)鏈烯基、-C(O)烷芳基、-C(O)烷基雜芳基、-C(O)雜環(huán)基或-C(O)烷基雜環(huán)基；R13是-H，-烷基，-芳基，-烷芳基或-烷基雜芳基；而其它取代基定義如上。
優(yōu)選在(c),(d),(e)或(f)中，R8是甲基，乙基，正丙基，異丙基，環(huán)戊基，苯乙基或芐基。
實(shí)施方案B的其它單個組份的優(yōu)選定義與上述實(shí)施方案A中給出的相同。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案C提供了式Ⅰ的化合物 其中Y是 或 m是0或1；X是-C(R3)2-R1是H、-R8、-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或每個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R4是-H而每個R5獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，-鏈烯基-R9或-炔基-R9，或R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R6是-H；R7是-OH、-OR8、-N(H)OH或-N(H)S(O)2R8；每個R8獨(dú)立地是-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R9獨(dú)立地是-芳基，-雜芳基，環(huán)烷基或-雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)O烷基、-N(H)C(O)O芳基、-N(H)C(O)O烷芳基、-N(H)C(O)O雜芳基、-N(H)C(O)O烷基雜芳基、-N(H)C(O)O環(huán)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)N(H)芳基、-N(H)C(O)N(H)烷芳基、-N(H)C(O)N(H)雜芳基、-N(H)C(O)N(H)烷基雜芳基、-N(H)C(O)N(H)環(huán)烷基、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基、其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替、結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；而每個R11獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-烷基、-環(huán)烷基、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2；條件是如果一個R3是-H，則另-個R3不是-H。
本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案D提供了式Ⅰ的化合物，其中Y是 R12是-C(O)烷基、-C(O)環(huán)烷基、-C(O)鏈烯基、-C(O)烷芳基、-C(O)烷基雜芳基、-C(O)雜環(huán)基或-C(O)烷基雜環(huán)基；而其它取代基定義如上，不同的是兩個R3都可以是H。
在A-D的任何一個實(shí)施方案中，優(yōu)選的化合物中R1是-C(O)R8或-C(O)(O)R8；R2和一個R3都是-H而另一個R3是氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9；或R4和一個R5與它們連接的原子一起形成選自如下的環(huán)系
條件是環(huán)系中的每一個選擇性地被一個或多個R10取代。
或者，實(shí)施方案A-D的優(yōu)選化合物為其中R3是-H而另一個R3是甲基，異丙基，叔丁基，-CH2SR8,-CH2SO2R8,-CH2CH2SR8，-CH2CH2SO2R8的化合物。
實(shí)施方案A-D中更優(yōu)選的化合物是其中R4和一個R5與它們連接的原子一起形成如下環(huán)系統(tǒng) 而另一個R5是H的化合物；或者是一個R3是H而另一個R3是甲基的化合物。
另外，實(shí)施方案A-D中更優(yōu)選的化合物是其中R4和一個R5與它們連接的原子一起形成如下環(huán)系 而另一個R5是H的化合物。
在上述另選的實(shí)施方案中，R10優(yōu)選是4-氟或4,4-二氟。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是其中R3是甲基；而R4和一個R5與它們連接的原子形成如下環(huán)系 而另一個R5是H的化合物。此外，實(shí)施方案A-D中首選的化合物是其中R3是甲基；而R4和一個R5與它們連接的原子一起形成如下環(huán)系 而另一個R5是H；且R10是4-氟或4,4-二氟的化合物。實(shí)施方案(B)或(D)的優(yōu)選化合物中Y是 其中Z表示-OR8而是CH3O, 或 本發(fā)明特定的化合物包括但不限于實(shí)施例5a-5bd,7a-7at,9a-9g,15a-15f,16a-16b,17a-17e,18a-18f,20a-20t,23a-23i,24a-24e,25a-25e,26a-26h,27a-27n,28a-28c,29a-29s,32a-32e,34,G1,G2,41,42,45,46,51,52,56,57,60,61,64,65,68,69,72,73,76-93,98a-z,aa-az和ba-bb,101,102a,102b,108a-d,110,111,116a-h,120a和b,121,122 a-v及123 a-c。
本發(fā)明的化合物可以存在一個或多個“不對稱”碳原子，因此可以以外消旋體和外消旋混合物、單一對映體、非對映異構(gòu)體混合物及單一非對映異構(gòu)體的形式存在。每個產(chǎn)生立體構(gòu)型的碳原子可以是R或S構(gòu)型。雖然在本說明書中列舉的特定化合物和骨架可能以特定的立體化學(xué)構(gòu)型描述，但是就任何給出的手性碳原子而言具有相反立體化學(xué)的化合物和骨架或其混合物也是可以想象的。
這些化合物的所有這些立體異構(gòu)形式及其藥用衍生物包括在本發(fā)明中。
術(shù)語“藥用衍生物”指本發(fā)明化合物的任何藥用鹽、酯或這種酯的鹽，或給患者使用時能提供(直接或間接)本發(fā)明化合物或其活性代謝物或殘基的任何其它化合物。
本發(fā)明化合物的藥用鹽包括，例如，得自藥用無機(jī)酸、有機(jī)酸和堿的鹽。適宜的酸的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、枸櫞酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。其它酸如草酸，雖然其本身不是藥用的，可以用于鹽的制備，所述用作獲得本發(fā)明化合物及其藥用酸加成鹽的中間體。從適當(dāng)?shù)膲A得到的鹽包括堿金屬(如鈉)、堿土金屬(如鎂)、銨和N-(C1-4烷基)4+鹽。
本發(fā)明還包括本文公開的化合物的任何堿性含氮基團(tuán)的“季銨鹽”形式。該堿性氮原子可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何試劑季銨化，例如，包括低級烷基鹵化物，如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物，二烷基硫酸酯如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；長鏈鹵化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；及芳烷基鹵化物，包括芐基和苯乙基溴?？梢酝ㄟ^這種季銨化得到水或油溶性或者分散性產(chǎn)物。
當(dāng)多取代時，只要取代基的聯(lián)合產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物，就可以獨(dú)立于任何其它取代基選擇每個取代基。
本發(fā)明考慮的取代基及可變因子的聯(lián)合只是那些導(dǎo)致形成穩(wěn)定化合物的那些。術(shù)語“穩(wěn)定”在本文中指所具穩(wěn)定性足以允許制備和通過本領(lǐng)域已知方法給哺乳動物使用的化合物。一般來說，這些化合物在40℃或更低的溫度下，在沒有潮濕或其它化學(xué)反應(yīng)性條件下至少穩(wěn)定一周。
口服給藥時，本發(fā)明的化合物可以容易地通過或者的血流吸收。此口服有效性使這些化合物是口服給藥治療或預(yù)防IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病的優(yōu)益制劑。
應(yīng)理解根據(jù)包括溶劑、pH及其它本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的選擇條件，本發(fā)明的化合物可能存在多種平衡形式。這些化合物的所有這些形式包括在本發(fā)明中。具體地講，很多本發(fā)明的化合物，特別是那些在Y基團(tuán)中含醛或酮基團(tuán)及羧酸基團(tuán)的，可以產(chǎn)生半縮醛或水合物的形式。例如，當(dāng)Y是 時，實(shí)施方案A的化合物是半縮醛的形式。
根據(jù)溶劑及其它本領(lǐng)域技術(shù)人員已知條件的選擇，本發(fā)明的化合物還可以是水合物、酰氧基縮醛、縮醛和烯醇的形式。例如，當(dāng)Y是 且R8是H時，本發(fā)明的化合物是水合物的形式；當(dāng)Y是 時，該化合物是酰氧基縮醛的形式；當(dāng)Y是 而R8不是H時，該化合物是縮醛的形式；當(dāng)Y是 時，該化合物是烯醇的形式。
此外，應(yīng)理解本發(fā)明化合物的平衡形式可以包括互變異構(gòu)體形式。這些化合物的所有這些形式包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
用常規(guī)技術(shù)可以合成式Ⅰ的化合物。有利的是，這些化合物由容易得到的起始物方便地合成。
可以用本文中描述的方法制備本發(fā)明的化合物。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，這些方法不是制備此申請中描述并要求保護(hù)的化合物的唯一途徑。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說其它方法是顯而易見的。此外，本文中描述的多種合成步驟可以以不同的順序或次序進(jìn)行，從而制備所需的化合物。
應(yīng)理解本發(fā)明的化合物可以用適當(dāng)?shù)墓倌芑揎椧蕴岣呱镞x擇性。這些修飾是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并包括增加對給出的生物系統(tǒng)(例如，血液、淋巴系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng))的生物透過性、增加口腔利用度、增加注射給藥時的溶解度、改變代謝及改變分泌速度的那些。此外，可以將這些化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榍八幮问?，作為對此前藥的代謝或其它生化過程的結(jié)果，在患者的體內(nèi)產(chǎn)生所需的化合物。在體外實(shí)驗(yàn)中，這些前藥形式一般顯示極小的活性或沒有活性。前藥的實(shí)例包括含酮或醛基團(tuán)化合物的縮酮、縮醛、肟、亞胺、腙形式，特別是在本發(fā)明化合物的Y基團(tuán)中發(fā)生。前藥的其它實(shí)例包括本文中描述的半縮酮、半縮醛、酰氧基縮醛、酰氧基縮酮、縮酮、縮醛和烯醇形式。
組合物和方法本發(fā)明的化合物是卡斯帕酶抑制劑，特別是ICE抑制劑。因此，這些化合物能靶向和抑制IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF和IFN-γ介導(dǎo)疾病的過程，并因此靶向在炎性疾病、自身免疫性疾病、骨破壞、增殖紊亂、傳染病和變性疾病中活力極高的蛋白質(zhì)。例如，本發(fā)明的化合物通過抑制ICE來抑制前體IL-1β向成熟IL-1β轉(zhuǎn)化。因?yàn)镮CE是產(chǎn)生成熟IL-1所必需的，通過抑制成熟IL-1的產(chǎn)生，抑制此酶，這樣有效阻斷了IL-1介導(dǎo)的生理作用和癥狀的發(fā)生。因此，通過抑制IL-1β前體活性，本發(fā)明化合物是有效的IL-1抑制劑。
本發(fā)明化合物還通過抑制ICE來抑制IGIF原向活性、成熟IGIF的轉(zhuǎn)化。因?yàn)镮CE是產(chǎn)生成熟IGIF所必需的，通過抑制成熟IGIF的產(chǎn)生，對ICE進(jìn)行抑制，這樣有效地阻斷了IGIF介導(dǎo)的生理作用和癥狀的發(fā)生。接著，IGIF是產(chǎn)生IFN-γ所必需的。因此，通過抑制成熟IGIF的產(chǎn)生并隨之抑制IFN-γ的產(chǎn)生，因此ICE抑制劑有效阻斷了IFN-γ介導(dǎo)生理作用和癥狀的發(fā)生。
當(dāng)與肽基抑制劑，例如描述于EP 618 223,EP 623 592,WO93/09135,WO 93/16710,US專利5,434,248,WO 95/35308或WO96/33209的那些比較時，本發(fā)明的化合物具有驚人的生物利用度。
因此，本發(fā)明的藥物組合物和方法將用于控制體內(nèi)卡斯帕酶活性。本發(fā)明的組合物和方法因此可用于控制體內(nèi)IL-1、IGIF或IFN-γ的水平并用于治療或降低IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)病癥(包括疾病、紊亂和影響)的提升、嚴(yán)重和影響。
本發(fā)明的藥物組合物含式Ⅰ化合物或其藥用鹽及藥用載體。這些組合物可以選擇性地包含其它治療劑。這些治療劑包括但不限于抗炎劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、脂氧合酶抑制劑、細(xì)胞因子拮抗劑、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、細(xì)胞因子、生長因子、免疫調(diào)節(jié)劑、前列腺素或抗血管過度增殖化合物。
術(shù)語“藥用載體”指可以與本發(fā)明化合物一起給患者使用，且不破壞其藥理學(xué)活性的無毒載體。
可以用于本發(fā)明藥物組合物的藥用載體包括但不限于離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、甘油、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、羊毛脂和自乳化藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(SEDDS)如α-生育酚、聚琥珀酸乙二醇1000酯或其它類似的聚合轉(zhuǎn)運(yùn)基質(zhì)。
在藥物組合物中只含實(shí)施方案A-D的化合物作為活性組份時，使用這些組合物的方法可再包括給對象使用其它制劑的步驟。這些制劑包括但不限于抗炎劑、基質(zhì)金屬蛋白抑制劑、脂氧合酶抑制劑、細(xì)胞因子拮抗劑、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、細(xì)胞因子、生長因子、免疫調(diào)節(jié)劑、前列腺素或抗血管過度增殖化合物。
術(shù)語“藥學(xué)有效量”指有效治療或改善患者的IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病的量。術(shù)語“預(yù)防有效量”指有效防止或基本減輕患者的IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病的量。
本發(fā)明的化合物可以以常規(guī)方式使用來控制體內(nèi)IGIF和IFN-γ水平并用于治療IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)的疾病或降低它們所介導(dǎo)的作用的提升和嚴(yán)重性。這些治療方法、其劑量水平和要求可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員用現(xiàn)有的方法和技術(shù)加以選擇。
例如，本發(fā)明的化合物可以與藥用輔劑混合，以藥學(xué)可接受的方式并以減輕疾病嚴(yán)重性的有效量，給IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病的患者使用。
或者，在延長的時間內(nèi)，本發(fā)明的化合物可以用于組合物和方法中以治療IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病或保護(hù)個體抗IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病。這些化合物可以單獨(dú)或與本發(fā)明的其它化合物以與藥物組合物中酶抑制劑的常規(guī)應(yīng)用一致的方式使用。例如，本發(fā)明的化合物可以與常規(guī)用于疫苗中的藥用輔劑混合并以預(yù)防有效量使用，以便在延長的時間內(nèi)保護(hù)個體抗IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病。
式Ⅰ的化合物還可以與其它卡斯帕酶或ICE抑制劑一起使用，以增加治療或預(yù)防多種IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病的作用。
此外，本發(fā)明的化合物可以與常規(guī)抗炎劑或與基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、脂氧合酶抑制劑及IL-1β以外的細(xì)胞因子拮抗劑聯(lián)合使用。
本發(fā)明的化合物還可以與免疫調(diào)節(jié)劑(例如溴匹立明、抗人α干擾素抗體、IL-2、GM-CSF、甲硫氨酸、腦啡肽、干擾素-α、二硫代氨基甲酸二乙酯、腫瘤壞死因子、納曲酮和EPO)、與前列腺素或與抗病毒劑(例如，3TC、多硫酸化多糖、更昔洛韋(ganiclovir)、利巴韋林、阿昔洛韋、α干擾素、三甲曲沙(trimethotrexate)、和泛昔洛韋(fancyclovir))或這些藥物的前藥或相關(guān)化合物聯(lián)合使用，以防止或抗IL-1介導(dǎo)的疾病癥狀如炎癥。
當(dāng)本發(fā)明的化合物與其它制劑聯(lián)合治療時，它們可以給患者依次或并行給藥?；蛘?，本發(fā)明的藥物或預(yù)防組合物含式Ⅰ化合物和其它治療或預(yù)防劑的混合形式。
本發(fā)明的藥物組合物可以口服、非腸道、吸入噴霧、局部、直腸、鼻內(nèi)、頰部、陰道或通過植入貯庫給藥。我們優(yōu)選口服給藥。本發(fā)明的藥物組合物可以含有任何常規(guī)無毒藥用載體、輔劑或賦形劑。在一些情況下，可以用藥用酸、堿或緩沖劑調(diào)節(jié)此制劑的pH以提高配制化合物或其轉(zhuǎn)運(yùn)形式的穩(wěn)定性。本文中術(shù)語非腸道包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、損傷區(qū)域內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸液技術(shù)。
這些藥物組合物可以是無菌注射制劑的形式，例如，無菌注射水或油混懸劑。此混懸劑可以按照本領(lǐng)域已知技術(shù)用適宜的分散劑或濕潤劑(如吐溫80)和助懸劑配制。此無菌注射制劑也可以是存在于無毒非腸道給藥可接受稀釋劑或溶劑(如1,3-丁二醇)中的無菌注射溶液劑或混懸劑。在可接受的載體和溶劑中，可以使用的是甘露醇、水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發(fā)油可常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以使用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的單或二甘油酯衍生物。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射劑的制備，如天然藥用油如橄欖油或蓖麻油，特別是其聚氧乙基化的形式。這些油溶液或懸浮液還可以含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，如描述于瑞士藥典(Pharmacopeia Helvetica)中的，或類似的醇。
本發(fā)明的藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型口服給藥，這些劑型包括但不限于膠囊、片劑和含水混懸劑及溶液劑。對于口服片劑，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。一般還加入潤滑劑如硬脂酸鎂。對于口服給藥的膠囊形式，可利用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)含水混懸劑和溶液劑及丙二醇口服給藥時，此活性組份與乳化劑或助懸劑混合。如果需要，可以加入某些甜味劑和/或矯味劑和/或著色劑。
本發(fā)明的藥物組合物還可以以栓劑的形式直腸給藥?？梢酝ㄟ^將本發(fā)明的化合物與適當(dāng)?shù)臒o刺激性賦形劑混合制備，該賦形劑在室溫下是固體但在直腸溫度下是液體，并因此會在直腸中融化以釋放活性組份。這些物質(zhì)包括但不限于可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
當(dāng)所需治療發(fā)生在局部施用容易進(jìn)入的區(qū)域或器官中時，本發(fā)明藥物組合物的局部給藥是特別有利的。為了給皮膚局部施用，此藥物組合物應(yīng)與適宜的軟膏配制，其中所含活性組份懸浮于或溶解于載體中。本發(fā)明化合物局部給藥的載體包括但不限于礦物油、液體石蠟、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水?；蛘?，此藥物組合物可以與適宜的洗劑或霜配制，其中所含活性化合物懸浮于或溶解于載體中。適宜的載體包括但不限于礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯六十、鯨蠟基酯蠟、混合十六十八醇(cetearylalcohol)、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。本發(fā)明的藥物組合物還可以通過直腸栓劑或在適當(dāng)?shù)墓嗄c劑中給腸道的較下部位局部施用。局部給藥透皮貼劑也包括在本發(fā)明中。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過鼻內(nèi)氣霧劑或吸入劑的形式給藥。按照藥物制劑領(lǐng)域熟知的技術(shù)制備這些組合物并可以制備為存在于生理鹽水中的溶液，使用芐醇或其它適宜的防腐劑、提高生物利用度的吸收促進(jìn)劑、碳氟化合物和/或其它本領(lǐng)域已知的溶解或分散劑。
在單獨(dú)治療中，用于預(yù)防和治療IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF或IFN-γ介導(dǎo)疾病的此活性組份化合物的劑量水平為約0.01至約100mg/kg體重每天，優(yōu)選為0.5至約75mg/kg體重每天并首選約1至50mg/kg體重每天，所述疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞骨的紊亂、增殖紊亂、傳染病、變性疾病、壞死性疾病、炎性腹膜炎、骨關(guān)節(jié)炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、腎小球性腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、Graves病、自身免疫性胃炎、胰島素依賴性糖尿病(Ⅰ型)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、炎性腸疾病、克羅恩氏病、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、移植物抗宿主病、骨質(zhì)疏松、與骨疾病有關(guān)的多發(fā)性骨髓瘤、白血病及相關(guān)疾病、脊髓發(fā)育不良綜合征、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、膿毒病、膿毒性休克、志賀氏菌病、早老性癡呆、帕金森氏病、腦局部缺血、心肌局部缺血、脊柱肌肉萎縮、多發(fā)性硬化、AIDS相關(guān)腦炎、HIV相關(guān)腦炎、衰老、脫發(fā)、中風(fēng)導(dǎo)致的神經(jīng)損傷、潰瘍性結(jié)腸炎、感染性肝炎、青少年糖尿病、扁平苔蘚病(lichenplanus)、急性皮膚肌炎、濕疹、原發(fā)性肝硬化、眼色素層炎、貝切特氏病、特應(yīng)性皮膚病、純紅細(xì)胞發(fā)育不全、再生障礙性貧血、肌萎縮性側(cè)索硬化、腎病綜合征和系統(tǒng)性疾病或由過量飲酒或病毒如HBV,HCV,HGV，黃熱病毒，登革熱病毒和日本腦炎病毒引起的炎癥或編程性細(xì)胞死亡所影響的肝臟或其它器官的疾病。
一般來說，本發(fā)明的藥物組合物每天將使用約1至5次，或者以連續(xù)輸液的形式給藥。此給藥可以用作慢性或急性治療。可以與載體混合以制備單位劑型的活性組份的量，將隨所治療的宿主和特定的給藥方式變化。典型的制劑含有約5％至約95％的活性化合物(w/w)。優(yōu)選，這些制劑含約20％至約80％的活性化合物。
當(dāng)本發(fā)明的組合物含式Ⅰ化合物和一種或多種其它治療劑或預(yù)防劑的聯(lián)合形式時，此化合物及其它制劑的劑量應(yīng)為單一治療方案中正常給藥量的約10％至80％。
隨著患者癥狀的改善，如果需要，可以使用本發(fā)明的化合物、組合物或聯(lián)合形式的維持劑量。于是，作為癥狀的函數(shù)，可以將給藥劑量或頻率降低至，或者二者都可以降低至維持改善癥狀，當(dāng)癥狀已減輕至所需的水平時，停止治療。但是，長時間內(nèi)在疾病癥狀的復(fù)發(fā)時需要間歇的治療。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員意識到的，可能需要比上述更低或更高的劑量。對任何特定患者的特定劑量和治療方案將依賴于多種因素，包括所用特定化合物的活性、患者的年齡，體重，整體健康狀況，性別，飲食，給藥時間，分泌速度、藥物聯(lián)合、疾病的嚴(yán)重性和過程及患者對疾病的素因及主治醫(yī)師的診斷。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的疾病，包括但不限于炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖疾病、感染性疾病和變性疾病?？梢杂帽景l(fā)明化合物治療或預(yù)防的疾病包括變性疾病。
IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的炎性疾病包括但不限于骨關(guān)節(jié)炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘和成人呼吸窘迫綜合征。優(yōu)選的炎性疾病是骨關(guān)節(jié)炎或急性胰腺炎。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的自身免疫性疾病包括但不限于腎小球性腎炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，硬皮病，慢性甲狀腺炎，Graves病，自身免疫性胃炎，胰島素依賴性糖尿病(Ⅰ型)，自身免疫溶血性貧血，自身免疫性中性白細(xì)胞減少，血小板減少癥，慢性活動性肝炎，重癥肌無力，多發(fā)性硬化，炎性腸疾病，克羅恩氏病，牛皮癬，特異性皮炎和移植物抗宿主病。優(yōu)選此自身免疫性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、克羅恩氏病、牛皮癬或特異性皮炎。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)骨破壞疾病包括但不限于骨質(zhì)疏松和與多發(fā)性骨髓瘤有關(guān)的骨疾病。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的增殖疾病包括但不限于白血病及相關(guān)疾病如脊髓發(fā)育不良綜合征，急性骨髓性白血病，慢性骨髓性白血病，轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤，和多發(fā)性骨髓瘤。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的感染性疾病包括但不限于膿毒病，膿毒性休克和志賀氏菌病。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的變性或壞死性疾病包括但不限于早老性癡呆、帕金森氏病、腦局部缺血和心肌局部缺血。優(yōu)選此變性疾病是早老性癡呆。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的疾病包括但不限于早老性癡呆，帕金森氏病，腦局部缺血，心肌局部缺血，脊柱肌肉萎縮，多發(fā)性硬化，AIDS相關(guān)腦炎，HIV相關(guān)腦炎，衰老，脫發(fā)和中風(fēng)引起的神經(jīng)損傷。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防具有炎性或編程性細(xì)胞死亡因素的其它疾病。這些疾病可以是系統(tǒng)性疾病或局部影響位于肝臟或其它器官的疾病，例如，這些疾病可以由下列原因引起過量飲酒或病毒如HBV、HCV、HGV、黃熱病毒、登革熱病毒和日本腦炎病毒。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IGIF-或IFN-γ-介導(dǎo)的疾病包括但不限于炎性、感染性、自身免疫性、增殖性、神經(jīng)變性及壞死性病癥。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IGIF-或IFN-γ-介導(dǎo)的炎性疾病包括但不限于骨關(guān)節(jié)炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、腦局部缺血、心肌局部缺血和成人呼吸窘迫綜合征。優(yōu)選此炎性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、肝炎或成人呼吸窘迫綜合征。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IGIF-或IFN-γ-介導(dǎo)的感染性疾病包括但不限于傳染性肝炎、膿毒病、膿毒性休克和志賀氏菌病。
可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的IGIF-或IFN-γ-介導(dǎo)的自身免疫性疾病包括但不限于腎小球性腎炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，硬皮病，慢性甲狀腺炎，Graves病，自身免疫性胃炎，胰島素依賴性糖尿病(Ⅰ型)，青少年糖尿病，自身免疫溶血性貧血，自身免疫性中性白細(xì)胞減少，血小板減少癥，重癥肌無力，多發(fā)性硬化，牛皮癬，扁平苔蘚病，移植物抗宿主病，急性皮膚肌炎，濕疹，原發(fā)性肝硬化，肝炎，眼色素層炎，貝切特氏病，特異性皮膚病，單純紅細(xì)胞發(fā)育不全，再生障礙性貧血，肌萎縮性側(cè)索硬化和腎病綜合征。優(yōu)選自身免疫性疾病是腎小球性腎炎、胰島素依賴性糖尿病(Ⅰ型)、青少年糖尿病、牛皮癬、移植物抗宿主病或肝炎。
可以治療或預(yù)防的更優(yōu)選的疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病包括克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腹膜炎、膿毒性休克、胰腺炎、腦外傷、器官移植排斥、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、牛皮癬、早老性癡呆、特異性皮炎或白血病及相關(guān)疾病如骨髓發(fā)育不良性綜合征或多發(fā)性骨髓瘤。
因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防患者的IL-1或編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)疾病的方法，包括給此患者使用本文中描述的任何化合物、藥物組合物或聯(lián)合形式和藥用載體的步驟。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防患者的IGIF產(chǎn)生的方法，包括給此患者使用本文中描述的任何化合物、藥物組合物或聯(lián)合形式和藥用載體的步驟。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案提供了降低患者的IFN-γ產(chǎn)生的方法，包括給此患者使用本文中描述的任何化合物、藥物組合物或聯(lián)合形式和藥用載體的步驟。
雖然本發(fā)明的焦點(diǎn)在于本文所述化合物預(yù)防和治療IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF和IFN-γ介導(dǎo)疾病的用途，但是本發(fā)明的化合物也可以用作其它半胱氨酸蛋白酶的抑制劑。
本發(fā)明的化合物也是有利的商業(yè)試劑，它們有效結(jié)合卡斯帕酶或其它半胱氨酸蛋白酶(包括但不限于ICE)。作為商業(yè)試劑，在生化或細(xì)胞檢測ICE和ICE類似物的實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明的化合物及其衍生物可以用來阻斷靶肽的蛋白水解，或可以衍生并與穩(wěn)定的樹脂結(jié)合以作為親和色譜中的固定底物。這些或其它以商業(yè)半胱氨酸蛋白酶抑制劑為特征的用途對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將是顯而易見的。
為了使本發(fā)明得到更充分的理解，給出下列實(shí)施例。這些實(shí)施例只是用來舉例說明而不是以任何方式限定本發(fā)明的范圍。
總方法分析HPLC條件柱C-18，粒度5μ，孔徑100埃，柱規(guī)格4.6×150mm溶劑A:0.1％TFA/1％MeCN/98.9％水溶劑B:0.1％TFA/99.9％MeCN梯度在20分鐘內(nèi)以流速1mL/分鐘從A至B柱氰基柱，粒度5μ，孔徑100埃，柱規(guī)格4.6×150mm溶劑A:0.1％TFA/1％MeCN/98.9％水溶劑B:0.1％TFA/99.9％MeCN梯度A/B=99％/1％至50％/50％，在20分鐘內(nèi)，流速為1mL/分鐘HPLC質(zhì)譜分析質(zhì)譜分析所有質(zhì)譜數(shù)據(jù)用Micromass QuattroⅡ三聯(lián)四極質(zhì)譜儀(Beverly,MA)收集，其裝配有交叉流動電噴射離子化源。將此質(zhì)譜儀與Hewlett-Packard生產(chǎn)的HPLC系統(tǒng)(HP1100)連接。此系統(tǒng)的自動加樣器是Gilson215(Middleton,WI)液體處理器。所有設(shè)備由購自Micromass的MassLynx軟件包控制。
用液體色譜-MS進(jìn)行質(zhì)譜分析以測定純度并同時確證分子量。對于樣品純度已用其它方法測定的情況，用流動注射分析(FIA)代替完全色譜分析。在所有情況下，收集陽性和陰性的離子圖譜。
質(zhì)譜條件對所有實(shí)驗(yàn)，在裝有交叉流動計數(shù)器電極的電子噴射態(tài)中校準(zhǔn)質(zhì)譜儀。用分流器將自HPLC的流量降低至原流量的40％。入口的溫度設(shè)定在140℃并將干燥氣流設(shè)定為最大信號。將質(zhì)譜儀的分辨率調(diào)節(jié)至0.65amu FWHM并在質(zhì)心狀態(tài)(centroid mode)收集數(shù)據(jù)。在陽離子狀態(tài)中，將錐體電壓設(shè)定為25V，毛細(xì)管電壓設(shè)定為3.8kV。在陰離子狀態(tài)中，將錐體電壓設(shè)定為25V，毛細(xì)管電壓設(shè)定為3.5kV。在陽離子和陰離子狀態(tài)中，獲得全部圖譜的時間為1秒，在掃描期間轉(zhuǎn)換時間為0.25秒。對于預(yù)計分子量小于350amu的分子的掃描質(zhì)量范圍為70-500m/z，而對預(yù)計分子量大于350amu的掃描質(zhì)量與電荷比率為200-1000m/z。
色譜條件液體色譜用YMC AQ C18柱(150mm×3mm，粒度為5μm而孔徑為120埃)進(jìn)行。對于所有分析，用含0.2％甲酸的MeCN與含0.2％甲酸的水混合形成洗脫液梯度。該梯度的特性為用15％MeCN水開始，并在10分鐘內(nèi)將MeCN的量線性增加至90％。在回到起始條件前將此濃度保持恒定2分鐘。在整個分析中，流速為0.9mL/分鐘。
流動注射條件用水與MeCN(都加入0.2％甲酸)1∶1的混合物獲得FIA數(shù)據(jù)。將流速設(shè)定為0.3mL/分鐘。
1H NMR所有1H NMR圖譜用Bruker Instruments AMX-500NMR光譜儀在給出的溶劑中獲得。
合成方法制備實(shí)施方案C式Ⅰ化合物的一般方法(方案Ⅰ-Ⅵ)制備類似物5a-5bd的方法方案Ⅰ 在方案Ⅰ-Ⅷ中，變量LR指交聯(lián)劑-樹脂并定義如上述方案Ⅰ中。
步驟1將6.7g(0.8mmol/g載樣量，5.36mmol)的4-甲基二苯甲胺鹽酸鹽樹脂(方案Ⅰ)用DMF(3×50 mL),10％DIEA/DMF(3×50mL)和N-甲基吡咯烷酮(NMP)(3×50mL)洗滌。向存在于25mL NMP中的洗滌后樹脂的懸浮液中依次加入化合物1(1.1eq(當(dāng)量),3.5g,5.90mmol),DIEA(3.33eq,3.1mL,17.70mmol),1-羥基苯并三唑水合物(HOBt)(1.1eq,797mg,5.90mmol)和0-苯并三唑-N,N,N,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)(1.1eq,2.24g,5.90mmol)。按照文獻(xiàn)A.M.Murphy等，J.Am.Chem.Soc.,114,pp.3156-3157(1992)的方法制備化合物1?；旌衔镉猛蟊壅饎悠髟谑覝叵滦D(zhuǎn)過夜。
將所得混合物過濾，并將此樹脂用DMF洗滌，然后室溫下用12mL 20％的醋酸酐DMF溶液處理30分鐘。將此混合物過濾，并用DMF(2×50mL),CH3OH(50mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×50mL),CH3OH(50mL)和CH2Cl2(3×50mL)依次洗滌。真空干燥后，獲得9.0g的樹脂2(0.48mmol/g載樣量)。
步驟2向4.5g的樹脂2(0.48mmol/g,2.16mmol)中，加入20％的哌啶的DMF溶液。將此懸浮液在室溫下轉(zhuǎn)動5分鐘并排干。此方法重復(fù)20分鐘。然后用DMF(2×40mL),CH3OH(40mL),CH2Cl2(2×40mL),CH3OH(40mL)和NMP(40mL)依次洗滌。向樹脂在40mL NMP的懸浮液中依次加入2.92g的N-Fmoc-脯氨酸(4eq,8.64mmol),3.0mL的DIEA(8eq,17.28mmol),1.17g的HOBt(4eq,8.64mmol)和3.27g的HBTU(4eq,8.64mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)方法重復(fù)3小時。然后用DMF(2×40mL),CH3OH(40mL),1∶1DMF/CH2Cl2(2×40mL),CH3OH(40mL)和CH2Cl2(3×40mL)依次洗滌此樹脂，并簡單真空干燥得到樹脂3。
步驟3將樹脂3在25mL 20％哌啶的DMF溶液中的懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘。將此懸浮液排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此過程。用DMF(2×40mL),CH3OH(40mL),CH2Cl2(2×40mL),CH3OH(40mL)和NMP(2×40mL)依次洗滌此樹脂。向樹脂在40mL NMP的懸浮液中依次加入2.93g的N-Fmoc-纈氨酸(4eq,8.64mmol),3.0mL的DIEA(8eq,17.28mmol),1.17g的HOBt(4eq,8.64mmol)和3.27g的HBTU(4eq,8.64mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)方法重復(fù)3小時。然后用DMF(2×40mL),CH3OH(40mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×40mL),CH3OH(40mL)和CH2Cl2(3×40mL)依次洗滌此樹脂，并真空干燥得到樹脂4(0.45mmol/g)。
步驟4向0.05mmol的樹脂4中加入2mL的20％哌啶的DMF溶液。將此懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此方法。將所得樹脂用DMF(3×50ml)、甲醇(5ml)和NMP(3×5ml)依次洗滌。然后加入所需的羧酸(4eq,0.2mmol)，接著加入0.8mL的0.25M HOBt的NMP溶液，0.14mL的DIEA(8eq,0.4mmol)和0.8mL的0.25M HBTU的NMP溶液。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(2×5mL),CH3OH(5mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×5mL),CH3OH(5mL)和CH2Cl2(3×5mL)依次洗滌，并真空干燥。然后將2mL的TFA在水中的95％溶液加入此樹脂中。將此混合物室溫下攪拌1小時，并過濾。將此濾液蒸發(fā)，并在乙腈-水中回收此殘余物并用制備HPLC純化，得到化合物5a-5bd。
除非另行說明，實(shí)施例5a-5bd,7a-7at,9a-9g,15a-15f,16a-16b,17a-17e,18a-18f,20a-20t,23a-23i,24a-24e,25a-25e,26a-26h,27a-27n,28a-28c,29a-29s,32a-32e的產(chǎn)品收率、分析HPLC條件、HPLC保留時間、產(chǎn)品純度和質(zhì)譜數(shù)據(jù)見表1。
表1．所選實(shí)施例的物理數(shù)據(jù)






類似物7a-7at的制備方法方案Ⅱ 類似物7a-7at按照方案Ⅰ所述制備,不同的是在步驟3中用Fmoc-丙氨酸代替Fmoc-纈氨酸(方案Ⅱ)。
步驟3將樹脂3(3.5g,1.75mmol)在20mL 20％哌啶的DMF溶液中的懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘。將此懸浮液排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此過程。用DMF(2×30mL),CH3OH(30mL),CH2Cl2(2×30mL),CH3OH(30mL)和NMP(2×30mL)依次洗滌此樹脂。向樹脂在30mL NMP的懸浮液中依次加入1.44g的N-Fmoc-丙氨酸(4eq,7.0mmol),2.4mL的DIEA(8eq,14.0mmol),0.95g的HOBt(4eq,7.0mmol)和2.66g的HBTU(4eq,7.00mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)方法重復(fù)3小時。然后用DMF(2×30mL),CH3OH(30mL),1∶1DMF/CH2Cl2(2×30mL),CH3OH(30mL)和CH2Cl2(3×30mL)依次洗滌此樹脂，并真空干燥得到樹脂6(0.50mmol/g)。
步驟4向0.125mmol的樹脂6中加入5mL的20％哌啶的DMF溶液。將此懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此方法。將所得樹脂用DMF(3×5ml)、甲醇(5ml)和NMP(3×5ml)依次洗滌。然后加入所需的羧酸(4eq,0.6mmol)，接著加入2.0mL的0.25M HOBt的NMP溶液，0.35mL的DIEA(8eq,1.0mmol)和2.0mL的0.25M HBTU的NMP溶液。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(3×5mL),CH3OH(5mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×5mL),CH3OH(5mL)和CH2Cl2(3×5mL)依次洗滌，并真空干燥。然后將5mL的TFA在水中的95％溶液加入此樹脂中。將此混合物室溫下攪拌1小時，并過濾。將此濾液蒸發(fā)，并在乙腈-水中溶解此殘余物并用制備HPLC純化，得到化合物7a-7at。
制備類似物9a-9g的方法方案Ⅲ
步驟1將10.0g(0.75mmol/g載樣量，7.5mmol)AgroPore-氨基甲基樹脂(商品目錄號800047)用DMF(3×40mL),10％DIEA/DMF(3×40mL),DMF和NMP(3×40mL)洗滌。向上述樹脂中依次加入化合物1(0.87eq,3.88g,6.55mmol),HBTU(1.14eq,3.13g,8.25mmol),HOBt(1.14eq,1.26g,8.25mmol)和NMP(40mL)。然后室溫下通過燒瓶的底部通入2分鐘氮?dú)夤呐輰⑦@些試劑混合。加入N,N-二異丙基乙胺(3.33eq,4.35mL,25mmol)并將所得懸浮液在室溫下過夜混合，過濾并用NMP(3×40mL)和DMF(3×40mL)依次洗滌。然后室溫下用50mL的20％醋酸酐DMF溶液處理38分鐘。將此混合物過濾，并用NMP(3×40mL)，二氯甲烷(3×40mL),1∶1甲醇/CH2Cl2(3×40mL)和CH3OH(3×40mL)依次洗滌。真空干燥后，得到13.76g的樹脂2(0.35mmol/g載樣量)。
步驟2將7個反應(yīng)容器中，每個都加入181mg的樹脂2(0.48mmol/g,0.063mmol)，然后用二氯甲烷(3×1mL)和NMP(3×1mL)洗滌。然后將每個反應(yīng)器用1mL的25％哌啶的DMF溶液處理并室溫下混合(旋轉(zhuǎn))15分鐘。將此方法進(jìn)行一式三份。然后，用NMP(3×1mL)將每個容器洗滌三次。然后用500μl的0.4M(2S,4R)-Fmoc-4-氨基-1-Boc-吡咯烷-2-甲酸/0.4M HOBt/NMP溶液，500μl的0.4M HBTU/NMP溶液和250μl 1.6M DIEA/NMP溶液處理容器并在室溫下混合3小時。混合后，將這些容器排干并重復(fù)此過程。
步驟3將所得樹脂用NMP(3×1mL)洗滌并用1mL的25％哌啶的DMF溶液處理并在室溫下混合(旋渦)15分鐘。將此方法重復(fù)一式三份。將所得樹脂用NMP(3×1mL)洗滌，然后用醋酸酐、或異丙基異氰酸酯、或甲磺酰氯或氯甲酸甲酯處理。對于醋酸酐加入300μl 1.6MDIEA/NMP溶液和1mL的0.5M醋酸酐/0.125M DIEA/0.015M HOBt在NMP中的溶液。對于異丙基異氰酸酯加入300μl的1.6M DIEA/NMP溶液和1mL的1M異丙基異氰酸酯的NMP溶液。對于甲磺酰氯加入600μl 1M吡啶在二氯甲烷中的溶液和600μl 1M甲磺酰氯的二氯甲烷溶液。對于氯甲酸甲酯加入500μl的1.6M DIEA/NMP溶液和1ml的0.7M氯甲酸甲酯的二氯甲烷溶液，將所得懸浮液室溫下混合6小時，排除溶劑并重復(fù)此偶聯(lián)方法。
步驟4將所得樹脂用NMP(3×1mL)洗滌，然后用TFA/二氯甲烷的1∶1混合物在室溫下處理30分鐘。然后將所得樹脂用二氯甲烷(3×1mL)和NMP(3×1mL)洗滌。然后，用500μl的0.4M Fmoc-纈氨酸-甲酸/0.4M HOBt/NMP溶液，500μl的0.4M HBTU/NMP溶液和250μl的1.6M DIEA/NMP溶液處理，并在室溫下混合3小時。混合后，將此容器排干并重復(fù)此偶聯(lián)步驟。
步驟5將所得樹脂用NMP(3×1mL)洗滌并用1mL的25％哌啶的DMF溶液處理并在室溫下混合(旋渦)15分鐘。將此方法重復(fù)一式三份。將所得樹脂用NMP(3×1mL)洗滌，然后用500μl的0.4M 1-異喹啉甲酸/0.4M HOBt/NMP溶液或500μl的0.4M對-茴香酸/0.4M HOBt/NMP溶液處理。將所得混合物用500μl的0.4M HBTU/NMP溶液和250μl的1.6M DIEA/NMP溶液處理，然后室溫下混合3小時，排除溶劑并重復(fù)此步驟。將所得樹脂用1.5mL的TFA的95％水溶液處理，并在室溫下攪拌1小時并過濾。將此濾液蒸發(fā)，并在DMF/乙腈/水的2∶1∶2的混合物中回收此殘余物，通過制備HPLC純化得到化合物9a-9g。
制備類似物15-18的方法 制備類似物15和16(方案Ⅳ)合成2-(S)-哌嗪-1,2,4-三甲酸4-叔丁基酯1-(9H-芴-9-基甲基)酯向2-(S)-哌嗪甲酸(Lonza)(3g,15mmol)在1∶1水∶二噁烷(30mL)的溶液中，加入(BOC)2O的二噁烷溶液(3.3g,15mmol，在5mL二噁烷中)，同時用1N氫氧化鈉維持pH為11。室溫下將此pH維持3小時。用1N鹽酸將此溶液的pH調(diào)節(jié)至9.5，冷卻至0℃并用Fmoc-Cl(3.87g,15mmol)處理。將pH在9.5維持1小時并將此混合物室溫下攪拌過夜。將所得懸浮液過濾并用1N硫酸氫鉀處理此濾液至pH2，然后用乙酸乙酯(2×75mL)萃取。用鹽水和硫酸鎂干燥此有機(jī)層，過濾并濃縮得到無色油狀物。將此油狀物溶解于乙酸乙酯中并加入到己烷中，分離后得到3.5g(51％收率)的白色固體。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ1.55(s,9H)2.80-3.5(m,3H),3.8-4.9(m,5H),5.7(bs,1H),7.3(m,2H),7.3-7.9ppm(m,8H),LC/MS(ES-)m/e 451.3(M-H)步驟1向5g的樹脂2(0.375mmol/g,1.82mmol)中，加入25ml20％的哌啶的DMF溶液。將此懸浮液在室溫下轉(zhuǎn)動5分鐘并排干。此方法重復(fù)20分鐘。然后用DMF(2×50mL),CH3OH(50mL),CH2Cl2(2×50mL),CH3OH(50mL)和NMP(50mL)依次洗滌樹脂。向樹脂在25mL NMP的懸浮液中依次加入3.5g的N-Fmoc-Boc哌嗪甲酸(4eq,7.48mmol),1.0mL的DIEA(8eq,14.96mmol),1.01g的HOBt(4eq,7.48mmol)和2.83g的HBTU(4eq,7.48mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)方法重復(fù)3小時。然后用DMF(2×50mL),CH3OH(50mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×50mL),CH3OH(1×50mL)和CH2Cl2(3×50mL)依次洗滌此樹脂，并簡單真空干燥得到樹脂10。
步驟2向5g(0.335mmol/g載樣量，1.675mmol)的樹脂10中加入25mL 20％哌啶的DMF溶液。將此懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此過程。用DMF(2×50mL),CH3OH(50mL),CH2Cl2(2×50mL),CH3OH(50mL)和NMP(2×50mL)依次洗滌此樹脂。向樹脂在25mL NMP的懸浮液中依次加入2.08g的N-Fmoc-纈氨酸或N-Fmoc-丙氨酸(4eq,6.7mmol),1.17mL的DIEA(4eq,6.7mmol),0.905g的HOBt(4eq,6.7mmol)和1.38g的HBTU(4eq,3.66mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)方法重復(fù)3小時。然后用DMF(2×50mL),CH3OH(50mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×50mL),CH3OH(50mL)和CH2Cl2(3×50mL)依次洗滌此樹脂，并真空干燥，分別得到樹脂11或12(0.35mmol/g,5g)。
步驟3向1.5g(0.165mmol)的樹脂11或12中加入2mL的20％哌啶的DMF溶液。將此懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此方法。將所得樹脂用DMF(3×15ml)、甲醇(15ml)和NMP(3×15ml)依次洗滌。然后加入所需的羧酸(4eq,0.66mmol)，接著加入存在于NMP中的0.25g(0.66mmol)的HOBt,0.12mL的DIEA(4eq,0.66mmol)和0.89g(0.66mmol)HBTU。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(2×15mL),CH3OH(15mL),1∶1 DMF/CH2Cl2(2×15mL),CH3OH(15mL)和CH2Cl2(3×15mL)依次洗滌，并真空干燥，得到13或14。
步驟4將2mL的TFA在水中的95％溶液加入此樹脂中。將此混合物室溫下攪拌1小時，并過濾。將此濾液蒸發(fā)，并在乙腈-水中回收此殘余物并用制備HPLC純化，得到化合物15和16。

合成類似物17和18的方法(見方案Ⅳ)步驟5用2mL 25％的TFA/二氯甲烷將樹脂13或14處理30分鐘，并用DMF(2×5mL),10％DIEA/二氯甲烷(2×5mL),DMF/二氯甲烷(2×5mL)，甲醇(5mL)和二氯甲烷(3×5mL)洗滌，并干燥5分鐘。將所得樹脂用NMP(3×1mL)洗滌，然后用醋酸酐或或甲乙酸(methoxacetic acid)或2-丙磺酰氯或異丙基異氰酸酯或甲磺酰氯或氯甲酸甲酯按照用于制備類似物9的方法(方案Ⅲ)處理。按照化合物15和16步驟4所述獲得化合物17和18。
化合物17a和17b通過在步驟4前還原氨化反應(yīng)用Na(OAc)3BH和HCHO(38％在水中，0.2mL)及CH3COOH(0.02mL)制備，而化合物18c在步驟4前用光氣處理，并接著用氨氣處理制備。
制備類似物20的方法按照化合物5描述的方法(方案Ⅰ)制備化合物20a-20t，不同的是在步驟3中用適當(dāng)?shù)腇moc-氨基酸代替Fmoc-纈氨酸(方案Ⅴ)。
方案Ⅴ
制備3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-3-甲基磺?；?丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(20i)將0.132mmol樹脂3在4mL 20％哌啶的DMF中的混懸液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘，并將此混合物排干。將此步驟重復(fù)20分鐘。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)依次洗滌。向此樹脂在4mL NMP的懸浮液中依次加入189mg的N-Fmoc-甲基半胱氨酸(4eq,0.528mmol),0.185mL的DIEA(8eq,1.056mmol),71mg的HOBt(4eq,0.528mmol)和200mg的HBTU(4eq,0.528mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)步驟重復(fù)3小時。然后將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)和1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
將100mg此樹脂在2mL of 20％的哌啶DMF溶液中的懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘，并排于。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此步驟。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)洗滌。向此樹脂在2mL的NMP中的懸浮液中，連續(xù)加入38mg的4-氨基-3-氯苯甲酸(4eq,0.2mmol),0.140mL的DIEA(8eq,0.4mmol),27mg的HOBt(4eq,0.2mmol)和76mg的HBTU(4eq,0.4mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。然后將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)和1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。然后將此樹脂用2mL的95％TFA水溶液處理1小時。將此混懸液過濾，并將此濾液真空濃縮并通過制備HPLC純化得到標(biāo)題化合物(20i)。
制備3-({1-[2-(3,5-二氯-4-羥基苯甲?；被?-4-甲磺?；?丁?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(20p)按照制備20i的方法用N-Fmoc-甲硫氨酸作為第一組份偶聯(lián)樹脂3而3,5二氯-4-羥基苯甲酸作為第二組份制備化合物20p。
制備3-[(1-{2-[(異喹啉-1-羰基}-氨基]-3-甲磺?；?丙?；鶀-吡咯烷-2-羰基}-氨基]4-氧代-丁酸(20r)用B.M.Trost和D.P.Curran,Tetrahedron Lett..22,pp.1287-190(1981)的方法，將N-Fmoc甲基半胱氨酸氧化為相應(yīng)的砜。向0.714g(2mmol)的N-Fmoc甲基半胱氨酸在24mL的1∶1甲醇和水的、在0℃下攪拌的溶液中，加入3.68g(3eq,6mmol)的OxoneTM。將此混合物室溫下攪拌48小時，用水稀釋，用6N鹽酸酸化至pH2并用三批100mL的乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)萃取物干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到0.700g(89％收率)的砜1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ 2.97(s,3H),3.49-3.59(m,2H),4.25(m,1H),4.30-4.38(m,2H),4.46(m,1H),7.33(t,2H),7.42(t,2H,),7.70-8.00(m,4H)；C19H19NO6S準(zhǔn)確的質(zhì)量理論值m/e 389.09，實(shí)測值m/e 390.2。
將0.250mmol的樹脂3在10mL的20％哌啶DMF溶液中的懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并將此混合物排干。將此方法重復(fù)20分鐘。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)依次洗滌。向此樹脂在6mL的NMP懸浮液中依次加入200mg的N-Fmoc-甲基半胱氨酸砜(4eq,0.50mmol),0.175mL的DIEA(8eq,1.00mmol),70mg的HOBt(4eq,0.50mmol)和188mg的HBTU(4eq,0.50mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)方法重復(fù)3小時。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，1∶1DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
將150mg的此樹脂在4mL的20％哌啶的DMF溶液中的懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。將此步驟重復(fù)20分鐘。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)依次洗滌。向此樹脂在3mL的NMP的懸浮液中，依次加入52mg的1-異喹啉甲酸(4eq,0.3mmol),0.104mL的DIEA(8eq,0.6mmol),37mg的HOBt(4eq,0.3mmol)和104mg的HBTU(4eq,0.3mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)和1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。然后，將此樹脂用2mL的95％TFA水溶液處理1小時。將此懸浮液過濾，真空濃縮濾液并通過制備HPLC純化，得到標(biāo)題化合物(20r)。
制備3-({1-[2-(3,5-二氯-4-羥基苯甲酰基氨基)-3-甲磺?；?丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(20s)按照制備20i的方法，用3,5-二氯-4-羥基苯甲酸代替1-異喹啉甲酸，制備化合物20s。 制備類似物23的方法按照化合物7所述方法(方案Ⅱ)制備化合物23a-23i，不同的是在步驟2中用適當(dāng)?shù)腇moc-氨基酸代替Fmoc脯氨酸(方案Ⅵ)。
方案Ⅵ 制備3-({2-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4-甲基-3,4-二氫-2H-吡唑-3-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(23g)按照化合物7描述的方法制備化合物23g，不同的是在步驟2中用4-甲基-4,5-二氫-吡唑-1,5-二甲酸1-(9H-芴-9-基甲基)酯代替Fmoc-脯氨酸(方案Ⅱ)。
制備4-甲基-4,5-二氫-吡唑-1,5-二甲酸1-(9H-芴-9-基甲基)酯向650mg(2mmol)的(10,10-二甲基-3,3-二氧代-λ6-硫雜-4-氮雜-三環(huán)[5.2.1.00,0]癸-4-基)-(4-甲基-3,4-二氫-2H-吡唑-3-基)-甲酮(J.Am.Chem.Soc.,119,pp.8379-8380(1997))在6mL水和14mLTHF的、在0℃攪拌的溶液中，加入420mg(10mmol,5eq)的氫氧化鋰。將此混合物在0℃下攪拌2小時并在室溫下攪拌30分鐘，用20mL水稀釋，并用乙醚(20mL)洗滌，然后將溶液的pH調(diào)節(jié)至9并加入519mg(2mmol,1eq)的Fmoc-Cl在3mL二噁烷中的溶液。將此混合物室溫下攪拌過夜，用乙醚洗滌，酸化至pH2-3并用3批40-mL乙酸乙酯洗滌。將此合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到690mg(98％收率)的無色泡沫，經(jīng)鑒定為標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6,500MHz)δ1.2(d,3H),3.2(m,1H),4.2-4.6(m,3H),7.1(s,1H),7.2-7.5(m,5H),7.7-8.0(m,4H)。C20H18N2O4準(zhǔn)確的質(zhì)量理論值m/e 350.13，實(shí)測值m/e 351.3。
制備3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-4-甲氧基-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(23i)按照化合物7所述方法制備化合物23i，不同的是在步驟2中用N-Fmoc-4-甲氧基脯氨酸代替Fmoc-脯氨酸(方案Ⅱ)。
制備N-Fmoc-4-甲氧基脯氨酸向在0℃下攪拌的、735mg(3mmol)的N-Boc-4-羥基脯氨酸甲基酯的20mL THF溶液中加入79mg(1.1eq,3.3mmol)的60％存在于礦物油中的氫化鈉。將此混合物在0℃攪拌1小時，并加入碘代甲烷(0.56mL,3eq,9mmol)。將此混合物室溫下攪拌過夜，通過加入飽和氯化銨溶液停止反應(yīng)，用水稀釋并用三批80mL的乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到淡黃色油狀物。將此油狀物在9mL的甲醇和3mL水中回收，并加入378mg(3eq,9mmol)的氫氧化鋰。將此混合物室溫下攪拌過夜，用水稀釋，酸化至pH3并用3批80mL的乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，干燥(MgSO4)并真空濃縮。將此殘余的油狀物在10mL的TFA中回收并將此溶液在室溫下攪拌2小時并真空濃縮。將此殘余的油狀物用6mL的10％碳酸鈉水溶液和3mL二噁烷稀釋，并加入氯甲酸9-芴基甲酯(779mg,1eq,3mmol)的5mL二噁烷溶液。將此混合物室溫下攪拌過夜，用水稀釋，酸化至pH3并用3批80mL的乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，干燥(MgSO4)并真空濃縮得到油狀物，將其用硅膠進(jìn)行柱色譜，用二氯甲烷/甲醇20∶1洗脫純化，得到600mg(55％)的N-Fmoc-4-甲氧基脯氨酸C21H21NO5準(zhǔn)確的質(zhì)量理論值m/e367.14，實(shí)測值m/e 368.4。
向0.125mmol的樹脂2中加入4mL的20％哌啶的DMF溶液。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。在20分鐘內(nèi)重復(fù)此方法。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)依次洗滌。向此樹脂的4mL NMP懸浮液中依次加入184mg的N-Fmoc-4-甲氧基脯氨酸(4eq,0.50mmol),0.175mL的DIEA(8eq,1.00mmol),70mg HOBt(4eq,0.50mmol)和188mg的HBTU(4eq,0.50mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。在3小時內(nèi)重復(fù)此偶聯(lián)步驟。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
向此樹脂中加入4mL的20％哌啶的DMF溶液。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。將此步驟在20分鐘內(nèi)重復(fù)。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)依次洗滌。向此樹脂的4mL NMP懸浮液中依次加入156mg的N-Fmoc-丙氨酸(4eq,0.50mmol),0.175mL的DIEA(8eq,1.00mmol),70mg的HOBt(4eq,0.50mmol)和188mg的HBTU(4eq,0.50mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此偶聯(lián)步驟重復(fù)3小時。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
向此樹脂中加入4mL的20％哌啶的DMF溶液。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。將此步驟在20分鐘內(nèi)重復(fù)。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和NMP(兩次)依次洗滌。向此樹脂的4mL NMP懸浮液中依次加入80mg的4-氨基-3-氯苯甲酸(4eq,0.50mmol),0.175mL的DTEA(8eq,1.00mmol),70mg的HOBt(4eq,0.50mmol)和188mg的HBTU(4eq,0.50mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
將此樹脂用4mL 95％TFA的水溶液處理1小時。將此混合物過濾。真空濃縮此濾液得到油狀物，將其通過HPLC純化得到標(biāo)題化合物(23i)。
制備類似物24a-e的方法按照化合物5所述方法(方案Ⅰ)制備化合物24a-24e，不同的是用Fmoc-氮雜環(huán)丁烷甲酸或反式-2-苯基-Fmoc-氮雜環(huán)丁烷甲酸代替步驟2中的Fmoc-脯氨酸。 制備類似物25的方法按照化合物5和7所述方法(方案Ⅰ和方案Ⅱ)制備化合物25a-25e，不同的是在步驟2中用Fmoc-2(S)-哌啶酸代替Fmoc-脯氨酸并在步驟3中偶聯(lián)Fmoc-纈氨酸或Fmoc-丙氨酸或Fmoc-叔亮氨酸。

制備26a-h的方法按照化合物23所述方法(方案Ⅵ)制備化合物26a-26h，不同的是在步驟3中用Fmoc-纈氨酸代替Fmoc-丙氨酸。 制備類似物27的方法按照化合物7所述方法(方案Ⅱ)制備化合物27a-27n，不同的是在步驟2中用Fmoc-4,4-二氟脯氨酸代替Fmoc-脯氨酸。
制備N-Boc-4,4-二氟脯氨酸甲酯在-78℃攪拌下，向9.63mL(7.2mmol)的草酰氯在10.6mL二氯甲烷的溶液中加入0.94mL(13.2mmol)的存在于15ml二氯甲烷中的二甲基亞砜溶液。將此溶液在-78℃下攪拌30分鐘。然后滴加1.47g(6mmol)的N-Boc-4-羥基脯氨酸甲酯的19mL二氯甲烷溶液。將此混合物在-78℃攪拌1.5小時，并加入3.34mL(24mmol)的三乙胺。讓此溶液升溫至室溫并攪拌過夜。然后，用100mL的二氯甲烷稀釋，用100mL水，100mL的1N HCl和100mL鹽水依次洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮。將此殘余物通過柱色譜在硅膠上(用乙酸乙酯/己烷，1∶3洗脫)純化，得到1.294g(89％收率)的N-Boc-4-氧代-脯氨酸甲酯。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.45(m,9H),2.60(m,1H),2.95(m,1H),3.75(m,3H),3.90(m,2H),4.80(m,25 1H)。
向808mg(3.33mmol)N-Boc-4-氧代脯氨酸甲酯的13mL二氯甲烷溶液中，在0℃攪拌下加入0.88mL(7.19mmol,2.2eq)的DAST。將此混合物在℃下攪拌2小時，室溫下攪拌16小時，并倒入冰水中。將此混合物室溫下攪拌2小時。分離有機(jī)相，用水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。將此殘余物通過柱色譜在硅膠上(用乙酸乙酯-己烷，1∶8)純化，得到754mg(79％收率)的二氟代衍生物，為淡黃色油狀物。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.50(M,9H),2.45(m,1H),2.70(m,1H),3.75(m,3H),3.80(m,2H),4.50(m,1H)。
制備N-Fmoc-4,4-二氟脯氨酸向754mg(2.85mmol)的N-Boc-4,4-二氟脯氨酸甲酯的5mL的THF溶液中，在0℃攪拌下加入179mg(4.27mmol)的氫氧化鋰5mL水溶液。將此溶液在0℃下攪拌3小時，室溫下攪拌1小時，用水稀釋，用乙醚萃取，酸化至pH2-3并用2批30mL乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，干燥(MgSO4)并真空濃縮得到652mg(91％)的酸，為淡黃色固體。
將652mg(2mmol)的N-Boc-4,4二氟脯氨酸的10mL的1∶1 TFA/二氯甲烷溶液，在0℃下攪拌45分鐘并真空濃縮。將此殘余物在3mL的二噁烷中回收并加入5ml 10％碳酸鈉水溶液，然后加入675mg(1eq)的Fmoc-Cl的5mL二噁烷溶液。將此混合物室溫下攪拌16小時，用20mL水稀釋，并用2批20mL乙醚萃取，酸化至pH2并用3批30mL乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)萃取物用50mL鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮。將此殘余物通過柱色譜在硅膠上(用二氯甲烷/甲醇10∶1洗脫)純化，得到850mg(88％)的N-Fmoc-4,4-二氟脯氨酸，為褐色固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ2.55(m,1H),2.95(m,1H),3.80(m,2H),4.20(m,1H),4.30(m,2H),4.55(m,1H),7.32(m,2H),7.45(m,2H),7.70(m,2H),7.90(m,2H)。C20H17F2NO4的準(zhǔn)確理論質(zhì)量m/e373.11，實(shí)測值m/e 374.4。
按照化合物5和7所述方法(方案Ⅰ和方案Ⅱ)制備化合物28a-28c，不同的是用Fmoc-二甲基硫代脯氨酸代替步驟2中的Fmoc-脯氨酸。 制備實(shí)施方案A式Ⅰ化合物的一般方法(方案Ⅶ-Ⅷ)實(shí)施方案A式Ⅰ的化合物，其中R4=H而一個R5=H類似物29的制備方法按照化合物5所述方法(方案Ⅰ)制備化合物29a-29s，不同的是用Fmoc-丙氨酸代替步驟2中的Fmoc-脯氨酸并在步驟3中用Fmoc-纈氨酸或Fmoc-丙氨酸或Fmoc-叔亮氨酸。 類似物32的制備方法按照化合物5所述方法(方案Ⅰ)制備化合物32a-32e，不同的是用2-(3-叔丁氧羰基氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-4-甲基-戊酸(30)(Neosystem商品目錄號BB02101)代替步驟2中的Fmoc-脯氨酸，接著進(jìn)行步驟4(方案Ⅶ)。
R2和R3與它們連接的原子一起形成5元環(huán)的實(shí)施方案A式Ⅰ的化合物方案Ⅶ 其中X=N-CH3的實(shí)施方案A式Ⅰ的化合物方案Ⅷ 制備3-({1-[N-(異喹啉-1-羰基)-N-甲基-肼基羰基}-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(34)將0.250mmol樹脂3(方案Ⅷ)在10mL 20％哌啶的DMF溶液中的懸浮液室溫下旋轉(zhuǎn)5分鐘并排干。將此方法重復(fù)20分鐘。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌并簡單干燥。向此樹脂中加入5mL的干燥二氯甲烷，0.128mL的DIEA(3eq,0.75mmol)和0.400mL的20％光氣的甲苯溶液(3eq,0.75mmol)。將此混懸液在室溫下旋轉(zhuǎn)1.5小時。將此混合物排干并將此樹脂用二氯甲烷洗滌幾次。向樹脂在5mL二氯甲烷的懸浮液中加入0.133mL甲基肼(10eq,2.5mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)1∶1DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
向存在于3mL NMP中的0.075mmol樹脂中依次加入52mg的1-異喹啉甲酸(4eq,0.3mmol),0.19mL的DIEA(8eq,0.6mmol),37mg的HOBt(4eq,0.3mmol)和104mg的HBTU(4eq,0.3mmol)。將此混合物室溫下旋轉(zhuǎn)過夜并排干。將此樹脂用DMF(兩次)，甲醇(一次)，1∶1 DMF/二氯甲烷(兩次)，甲醇(一次)和二氯甲烷(三次)依次洗滌，并真空干燥。
將此樹脂用4mL 95％TFA的水溶液處理1小時。將此混合物過濾。濾液真空濃縮得到油狀物，將其通過HPLC純化得到標(biāo)題化合物(34)。
R3=R3=H的實(shí)施方案A式Ⅰ的化合物 3-({1-[(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-乙?；鵠吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(G1)按照化合物7所述制備，不同的是在步驟3中用Fmoc-甘氨酸代替Fmoc-丙氨酸(方案Ⅱ)得到4.3mg的標(biāo)題化合物。LC-MS(ES+)m/e=425.2(M+H) 3-({1-[(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-乙酰基]-4,4-二氟-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(G2)按照化合物7和27所述制備，不同的只是用Fmoc-甘氨酸代替步驟3中的Fmoc-丙氨酸(方案Ⅱ)得到10.0mg的標(biāo)題化合物。LC-MS(ES+)m/e=461.2(M+H)制備Y=C的實(shí)施方案C式Ⅰ和實(shí)施方案D式Ⅰ化合物的一般方法(方案Ⅸ-ⅩⅩⅡ)方案Ⅸ 所選環(huán)系統(tǒng)的來源結(jié)構(gòu)參考文獻(xiàn)
方案Ⅹ 5-叔丁基-3-[2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁?；鵠-2,3-二氫[1,3,4]噻二唑-2-甲酸乙酯(37)向攪拌的、聚乙烯基吡啶(2.63g,25mmol)在5-叔丁基-2,3-二氫[1,3,4]噻二唑-2-甲酸乙酯(36)(J.Med.Chem.,34,p.439(1991))(2.16g,10mmol)的干燥甲苯溶液中的懸浮液中，滴加(1-氯羰基-2-甲基-丙基)-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(4.76g,12.1mmol)的20mL無水甲苯，進(jìn)行處理。攪拌16小時后，將此懸浮液過濾并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。分離有機(jī)層，用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到黃色油狀物。通過快速色譜用9/1己烷/乙酸乙酯洗脫純化，得到2.66g(49％收率)的標(biāo)題化合物(37)，為清澈粘稠油狀物。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ0.89(d,1.5H),0.93(d,1.5H),1.00(d,1.5H),1.06(d,1.5H),1.22(t,3H),1.28(s,9H),2.12-2.22(m,0.5H),2.32-2.42(m,0.5H),4.18-4.28(m,2H),4.31-4.45(m,2H),4.96-5.01(m,0.5H),5.02-5.10(m,0.5H),5.52(d,0.5H),5.61(d,0.5H),6.10(s,0.5H),6.13(s,0.5H),7.27-7.34(m,2H),7.35-7.42(m,2H),7.56-7.64(m,2H),7.73-7.78(m,2H)。
3-(2-乙?；被?3-甲基丁?；?-5-叔丁基-2,3-二氫-[1,2,4]噻二唑-2-甲酸乙酯(38)向化合物(37)(方案Ⅸ)(0.508g,0.94mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入二乙胺(1mL)。將此溶液室溫下攪拌2小時，真空除去溶劑并將所得油狀物與二氯甲烷(4x)共沸。將粗品油狀物溶解于二氯甲烷(5mL)和三乙胺(0.26mL,1.86mmol)并加入乙酰氯(80μl,1.1mmol)。將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?小時。蒸發(fā)溶劑，并將粗品物質(zhì)溶解于乙酸乙酯中并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，并用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，得到黃色油狀物。通過快速柱色譜在硅膠上用己烷/EtOAc(95/5至90/10％)純化，得到此產(chǎn)物，為黃色油狀物(0.301g,89％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.88(dd,3H),0.99(dd,3H),1.16-1.45(m,12H),2.02(s,3H),2.09-2.19(m,0.5H)。2.30-2.40(m,0.5H),4.12-4.29(m,2H),5.20-5.27(m,0.5H),5.30-5.36(m,0.5H),6.60(s,0.5H),6.90(s,0.5H),6.20-6.31(m,1H)。分析HPLC(C18柱)，(非對映異構(gòu)體的混合物)7.77,7.98分鐘。LC-MS(ES+)m/e=358.3(M+H)。
3-(2-乙酰基氨基-3-甲基丁?；?-5-叔丁基-2,3二氫-[1,2,4]噻二唑-2-甲酸(39)向化合物38(0.301g,0.84mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入1N氫氧化鈉溶液(1.7mL,1.7mmol)。將此反應(yīng)液在氮?dú)夥障率覝財嚢?小時，蒸發(fā)溶劑。并將殘余物溶解于乙酸乙酯中并用0.5N硫酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，并用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為黃色油狀物(0.277g，定量)。
制備2-(芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(40)通過改良的Bioorg.Med.Chem.Lett.Vol.2,No.6,pp.613-618,(1992)所述的方法由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯制備化合物40。
向DMSO(27.52g,352mmol)的二氯甲烷(240mL)溶液中，在-78℃加入草酰氯(24.4g,192mmol)。15分鐘后，緩慢加入3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯(41.44g,160mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液，并將此混合物在-78℃再攪拌1.5小時。加入DIEA(62.0g,480mmol)并讓此混合物升溫至室溫，保持15分鐘。將所得溶液用二氯甲烷(300mL)稀釋，用0.5N硫酸氫鈉(500mL×2)，水(300mL×2)和鹽水(400mL×2)洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮至體積為200mL。向此溶液中加入芐醇(48g,444mmol)，隨后加入3埃分子篩(30g)和對甲苯磺酸(0.8g)。將此反應(yīng)混和物攪拌4天并加入TFA(96mL)。將所得懸浮液攪拌1小時，然后真空蒸發(fā)。加入乙酸乙酯(500mL)并將此混合物通過硅藻土板過濾。濾液用飽和碳酸氫鈉(500mL×2)，水(400mL×2)和鹽水(300mL×2)洗滌。有機(jī)溶液用無水硫酸鈉干燥，過濾和真空蒸發(fā)得到90g的淡黃色油狀物，將其與己烷(400mL×2)攪拌，由較低層殘余物中得到31g的粗品，用乙酸乙酯/己烷(4/96至22/78)進(jìn)行色譜，得到6.97g的反-2-(芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(較高Rf)，4.53g的順式非對映異構(gòu)體和12.97g的非對映異構(gòu)體混合物(總收率53％)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)反式非對映異構(gòu)體δ2.41-2.45(m,H),3.02-3.07(m,H),4.28(br,H),4.50-4.80(m,3H),4.80-5.15(m,2H),5.24-5.32(m,2H),5.48(s,H),5.88-6.00(m,H),7.31-7.56(m,5H)；順式非對映異構(gòu)體δ2.49-2.53(m,H),2.83-2.89(m,H),4.57-4.65(m,4H),4.87-4.90(m,H),5.12-5.30(m,3H),5.52-5.53(d,H),5.88-6.00(m,H),7.31-7.39(m,5H)；分析HPLC保留時間反式非對映異構(gòu)體10.49min和順式非對映異構(gòu)體10.37min；LC-MS:m/z 292(M+H+)。
3-(2-乙?；被?3-甲基丁酰基)-5-叔丁基-2,3二氫-[1,2,4]噻二唑-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(41)向(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(40)(0.385g,1.32mmol)的DMF(2ml)和二氯甲烷(2ml)溶液中，加入DMBA(0.456g,2.92mmol)和Pd(PPh3)4(0.136g,0.12mmol)并將此溶液室溫下攪拌15分鐘。加入(39)的二氯甲烷(4.5ml)和DMF(0.5ml)溶液，隨后加入HOBt(0.168g,1.24mmol)和EDC(0.256g,1.33mmo1)。在氮?dú)夥障聦⒋朔磻?yīng)室溫下攪拌18小時。蒸發(fā)溶劑。將此粗品溶解于EtOAc并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，并用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到黃色固體。通過快速柱色譜純化得到標(biāo)題化合物(41)，為非對映異構(gòu)體的混合物(374mg,88％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.75-1.05(m,6H),1.19-1.34(m,9H),1.93-2.08(m,3H),2.19-2.50(m,2H),2.80-3.03(m,1H),4.56-4.93(m,3H),5.02-5.20(m,1H)5.46-5.56(m,1H),5.95-6.16(m,2H),6.86-6.95(m,1H),7.20-7.43(m,5H)。分析HPLC(C18柱)，(非對映異構(gòu)體的混合物)8.58分鐘。LC-MS(ES+)m/e=519.2(M+H)。
制備3-{[3-(2-乙?；被?3-甲基-丁酰基)5-叔丁基-2,3-二氫-[1,3,4]噻二唑-2-羰基]-氨基}-4-氧代-丁酸(42)按照方法A(見方案ⅩⅩⅢ)將45mg(0.087mmol)41的樣品水解得到17mg(45％收率)的標(biāo)題化合物。分析HPLC(C18柱)5.15分鐘。LC-MS(ES+)m/e=429.3(M+H)5-叔丁基-3-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基丁?；鵠-2,3-二氫-[1,3,4]噻二唑-2-甲酸乙酯(43)按照化合物38報告的方法用茴香酰氯制備得到216mg(50％)的標(biāo)題化合物，為無定型固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.92(d,1.5H),0.98(d,1.5H),1.03(d,1.5H),1.07(d,1.5H),1.21(t,3H),1.28(s,(H),2.21-2.28(m,0.5H),2.41-2.48(m,0.5H),3.83(s,-4H),4.15-4.28(m,2H),5.41-5.46(m,0.5H),5.48-5.53(m,0.5H),6.08(s,0.5H),6.13(s,0.5H),6.75(d,0.5H),6.85(d,0.5H),6.91(d,2H),7.59(d,2H)。
5-叔丁基-3-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基丁酰基]-2,3-二氫-[1,3,4]噻二唑-2-甲酸(44)按照化合物39描述的方法制得180mg(定量)的標(biāo)題化合物，為白色固體。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.92(d,1.5H),0.96(d,1.5H),1.03(d,1.5H),1.07(d,1.5H),2.22-2.30(m,0.5H),2.37-2.45(m,0.5H),3.83(s,1.5H)3.84(s,1.5H)5.41-5.48(m,1H),6.14(s,0.5H),6.15(s,0.5H),6.87-6.95(m,2H),7.75-7.83(m,3H)。
5-叔丁基-3-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基-丁酰基]-2,3-二氫-[1,3,4]噻二唑-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(45a和45b)按照化合物41所述的方法制備得到粗品標(biāo)題化合物，為4個非對映異構(gòu)體。將此粗品通過快速色譜純化，用二氯甲烷至二氯甲烷/乙酸乙酯(6/4)的梯度洗脫，得到31mg的較高Rf組份，為單一非對映異構(gòu)體(45a)。分析HPLC(Microsorb C18柱)19.87分鐘。1H NMR(500MHz,CDCl3)(單一非對映異構(gòu)體)δ1.04(d,3H),1.14(d,3H),1.28(s,9H),2.77(d,0.5H),2.81(d,0.5H),2.90(d,0.5H),2.95(d,0.5H),3.84(s,3H),4.44-4.49(m,1H),4.53(d,1H),4.85(d,1H),5.02-5.08(m,1H),6.37(s,1H),6.41(d,1H),6.93(d,2H),7.26-7.40(M,5H),7.75(d,2H),7.92-7.96(m,1H)。
較低Rf餾份含185mg的固體，為3∶1∶2的非對映異構(gòu)體的混合物(45b)。分析HPLC:Microsorb C18柱，19.00,19.26,20.02mins,1H NMR(500MHz,CDCl3)(3種非對映異構(gòu)體的3∶1∶2混合物)δ0.89(d,2.25H),0.98(d,0.75H),1.02(d,0.5H),1.03(d,1.5H),1.08(d,0.25H),1.10(d,0.75H),1.16(s,0.75H),1.17(s,2.25H),1.23(s,0.375H),1.24(s,1.125H),1.28(s,1.125H),1.29(s,3.375H),2.12-2.18(m,0.33H),2.32-2.42(m,0.67H),2.43-2.51(m,0.5H),2.61-2.67(m,0.5H),2.84-2.92(m,0.5H),2.96-3.07(m,0.5H),3.8S(s,3H),4.58-4.71(m,2H),4.81(d,0.16H)4.86(d,0.32H)4.91(d,0.52H),5.09-5.13(m,0.33H)5.14-5.18(m,0.67H),5.35(dd,1H),5.46(s,0.16H)5.53(d,0.32H)5.58-5.62(d,0.52H),6.17(s,0.52H),6.20(s,0.16H),6.34(s,0.32H),6.50(d,0.32H),6.62(d,0.16H),6.67(d,0.52H),6.86(d,0.33H),6.91(d,0.67H),6.94(d,1.0H),7.24-7.43(m,5H),7.61(d,1H),7.70(d,0.33H),7.71(d,0.67H),7.76(d,1H)。
制備3-({5-叔丁基-3-[2-(4-甲氧基苯甲酰基氨基)-3-甲基-丁?；鵠-2,3-二氫[1,3,4]噻二唑-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(46a)
按照方法B(見方案ⅩⅩⅢ)將30mg 45a樣品水解得到8mg(30％收率)的所需產(chǎn)物。分析HPLC(Microsorb C-18柱，乙腈/水，用TFA緩沖液)12.85min,1H NMR(500MHz,CD3OD)δ0.98-1.1(m,6H),1.28(s,9H),2.20-2.31(m,1H),2.40-2.48(m,1H),2.6-2.72(m,1H),3.84(s,3H),4.18-4.26(m,1H),4.56-4.62(m,1H),5.25-5.32(m,1H),6.24-6.28(m,1H),6.98(d,2H),7.85(d,2H)。
制備3-({5-叔丁基-3-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基-丁?；鵠-2,3-二氫[1,3,4]噻二唑-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(46b)按照方法B(見方案ⅩⅩⅢ)將30mg的45b樣品(3種非對映異構(gòu)體的混合物)水解，得到22mg(84％收率)的所需產(chǎn)物，為3∶2的非對映異構(gòu)體混合物。分析HPLC(Microsorb氰基柱)7.08,7.78分鐘。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ0.98-1.06(m,4H),1.09-1.12(m,2H),1.29& 1.31(2singlets,9H),2.23-2.30(m,0.5H),2.36-2.55(m,1.5H).,2.62-2.72(m,1H),3.85(s,3H),4.18-4.27(m,1H),4.58-4.65(m,1H),5.27-5.33(m,1H)6.23-6.27(m,1H),7.00(d,2 H),7.70-7.88(m,2H).
方案Ⅺ 1-(2-芐氧基羰基氨基-2-甲基-丙?；?吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(49)向脯氨酸-叔丁基酯(47)(2.00g,12mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中，加入N-芐氧羰基-2-甲基丙氨酸(3.05g,13mmol),HOBt(2.36g,17mmol)和EDC(3.43g,18mmol)并將此溶液室溫下在氮?dú)夥障聰嚢?8小時。蒸發(fā)溶劑，將此粗品溶解于乙酸乙酯中并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到白色固體(4.68g,100％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.20-2.15(m,4H),1.43(s,9H),1.59(d,6H),3.21-3.79(m,2H),4.35(br s,1H),4.82-5.19(m,3H),5.74(br s,1H),7.17-7.49(m,5H)。分析HPLC(C18柱)10.66分鐘。LC-MS(ES+)m/e=391.3(M+H)。
1-[2-(4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-2-甲基-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(50)向化合物49(1.00g,2.56mmol)的甲醇(20ml)溶液中，加入10％Pd/C(200mg)并將此混合物在氫氣氛中攪拌2小時。將此混合物過濾通過0.45μm PTFE過濾器過濾并真空除去溶劑得到無色油狀物。將此油狀物溶解于二氯甲烷(25mL)和DIEA(660μl,3.79mmol)中并加入對茴香酰氯(480mg,2.8mmol)。將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?8小時。真空除去溶劑并將此油狀物溶解于乙酸乙酯中。將此有機(jī)相用0.5N硫酸氫鈉(2x)，水，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到白色固體，將其通過快速柱色譜純化，用二氯甲烷/MeOH(99/1至98/2％)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(655mg,65％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.47(s,9H),1.68-2.24(m,5H),1.80(d,6H),3.55-3.68(m,1H),3.72-3.93(m,1H),3.84(s,3H),4.43-4.55(m,1H),6.90(d,2H),7.60(br s,1H),7.77(d,2H)。分析HPLC(C18柱)8.98分鐘。
1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-2-甲基-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(51)向化合物50(325mg,0.83mmol)的二噁烷(5mL)溶液中，加入三乙胺(463μl,3.32mmol)和TMS三氟甲磺酸鹽(642μl,3.32mmol)并將此溶液在100℃下攪拌5小時，然后在室溫下攪拌18小時。用水稀釋此反應(yīng)，用飽和碳酸氫鈉調(diào)節(jié)至pH8，并用乙醚萃取，用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到白色固體(230mg,83％收率)，將其直接用于下步反應(yīng)。
向(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(40)(1.027g,3.5mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中，加入DMBA(543mg,3.48mmol)和Pd(PPh3)4(280mg,0.24mmol)并將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?0分鐘。加入1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-2-甲基-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(818mg,2.45mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，接著加入HOBt(0.534g,3.95mmol)和EDC(738mg,3.84mmol)。將此反應(yīng)在氮?dú)夥障率覝叵聰嚢?8小時。蒸發(fā)溶劑，將此粗品溶解于乙酸乙酯或者，并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到黃色固體。通過快速柱色譜純化，用乙酸乙酯/己烷(20/80至50/50％)洗脫，得到淡黃色固體產(chǎn)物(760mg,61％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ1.53(d,6H),1.65-1.93(m,3H),1.96-2.14(m,1H),2.60(dd,0.1H),2.77(dd,0.85H),2.94(dd,0.85H),3.04-3.11(m,0.2H),3.42-3.52(m,1H),3.57-3.67(m,1H),3.84(s,3H),4.38-4.76(m,3H)4.84(d,1H),5.64-5.70(m,1H),6.96-7.03 2H)7.23-7.43(m,5H),7.78-7.97(m,2H)。分析HPLC(C18柱)13.32,14.37分鐘。LC-MS(ES+)m/e=524.3(M+H)。
制備3-({1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-2-甲基-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(52)按照方法C(見方案ⅩⅩⅢ)將61mg(0.14mmol)化合物51的樣品水解，得到30mg(60％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC(C18柱)6.79分鐘。LC-MS(ES+)m/e=434.3(M+H)。 1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基丁?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(54)向H-val-pro-otBu·HCl(53)(2.011g,7.44mmol)的二氯甲烷(20ml)懸浮液中，加入DIEA(3.2ml,18.4mmol)，隨后加入4-甲氧基-苯甲酰基氯(1.26g,7.4mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液。將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?小時，然后濃縮。將所得油狀物溶解于乙酸乙酯中并用0.5N硫酸氫鉀(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，然后真空濃縮得到標(biāo)題化合物，為白色固體(2.814g,94％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.05(dd,6H),1.46(s,9H),1.88-2.29(m,5H),3.65-3.74(m,1H),3.81-3.92(m,1H),3.85(s,3H),4.32-4.42(m,1H),4.81-4.91(m,1H),6.79-6.86(m,1H),6.91(d,2 H),7.78(d,2H)。分析HPLC(氰基柱)10.18分鐘。
1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基丁?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)酰胺(56)將1.079g(2.67mmol)化合物54樣品溶解于15％TFA的二氯甲烷(40mL)溶液中并室溫攪拌4小時。溶劑真空濃縮得到化合物55，為白色固體(0.93g,100％)，將其用于下步反應(yīng)。
向化合物40(1.796g,6.17mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中，加入DMBA(1.119g,7.17mmol)和Pd(PPh3)4(0.683g,0.59mmol)并將此溶液室溫下攪拌20分鐘。加入化合物55(0.928g,2.67mmol)的二氯甲烷(17ml)和DMF(2ml)溶液，隨后加入HOBt(0.811g,6.01mmol)和EDC(1.16g,6.04mmol)。將此反應(yīng)室溫下在氮?dú)夥障聰嚢?8小時。蒸發(fā)溶劑，將此粗品溶解于EtOAc中并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到黃色固體。通過快速色譜用乙酸乙酯/二氯甲烷(10/90至40/60％)洗脫純化得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(910mg,63％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.96(dd,6H),1.84-2.19(m,4H),2.25-2.38(m,1H),2.45(dd,1H),2.80-2.98(m,1H),3.60-3.72(m,1H),3.82-3.95(m,1H),3.86(s,3H),4.26-4.9S(m,6H),5.41(s,0.2H),5.53(d,0.8H),6.67-6.77(m,1H),6.88-6.99(d,2H)7.22-7.57(m,5H),7.71-7.82(d,2H)。
分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)9.21分鐘。LC-MS(ES+) m/e=538.3(M+H)。
3-({1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3-甲基-丁?；鵠吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(57)按照方法A(見方案ⅩⅩⅢ)，將125mg(0.23mmol)化合物56的樣品水解得到60mg(58％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 5.71分鐘。LC-MS(ES+)m/e=448.2(M+H)。
制備4-氨基-3-氯-苯甲酸將4-氨基-3-氯芐腈(4.82g,31.58mmol)在6N HCl(140ml)中的懸浮液加熱至回流。將沉淀加熱溶解得到無色溶液。再進(jìn)一步加熱該溶液出現(xiàn)絮狀沉淀。9小時后，將此反應(yīng)冷卻至室溫。將所得沉淀過濾，然后溶解于THF中并蒸發(fā)溶劑。將此殘余物再從甲苯中濃縮得到白色固體(3.18g,59％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD∶CDCl31∶4)δ6.80(d,1H),7.75(dd,1H),7.94(d,1H)。分析HPLC(氰基柱)8.73分鐘。
吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(58)向化合物53(1.707g,6.31mmol)的二氯甲烷(25ml)懸浮液中，在0℃下加入DIEA(3.2ml,18.4mmol)，隨后加入4-氨基-3-氯苯甲酸(1.298g,7.56mmol),HOBt(1.005g,7.44mmol)和EDC(1.456g,7.58mmol)的溶液。將所得混合物在0℃下攪拌15分鐘，然后讓其升溫至室溫并攪拌18小時。蒸發(fā)溶劑并將所得油狀物溶解于乙酸乙酯中，用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，得到白色固體(2.68g)。經(jīng)快速色譜用MeOH/二氯甲烷(1/99至2/98％)純化得到2.04g(76％收率)的化合物58，為白色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.05(dd,6H)1.47(s,9H),1.86-2.29(m,5H),3.62-3.78(m,1H)3.78-3.94(m,1H),4.39(dd,1H),4.79-4.89(dd,1H),6.73(d,1H),6.78(d,1H),7.52(dd,1H),7.75(d,1H)。分析HPLC(氰基柱)16.18分鐘。LC-MS(ES+) M/e=424.3(M+H)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-3-甲基丁酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(60)將0.632g(1.49mmol)的化合物59樣品溶解于50％TFA的二氯甲烷(20mL)溶液中并將此溶液室溫下攪拌2小時。通過從二氯甲烷(3x)中反復(fù)濃縮除去殘留的TFA，得到產(chǎn)物，為白色固體。
通過化合物56使用的方法讓385mg(1.04mmol)樣品與化合物40反應(yīng)。標(biāo)題化合物(60)分離為黃色固體(265mg,45％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ0.89-1.12(m,6H),1.72-2.26(m,5H),2.49(dd,0.25H),2.60(dd,0.7H),2.80(dd,0.75H),2.96-3.09(m,0.3H),3.64-3.77(m,1H),3.94-4.10(m,1H),4.20-4.74(m,4H),4.76-4.95(m,1H),5.51(s,0.5H),5.61-5.70(m,1.5H),6.79(dd,1H),7.23-7.43(m,5H),7.48-7.61(m,1.4H),7.68-7.81(m,1H),7.99-8.12(m,0.6H)。
分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)14.90,15.20分鐘。LC-MS(ES+)m/e=557.2(M+H)。
3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-3-甲基丁?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(61)按照方法A(見方案ⅩⅩⅢ)將45mg(0.08mmol)的化合物60樣品水解得到30mg(80％收率)的標(biāo)題化合物1H NMR(500MHz,CD3OD)δ1.06(dd,6H),1.78-2.38(m,5H),2.38-2.86(m,2H),3.62-3.83(m,1H),4.12-4.76(m,4H),7.04-7.21(m,1H),7.58-8.01(m,2H)；分析HPLC 8.16分鐘。LC-MS(ES+) m/e=467.3(M+H)。
方案ⅩⅢ 1-[2-(4-羥基-3,5-二甲基-苯甲酰基氨基)-3-甲基丁?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(63)向化合物62(由化合物53和Fmoc-Cl制備)(600mg,1.22mmol)的無色DMF(10ml)溶液中，加入二乙胺(3ml)。將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?小時并蒸發(fā)溶劑。將所得油狀物溶解于二氯甲烷(8ml)中，并加入3,5-二甲基-4-羥基苯甲酸(0.302g,1.82mmol),HOBt(338mg,2.5mmol)和EDC(0.456g,2.43mmol)，并將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?8小時。溶劑真空濃縮并將所得油狀物溶解于乙酸乙酯中，用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，得到粗品，為白色固體(0.80g)?？焖偕V使用MeOH/二氯甲烷(1/99至2/98％)洗脫，得到380mg(75％收率)的白色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.06(dd,6H),1.47(s,9H),1.90-2.32(m,5H)2.24(s,6H),3.65-3.75(m,1H),3.84-3.92(m,1H),4.36-4.42(m,1H),4.82-4.88(m,1H),5.53-5.61(m,1H),6.77-6.85(m,1H),7.42(s,2H)。分析HPLC(氰基柱)17.53分鐘。LC-MS(ES+) m/e=419.3(M+H)。
1-[2-(4-羥基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-3-甲基丁酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(64)
按照制備化合物56的方法由化合物63和化合物40制得標(biāo)題化合物(64)，為淡黃色固體(352mg,72％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ0.83-1.28(m,6H),1.66-2.37(m,3H),2.23(s,6H),2.48-2.54(m,0.2H),2.61(ddd,0.8H),2.72(ddd,0.9H),3.01-3.09(m,1H),3.66-3.76(m,1H),3.9 5-4.07(m,1H),4.48-4.73(m,3H),4.75-4.92(m,1H),5.45-15.48(m,0.1H),5.61-5.64(m,0.1H),5.64-5.70(m,0.8H),7.21-7.62(m,6H),7.88-8.04(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)，(2種非對映異構(gòu)體的混合物)17.73分鐘。LC-MS(ES+)m/e=552.3(M+H).
3-({1-[2-(4-羥基-3,5-二甲基-苯甲酰基氨基)-3-甲基-丁?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代丁酸(65)按照方法A(見方案ⅩⅩⅢ)將160mg(0.29mmol)的化合物64樣品水解13.1mg(10％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC(氰基柱)10.28分鐘。LC-MS(ES+) m/e=462.2(M+H).
方案ⅩⅣ 1-[2-(2-9H-芴-9-基-乙?；被?-3,3-二甲基丁?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(66)
向H-pro-OtBu(53)(1.033g,6.0mmol,Ⅱ，方案5)的二氯甲烷(20ml)和DMF(5ml)溶液中，加入Fmoc-tLeu-OH(2.337g,6.60mmol,Ⅰ,Scheme,5),HOBt(1.63g 12.1mmol)和EDC(2.30g,12.0mmol)并將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?8小時。真空除去溶劑，并將此殘余物溶解于乙酸乙酯中，并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到淡黃色固體(3.65g)。進(jìn)行快速色譜用EtOAc/己烷(10/90至20/80％)洗脫，得到標(biāo)題化合物(66)(2.25g,74％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.09(s,9H),1.47(s,9H),1.79-2.28(m,3H),3.62-3.72(m,1H),3.76-3.83(m,1H),4.18-4.43(m,4H),5.48-5.67(m,1H),7.28-7.44(m,4H),7.55-7.64(m,2H),7.72-7.82(m,2H)。分析HPLC(氰基柱)11.95分鐘。LC-MS(ES+) m/e=507.3(M+H)。
1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3,3-二甲基-丁?；鵠吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(67)向化合物66(0.503g,0.99mmol)的DMF(8ml)溶液中，加入二乙胺(2.5ml)并將此溶液室溫下攪拌1小時并蒸發(fā)溶劑。將所得殘余物從二氯甲烷(3x)中反復(fù)濃縮。將所得油狀物溶解于二氯甲烷(9ml)并加入DIEA(260μl,1.49mmol)和4-甲氧基-苯甲酰基氯(190mg,1.05mmol)。將此溶液在氮?dú)夥障聰嚢?8小時，并將溶劑真空濃縮。將此殘余物溶解于EtOAc中并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到白色固體(0.529g)。進(jìn)行快速色譜在硅膠上用MeOH/二氯甲烷(1/99至2/98％)洗脫，得到標(biāo)題化合物(2.25g,74％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ1.01(s,1.4H),1.11(s,7.6H),1.73-2.25(m,4H),2.47-2.77(m,1H),2.81(dd,0.7H),2.91-3.11(m,0.3H),3.61-4.03(m,3H),3.84(s,3H),4.2.9-4.4.9(m,1H),4.49-5.00(m,5H),5.46(s,0.15H),5.58-5.73(m,0.85H),6.94-7.04(m,2H),7.27-7.41(m,4H),7.61-7.73(m,1H),7.74-7.84(m,2H)。分析HPLC(氰基柱)13.10分鐘。
1-[2-(4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-3,3-二甲基-丁?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(68)向化合物67(0.909,1.74mmol)的二氯甲烷(25ml)溶液中，加入2,6-二甲基吡啶(2.1ml,18.0mmol)和TMS三氟甲磺酸鹽(2.3ml,11.9mmol)，并將此反應(yīng)在氮?dú)夥障率覝財嚢?.5小時。將所得混合物用二氯甲烷稀釋，用10％碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)。將此殘余物溶解于二氯甲烷，然后用DIEA(0.6ml,3.5mmol)和4-甲氧基苯甲酰氯(0.355g,2.09mmol)處理，并讓其在氮?dú)夥障率覝財嚢?8小時。將此粗品通過快速色譜純化，用二氯甲烷/MeOH(99/1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(274mg,28％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.01(s,1.4H),1.11(s,7.6H),1.7-2.25(m,4H),2.47-2.77(m,1H),2.81(dd,0.7H),2.91-3.11(m,0.3H),3.61-4.03(m,3H),3.84(s,3H),4.29-4.49(m,1H),4.49-5.00(m,5H),5.46(s,0.15H),5.58-5.73(m,0.85H),6.-94-7.04(m,2H),7.27-7.41(m,4H),7.61-7.73(m,1H),7.74-7.84(m,2H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)17.03,17.39分鐘。LC-MS(ES+) m/e=552.3(M+H)。
3-({1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-3,3-二甲基-丁?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(69)按照方法C(見方案ⅩⅩⅢ)將117mg(0.21mmol)的化合物68樣品水解得到40mg(41％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC7.16分鐘。LC-MS(ES+) m/e=462.3(M+H)。
方案ⅩⅤ 1-(2-叔丁氧羰基氨基-3,3-二甲基-丁酰基)吡咯烷-2-甲酸芐基酯(70)向H-pro-OBzl·HCl(2.00g,8.66mmol)的二氯甲烷(20ml)懸浮液中，加入DIEA(2.25ml,12.92mmol)得到無色溶液。加入Boc-tLeu-OH(1.95g,9.52mmol),HOBt(1.76g,13.03mmol)和EDC(2.49g,12.95mmol)，并將此溶液在氮?dú)夥障率覝財嚢?8小時。真空除去溶劑，溶解于乙酸乙酯中，并用水，0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物(3.57g,99％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.99(s,9H),1.40(s,9H),1.88-2.33(m,4H),3.58-3.90(m,2H),4.21-4.35(d,1H),4.53-4.66(m,1H),5.04-5.38(m,3H),7.14-7.42(m,5H)LC-MS(ES+)m/e=419.4(M+H)。
{1-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基丙基}-氨基甲酸叔丁基酯(71)將871mg(2.08mmol)的化合物70的樣品溶解于甲醇(15mL)中并加入10％Pd/c(200mg)。將此懸浮液在氫氣氛下攪拌1小時，通過硅藻土板過濾并蒸發(fā)溶劑。按照用于制備化合物56的方法將所得殘余物與化合物40反應(yīng)得到889mg(71％收率)的標(biāo)題化合物(71)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.93(s,9H)1.44(s,9H),1.78-2.18(m,4H),2.29-2.49(m,2H),2.76-3.04(m,1H),3.50-3.70(m,1H),3.70-3.85(m,1H),4.20-4.37(m,1H),4.49-4.78(m,3H),4.78-4.98(m,1H),5.12-5.26(m,1H),5.40-5.59(m,1H),7.10-7.78(m,5H)。分析HPLC(氰基柱)11.17分鐘。LC-MS(ES+)m/e=518.3(M+H)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-3,3-二甲基丁酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(72)將456mg(0.088mmol)的化合物71的二氯甲烷(20mL)溶液用無水TFA(5mL)處理，然后在氮?dú)夥障率覝財嚢?小時并蒸發(fā)至干。將此殘余物從二氯甲烷(3x)中反復(fù)濃縮，然后真空干燥。將所得殘余物溶解于二氯甲烷(20ml)中，冷卻至0℃，然后用DIEA(1.3ml,8eq,2.46mmol)處理，隨后用4-氨基-3-氯-苯甲酸(202mg,1.17mmol),HOBt(183mg,1.35mmol)和EDC(279mg,1.45mmol)處理。將所得混合物升溫至室溫并攪拌18小時。真空除去溶劑并將此殘余物溶解于EtOAc中，然后用蒸餾水(3x),0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到殘余物，將其通過快速色譜純化，用二氯甲烷/MeOH(99/1至97/3％)洗脫，得到285mg(57％收率)的標(biāo)題化合物(72)，為黃色固體。
1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ0.91-1.24(m,9H),1.70-2.27(m,4H),2.47-2.85(m,1.5H),2.99-3.13(m,0.5H),3.39-3.53(m,0.5H),3.60-3.78(m,1.5H),3.85-4.04(m,1H),4.24-4.47(m,2H),4.53-4.97(m,4H),5.46(s,0.3H),3.88-4.02(m,0.1H),5.60-5.69(m,0.6H),6.80(d,1H),7.22-7.77(m,7H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.90,16.23分鐘。LC-MS(ES+)m/e=571.2(M+H)。
3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-3,3-二甲基丁?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(73)按照方法A(方案ⅩⅩⅢ)將40mg(0.07mmol)的化合物72樣品水解得到25mg(74％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC(氰基柱)10.66分鐘。LC-MS(ES+) m/e=481.3(M+H)。
方案ⅩⅥ {2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}氨基甲酸叔丁基酯(75)向化合物40(6.69g,23.0mmol)的無水二氯甲烷溶液中，加入1,3-二甲基巴比土酸(DMBA)(3.97g,25.4mmol)和Pd(PPh3)4(1.12g,0.97mmol)。將此溶液室溫下在氮?dú)夥障聰嚢?5分鐘，冷卻至0℃，隨后加入Boc-ala-pro-OH(BaChem)(5.087g,17.8mmol),HOBt(3.60g,26.7mmol)和EDC(5.12g,26.7mmol)。讓所得溶液溫?zé)嶂潦覝夭⒃诘獨(dú)夥障聰嚢?8小時。將溶劑真空濃縮并將此殘余物溶解于EtOAc中，然后用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到桔黃色油狀物(12.23g)。在硅膠上進(jìn)行快速柱色譜，用二氯甲烷/EtOAc(80/20至60/40)洗脫，得到標(biāo)題化合物75，為黃色固體(7.28g,86％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.19-1.31(m,3H),1.42(s,9H),1.69-2.29(m,4H),2.45-2.67(m,0.9H),2.71-2.86(m,0.5H),2.99-3.10(m,0.6H),3.49-3.84(m,2H),4.24-4.45(m,2.5H),4.57-4.73(m,1.5H),4.76-4.92(m,1H),5.45(s,0.45H),5.63-5-68(m,0.55H),7.25-7.40(m,5H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.99,16.33分鐘。LC-MS(ES+) m/e=476.3(M+H)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺](76)將1.899g(3.99mmol)75樣品的二氯甲烷(20ml)溶液用無水TFA(5ml)處理，然后在氮?dú)夥障率覝財嚢?小時，并蒸發(fā)至干。將此殘余物從二氯甲烷(3x)中反復(fù)濃縮，然后真空干燥。將所得殘余物溶解于二氯甲烷(20ml)，冷卻至0℃，然后用DIEA(5.6ml,8eq,32.1mmol),4-氨基-3-氯-苯甲酸(0.910g,5.3mmol),HOBt(0.824g,6.1mmol)和EDC(1.197g,6.23mmol)處理。將所得混合物升溫至室溫并攪拌18小時。真空除去溶劑并將此殘余物溶解于乙酸乙酯中，然后用蒸餾水(3x),0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到殘余物，將其通過快速色譜純化，用二氯甲烷/MeOH(99/1至97/3％)洗脫。得到標(biāo)題化合物，為白色固體(1.221g,58％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.15(d,0.25H),1.29-1.60(m,2.75H),2.41-2.54(m,0.5H),2.55-2.70(m,0.5H),2.77(dd,0.5H)3.03(ddd,0.5H),3.59-3.75(m,1H),3.75-3.98(m,1H)4.26-5.01(m,5H),5.41-5.57(m,1H).5.60-5.76(m,0.5H),6.70-6.92(m,0.5H),7.15-7.48(m,5H),7.48-7.68(m,1H),7.68-7.88(m,1H),8.15-8.34(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)14.44,14.89分鐘。LC-MS(ES+)m/e=529.3(M+H) [1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺](77)由化合物75和3,5-二甲基-4-甲氧基苯甲酸按照制備化合物76的方法合成，得到標(biāo)題化合物(1.18g,44％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.40(m,3H),1.67-2.41(m,4H),2.28(s,6H),2.48(ddd,0.5H),2.62(dd,0.5H),2.78(ddd,0.5H),3.04(ddd,0.5H),3.62-3.94(m,3H),3.71(s,3H),4.21-4.51(m,2H),4.59-4.85(m,4H),5.46(s,0.25H),5.52(s,0.25H),5.63(d,0.4H),5.67(d,0.1H),7.17-7.45(m,5H),7.45-7.65(m,2H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.06,15.39分鐘。LC-MS(ES+)m/e=538(M+H)制備4-乙酰基氨基-3-氯苯甲酸向4-氨基-3-氯-苯甲酸(10.0g,58.3mmol)的無水THF(100mL)溶液中，加入乙酰氯(20.7ml,291.1mmol)，并將此溶液室溫下攪拌48小時。蒸發(fā)溶劑并從己烷中沉淀產(chǎn)物，然后過濾并干燥得到白色固體(11.73g,94％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ2.28(s,3H),7.92(dd,1H),7.99-8.16(m,2H)。分析HPLC(氰基柱)7.84分鐘。 1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(78)按照制備化合物76的方法，由化合物75和4-乙?；被?3-氯-苯甲酸制得標(biāo)題化合物(146mg,19％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.28-1.52(m,3H),1.68-2.38(m,4H),2.20(s,3H),2.41-2.88(m,1.5H),2.96-3.10(m,0.5H),2.96-3.10(m,0.5H),3.43-3.75(m,1H),3.80-3.96(m,1H),4.25-5.00(m,％H),5.42-5.54(m,0.5H),5.63-5.78(m,0.5H),7.13-7.48(m,0 5H),7.79-8.14(m,2.5H),8.56-8.70(m,0.5H)。分析HPLC(cvano柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)8.64分鐘。LC-MS(ES+) m/e=571.2(M+H)。 1-[2-(3-異丙氧基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(79)按照制備化合物76的方法，由化合物75和3-異丙氧基苯甲酸制得標(biāo)題化合物(120mg,58％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.27(d,6H),1.33-1.52(m,3H),1.69-2.31(m,4H),2.49(dd,0.3H),2.63(dd,0.7H),2.78(dd,0.7H),3.03(dd,0.3H),3.43-3.73(m,1H),3.78-3-94(m,1H),4.27-4.47(m,2H),4.47-4.87(m,4H),5.47(s,0.7H),5.53(d,0.3H),5.64(d,0.BH),5.72(d,0.2H),6.98-7.12(m,1H),7.19-7.47(m,9H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)14.54,14.85分鐘。
LC-MS(ES+) m/e=538(M+H)。 喹喔啉-2-甲酸{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-酰胺(80)按照制備化合物76的方法，由化合物75和2-喹喔啉甲酸制得標(biāo)題化合物(122mg,60％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.12-1.67(m,3H),1.68-2.34(m,4H),2.35-2.70(m,0.85H),2.70-2.95(m,0.75H),3.06(dd,0.4H),3.41-3.49(m,2H),4.18-5.03(m,6H),5.47(d,0.5H),5.55,(d,2H),5.67(dd,1H),5.71(dd,0.3H),7.03-7.53(m,5H),7.80-8.06(m,2H),8.06-8.34(m,2H),9.43-9.48(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)9.06分鐘。LC-MS(ES+) m/e=532.3(M+H)。 1-[2-(3-芐氧基-4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(81)按照制備化合物76的方法，由化合物75和3-芐氧基-4-甲氧基苯甲酸制得標(biāo)題化合物(142mg,58％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.14(d,0.3H),1.27-1.52(m,2.7H),1.66-2.30(m,4H),2.47(dd,0.4H),2.59(dd,0.6H),2.77(dd,0.6H),3.02(dd,0.4H),3.41-3.72(m,1H),3.72-3.99(m,2H),3.86(s,3H),4.19-4.86(m,SH),4.99-5.15(m,2H),5.45(m,0.8H),5.65(m,1.2H),6.98(dd,1H),7.11-7.63(m,12H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)12.28,12.44分鐘。LC-MS(ES+) m/e=616.3(M+H)4-烯丙氧-3,5-二甲基-苯甲酸將4-羥基-3,5-二甲基-苯甲酸(3.32g,20mmol)，烯丙基溴(7.26g,60mmol)，芐基三乙基氯化銨(455mg,2mmol)和碳酸鉀(6.9g,50mmol)在DMF(50mL)中的混合物，室溫下攪拌16小時。將此混合物用乙酸乙酯(200mL)稀釋，用水，鹽水洗滌。將此有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾并真空蒸發(fā)得到5.3g的酯，為油狀物。將此酯與氫氧化鈉(5g,125mmol)在水/甲醇(50mL/50mL)中回流6小時。將此混合物真空蒸發(fā)除去甲醇，并將所得溶液用水(200mL)稀釋，用乙酸乙酯/己烷(30mL/70mL)洗滌。將水層在0℃下用濃鹽酸酸化至pH2。過濾收集所得沉淀并用水洗滌，高真空干燥得到3.86g(收率94％)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)2.33(s,6H),4.35-4.37(m,2H),5.28-5.30(m,H),5.42-5.46(m,H),6.07-6.15(m,H),7.79(s,2H)；分析HPLC保留時間11.28min；LC-MS:m/z=205(M-H+)
1-[2-(4-烯丙氧-3,5-二氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(82)按照制備化合物76的方法，由化合物75和4-烯丙氧-3,5-二氯-苯甲酸制得標(biāo)題化合物(208mg,47％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.05-1.58(m,3H),1.68-3.21(m,7H),3.39-3.90(m,3H),4.05-5.01(m,6H),5.22-5.62(m,3H),6.04-6.25(m,1H),6.94-7.63(m,8H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)9.69,9.89分鐘。LC-MS(ES+) m/e=604.2(M+H)。 1-[2-(3,5-二氯-4-羥基-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(83)將化合物82的140mg樣品(0.23mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)中并用DMBA(35.4mg,0.26mmol)和Pd(PPh3)4(32mg,0.028mmol)處理。將此溶液在0℃下攪拌15分鐘，升溫至室溫，保持2小時，然后用二氯甲烷稀釋，并用水(2x)和鹽水洗滌。溶劑真空濃縮并將此殘余物經(jīng)快速色譜在硅膠上用MeOH/二氯甲烷(1/99至3/97)洗脫純化，得到標(biāo)題化合物(93.2mg,71％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.16(d,0.25H),1.28-1.49(m,2.75H),1.63-2.33(m,4H),2.48(dd,0.4H),3.39-3.59(m,0.2H),3.60-3.73(m,0.8H),3.73-3.96(m,1H),4.24-4.48(m,2H),4.57-4.92(m,7H),5.44(s,0.4H),5.50(d,0.4H),5.64(d,0.8H),5.75(d,0.5H),7.16-7.43(m,5H),7.78-7.89(m,1.6H),8.40-8.63(m,0.4H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)11.57,11.82分鐘。LC-MS(ES+)m/e=564.1(M+H) 1-(2-苯甲?；被?丙?；?-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(84)按照制備化合物76的方法，由化合物75和苯甲酰氯制得標(biāo)題化合物，無色油狀物(8mg,38％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.35-1.54(m,3H),1.72-2.30(m,4H),2.42-2.70(m,1.3H),2.74-2.84(m,0.5H),3.03(dd,0.2H),3.41-3.75(m,2H),3.81-3.96(m,1H),4.22-4.86(m,4H),5.46(s,0.3H),5.51-5.54(m,0.1H),5.66(d,0.5H),5.72(d,0.1H),7.20-7.57(m,7H),7.77-7.89(m,2H),8.42-8.67(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.23,15.67分鐘。
LC-MS(ES+) m/e=481.2(M+H) 異喹啉-1-甲酸{2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基}-1-甲基-2-氧代-乙基}-酰胺(85)按照制備化合物76的方法，由化合物75和1-異喹啉甲酸制備，得到標(biāo)題化合物(732mg,53％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.22-1.56(m,3H),1.70-2.34(m,4H),2.43-2.71(m,0.9H),2.73-2.89(m,0.5H),3.06(ddd,0.6H),3.42-3.81(m,2H),3.,84-4.01(m,1H),4.29-5.00(m,5H),5.47(d,0.65H),5.55(s,0.3H),5.67(d,0.8H),5.72(d,0.25H),7.21-7.43(m,5H),7.49-7.83(m,2.5H),7.88-8.04(m,1.8H),8.45-8.54(m,0.8H),8.97-9.06(m,0.6H)。分析HPLC(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.71,16.04分鐘。LC-MS(ES+) m/e=531.2(M+H) 1-[2-(4-氨基-5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(86)按照制備化合物76的方法，由化合物75和4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸制得標(biāo)題化合物(330mg,61％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.22(d,0.25H),1.29-1.50(m,0.75H),1.68-2.36(m,4H),2.38-2.89(m,1.5H),2-94-3.14(m,0.5H),3.37-3.98(m,6H),4.27-4.98(m,6H),5.44-5.50(m,0.4H),5.53-5.56(s,0.1H),5.60-5-75(m,0.5H),6.50(s,1H),7.17-7.45(m,4H),7.73-7.90(m,1H),8.49-8.70(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)16.39,16.82分鐘。LC-MS(ES+) m/e=559.2(M+H)。 1-[2-(4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(87)按照制備化合物76的方法，由化合物75和4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基苯甲酸制得標(biāo)題化合物(364mg,64％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.20-1.27(m,0.25),1.35-1.49(m,0.75H),1.72-2.30(m,4H),2.23(s,3H),2.42-2.58(m,0.6H),2.59-2.68(m,0.5H),2.73-2.86(m,0.7H),2.99-3.11(m,0.7H),3.41-4.07(m,5H),4.29-4.97(m,SH),4.79-5.56(m,0.5H),5.65-5.73(m,0.5H),7.18-7.44(m,4.3H),7.90-8.09(m,2H),8.71-8.85(m,0.7H)。
分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.61,16.01分鐘。LC-MS(ES+) m/e=601.1(M+H)。 吡啶-2-甲酸{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-酰胺(88)按照制備化合物76的方法，由化合物75和吡啶-2-甲酸制得標(biāo)題化合物(233mg,42％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.30-1.59(m,3H),1.68-2.36(m,4H),2.39-2.57(m,0.6H),2.57-2.69(m,0.35H),2.71-2.87(m,0.4H),3.05(dd,0.65H),3.39-3-93(m,3H),4.24-4.99(m,5H),5.49-5.55(m,0.8H),5.63-5.77(m,1.2H),7.17-7.46(m,5H),7.49-7.60(m,1H),7.89-7.99(m,1H),8.03-8.12(m,1H),8.58-8.67(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)8.63分鐘。LC-MS(ES+) m/e=481.3(M+H)。 [1-[2-(4-氨基-3,5-二氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺](89)按照制備化合物76的方法，由化合物75和3,5-二氯-4-氨基苯甲酸制得標(biāo)題化合物(162mg,70％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.21-1.58(m,3H),1.58-2.37(m,4H),2.37-3.13(m,2H),3.43-3.74(m,1.5H),3.77-3.94(m,1H),4.28-4.51(m,1.5H),4.50-5.01(m,3H),5.41-5.77(m,1H)7.15-7.49(m,5H),7.66-7.88(m,2H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)8.36分鐘。LC-MS(ES+) m/e=563.2(M+H)。 1-[2-(4-甲氧基-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(90)按照制備化合物76的方法，由化合物75和4-甲氧基-苯甲酰氯制得標(biāo)題化合物(404mg,50％)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.19(d,0.3H),1.29-1.58(m,2.7H),1.58-2.38(m,4H),2.43-2.69(m,1H),2.74-2.86(m,0.6H),2.99-3.11(m,0.4H),3.39-3.75(m,1.5H),3.77-3-94(m,1H),3.84(s,3H),4.29-4.94(m,4.5H),5.45-5.55(m,4.5H),5.63-5.71(m,0.5H),5.73(d,0.1H),6.85-7.09(m,2H),7.19-7.44(m,4H),7.73-7.92(m,2H),8.26-8.44(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)15.18,15.65分鐘。LC-MS(ES+) m/e=510.2(M+H)。 1-{2-[(9-氧代-9H-芴-4-羰基)-氨基]-丙?；鶀吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(91)按照制備化合物76的方法，由化合物75和9-氧代-9H-芴-甲酸制得標(biāo)題化合物(403mg,44％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.38-1.59(m,3H),1.75-2.37(m,4H),2.43-2.59(m,0.65H),2.59-2.72(m,0.35H),2.79-2.89(m,0.35H),3.01-3.11(m,0.65H),3.68-3.86(m,1H),3.92-4.09(m,1H),4.35-5.03(m,7H),5.42-5.90(m,1H),7.06-8.00(m,12H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)12.30分鐘。LC-MS(ES+) m/e=582.1(M+H) 1-[2-(3,5-二氯-4-甲氧基-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(92)按照制備化合物76的方法，由化合物75和3,5-二氯-4-甲氧基-苯甲酸制得標(biāo)題化合物(364mg,46％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.17(d,0.25H),1.28-1.53(m,2.75H),1.64-2.33(m,4H),2.39-2.94(m,1.5H),2.94-3.12(m,0.5H),3.41-3.74(m,2H),3.74-4.00(m,1H),3.91(s,3H),4.26-5.02(m,5H),5.42-5.81(m,1H),7.08(d,0.4H),7.21-7.43(m,4.6H),7.53-7.69(m,0.5H),7.85-7.97(m,1.2H)分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)10.79分鐘。LC-MS(ES+) m/e=578.2(M+H) 喹啉-6-甲酸{2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基}-1-甲基-2-氧代-乙基}-酰胺(93)按照制備化合物76的方法，由化合物75和6-喹啉甲酸制得標(biāo)題化合物(344mg,71％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.11-1.58(m,3H),1.69-2.40(m,4H),2.42-3.15(m,2H),3.80-4.01(m,1H),4.29-4.99(m,5H),5.44-5.54(m,0.5H),5.63-5.73(d,0.4H),5.73-5.79(d,0.1H),7.18-7.43(m,5H),7.56-7.67(m,1H),8.08(d,1H),8.13-8.25(m,1H),8.40-8.56(m,2H),8.88-8.99(m,1H)。分析HPLC(氰基柱)(2種非對映異構(gòu)體的混合物)10.27,10.50分鐘。LC-MS(ES+) m/e=531.2(M+H)。
方案ⅩⅦ 1-(2-芐氧基羰基氨基-丙酰基)-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(95)按照Pierre Chevallet,Patrick Garrouste,BarbaraMalawaska & Jean Martinez在Tetrahedron Letters,Vol.34,pp.7409-7412,(1993)中描述的方法制備。在55℃下Cbz-ala-pro-OH(10.0g,31.2mmol)，叔丁基溴(180g,1.31mol),芐基三乙基氯化銨(7.11g,31.2mmol)和碳酸鉀(180g,1.30mol)在N,N-二甲基乙酰胺(DMA)(225mL)中的混合物攪拌24小時。將此反應(yīng)混和物冷卻至室溫并用1升冰水稀釋，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾并真空蒸發(fā)得到14g的油狀物，將其通過快速色譜用己烷/乙酸乙酯(95/5至50/50)洗脫純化，得到11.73g(收率99.7％)的標(biāo)題化合物，為清澈的油狀物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.25-1.50(m,12H),1.85-2.25(m,4H),3.42-3.70(m,2H),4.25-4.57(m,2H),5.07-5.11(m,2H),5.69(d,H),7.28-7.38(m,5H)；分析HPLC保留時間11.07min；LC-MS:m/z=377(M+H+)。 96a,X=Cl,Y=NH2,Z=H96b,X=Cl,Y=AcNH,Z=H96c,X=Cl,Y=AcNH,Z=CH3O 97a,X=Cl,Y=NH2,Z=H97b,X=Cl,Y=AcNH,Z=H97c,X=Cl,Y=AcNH,Z=CH3O1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(96a)向化合物95(10.50g,27.9mmol)的甲醇(100ml)溶液中加入10％Pd/C(5.00g)在EtOAc(50ml)中的懸浮液。將此混合物在氫氣氛下攪拌48小時，通過硅藻土板過濾并蒸發(fā)溶劑得到蠟狀固體。將其溶解于二氯甲烷(100ml)和DMF(50ml)中并將此溶液冷卻至0℃。加入4-氨基-3-氯苯甲酸(5.82g,27.2mmol),DIEA(14.58ml,83.7mmol),HOBt(3.77g,27.9mmol)和EDC(6.68g,34.8mmol)并將此溶液在0℃下攪拌15分鐘，然后在室溫下攪拌24小時。用乙酸乙酯稀釋此反應(yīng)混和物，用硫酸氫鈉(2x),10％碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。將此粗品通過快速柱色譜純化，用二氯甲烷/MeOH(99/1至97/3％)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(7.75g,70％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.27-1.67(m,12H),1.82-2.14(m,4H),3.48-3.85 2H),4.26-4.53(m,3H),4.81-4.98(m,1H),6.71(d,1H),7.15(m,1H),7.50(dd,1H),7.75(d,1H)。分析HPLC 10.83分鐘。LC-MS(ES+) m/e=396.3(MH+)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(97a)用TFA/二氯甲烷處理由96a制備。反應(yīng)完畢后，真空除去溶劑并將此殘余物從甲苯中反復(fù)濃縮。將所得殘余物真空干燥至恒重。
1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(96b)按照用于化合物96a的方法由化合物95和4-乙酰基氨基-3-氯苯甲酸制得標(biāo)題化合物，為白色固體(9.18g,77？6收率)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.30-1.62(m,12H),1.85-2.16(m,3H),2.16-2.44(m,1H),2.27(s,3H),3.47-3.83(m,2H),4.34-4.54(m,1H),4.8.9(m,1H),7.27-7.39(m,1H),7.59-7.71(m,2H),7.83-7.97(m,1H),8.47(d,1H)。分析HPLC 9.43分鐘。
1-[2-(4-乙酰氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(97b)用TFA/二氯甲烷處理由96b制備。反應(yīng)完畢后，真空除去溶劑并將此殘余物從甲苯中反復(fù)濃縮。將所得殘余物真空干燥至恒重。
4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲酸4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲酸甲酯(2.09g,8.11mmol)溶解于甲醇(110ml)中，并加入氫氧化鋰溶液(25.48mmol在30ml 1∶1MeOH∶H2O中)，室溫下將此溶液攪拌6小時。溶劑真空濃縮，加入EtOAc并用0.5N鹽酸洗滌有機(jī)相，然后用飽和碳酸氫鈉(2x)萃取。將水相用12N鹽酸酸化至pH1并將所得沉淀萃取入二氯甲烷中。將合并的萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物，為白色固體(0.933g,50％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ2.31(s,3H),4.10(s,3H),7.78-7.92(br s,1H),8.17(s,1H),8.45(s,1H)。分析HPLC5.62分鐘。
1-[2-(4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(96c)向化合物95(1.534g,4.07mmol)的甲醇(40ml)溶液中，加入10％Pd/C(650mg)并將此混合物在氫氣氛下攪拌2小時。將此懸浮液通過硅藻土板過濾并蒸發(fā)得到黃色油狀物。讓其與4-乙酰基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸反應(yīng)，按照用于制備化合物96a的方法，得到標(biāo)題化合物(497mg,52％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.46(d,3H),1.49(s,9H),1.80-2.01(m,3H),2.19-2.40(m,1H),2.22(s,3H),3.58-3-72(m,1H),3.78-3.89(m,1H),3.98-4.09(s,3H),4.31-4.45(s,1H),4.78-4.95(m,1H),7.89-8.10(m,2H)。分析HPLC11.31分鐘。
1-[2-(4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(97c)用TFA/二氯甲烷處理由化合物96c制備。反應(yīng)完畢后，真空除去溶劑并將此殘余物從甲苯中反復(fù)濃縮。將所得殘余物真空干燥至恒重。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(5-氧代-2-苯乙氧基-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98a)向(5-氧代-2-苯乙氧基-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(194mg,0.54mmol)(如(40)所述用苯乙醇制備)的無水二氯甲烷(5mL)溶液中，在0℃下加入DMBA(196mg,1.26mmol)和Pd(PPh3)4(32mg,0.03mmol)。將此溶液攪拌15分鐘，并加入97a(由96a通過在二氯甲烷中用TFA處理制備)(166mg,0.49mmol)和DIEA(680μl,3.90mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，然后加入HOBt(98mg,0.73mmol)和EDC(122mg,0.63mmol)。將此溶液在0℃下攪拌15分鐘，然后在室溫下攪拌18小時。真空除去溶劑并將此殘余物溶解于乙酸乙酯中，然后用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，得到桔黃色固體，將此通過快速柱色譜純化，用二氯甲烷/MeOH(99/1至97/3％)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(190mg,73％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.29(d,0.6H),1.41(d,2.4H),1.78(m,1H),2.08(m,3H),2.56(m,1H),2.77(dd,1H),2.94(t,2H),3.53(m,0.3H),3.67(m,0.5H),3.85(m,2H),3.96-4.08(m,1H),4.40(m,2H),4.62(m,1H),4.67-4.79(m,1H),5.57(d,0.7H),5.60(d,0.3H),6.78(dd,1H),7.21(m,5H),7.58(m,1H),7.79(m,1H),8.26(d,1H)。分析HPLC 14.52分鐘。LC-MS(ES+)m/e=543.2(MH+)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98b)由(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(40)的順式非對映異構(gòu)體和97a，按照用于98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為淡黃色固體(720mg,51％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.16(d,0.5H),1.40(d,2.5H),1.64-2.25(m,4H),2.61(dd,1H),2.79(dd,1H),3.37-3.59(m,1H)3.59-3.74(m,1H),3.77-3.92(m,1H),4.29-4.47(m,1H),4.47-5.02 25(m,4H),5.48(s,0.5H),5.66(d,1H)5.68(d,0.5H),6.79(d,1H),7.17-7.52(m,5H),7.48-7.62(m,1H),7.68-7.83(m,1H)。分析HPLC15.98分鐘。LC-MS(ES+) m/e=529.2(MH+)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98c)用反式-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(40)和97a，按照用于98a的方法制備。標(biāo)題化合物以白色固體分離(186.6mg,46％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.30-1.52(m,3H),1.76-2.33(m,4H),2.41-2.59(m,1H),2.90(dd,0.15H),3.04(dd,0.85H),3.44-3.75(m,1.5H),3.82-3.95(m,1H),4.27-4.42(m,2H),4.42-4.56(m,0.5H),4.56-4.86(m,4H),5.42-5.55(m,1H),6.79(d,1H),7.21-7.42(m,4.6H),7.54-7.63(m,1.4H),7.76-7.83(m,0.65H),8.60-8.68(m,0.35H)。分析HPLC 15.19分鐘。LC-MS(ES+) m/e=529.3(MH+)
2-(乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯如(40)所述用乙醇制備。用己烷/乙酸乙酯(95/5至80/20)進(jìn)行色譜，得到0.94g的反式-2-(乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(較高Rf)，1.96g的順式非對映異構(gòu)體(較低Rf)和8.08g的非對映異構(gòu)體混合物(總收率60％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)，對于反式非對映異構(gòu)體δ1.13-1.31(m,3H),2.31-2.45(m,1H),2.92-3.08(m,1H),3.52-3.72(m,1H),3.78-3.92(m,1H),4.10-4.25(m,1H),4.45-4.70(m,2H),5.00(bs,1H),5.12-5.45(m,3H),5.80-5.95(m,1H)；對于順式非對映異構(gòu)體1.13-1.35(m,3H),2.38-2.50(m,1H),2.75-2.92(m,1H),3.60-3.73(m,1H),3.82-3.95(m,1H),4.40-4.70(m,3H),5.10-5.52(m,4H),5.80-5.94(m,1H)；LC-MS:m/z=230(M+H+)對于兩種非對映異構(gòu)體。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98d)由(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)氨基甲酸烯丙基酯和97a按照用于98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(175mg,77％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.13(t,0.5H),1.23(t,2.5H),1.36(d,0.5H),1.44(d,2.5H),1.75-2.38(m,4H),2.56(dd,1H),2.76(dd,1H),3.45-3.97(m,5H),4.47(dd,1H),4.59-4.67(m,1H),4.74(q,1H),5.55(d,0.2H),5.56(d,0.8H),6.75-6.82(m,1H),7.56(dd,1H),7.77(d,1H),8.3-9(d,1H)。分析HPLC 8.17分鐘。LC-MS(ES+) m,/e=467.4(MH+) (2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯按照化合物40描述的方法，用環(huán)戊醇制備得到標(biāo)題化合物，為非對映異構(gòu)體的混合物。用己烷/EtOAc(90/10至80/20)進(jìn)行快速柱色譜得到標(biāo)題化合物的順式非對映異構(gòu)體順式非對映異構(gòu)體1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.5-2.0(m,8H),2.45(dd,1H),2.81(dd,0.9H),3.0(dd,0.1H),4.31(m,1H),4.59(m,4H),5.23(m,1H),5.32(m,1H),5.45(s,0.1H),5.51(s,0.9H),5.92,(m,1H)ppm；反式非對映異構(gòu)體1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.50(m,2H),1.67(m,6H),2.36(d,1H),2.8(dd,0.08H),2.96(dd,0.92H),4.13(m,1H),4.25(m,1H),4.55(br,2H),5.20(d,1H),5.30(m,2H),5.43(s,0.92H),5.5(d,0.08H),5.89(s,1H)ppm1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98e)由(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和97a，按照用于98a的方法制得標(biāo)題化合物(280mg,51％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.38(d,0.5H),1.44(d,2.5H),1.49-2.35(m,12H),2.47(dd,0.7H),2.56(dd,0.3H),2.75(dd,0.3H),2.81-2.88(m,0.1H),2.97(dd,0.6H),3.47-3.76(m,0.2H),3.82-3.96(m,1H),4.10-4.40(m,2H),4.40-4.46(m,1H),5.44(d,0.5H),5.50(d,0.2H),5.65(d,0.3H),6.79(d,1H),7.54-7.64(m,1H),7.78(d,1H),8.21-8.31(m,1H)。
分析HPLC 15.02,15.34分鐘。LC-MS(ES+) m/e=507.3(MH+) (2-環(huán)己基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯按照化合物40所述，用環(huán)己醇制備，得到標(biāo)題化合物，為非對映異構(gòu)體的混合物(淡黃色油狀物)(4.62g,85％收率)。用己烷/EtOAc(90/10至80/20)進(jìn)行快速柱色譜，得到394mg(7％收率)的標(biāo)題化合物的順式非對映異構(gòu)體。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.11-2.09(m,10H),2.35-2.61(dd,1H),2.72-2.98(dd,1H),3.60-3.83(m,1H),4.32-4.72(m,3H),5.06-5.43(m,2H),5.60(d,1H),5.82-6.03(m,1H)。
1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)己基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98f)由順-(2-環(huán)己基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和97b按照用于98a的方法制備，得到標(biāo)題化合物(121mg,33％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.06-1.61(m,9H),1.61-2.37(m,7H),2.22(s,3H),2.52-2.81(m,2H),3.49-3.78(m,2H),3.84-3.97(m,1H),4.42-4.57(m,1H),4.57-4.69(m,1H),5.67-5.81(m,1H)7.72-7.89(m,1H),7.89-8.12(m,2H)分析HPLC 9.84分鐘。LC-MS(ES+) m/e=563.3(MH+)。

1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)己基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98g)由順-(2-環(huán)己基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和97a按照用于98a的方法制得標(biāo)題化合物(153mg,47％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.06-2.38(m,14H),1.42(d,3H),2.50-2.66(m,1H),2.69-2.82(dd,1H),3.06-3.75(m,2H),3.80-3.94(m,1H),4.40-4.52(m,1H),4.57-4.65(m,1H),4.70-4.80(m,1H),5.72(d,1H),6.71(m,1H),7.50-7.63(m,1H),7.78(d,0.6H),8.42(d,0.4H)。分析HPLC 10.30分鐘。LC-MS(ES+)m/e=521.2(MH+) 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98h)由(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)氨基甲酸烯丙基酯和97a按照用于98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(195mg,82％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.32-1.55(m,3H),1.58-1.77(m,3H),1.98-2.54(m,4H),2.68-2.76(d,0.3H),2.79-2.89(m,0.7H),2.96-3.10(m,0.7H),3.18-3.27(dd,0.3H),3.72-4.18(m,4H),4.46-5.12(m,3H),5.60(s,0.4H),5.74-5.84(m,0.6H)7.03(d,0.8H),7.75-7.86(m,1H),8.01(d,0.7H)8.35(d,0.3H),8.74(d,0.2H)。分析HPLC 8.31分鐘。LC-MS(ES+) m/e=467.3(MH+)。
癸-2-基氧基)-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯如化合物40所述用2-金剛醇(6.21g,5當(dāng)量)制得標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物(1.52g,61％收率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.38-2.22(m,14H),2.40(d,0.2H),2.53(dd,0.7H),2.87(dd,0.7H),2.87(dd,0.8H),3.00-3.12(m,0.3H),3.84-3.97(m,1H),4.40-4.71(m,3H),5.18-5-44(m,2H),5.53-5.69(m,1H),5.82-6.02(m,1H)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸[5-氧代-2-(三環(huán)[3.3.1.10.0]癸-2-基氧基)-四氫呋喃-3-基]酰胺(98i)由[5-氧代-2-(三環(huán)[3.3.1.10.0]癸-2-基氧基)-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯和97a按照用于98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(76mg,13％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.38-2.22(m,14H),w.40(d,0.2H),2.53(dd,0.7H),2.87(dd,0.8H),3.00-3.12(m,0.3H),3.84-3.97(m,1H),4.40-4.71(m,3H),5.18-5.44(m,2H),5.53-5.69(m,1H),5.82-6.02(m,1H)。分析HPLC11.89分鐘。LC-MS(ES+) m/e=573.2(MH+)。 1-[2-(4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98j)由順-{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代乙基)-氨基甲酸叔丁基酯和97c，按照用于98a的方法制得標(biāo)題化合物(222mg,82％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.23(d,0.6H),1.42(d,2.4H),1.72-2.27(m,4H),2.23(s,3H),2.63(dd,1H),2.77-2.88(m,1H),3.43-3.52(m,0.5H),3.56-3.71(m,1.5H),3.74-3.85(m,1H),3.98(s,3H),(m,1.5H),4.51-4.92(m,4.5H),5.63-5.76(m,1H),7.23-7.40(m,5H),7.97(s,1H),8.45(d,1H),8.69-8.80(m,1H)。分析HPLC 11.63分鐘，LC-MS(ES+) m/e=601.2(MH+)。 合成1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98k)由反-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和97a按照用于98a的方法制得175mg的標(biāo)題化合物(59％)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.10-1.28(m,3H),1.42(d,0.6H),1.46(d,2.4H),1.75-2.45(m,4H),2.45-2.70(m,1H),2.80-3.05(m,1H),3.50-3.95(m,4H),4.20-4.75(m,3H),4.75-4.90(m,1H),5.32(s,0.8H),5.38(s,0.2H),6.80(d,1H),7.55-7.84(m,2H)。分析HPLC:10.47分鐘。LC-MS(ES+):m/e=467.3(M+H+)。 合成1-[2-(4-氨基-3,5-二氯-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(981)
由(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和1-[2-(4-氨基-3,5-二氯-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-基甲酸叔丁基酯，按照用于98a的方法制備，得到158mg的標(biāo)題化合物(54％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.08-1.30(m,3H),1.32-1.52(m,3H),1.72-2.44(m,4H),2.40-3.05(m,2H),3.50-3.97(m,4H),4.25-4.70(m,3H),4.70-4.86(m,1H),5.33(s,0.4H),5.47(s,0.1H),5.56(d,0.4H),5.62(d,0.1H),7.50(s,1H),7.80(s,1H)。分析HPLC:10.84分鐘。LC-MS(ES+):m/e=501.2(M+H+). 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98m)按照制備98a的方法用Cbz-Ala-D-pro-OH制備，得到230mg的標(biāo)題化合物(69％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.30(d,1.2H),1.45(d,1.8H),1.62-2.40(m,4H),2.40-3.10(m,2H),3.30-3.97(m,2H),4.33-4.95(m,5H.),5.30(s,0.5H),5.68(d,0.5H),6.80(d,1H),7.25-7.95(m,7H)。分析HPLC:11.56,11-91分鐘。
LC-MS(ES+):m/e 529.2(M+H+) 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98n)
由97b和順-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯，按照用于制備98a的方法，制得210mg的標(biāo)題化合物(64％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.33(d,0.6H),1.44(d,2.4H),1.68-2.40(m,4H),2.26(s,3H),2.55-3.05(m,2H),3.40-3.90(m,2H),4.20-4.95(m,5H),5.68(d,0.8H),5.84(d,0.2H)7.15-8.30(m,8H)。分析HPLC:15.67分鐘。LC-MS(ES+):m/e=571.1(M+H+) (2-異丙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照化合物40描述的方法用異丙醇制備，得到3.80g(81％收率)的標(biāo)題化合物，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.10-1.35(m,6H),2.32-2.60(m,1H),2.82(dd,0.5B),3.02(dd,0.5H),3.82-4.11(m,1H),4.48-4.66(m,3H),5.20-5.36(m,2H),5.54(dd,1H),5.82-6.05(m,1H)。LC-MS(ES+):m/e=244.2(M+H+)1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-異丙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98o)由97a和(2-異丙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯，按照制備98a的方法制得200mg的標(biāo)題化合物(66％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.05-1.35(m,6H),1.35-1.50(m,3H),1.70-2.45(m,4H),2.45-3.05(m,2H),3.55-4.10(m,3H),4.15-4.88(m,4H),5.48(s,0.4H),5.58(s,0.1H),5.6 4(d,0.4H),5.70(d,0.1H),6.78(d,1H),7.58(d,1H),7.80(s,1H)。分析HPLC:12.19,12.40分鐘。LC-MS(ES+):m/e=581.2(M+H+)。 1-[2-(4-乙酰基氨基-3,5-二氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98p)由1-[2-(4-乙酰基氨基-3,5-二氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和順-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯，按照制備98a的方法，制得230mg標(biāo)題化合物(72％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.36(d,0.6H),1.47(d,2.4H),1.68-2.47(m,4H),2.23(s,3H)2.60-3.15(m,2H),3.40-3.90(m,2H),4.15-4.95(m,5H),5.68(d,0.8H),5.84(d,0.2H),7.20-7.98(m,7H)。分析HPLC:13.07分鐘。LC-MS(ES+):m/e=605.1(M+H+)。 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98g)由97b和(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得215mg的標(biāo)題化合物(69％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.35-1.90(m,11H),1.90-2.35(m,4H)2.24(s,3H),2.40-3.10(m,2H),3.50-3.95(m,3H)4.15-4.90(m,3H),5.44(s,0.55H),5.56(s,0.15H),5.64(d,0.22H),5.71(d,0.08H),7.70-8.25(m,3H)。分析HPLC:12.13分鐘。LC-MS(ES+):m/e=549.2(M+H+) 合成1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98r)由97b和順-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得68mg的標(biāo)題化合物(24％)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.13(t,0.6H),1.28(t,2.4H),1.38(d,0.6H),1.48(d,2.4H),1.75-2.40(m,4H),2.22(s,3H),2.55-2.88(m,2H),3.50-3.92(m,4H),4.40-4.90(m,3H),5.57(d,0.8H),5.61(d,0.2H),7.60-8.20(m,3H)。分析HPLC:8.64分鐘。LC-MS(ES+):m/e=509.2(M+H+) 制備(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，如化合物40所述，用環(huán)戊基甲醇(6.5mL,60mmol)制備，得到2.98g(52％總收率)的標(biāo)題化合物，為差向異構(gòu)體的混合物。純化得到0.97g(17％收率)的4(S),5(R)，為無色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.19(m,2H),1.54(m,4H),1.71(m,2H),2.16(m,1H),2.44(dd,J=17.2,10.4Hz,1H),2.82(dd,J=17.2,8.4Hz,1H),3.44(dd,J=9.3,7.2Hz,1H),3.71(dd,J=9.3,7.2Hz,1H),4.57(m,3H),5.32(m,3H),5.41(d,J=5.2Hz,1H),5.91(ddt,J=17.1,10.4,5Hz,1H)ppm。LC-MS.(ES+):m/e=284。
還分離了差向異構(gòu)體混合物(0.66g,11％收率)和4(S),5(S)差向異構(gòu)體(1.35g,24％收率)，為蠟狀固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.20(m,2H),1.54(m,4 H),1.69(m,2H),2.10(m,1H),2.37(d,J=8.1Hz,1H),2.97(dd,J=18.0,7.6HZ,1H),3.42(dd,J=7.3,1.7Hz,1H),3.49(m,2H),3.64(dd,J=9.0,7.3Hz,1H),4.19(br,1H),4.55(m,2H),5.25(m,2H),5.36(s,1H),5.87-(M,1H)ppm.LC-MS(ES+):m/e=284(M+H)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98s)由97a和順-(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得195mg的標(biāo)題化合物(51％收率)。1H-NMR 5(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.15-1.90(m,11H),1.90-2.40(m,5H),2.55-2.78(m,2H),3.50-3.90(m,4H),4.38-4.92(m,3H),5.53(d,0.5H),5.57(d,0.2H),6.78(d,1H),7.50-8.15(m,2H)。分析HPLC:10.48分鐘。LC-MS(ES+):m/e=521.2(M+H+)。 (5-氧代-2-(3-苯基-丙氧基)-四氫呋喃-3-基)氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，按照化合物40所述的方法，用3-苯基丙醇，制備得到1.15g(32％收率)的標(biāo)題化合物，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.82-2.05(m,2H),2.38(dd,1H),2.68(m,2H),2.82(dd,1H),3.55-3.65(m,1H),3.82-3.92(m,1H),4.48-4.72(m,3H),5.12-5.59(m,3H),5.82-6.03(m,1H),7.11-7.45(m,5H)。分析HPLC:9.08分鐘。LC-MS(ES+):m/e=320.2(M+H+).
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(5-氧代-2-(3-苯基丙氧基)-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98t)由97b和順-(5-氧代-2-(3-苯基-丙氧基)-四氫呋喃-3-基)氨基甲酸烯丙基酯，按照制備98a使用的方法制得200mg標(biāo)題化合物(57％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.34(d,0.6H),1.44(d,2.4H),1.75-2.40(m,6H),2.50-2.95(m,4H),3.47-3.95(m,4H),4.38-4.82(m,3H),5.52(d,0.5H),5.56(d,0.2H),6.75-8.25(m,8H)。分析HPLC:10.79分鐘。
LC-MS(ES+):m/e 557.2(M+H+)。

合成1-[2-(4-乙?；被?3-氯苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)酰胺(98u)由97b和順-(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得215mg的標(biāo)題化合物(67％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.38(d,0.6H)1.47(d,2.4H),1.11-1.88(m,5H),1.92-2.40(m,5H),2.24(s,3H),2.53-2.86(m,2H),3.30-3.90(m,4H),4.38-4.89(m,3H),5.53(d,0.8H),5.60(d,0.2H),7.68-8.22(m,3H)。分析HPLC:9.90分鐘。LC-MS(ES+):m/e 563.3(M+H+)。 1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(5-氧代-2-(3-苯基丙氧基1)-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98v)由1-(2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和順-(5-氧代-2-(3-苯基-丙氧基)四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯，按照用于制備98a的方法制得238mg的標(biāo)題化合物(75％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.33(d,0.6H),1.56(d,2.4H),1.78-2.45(m,6H),2.27(s,3H),2.53-2.97(m,4H),3.53-3.94(m,4H),4.47-4.86(m,3H),5.53(d,0.8H),5.62(d,0.2H),7.11-8.26(m,8H)。分析HPLC:10.27分鐘。LC-MS(ES+):m/e=599.2(M+H+)。 1-[2-(4-氨基-3-三氟甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98w)由{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯和4-氨基-3-三氟甲基-苯甲酸按照用于制備98a的方法制得56mg的標(biāo)題化合物(48％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.20-1.55(m,3H),1.75-2.50(m,4H),2.50-3.10(m,2H),3.50-4.00(m,2H),4.30-5.00(m,5H),5.42(s,0.4H),5.51(s,0.2H),5.62(d,0.3H),5.78(d,0.1H),6.84(d,1H),7.20-8.15(m,7H)。分析HPLC:14.90,15.20分鐘。LC-MS(ES+):m/e=563.2(M+H+)。 1-[2-(3-氯-4-二甲基氨基-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98x)由{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯和3-氯-4-二甲基氨基-苯甲酸，按照制備98a的方法制備，得到82mg的標(biāo)題化合物(44％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.18-1.53(m,3H),1.70-2.40(m,4H),2.55-3.10(m,2H),2.84(s,6H),3.45-3.94(m,2H),4.25-4.95(m,5H),5.46(s,0.3H),5.51(s,0.2H),5.63(d,0.4H),5.73(d,0.1H),7.05(d,1H),7.15-7.95(m,7H)。分析HPLC:11.85,12.19分鐘。LC-MS(ES+):m/e=557.3(M+H+)。 1-[2-(4-二甲基氨基-3,5-二氟-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98y)由{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯和4-二甲基氨基-3,5-二氯-苯甲酸，按照制備98a的方法制得106mg的標(biāo)題化合物(65％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.10-1.55(m,3H),1.75-2.30(m,4H)2.45-3.15(m,2H),2.84(s,6H),3.40-3.95(m,2H),4.15-4.95(m,5H),5.47(s,0.35H),5.54(s,0.15H),5.67(d,0.4H),5.77(d,0.1H),7.20-7.70(m,7H)。分析HPLC:12.21,12.51分鐘。LC-MS(ES+) m/e=559.2(M+H+)。 1-[2-(4-氨基-2,3,5,6-四氟-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98z)由{2-(2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯和4-氨基2,3,5,6-四氟-苯甲酸按照用于制備98a的方法制得58mg的標(biāo)題化合物(73％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.30-1.50(m,3H),1.62-2.35(m,4H),2.45-3.12(m,2H),3.50-3.90(m,2H),4.20-4.95(m,5H),5.42(s,0.4H),5.52(s,0.1H),5.64(d,0.4H),5.82(d,0.1H),7.25-7.65(m,5H)。分析HPLC:16.56,16.90分鐘。LC-MS(ES+):m/e 567.2(M+H+)。 1-{2-[3-氯-4-(2,2-二甲基丙?；被?-苯甲?；被鵠-丙酰基}-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98aa)向98b(100mg,0.19mmol)和聚(4-乙烯基吡啶)(200mg)的懸浮液中，加入新戊酰氯(70μl,0.57mmol)。將所得懸浮液室溫下攪拌過夜，過濾并用乙酸乙酯(25mL)稀釋。將此有機(jī)層用10％碳酸氫鈉(2×25mL)，飽和氯化鈉(1×25mL)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干，進(jìn)行色譜純化后得到98mg的標(biāo)題化合物(85％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.10-1.55(m,3H),1.38(s,9H),1.65-2.40(m,4H),2.60-3.10(m,2H),3.46-3.88(m,2H),4.20-4.95(m,5H),5.62(d,0.5H),5.78(d,0.2H),7.15-8.30(m,8H)。分析HPLC:11.82分鐘。LC-MS(ES+):m/e=613.2(M+H+)
1-[2-(3-氯-4-丙?；被?-苯甲?；被鵠丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ab)由98b和丙酰氯按照用于制備98aa的方法制得104mg標(biāo)題化合物(95％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.16(t,0.6H),1.18(d,0.6H),1.27(t,2.4H),1.38(d,2.4H),1.72-2.35(m,4H),2.45-2.58(m,2H),2.58-3.05(m,2H),3.45-3.85(m,2H),4.20-4.88(m,5H),5.64(d,0.5H),5.76(d,0.2H),7.20-8.35(m,8H)。分析HPLC:9.89分鐘。LC-MS(ES+):m/e=585.2(M+H+)。 1-[2-(3-氯-4-苯基乙?；被?-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ac)由98b和苯基乙酰氯按照用于制備98aa的方法制得85mg的標(biāo)題化合物(77％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.18(d,0.6H),1.40(d,2.4H),1.72-2.38(m,4H),2.58-3.05(m,2H),3.46-3.78(m,2H),3.85(s,2H),4.18-4.92(m,5H),5.63(d,0.5H),5.75(d,0.2H),7.15-8.34(m,13H)。分析HPLC:11.63分鐘。LC-MS(ES+):m/e=647.2(M+H+) 1-[2-(3-氯-4-甲基-丁酰基氨基)-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ad)由98b和異戊酰氯按照用于制備98aa的方法制得60mg的標(biāo)題化合物(58％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.07(d,5H),1.15(d,0.8H),1.27(d,1H),1.45(d,2.2H),1.67-2.30(m,5H),2.34(d,2H),2.58-3.05(m,2H),3.48-3.88(m,2H),4.10-4.98(m,5H),5.68(d,0.7H),5.78(m,0.3H),7.18-8.33(m,8H)。分析HPLC:10.74分鐘。LC-MS(ES+):m/e=613.2(M+H+)。 1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ae)由1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和順-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得174mg(81％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.04(t,0.45H),1.27(t,2.55H),1.34-1.45(m,3H),1.95-2.45(m,10H),2.78-2.84(m,H),3.60-3.90(m,8H),4.50-4.70(m,2H),4.90-4.94(m,H),5.45(d,0.85H),5.61(d,0.15H),6.99(d,H),7.15(d,H),7.45(s,2H)；分析HPLC保留時間10.09min；LC-MS:M/z=476(M+H+)。 1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98af)由1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和反-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得168mg(77％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.10-1.35(m,3H),1.35-1.60(m,3H),1.90-2.45(m,10H),2.60-3.00(m,H),3.55-3.95(m,5H),4.15-4.60(m,2H),4.83-5.00(m,H),5.29(s,H),6.95-7.06(m,H),7.50(s,2H),7.92(d,H)；分析HPLC的保留時間10.14min；LC-MS:m/z=476(M+H+)。 1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ag)由1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和順-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯(40)，按照制備98a的方法，制得406mg(收率71％)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.09(d,0.6H),1.35(m,2.4H),1.90-2.20(m,3H),2.22-2.50(m,10H),2.84-2.90(m,H),3.52-3.62(m,1.6H),3.65-3.80(m,3.4H),4.10-4.40(m,H),4.50-4.75(m,3H),4.82-4.95(m,2H),5.54(d,0.8H),5.80(d,0.2H),6.87(d,H),7.10-7.40(m,6H),7.45(s,2H)；分析HPLC保留時間16.71分鐘1；LC-MS:m/z=538(M+H+) 1-[2-(4-烯丙氧-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ah)由1-[2-(-4-烯丙氧-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和化合物40按照用于制備98a的方法制得264mg(收率46％)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.09-1.43(m,3H),1.90-2.20(m,3H),2.20-2.38(m,7H),2.38-2.52(m,H),2.80-2.95(m,H),3.52-3.67(m,H),3.70-3.80(m,H),4.10-4.40(m,2H),4.40-4.95(m,5H),5.26-5.55(m,3H),6.00-6.14(m,H),6.87(d,H),7.10-7.70(m,8H)；分析HPLC保留時間18.56和18.92min；LC-MS:m/z=564(M+H+) {2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯如化合物40所述用(1R,2S,5R)-(-)-薄荷醇制備,得到0.32g標(biāo)題化合物的順式非對映異構(gòu)體(較低Rf)和4.25g的反式/順式非對映異構(gòu)體的混合物(總收率67％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)混合物δ0.70-1.05(m,13H),1.20-1.47(m,2H),1.60-1.80(m,2H),1.94-2.20(m,2H),2.35-2.50(m,H),2.82-3.04(m,H),3.40-3.61(m,H),4.43-4.70(m,3H),5.15-5.35(m,2H),5.48-5.61(m,H),5.90-5.94(m,H)；順式非對映異構(gòu)體0.70-1.05(m,13H),1.20-1.47(m,2H),1.60-1.80(m,2H),1.94-2.18(m,2H),2.40-2.50(m,H),2.82-2.92(m,H),3.54-3.61(m,H),4.45-4.70(m,3H),5.18-5.35(m,2H),5.58-5.61(m,H),5.90-5.93(m,H)；反式/順式非對映異構(gòu)體混合物的LC-MS:m/z=340(M+H+)。
4-芐氧基-3,5-二甲基-苯甲酸通過合成4-烯丙氧-3,5-二甲基-苯甲酸的方法制備，得到2.43g(收率56％)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ4.87(s,2H),7.36-7.48(m,5H),7.92(s,2H)；LC-MS:m/z=255(M-H+)。
1-[2-(4-芐氧基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ai)由1-[2-(4-芐氧基-3,5-二甲基苯甲酰基氨基)-丙?；?-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯{2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}-氨基甲酸烯丙基酯，按照制備98a的方法制得130mg(收率39％)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.45-1.10(m,12H),1.15-1.90(m,8H),1.90-2.45(m,12H),2.80-2.84(m,H),3.50-3.85(m,3H),4.45-4.70(m,2H),4.80-4.95(m,3H),5.62(d,H),7.05(d,H),7.17(d,H),7.30-7.60(m,7H),7.62-7.75(m,H)；分析HPLC的保留時間15.90和16.08min；LC-MS:m/z=662(M+H+)。 1-[2-(4-羥基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸{2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98aj)將1-[2-(4-芐氧基-3,5-二甲基苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(110mg,0.17mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液，在鈀碳(20mg)上在氫氣氛下攪拌24小時，然后通過硅藻土板過濾并真空蒸發(fā)。將所得殘余物通過色譜用二氯甲烷/甲醇(99/1至96/4)純化，得到58mg標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.70-1.00(m,10H),1.20-1.80(m,10H),1.90-2.40(m,11H),2.82-2.86(m,H),3.57-3.78(m,3H),4.55-4.67(m,2H),4.90-4.94(m,H),5.29(s,H),5.62(d,H),6.90(d,H),7.14(d,H),7.42(s,2H)；分析HPLC保留時間12.84和13.05min；LC-MS:m/z=572(M+H+)。 1-[2-(4-羥基-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ak)將98ah(230mg,0.41mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，用DMBA(65mg,0.42mmol)和Pd(PPh3)4(50mg)室溫下處理20小時。將此混合物真空蒸發(fā)至干，并通過快速色譜用二氯甲烷/甲醇(99.5/0.5至97/3)洗脫純化，得到181mg的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.08(d,0.75H),1.20-1.35(m,2.25H),1.70-2.50(m,12H),2.80-2.90(m,H),3.50-3.65(m,H),3.70-3.80(m,H),4.10-4.25(m,H),4.35-4.98(m,3H),5.53(d,0.75H),5.85(d,0.25H),6.81(d,H),7.13-7.60(m,8H)；分析HPLC保留時間10.38和10.56分鐘；LC-MS:m/z 524(M+H+)。

1-[2-(4-二甲基氨基-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98al)由1-[2-(4-二甲基氨基-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和順-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得60mg(45％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.04(d,0.75H),1.35(d,2.25H),1.80-2.50(m,5H),2.75-3.20(m,BH),3.45-3.75(m,2H),4.05-4.20(m,0.5H),4.30-4.80(m,3.5H),4.80-4.95(m,1.5H),5.52(d,H),5.75-6.00(m,0.5H),6.60-6.90(m,3H),7.10-7.50(m,4H),7.50-7.80(m,2H)；分析HPLC保留時間10.46分鐘；LC-MS:m/z=523(M+H+)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸{2R-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}酰胺(98am)由1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(97a)和順-{2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得103mg(收率67％)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.70-1.10(m,12H),1.20-1.50(m,5H),1.50-1.85(m,2H),1.90-2.30(m,5H),2.75-2.85(m,H),3.50-3.70(m,2H),3.70-3.82(m,H),4.20-4.65(m,4H),4.80-4.95(m,H),5.61(d,H),6.70-6.73(m,H),6.95(d,H),7.15(d,H),7.49-7.51(m,H),7.73(s,H)；分析HPLC的保留時間12.88min；LC-MS:m/z=577(M+H+)。 {2-[1S-(2R-異丙基-5S-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，如化合物40所述，用(1S,2R,5S)-(+)-薄荷醇制備，得到855mg標(biāo)題化合物的反式非對映異構(gòu)體(較高Rf)，503mg的順式非對映異構(gòu)體(較低Rf)和459mg的反/順非對映異構(gòu)體混合物(總收率66％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)反式非對映異構(gòu)體δ0.74-1.00(m,12H),1.20-1.45(m,2H),1.58-1.72(m,2H),1.98-2.12(m,2H),2.18-2.40(m,H),2.98-3.03(m,H),3.49-3.54(m,H),4.17(br,H),4.59(br,2H),4.97(br,H),5.22-5.33(m,2H),5.58(s,H),5.87-5.93(m,H)；順式非對映異構(gòu)體0.75-1.02(m,12H),1.25-1.45(m,2H),1.57-1.70(m,2H),2.00-2.16(m,2H),2.40-2.52(m,H),2.78-2.90(m,H),3.40-3.50(m,H),4.58(br,2H),5.24-5.35(m,2H),5.51-5.52(d,H),5.85-5.98(m,H)；兩種非對映異構(gòu)體的LC-MS:m/z=340(M+H+)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸{2R-[1S-(2R-異丙基-5S-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}酰胺(98an)由97a和順-{2-[1S-(2R-異丙基-5S-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得88mg(50％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.70-1.10(m,12H),1.20-1.50(m,14H),1.50-1.70(br,2H),1.90-2.25(m,4H),2.27-2.37(m,H),2.40-2.50(m,H),2.75-2.79(m,H),3.35-3.80(m,3H),4.20-4.57(m,3H),4.60-4.70(m,H),4.88-4.92(m,H),5.53(d,H),6.71-6.75(m,H),6.90(d,H),7.20(d,H),7.50-7.53(m,H),7.75(d,H)；分析HPLC保留時間13.20分鐘；LC-MS:m/z=577(M+H+)。 (2-環(huán)己基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，按照化合物40所述，用環(huán)己基甲醇制備，得到1.04g(較高Rf)(35％收率)標(biāo)題化合物的反式非對映異構(gòu)體和1.295g(較低Rf)(44％收率)的順式非對映異構(gòu)體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)反式非對映異構(gòu)體δ0.90-0.96(m,2H),1.10-1.30(m,3H),1.55-1.85(m,6H),2.37-2.41(d,H),2.97-3.03(m,H),3.34-3.38(m,H),3.58-3.62(m,H),4.55-4.70(m,2H),4.70-4-73(m,H),5.03(bs,H),5.22-5.37(m,3H),5.87-5.93(m,H)；順式非對映異構(gòu)體0.91-0.97(m,2H),1.10-1.31(m,3H),1.56-1.90(m,7H),2.44-2.48(m,H),2.81-2.87(m,H),3.35-3.39(m,H),3.63-3.67(m,H),4.53-4.70(m,3H),5.20-5.50(m,3H),5.89-5.95(m,H)；兩種非對映異構(gòu)體的LC-MS:M/z=298(M+H+)。
1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)己基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ao)由97b和順-(2-環(huán)己基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯，按照制備98a使用的方法制備，得到212mg(64％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.70-1.30(m,5H),1.30-1.85(m,9H),1.85-2.60(m,8H),2.75-3.00(m,H),3.10-3.80(m,4H),4.30-4.95(m,3H),5.42(d,0.85H),5.62(d,0.15H),6.87(d,0.15H),7.08(d,0.85H),7.25(d,H),7.60-7.90(m,3H),8.08(d,0.15H),8.50(d,0.85H)；分析HPLC保留時間11.81min；LC-MS:m/z=577(M+H+)。 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸{2R-[1S-(2R-異丙基-5S-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}酰胺(98ap)由97b和順-{2-[1S-(2R-異丙基-5S-甲基-環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得223mg(63％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.70-1.15(m,12H),1.20-1.85(m,8H),1.85-2.60(m,9H),2.74-2.88(m,H),3.35-3.85(m,3H),4.40-4.55(m,H),4.65-4.78(m,H),4.88-4.91(m,H),5.53(d,H),7.00-7.25(m,2H),7.60-7.90(m,3H),8.50(d,H)；分析HPLC的保留時間13.31min；LC-MS:m/z=619(M+H+)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)己基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98aq)
由97a和順-(2-環(huán)己基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得113mg(56％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.70-1.39(m,5H),i.-Ac；-J..go(m,8H),1.90-2.20(m,3H),2.30-2.60H),2.80-3.00(m,H),3.15-3.80(m,4H),4.28-4.75(m,4H),4.89-4.93(m,H),5.42(d,H),6.74(d,H),6.87(d,H),7.30(d,H),7.51-7.53(m,H),7.74(d,H)；分析HPLC保留時間12.02min；LC-MS:m/z=535(M+H+) (2-丁氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，如化合物40所述，用正丁醇制備，得到878mg(29％收率)的標(biāo)題化合物(313mg的反式非對映異構(gòu)體，260mg的順式非對映異構(gòu)體和305mg的混合物)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)反式非對映異構(gòu)體δ(較高Rf)0.89-0.96(t,3H),1.32-1.40(m,2H),1.54-1.63(m,2H),2.37-2.41(d,H),2.98-3.04(q,H),3.55-3.60(m,H),3.77-3.82(m,H),4.19-4.22(m,H),4.58(br,2H),5.03(br,H),5.23-5.40(m,3H),5.87-5.93(m,H)，順式非對映異構(gòu)體(較低Rf)0.91-0.95(t,3H),1.34-1.39(m,2H),1.56-1.63(m,2H),2.42-2.50(m,H),2.83-2.87(m,H),4.07-4.11(t,H),4.45-4.50(m,0.5H),4.51-4.70(m,2.5H),5.23-5.35(m,2H),5.42-5.43(d,H),5.80-5.95(m,H)；兩種非對映異構(gòu)體的LC-MS:m/z=258(M+H+)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]吡咯烷-2-甲酸(2-丁氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ar)
由97a和順-(2-丁氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得118mg(48％收率)的標(biāo)題化合物，為順式非對映異構(gòu)體。
1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.80-1.02(m,2H),1.35-1.51(m,5H),1.51-1.70(m,2H),1.90-2.27(m,3H),2.30-2.46(m,H),2.80-2.90(m,H),3.55-3-94(m,4H),4.30-4.75(m,4H),4.90-5-00(m,H),5.44-5.46(m,H),6.73-6.80(m,H),6.80-6.93(m,H),7.16-7.25(m,H),7.49-7.60(m,H),7.70-7.84(m,H)；分析HPLC保留時間9.71min；LC-MS:m/z495(M+H+) (2-異丁氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，如化合物40所述，用異丁醇制得190mg(收率7.3％)的標(biāo)題化合物，為反式非對映異構(gòu)體和290mg(收率11％)的順式非對映異構(gòu)體1H-NMR(500MHz,CDCl3)反式非對映異構(gòu)體δ(較高Rf)0.85-1.05(m,6H),1.82-1.98(m,H),2.37-2.42(d,H),2.98-3.04(m,-H),3.31-3.35(m,H),3.55-3.58(m,H),4.20-4.30(t,H),4.58(br,2H),5.07(br,H),5.22-5.43(m,3H),5.84-5.96(m,H)，順式非對映異構(gòu)體(較低Rf)0.85-1.05(m,6H),1.88-1.95(m,H),2.40-2.51(m,H),2.83-2.90(m,H),3.33-3.36(m,H),3.61-3.65(m,H),3.87-3.88(d,H),4.40-4.68(m,3H),5.20-5.40(m,2H),5.42-5.43(d,H),5.80-5.97(m,H)；兩種非對映異構(gòu)體的LC-MS:m/z=258(M+H+)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-異丁氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98as)由97a和順-(2-異丁氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得93mg(38％收率)的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.74-0.76(t,0.6H),0.80-1.00(m,5.4H),1.40-1.50(m,3H),1.90-2.22(m,3H),2.33-2.45(m,H),2.80-2.90(m,H),3.32-3.38(m,H),3.55-3.80(m,3H),4.38(br,H),4.50-4.60(m,H),4.70-4.80(m,H),4.90-5.00(m,H),5.42-5.45(m,H),6.74-6.76(d,H),6.86-6.88(d,H),7.31-7.33(d,H),7.51-7.53(m,H),7.74-7.75(d,H)；分析HPLC的保留時間9.63 & 9.80分鐘；LC-MS:m/z=495(M+H+)。 [2-(茚-2-基)氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙基氧基羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯(5.2g,20mmol)如化合物40所述，用2-茚醇(8.05g,60mmol)制備，得到4.10g(65％收率)的標(biāo)題化合物，為差向異構(gòu)體的混合物。經(jīng)純化得到1.76g(28％收率)的4(S),5(R)差向異構(gòu)體，為黃色油狀物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 2.42(dd,J=17.2,10.5Hz,JH),2.79(dd,J=17.2,8.4Hz,1H),2.99(dd,J=16.7,4.1Hz,1H),3.04(dd,J=16.7,4.1Hz,1H),3.22(dd,J=17.2,6.6Hz,1H),3.26(dd,J=17.2,6.6Hz,1H),4.53(m,3H),4.70(m,1H),5.20(m,2H),5.60(d,J=5.3Hz,1H),5.87(m,1H),7.17(m,4H)ppm。LC-MS(ES+):m/e=318(M+H)。分析HPLC(C18柱):17.094分鐘。
還分離出差向異構(gòu)體混合物(0.75g,12％收率)和4(S),5(S)差向異構(gòu)體(1.59g,25％)，為白色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ2.38(d,J=17.9Hz,1H),3.0(m,3H),3.22(m,2H),4.13(m,1H),4.58(m,2H),4.68(m,2H),4.98(br s,1H),5.26(m,1H),5.57(s,1H),5.88(ddt,J=18.0,11.1,5.4Hz,1H),7.20(m,4H)ppm。LC-MS(ES+):m/e=318(M+H)。分析HPLC(C18柱):17.025(5.5％),17.325(94.5％)分鐘。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸[2-(茚-2-基氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(98at)由97a和[2-(茚醇-2-基]氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得標(biāo)題化合物，為差向異構(gòu)體的71∶29的混合物，為米色固體(0.20g,58％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.0-1.5(m,3H),1.6-2.3(m,4H),2.42(m,1H),2.6-3.4(m,6H),3.5-4.1(m,3H),4.2-4.9(m,4H),5.65(d,J=5.OHz,0.80H),5.8(m,0.07H),5.85(d,J=5.0Hz,0.13H),6.8-7.3(m,6E),7.4-7.9(m,3H)ppm。分析HPLC(C18柱)16.035(71.4％),16.476(28.6％)分鐘。LC-MS(ES+):m/e=555(M+H)。 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸[2-(茚-2-基氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(98au)由97b和[2-(茚醇-2-基)氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得標(biāo)題化合物為76∶24的差向異構(gòu)體混合物，為米色固體(0.22g,57％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.08(d,J=6.9Hz,0.4H),1.26(d,7=6.9Hz,0.6H),1.35(d,J=6.9Hz,2H),1.8-2.3(m,3H),2.28(s,2H),2.29(s,1H)2.4(m,1H),2.8(m,1H),3.10(m,2H),3.27(m,2H)3.58(m,2H),3.69(m,1H),4.5-4.9(m,4H),5.65(d,J=5.3Hz,0.68H),5.84(d,J=5.3Hz,0.18H),6.38(br,0.14H),6.9-7.7(m,6H),7.6-7.9(m,3H),8.33(brd,J=6.8Hz,0.18H),8.51(br d,J=8.0Hz,0.82H)ppm。分析HPLC(C18柱)15.596(76.2％),15.932(23.8％)分鐘。LC-MS(ES+):m/e=597(M+H) 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98av)由97a和順-(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得標(biāo)題化合物，為米色固體(0.19g,59％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.2-2.4(m,15H),2.4-3.1(m,2H),3.6-3.9(m,2H),4.2-4.4(m,2H),4.5-5.0(m,4B),5.40(d,J=5.0Hz,0.35H),5.55(d,J=5.0Hz,0.65H),6.8-8.2(m,5H)ppm。分析HPLC(C18柱)14.065分鐘。LC-MS(ES+):m/e=507(M+H)。 1-[2-(3,5-二氯-4-羥基-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98aw)由1-[2-(4-烯丙氧-3,5-二甲基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯和順-40化合物按照用于制備化合物98a的方法制得標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(1.087g,64％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.09(d,J=6.9Hz,0.6H),1.33(d,J=6.9Hz,2.4H),1.96(m,1H),2.03(m,1H),2.10(m,1H),2.28(m,0.8H),2.40(dd,J=17.3,10.2Hz,0.BH),2.56(m,0.2H),2.85(dd,J=17.3,B.5Hz,0.8H),3.09(dd,J=17.7,10.2Hz,0.2H),3.57(m,1H),3.73(dt,J=9.2,7.9Hz,0.5H),4.09(m,0.2H),4.21(d,J=7.9Hz,0.2H),4.44(d,J=9.8Hz,0.2H),4.55(dd,J=8.0,3.0Hz,0.8H),4.62(d,J=11.6Hz,1H),4.70(m,1H),4.80(m,1H),4.89(d,J=11.6Hz,0.5H),5.52(d,J=5.2Hz,0.8H),5.82(d,J=5.2Hz,0.2H),6.51(br,0.2H),6.62(br,0.8H),7.0-7.4(m.7H),7.43(s,0.4H),7.66(d,J=1.0Hz,1.6H)ppm。分析HPLC(C18柱)10.135分鐘。LC-MS(ES+):m/e=564,566(6∶4)(M+H)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ax)按照用于制備(98av)的方法，用反-(2-環(huán)戊基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺制備，得到標(biāo)題化合物，為米色固體(0.24g,74％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.41(d,J=6.5Hz,3H),1.7(m,7H),1.98(br,2H),2.13(br,2H),2.27(m,1H),2.69(m,1H),2.86(dd,J=18.0,6.8Hz,0.7H),2.98(dd,J=18.3,8.2Hz,0.3H),3.60(br,1.4H),3.77(br,0.6H),4.1-4.6(m,5H),4.82(m,1H),5.27(m,0.65H),5.51(d,J=5.3Hz,0.05H),5.59(br s,0.3H),6.76(br,1H),7.00(br,1H),7.49(br,1H),7.74(br,1H),7.89(br,1H)ppm。分析HPLC(C18柱)9.756分鐘。LC-MS(ES+):m/e=507(M+H)。 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(98ay)由(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)氨基甲酸烯丙基酯和97b按照用于98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(51mg,18％收率)。1H-NMR(500MHz,1∶1 CDCl3∶CD3OD)δ1.08-1.35(m,3H),1.35-1.55(m,3H),1.75-2.44(m,4H),2.26(s,3H),2.44-3.07(m,2H),3.48-3.97(m,2H),4.18-4.92(m,5H),5.32(d,0.4H),5.47(d,0.1H),5.58(d,0.4H),5.64(d,0.1H),7.70-8.35(m,3H)。分析HPLC 10.37,10.54分鐘。LC-MS(ES+)m/e=509.2(M+H+)。 [2-(2-氯-乙氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯(5.2g,20mmol)，如化合物40所述，用氯乙醇(4.05mL,60mmol)制備，得到1.84g(35％收率)的標(biāo)題化合物，為差向異構(gòu)體的混合物。對于反式非對映異構(gòu)體1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ2.42(dd,J=18.1Hz,1H),3.00(dd,J=18.1,7.8Hz,1H),3.63(m,2H),3.85(m,1H),4.02(m,1H),4.23(m,1H),4.57(br s,2H),5.17(br s,1H),5.22(d,H=11.5Hz,1H),5.29(d,J=16.8Hz,1H),5.44(s,1H),5.89(m,1H)ppm；LC-MS(ES+)m/e=264(M+H)。順-非對映異構(gòu)體1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ2.47(dd,J=17.3,10.7Hz,1H),2.83(dd,J=17.3,8.4Hz,1H),3.65(m,2H),3.83(m,1H),4.11(m,1H),4.57(m,3H),5.22(d,H=10.4Hz,1H),5.30(d,J=17.2Hz,1H),5.33,(m,I.H),5.47(d,J=5.2Hz,1H),5.89(ddt,J=17.1,11.0,5.4Hz,1H)ppm；LC-MS(ES+) m/e=264(M+H)。
-氨基甲酸烯丙基酯由[2-(2-氯-乙氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯，通過與嗎啉(2eq)和KI(1eq)在DMF中反應(yīng)制備。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸[2-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(98az)由97a和順-[2-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯按照用于98a的方法制得。 [2-(4-氯-芐氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯由3-烯丙氧羰基氨基-4-羥基-丁酸叔丁基酯，如化合物40所述，用4氯芐醇制備，得到標(biāo)題化合物為白色固體。反式非對映異構(gòu)體HPLC(C18柱)10.924min；1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ2.41(d,J=5.0Hz,1H),3.02(dd,J=18.1,7.8Hz,1H),4.25(br,1H),4.56(m,2H),4.58(d,J=11.7Hz,1E),4.79(d,J=11.7Hz,1H),4.99(br,1H),5.22(dd,J=10.4,1.1Hz,1H),5.28(dd,J=17.2,1.3Hz,1H),5.44(s,1H),5.86(m,1H),7.25(d,J=8.4Hz,2H),7.32(d,J=8.4Hz,2H)ppm；LC-MS(ES+) m/e=326(M+H)；順-非對映異構(gòu)體HPLC(C18柱)10.780min；1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ2.47(dd,J=17.3,10.5Hz,1H),2.85(dd,J=17.3,8.4Hz,1H),4.55(m,3H),4.58(d,J=11.7Hz,1H),4.84(d,J=11.7Hz,1H),5.23(dd,H=10.4,I.1Hz,1H),5.30(d,J=16.6Hz,1H),5.49(d,J=5.0Hz,1H),5.89(ddt,J=17.1,11.0,5.4Hz,1H),7.23(d,J=8.3Hz,2H),7.31(d,J=8.3Hz,2H)ppm；LC-MS(ES+) m/e=326(M+H)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-甲酸[2-(4-氯-芐氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(98ba)由97a和順-[2-(4-氯-芐氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯按照用于98a的方法制得154mg(65％收率)的標(biāo)題化合物，為淡粉色固體。HPLC(C18柱)10.597min；1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.14(d,J=6.8Hz,0.75H),1.34,(d,J=6.8Hz,2.25H),1.6(br,0.25H),1.91(m,1H),2.03(m,1H),2.10(m,1H),2.29(m,0.75H),2.40(dd,J=17.3,10.3Hz,0.75H),2.51(m,0.25H),2.82(dd,J=17.3,B.5Hz,0.75H),3.08(dd,J=17.9,10.9Hz,0.25H),3.58(m,1H),3.72(dd,J=16.5,8.7Hz,0.75H),4.10(m,0.25H),4.22(d,J=5.0Hz,0.25H),4.39(d,J=10.5Hz,0.25H),4.54(dd,J=9.1,2.9Hz,0.75H),4.60(d,J=11.9Hz,0.75H),4.68(m,1H),4.85(d,J=11.7Hz,0.75H),4.86(m,1H),5.49(d,J=5.2Hz,0.75H),5.81(d,J=5.2Hz,0.25H),6.2(br,0.25H),6.74(m,2H),7.05(d,J=S.5Hz,0.5H),7.17(d,J=8.4Hz,0.5H),7.30(m,3.25H),7.48(dd,J=8.4,2.0Hz,0.75H),7.56(d,J=1.9Hz,0.25H),7.73(d,J=1.9Hz,0.75H),8.42(d,J=5.7Hz,0.25H)ppm；LC-MS(ES+) m/e=563,565(M+H)。

1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸[2-(4-氯-芐氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(98bb)由97b和順-[2-(4-氯-芐氧基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-氨基甲酸烯丙基酯按照用于制備98a的方法制得165mg(64％收率)的標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。HPLC(C18柱)10.491min；1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.16(d,J=6.8Hz,0.6H),1.35,(d,J=6.8Hz,2.4H),1.94(m,1H),2.04(m,1H),2.10(m,1H),2.25(s,3H),2.28(m,1H),2.40(dd,J=17.3,10.4Hz,0.8H),2.53(m,0.2H),2.84(dd,J=17.3,8.5Hz,0.8H),3.02(dd,J=17.5,10.5Hz,0.2H),3.58(m,1H),3.72(ddd,J=17.2,8.3,8.3Hz,0.8H),4.13(m,0.2H),4.22(d,J=8.2Hz,0.2H),4.40(d,J=10.9Hz,0.2H),4.54(dd,J=8.1,3.0Hz,0.8H),4.60(d,J=11.8Hz,0.8H),4.69(m,1H),4.85(d,J=11.8Hz,0.8H),4.87(m,1H),5.49(d,J=5.2Hz,0.8H),5.80(d,J=5.2Hz,0.2H),6.47(br,0.2H),6.95(d,J=8.3Hz,0.8H),7.05(d,J=8.3Hz,0.4H),7.18(d,J=8.3Hz,0.4H),7.29(m,3.2H),7.49(dd,J=8.6,1.9Hz,0.2H),7.63(dd,J=8.6,1.9Hz,0.8H),7.74(d,J=1.9Hz,1H),7.85(d,J=1.9Hz,0.8H),8.25(d,J=6.4Hz,0.2H),8.51(m,0.8H)ppm；LC-MS(ES+) m/e=605,607(M+H)。
方案ⅩⅧ
2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?哌啶-1-甲酸-叔丁基酯(100)由哌啶-1,2-二甲酸1-叔丁基酯(99)和化合物40，按照用于制備化合物75的方法制備，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(2.63g,57％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.15-1.79(rn,15H),2.12-2.50(m,2H),2.56-2.83(m,1H),2.89(dd,0.5H),3.05(dd,0.5H),3.81-4.15(br s,1H),4.36-4.97(m,3H),5.37-5.61(m,1H),6.42-6.89(br s,1H),7.17-7.51(m,5H)。LC-MS(ES+)m/e=419.4(MH+)。
{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-哌啶-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}氨基甲酸叔丁基酯(101)將2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(100)溶解于20％TFA的二氯甲烷(25mL)溶液中并室溫下攪拌50分鐘。蒸發(fā)溶劑并將殘余的酸與二氯甲烷(4x)共沸。將所得油狀物溶解于二氯甲烷(20mL)和DMF(5mL)中，冷卻至0℃，并用DIEA(4.7mL,27.0mmol),Boc-丙氨酸(970mg,5.1mmol),HOBt(924mg,6.8mmol)和EDC(1.31g,6.8mmol)處理，將此溶液在氮?dú)夥障聰嚢?8小時。溶劑真空濃縮，然后溶解于EtOAc中，并用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到桔黃色固體，將其溶解于二氯甲烷并滴加至乙醚中，得到白色沉淀。此標(biāo)題化合物為白色固體(1.21g,73％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.10-1.79(m,18H),1.98-2.19(m,0.5H),2.28-2.88(m,3H),2.89-3.13(m,0.5H),3.78-3.95(m,0.5H),4.21-5.16(m,5.5H),5.38-5.59(m,0.3H),5.66-(d,0.4H),5.80(d,0.3H),7.24-7.40(m,5H)。LC-MS(ES+) m/e=490.3(MH+)。
1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠哌啶-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)酰胺(102a)
由{2-[2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?-哌啶-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}氨基甲酸-叔丁基酯和4-乙?；被?3-氯苯甲酸，按照用于制備98a的方法制備，得到標(biāo)題化合物(71mg,47％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.10-1.97(m,10H),2.10-2.68(m,5H),2.73-3.24(m,2H),3.62-3.92(m,1H),4.24-5.27(m,5H),5.48-5.59(m,0.5H),5.75-5.85(m,0.5H),6.51-6.61.(d,1H),7.05-7.45(m,4H),7.52-8.12(m,4H)。分析HPLC 8.30分鐘。LC-MS(ES+) m/e=585.3(MH+)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-哌啶-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(102b)如102a所述制備，得到標(biāo)題化合物(0.06g,27％收率)，為黃色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.2-1.8(m,7H)2.1-2.6(m,2H),2.7-3.2(m,4H),3.6-4.0(m,1H),4.3-4.9(m,7H),5.0-5.8(m,2H),6.5-7.0(m,2H),7.2-7.8(m,5H)ppm。分析HPLC(氰基柱)14.559(39.6％),15.198(60.4％)。LC-MS:(ES+):m/e=543(M+H)
4-羥基-吡咯烷-1,2-二甲酸1-芐基酯2-叔丁基酯(104)按照用于制備化合物95的方法制備化合物104。
在55℃下，將Cbz-Hyp-OH(4.854g,18mmol)的DMA(135ml)懸浮液，芐基三乙基氯化銨(4.105g,18mmol)，碳酸鉀(64g,46mmol)和2-溴-2-甲基丙烷(99ml,859mmol)攪拌18小時。用冰水稀釋此混合物并用EtOAc(3x)萃取，將此有機(jī)相用水，0.5N硫酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，干燥并真空除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，為黃色油狀物(5.368g,98％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.33(s,5H),1.47(s,4H),2.01-2.14(m,1B),2.22-2.38(m,1H),3.50-3.72(m,2H),4.34-4.45(m,1H),4.45-4.53(m,1H),5.04-5.20(m,2H),7.22-7.42(m,5H)。分析HPLC 10.14分鐘。LC-MS(ES+) m/e=322.2(MH+)。
4-氟-吡咯烷-1,2-二甲酸1-芐基酯2-叔丁基酯(105)在-78℃下，將化合物104(4.262g,13.96mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液用DAST(1.80ml,13.6mmol)處理，攪拌10分鐘，然后升溫至室溫并在氮?dú)夥障聰嚢?0小時。將此混合物倒入到冰冷的碳酸氫鈉(10％溶液，350ml)中并用二氯甲烷(2x)萃取，將此有機(jī)相用水、鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥并濃縮得到棕色油狀物(4.299g)，將其通過快速柱色譜在硅膠上用己烷/EtOAc(90/10至80/20％)洗脫純化。獲得的標(biāo)題化合物為黃色油狀物(2.805g,64％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.37(s,4.5H),1.45(s,4.5H),2.20-2.55(m,2H),3.61-3.93(m,2H),4.41(d,0.5H),4.49(d,0.5H),5.03-5.21(m,3H),7.23-7-44(m,5H)。分析HPLC 12.15分鐘。LC-MS(ES+)m/e=324.2(MH+)。
1-(2-芐氧基羰基氨基-丙酰基)-4-氟-吡咯烷-1,2-二甲酸1-芐基酯2-叔丁基酯(106)將化合物105(2.72g,8.42mmol)的甲醇(50ml)溶液和10％Pd/C(1.27g)在氫氣氛下攪拌2小時，然后通過硅藻土板過濾，并蒸發(fā)溶劑得到黃色油狀物(1.526g)。將此油狀物溶解于二氯甲烷(30ml)并用DIEA(1.5ml,8.6mmol),Cbz-ala-OH(2.34g,10.5mmol)和EDC(2.32g,12mmol)在0℃下處理。將此混合物在0℃下再攪拌10分鐘，然后升溫至室溫，并攪拌18小時。溶劑真空濃縮并將此殘余物溶解于EtOAc，然后用0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到白色固體，將其通過快速柱色譜，用己烷/EtOAc(80/20至60/40％)洗脫純化。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(286g,86％，由4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸1-芐基酯2-叔丁基酯)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.26-1.59(m,12H),2.20-2.67(m,.2H),3.45-4-13(m,2H),4.25-4.47(m,1H),4.58-4.71(m,1H),4.96-5,.17(m,2H),5.19-5.45(m,1H),7.23-7.48(m,5H)。分析HPLC 16.36分鐘。LC-MS(ES+)m/e=395.3(MH+)。
1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸-叔丁基酯(107)將化合物106(2.65g,6.72mmol)的甲醇(40ml)懸浮液和10％Pd/C(1.32g)在氫氣氛下攪拌1.5小時，通過硅藻土板過濾并濃縮得到蠟狀固體(1.694g)。將此固體溶解于二氯甲烷(25ml)并用DIEA(3.4ml,19.5mmol),4-氨基-3-氯苯甲酸(1.362g,7.9mmol),HOBt(1.164g,8.62mmol)和EDC(1.645g,8.57mmol)在0℃下在氮?dú)夥障绿幚?。讓此混合物升溫至室溫并攪?8小時。溶劑真空濃縮。將此殘余物溶解于EtOAc，用水(4x),0.5N硫酸氫鈉(2x)，飽和碳酸氫鈉(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到白色固體，將其通過快速柱色譜用二氯甲烷/MeOH(99/1至98/2％)洗脫純化。得到的產(chǎn)物為白色固體(2.705g,97％)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.33(s,9H),1.48(d,3H),2.31-2.55(m,2H),3.93(d,d,1H),4.02-4.21(m,1H),4.59-4.76(m,IE),5.31(br s,0.5H),5.41(brs,0.5H),6.78(d,1H),7.57(d,d,1H),7.78(s,1H),8.31(d,1H)。分析HPLC 14.14分鐘。LC-MS(ES+) m/e=414.2(MH+)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(108a)由順-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和107a，按照合成98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(41mg,15％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ0.94(d,0.3H),1.07(d,1H),1.40(m,1.7H),2.21-2.65(m,2.2H),2.70-2.85(m,1.4H),2.96-3.08(m,1.4H),2.96-3.08(dd,0.4H),3.57-4.24(m,3H),4.41-4.93(m,4H),5.14-5.45(m,1H),5.60-5.67(m,0.6H),5.77(d,0.4H),6.77(dd,1H),7.15-7.41(m,5H),7.51-7.62(m,1H),7.77(dd,1H)。分析HPLC 12.83分鐘。LC-MS(ES+) m/e=547.1(MH+)。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(108b)由(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯107a，按照用于合成98a的方法制備。分離出的標(biāo)題化合物為白色固體(654mg,54％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD))δ1.07(d,0.5H),1.25-1-56(m,2.5H),2.21-2.65(m,2.3H),2.68-2.89(m,1H),2.91-3.10(m,0.7H),3.57-4.23(m,2H),4.32-4.95(m,5H),5.16-5.52(m,1H),5.45-5.50(m,0.3H),5.54-5.58(m,0.2H),5.61-5.67(m,0.3H),5.77(d,0.2H),6.72-6.84(m,1H),7.16-7.41(m,5H),7.50-7.65(m,1H),7.71-7.87(m,1H)。分析HPLC12.83分鐘。LC-MS(ES+) m/e=547.1(MH+) 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-4-氟-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(108c)由順-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯和107a按照合成98a的方法制得標(biāo)題化合物(100.3mg,38％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.09(t,1.2H),1.25(t,1.8H),1.40(d,1H),1.49(d,2H),2.33-2.61(m,2H),2.65-2.95(m,2H),3.44-4.30(m,4H),4.47-4.79(m,3H),5.18-5.25(m,0.2H),5.275.36(m,0.5H),5.39-5.46(m,0.3H),5.56(m,1H),6.72-6.94(m,0.5H),7.54-7.69(m,0.5H),7.79(d,0.55H),8.06(d,0.SSH),9.00(d,0.3H)。分析HPLC 8.46分鐘。LC-MS(ES+) m/e=485.2(MH+)。

1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4-氟-吡咯烷-2-甲酸[2-(2-異丙基-5-甲基-環(huán)己基)-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(108d)由{2-[1R-(2S-異丙基-5R-甲基環(huán)己基氧基)]-5-氧代-四氫呋喃-3-基}-氨基甲酸烯丙基酯和107a按照合成98a的方法制得標(biāo)題化合物(95mg,31％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ0.42(d,2H),0.57(d,2H),0.60-1-10(m,10H),1.22-1.76(m,6H),1.96-2.17(m,1H),2.29-2.60(m,2H),2.61-2.88(m,1.5H),3.02-3.23(dd,0.5H),3.37-3.47(m,0.5H),3.50-3.61(m,0.5H),3.63-4.24(m,2H),4.48-4.62(m,3H),5.18-5.48(m,1H),5.72(d,0.4H),5.82(d,0.6H),6.77-6.84(m,1H),7.53-7.67(m,1H),7.78(d,0.4H),7.84(d,1H)/分析HPLC 8.34分鐘。LC-MS(ES+) m/e=595(MH+)。
方案ⅩⅩ {2-[2-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}氨基甲酸叔丁基酯(109)由(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)氨基甲酸烯丙基酯74，按照用于合成化合物75的方法制備，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色固體(660mg,73％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3 OD)δ1.14-1.36(m,6H),1.42(s,9H),1.75-2.29(m,4H),2.48(dd,0.5H),2.58(dd,0.5H),2.72-2.85(m,0.5H),2.99(dd,0.5H),3.43-3.91(m,4H),4.07-4.52(m,2.5H),4.53-4.72(m,0.5H),5.37(s,0.5H),5.57(d,0.5H)。分析HPLC(2種非對映異構(gòu)體的混合物)7.92,8.14分鐘。LC-MS(ES+) m/e=414.3(MH+)。
1-[2-(4-烯丙基氧基-3,5-二氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(110)由化合物109和4-烯丙氧-3,5-二氯-苯甲酸，按照用于合成化合物82的方法制備，得到標(biāo)題化合物為s白色固體(228mg,65％)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.10-1.30(m,4H),1.32-1.52(m,3H),1.63-2.31(m,4H),2.41-2.50(d,0.5H),2.52-2.61(dd,0.5H),2.67-2.81(m,0.5H),2.94-3.05(dd,0.5H),3.47-3.96(m,4H),4.21-4.81(m,5H),5.22-5.32(m,1H),5.35-5.49(m,1.5H),5.55-5.63(m,0.5H),6.06-6.21(m,1H),7.90(s,2H)。分析HPLC(2種非對映異構(gòu)體的混合物)12.56分鐘。LC-MS(ES+) m/e=542.3(MH+)。
1-[2-(3,5-二氯-4-羥基-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(111)在0℃下，向化合物110(194mg,0.36mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，加入DMBA(70.7mg,0.45mmol)和Pd(PPh3)4(50.3mg,0.044mmol)。15分鐘后將此溶液升溫至室溫，攪拌2小時，用二氯甲烷稀釋，然后用水(2x)和鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到粗品。進(jìn)行快速色譜用二氯甲烷/甲醇(99/1至95/5％)洗脫，得到標(biāo)題化合物(138.6mg,77％收率)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.13-1.31(m,3H),1.35-1.49(m,3H),1.84-2.35(m,4H),2.43-3.05(m,2H),3.48-3.93(m,4H),4.22-4.80(m,3H),5.38(d,0.4H),5.46(s,0.1H),5.55-5.61(m,0.5H),7.76-7.94(m,2H)。分析HPLC 8.70分鐘。LC-MS(ES+) m/e=502.2(MH+)。
方案ⅩⅪ 化合物116a-116h按照化合物98所述制備，不同的只是用1-(2-芐氧基羰基氨基-丙酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(114)代替1-(2-芐氧基羰基氨基-丙?；?-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(95)。
制備1-(2-芐氧基羰基氨基-丙酰基)-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(114)將4,4-二氟-吡咯烷-1,2-二甲酸-1-芐基酯-2-叔丁基酯(113)(Karanewsky，等，J.Med.Chem.33,pp.1459-1469(1990))(0.42g,1.23mmol)和10％鈀碳(0.22g)在甲醇(6mL)中的溶液，在1個大氣壓的氫氣壓下攪拌3小時。將此混合物通過硅藻土板過濾并蒸發(fā)。將此殘余物溶解于二氯甲烷(4mL)和DMF(2mL)，并冷卻至0℃。加入2-芐氧基羰基氨基-丙酸(0.30g,1.35mmol),EDC(0.30,1.54mmol),DIEA(0.65mL)和HOBt(0.17g,1.23mmol)并將此反應(yīng)在0℃攪拌0.5小時，然后在氮?dú)夥障率覝財嚢?6小時。真空除去溶劑并將此殘余物溶解于乙酸乙酯，然后用10％硫酸氫鈉、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。通過快速色譜在硅膠上用25∶75乙酸乙酯∶己烷洗脫純化，得到1-(2-芐氧基羰基氨基丙?；?-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸叔丁基酯(0.39g,77％收率)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.3-1.6(m,12H),2.5(m,0.5H),2.7(m,1.2H),3.9(m,1H),4.1(m,1H),4.4(m,1H),4.7(m,1H),5.1(m,2H),5.59(br d,J=7.7Hz,0.8H),5.7(br d,J=7.7Hz,0.2H),7.35(m,5H)ppm。分析HPLC(氰基柱)17.069分鐘。LC-MS(ES+) m/e=413(M+H),357(M+H-叔丁基)，313[M+H-(CO2叔丁基)]。 1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116a)由化合物115a和順-40化合物制得標(biāo)題化合物，為米色固體(0.14g,73％收率)。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ1.0-1.5(m,3H),2.0-3.5(m,4H+CH3OH),3.5-5.5(M,6H+H2O),5.6-5.8(M,1H),6.7-6.8(m,1H),7.1-7.8(m,8H),8.2-8.6(m,1H)ppm。分析HPLC(氰基柱)13.744分鐘。LC-MS(ES+) m/e=565(M+H)。

1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116b)由115b和順-40得到標(biāo)題化合物，為米色固體(0.08g,38％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.03(d,J=6.9Hz,0.4H),1.30(d,J=6.9Hz,0.6H),2.25(d,J=2.9Hz,3H),2.4-3.2(m,4H),3.6-4.4(m,4H),4.6-4.9(m 3H),5.52(d,J=5.2Hz,0.6H),5.78(d,J=5.2Hz,0.4H),6.6(br s,1H),6.9-7.9(m,8H),8.39(d,J=5.1Hz,0.4H),8.44(d,J=8.3Hz,0.6H),8.74(d,J=6.8Hz,1H)ppm。分析HPLC(氰基柱)11.830分鐘。LC-MS(ES+):m/e=607(M+H) 1-[2-(4-乙酰基氨基-5-氯-2-甲氧基-苯甲?；被?-丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116c)由115c和順-40得到標(biāo)題化合物，為米色(0.07g,29％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ0.99(d,J=6.9Hz,1.35H),1.32(d,J=6.9Hz,1.65H),2.25(s,1.5H),2.26(s,1.5H),2.3-3.2(m,4H),3.95(s,0.55H),3.98(s,0.45H),3.7-4.1(m,2.5H),4.2-4.5(m,1.5H),4.6-4.9(m,3H),5.52(d,J=5.3Hz,0.55H),5.80(d,J=5.3Hz,0.45H),7.0-7.4(m,4H),7.7-7.9(m,2H),8.0-8.4(m,2H),8.49(d,J=6.5Hz,1H),8.93(d,J=6.7Hz,1H)ppm。分析HPLC(氰基柱)12.959分鐘。LC-MS(ES+):m/e=637(M+H)。 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116d)由115b和順-(2-乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯得到標(biāo)題化合物，為92∶8的差向異構(gòu)體混合物。米色固體(0.27g,66％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.0-1.5(m,6H),2.25(s,1.5H),2.26(s,1.2H),2.3-3.1(m,4H),3.3-4.3(m,4H),4.5-4.9(m,3H),5.45(d,J=5.3Hz,0.75H),5.59(d,J=5.2Hz,0.25H),6.7-7.1(m,2H),7.62(dd,J=8.7,2.0Hz,1H),7.76(m,1H),7.85(d,J=2.0Hz,1H),8.48(m,1H)ppm。分析HPLC(C18柱)13.300(91.8％),14.046(8.2％)分鐘。LC-MS(ES+):m/e=545(M+H)。 1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)已基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116e)由115b和順-(2-環(huán)己基氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯制得標(biāo)題化合物，為93∶7的差向異構(gòu)體的混合物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.0-2.0(m,13H),2.25(s,2H),2.26(s,1H),2.40(dd,J=17.3,10.1Hz,1H),2.84(dd,J=17.3,5.5Hz,.1H),2.5-3.0(m,2H),3.5-4.3(m,3.5H),4.5-4.9(m,2.5H),5.59(d,J=5.3Hz,0.75H),5.76(d,J=5.2Hz,0.25H),6.74(br d,J=5.7Hz,0.25H),6.93(br d,J=7.1Hz,1H),7.06(br d,J=7.8Hz,0.75H),7.62(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),7.78(m,1H),7.85(d,J=2.0Hz,1H),8.35(br d,J=6.6Hz,0.25H),8.50(br d,J=8.2Hz,0.75H)ppm。分析HPLC(C18柱)17.112(93％),17.433(7％)分鐘。LC-MS(ES+):m/e=599(M+H)。 1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸[2-(茚醇-2-基)氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基]-酰胺(116f)由115b和[2-(茚醇-2-基)氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基]氨基甲酸烯丙基酯制得標(biāo)題化合物，為62∶38差向異構(gòu)體的混合物。米色固體(0.34g,71％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.09(d,J=6.9Hz,0.6H),1.21(d,J=6.9Hz,0.9H),1.33(d,J=6.9Hz,0.9H),1.42(d,J=6.9Hz,0.6H),2.28(s,2H),2.29(s,1H),2.40(dd,J=17.4,10.3Hz,1H),2.4-3.3(m,7H),3.6-4.2(m,2H),4.5-4.8(m,4H),5.66(m,0.6H),5.84(d,J=4.3Hz,0.2H),6.22(m,0.2H),6.7-7.0(m,2H),7.2-7.3(m,4H),7.5-7.7(m,1H),7.8-8.0(m,2H),8.52(m,0.6H),8.62(br d,J=6.5Hz,0.4H)ppm。分析HPLC(C18柱)16.556(62.0％),16.824(38.0％)分鐘。LC-MS(ES+):m/e=633(M+H)。

1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116g)由115b和順-(2-環(huán)戊基甲氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯制得標(biāo)題化合物，為米色固體(0.20g,44％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.0-1.8(M,11H)1.9-3.0(m,5H),2.26(s,3H),3.29(m,0.25H),3.47(m,0.75H),3.58(m,0.25H),3.74(m,0.75H),3.8(m,0.75H),4.1(m,0.25H),4.25(m,1H),4.4-4.8(m,3H),5.44(d,7=5.2Hz,0.75H),5.62(d,J=5.2Hz,0.25H),6.7(br,0.25H),6.91(d,J=7.1Hz,1H),7.1(m,0.75H),7.59(d,J=8.5Hz,0.25H),7.63(dd,J=5.5,2.5Hz,0.75H),7.75(m,1H),7.86(d,J=1.5Hz,1H),8.33(brd,J=6.5Hz,0.25H),8.49(br d,J=8.4Hz,0.75H)ppm。分析HPLC(C18柱)17.705分鐘。LC-MS(ES+):m/e=599(M+H)。 1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲酸(2-苯基乙氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(116h)由115b和順-(5-氧代-2-苯乙基氧基四氫呋喃-3-基)-氨基甲酸烯丙基酯制得標(biāo)題化合物，為米色固體(0.15g,24％收率)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ1.29(d,J=6.9Hz,0.75H),1.40(d,L7=6.9Hz,2.25H),2.25(s,2.25H),2.26(s,0.75H),2.3-3.0(m,6H),3.7-4.8(m,7H),5.38(d,J=5.3Hz,0.75H),5.67(d,J=5.1Hz,0.25H),6.65(m,1H),6.90(d,J=7.0Hz,0.75H),7.06(d,J=7.6Hz,0.25H),7.1-7.3(m,5H),7.57(d,J=8.6Hz,0.25H),7.63(d,J=8.6Hz,0.75H),7.75(m,1H),7.86(d,J=1.8Hz,1H),8.35(d,J=6.2Hz,0.25H),8.49(d,J=8.3Hz,0.75H)ppm。分析HPLC(C18柱)17.265分鐘。LC-MS(ES+):m/e=621(M+H)。
方案ⅩⅫ 2-(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基氨基甲?；?吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(118)由化合物40(1.16g,4.0mmol)和Boc-Pro-OH按照制備化合物100的方法(方案ⅩⅧ)制得1.53g(94％收率)的標(biāo)題化合物，為白色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.61(br,9H),1.88(br,2H),2.00-2.50(m,3H),2.80-3.10(m,H),3.20-3.60(m,2H),4.05-4.45(m,1.5H),4.58-4.80(m,1.5H),4.83-4.98(m,H),5.43-5.53(m,H),7.26-7.45(m,5H),7.60-7.80(d,H)；分析HPLC:11.32min；LC-MS:m/e=405(M+H+)。
2-苯基氨基丙酸(119)將丙氨酸(356mg,4.0mmol)，碘代苯(816mg,4.0mmol)，反-二氯雙(三-o-甲苯基膦)鈀(Ⅱ){Pd[P(o-Tol)3]2Cl2}(160mg,0.2mmol)，碘化銅(Ⅰ)(40mg,0.2mmol)，碳酸鉀(552mg,4.0mmol)，芐基三乙基氯化銨(160mg,0.8mmol)，三乙胺(1.6mL)和水(0.8mL)在DMF(8mL)中的混合物，在氮?dú)夥障略?00℃下攪拌20小時。將此混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀釋，用6N HCl酸化至pH=2至3。用乙酸乙酯(50mL×4)萃取水層。將合并的有機(jī)層用水、鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾和真空蒸發(fā)得到紅色油狀物。進(jìn)行快速色譜己烷/乙酸乙酯/乙酸(95/5/0.5至80/20/0.5)洗脫得到300mg(45％收率)的標(biāo)題化合物，為粉紅色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3/CD3OD=0.5ml/3滴)δ1.45(d,3H),4.02-4.15(m,H),6.57-6.70(m,3H),7.11-7.25(m,2H)；分析HPLC:6.10分鐘。LC-MS:m/e=166(M+H+)。
1-(2-苯基氨基-丙酰基)-吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺(120a和120b)將化合物118(405mg,1.0mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液用TFA(2mL)處理1小時。將反應(yīng)溶液真空蒸發(fā)并與二氯甲烷共沸4次，得到吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺，為淡黃色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.87-2.15(m,4H),2.30-2.70(m,2H),2.80-3.08(m,H),3.45(br,2H)4.35-4.98(m,3H),5.30-5.56(m,H),7.10-7.60(m,5H)分析HPLC:7.78/8.20分鐘；LC-MS:m/e=305(M+H+)。
2-苯基氨基丙酸(119)(300mg,1.8mmol)在二氯甲烷(10mL)中用HOBt(270mg,2.0mmol)和EDC(2.1g,11mmol)在0℃處理10分鐘。加入二異丙基乙胺(2mL)，隨后加入吡咯烷-2-甲酸(2-芐氧基-5-氧代-四氫呋喃-3-基)-酰胺的二氯甲烷(10mL)溶液。將此混合物室溫下攪拌4小時，用二氯甲烷(40mL)稀釋，用水、然后用鹽水洗滌。將此有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾和真空蒸發(fā)得到淡黃色固體。進(jìn)行快速色譜用二氯甲烷/甲醇(99/1至98/2)洗脫，得到151mg(33％收率)的標(biāo)題化合物的反式非對映異構(gòu)體(120a)和129mg(29％收率)的順式非對映異構(gòu)體(120b)，為白色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3)反式非對映異構(gòu)體δ1.37-1.41(m,3H),1.50-2.45(m,4H),2.60-2.70(m,0.3H),2.89-2.94(m,0.7H),3.40-3.80(m,2H),4.10-4.50(m,3H),4.50-4.90(m,3H),5.26(s,0.3H),5.38(s,0.7H),6.45-6.60(m,2.3H),6.65-6.80(m,H),7.10-7.20(m,2.5H),7.25-7.50(m,4.5H),7.53-7.70(m,0.7H),7.82(d,H)。順式非對映異構(gòu)體δ0.86-0.89(m,H),1.20-1.40(m,4E),1.80-2.45(m,4H),2.80-2.86(m,H),3.58-3.65(m,2H),-4.20-4.40(m,H),4.50-4.75(m,2H),4.90(d,H),5.52(d,H),6.45-6.70(m,3H),6.75-6.85(m,H),7.10-7.20(m,2.3H),7.30-7.50(m,5.7H)；分析HPLC反式非對映異構(gòu)體10.55分鐘，而順式非對映異構(gòu)體10.62分鐘；兩種非對映異構(gòu)體LC/MS:m/e=452(M+H+)。
4-氧代-3-{[1-(2-苯基氨基-丙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基)-丁酸(121)由化合物120(151mg,0.33mmol)用方法A水解得到101mg(83％收率)的標(biāo)題化合物，為白色固體。1H-NMR(500MHz,CDCl3/CD3OD=1/1):δ1.20-1.65(m,2H),1.65-2.35(m,3H),2.40-3.00(m,H),3.20-3.80(m,2H),3.90-4.90(m,7H),7.25-7.80(m,5H)；分析HPLC:6.38分鐘；LC-MS:m/e=362(M+H+)。
制備實(shí)施方案C式Ⅰ化合物的一般方法(方案ⅩⅩⅢ-ⅩⅩⅤ)方案ⅩⅩⅢ
水解方法A將烷基半縮醛的0.005-50mmol樣品溶解于2.5NHCl/CH3CN(10/1)，并在室溫下攪拌直到反應(yīng)完畢。將所得水層用乙醚(2×20mL)洗滌并凍干得到產(chǎn)物。
水解方法B將烷基半縮醛的0.005-50mmol樣品加到純甲酸中并室溫下攪拌過夜。將此混合物用3∶1的己烷/乙醚混合物研磨，得到沉淀。傾析溶劑并用乙醚洗滌此沉淀，得到產(chǎn)物。
水解方法C將烷基半縮醛的0.005-50mmol樣品溶解于甲醇和20％Pd(OH)2/C中，并在氫氣氛下攪拌直到反應(yīng)完畢。將所得懸浮液過濾并真空濃縮此溶液，然后用3∶1的己烷/乙醚混合物研磨，得到沉淀。傾析溶劑并用乙醚洗滌此沉淀，得到產(chǎn)物。
水解方法D將存在于CH3CN/水(1/2)中的烷基半縮醛的0.005-50mmol樣品與酸性樹脂(Dowex 50w×2,H+型)搖動，直到反應(yīng)完畢。將此溶液過濾并用CH3CN/水(1/4)洗滌此樹脂。將所得水層用乙醚洗滌，真空濃縮至較小的體積，然后凍干得到產(chǎn)物。
方案ⅩⅩⅣ 4-氧代-3-[(1-(2-[9-氧代-9H-芴-4-羰基}-氨基]丙?；鶀-吡咯烷-2-羰基)-氨基)-丁酸(122a)將化合物91的109.0mg(0.19mmol)樣品按照方法A水解得到88mg(96％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 7.15分鐘。LC-MS(ES+)m/e=492.2(M+H)。 3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122b)將化合物76的51.0mg(0.096mmol)樣品按照方法A水解得到43.0mg(100％收率)的標(biāo)題化合物1H-NMR(500MHz,CD3OD/D2O:0.5mL/10滴):δ1.37-1.52(m,3H),1.80-2.20(m,3H),2.20-2.37(m,H),2.49-2.60(m,H),2.60-2.75(m,H),3.70-3.80(m,E),3.80-3.95(m,H),4.20-4.35(m,H),4.40-4.50(m,H),4.50-4.70(m,H),4.70-4.85(m,H),6.85-6.67(d,H),7.58-7.60(m,H),7.77(s,H)；分析HPLC保留時間6.54min；LC-MS:m/z=439(M+H+)。

3-({1-[2-(3,5-二氯-4-甲氧基-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122c)將化合物92的51.0mg(0.088mmol)樣本按照方法A水解得到24.0mg(56％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 6.41分鐘。LC-MS(ES+)m/e=488.3(M+H)。 3-({1-[2-(4-甲氧基-3,5-二甲基-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122d)將化合物77的55.0mg(0.102mmol)樣品按照方法A水解得到44.0mg(96％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC(C18)8.70分鐘，1H-NMR(CDCl3,500Mhz)δ1.23-1.70(m,3H),1.80-2.70(m,10H),2.70-3.15(m,2H),3.58-4.20(m,5H),4.32-5.50(m,3H),5.60-6.00(m,H),6.80-7.90(m,4H)；LC-MS(ES+) m/e=448.2(M+H)。 4-氧代-3-[(1-{2-[(吡啶-2-羰基)-氨基]-丙?；鶀吡咯烷-2-羰基)-氨基]-丁酸(122e)將化合物88的55.0mg(0.114mmol)樣品按照方法A水解得到30.0mg(67％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 4.60分鐘。LC-MS(ES+)m/e=391.3(M+H)。 3-({1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122f)將化合物78的52mg(0.091mmol)樣品按照方法A水解得到40mg(91％收率)的標(biāo)題化合物1H NMR(500MHz,CD3OD)δ1.08-1.61(m,3H),3.77-2.41(m,3H),2.21(s,3H),2.41-2.77(m,2H),3.43-3.63(m,0.3H),3.65-3.76(m,1H),3.81-3.94(m,1H),4.18-4.34(m,1H),4.42-4.64(m,1.7H),4.77(q,1H),7.79(dd,1H)；分析HPLC 4.97分鐘。LC-MS(ES+) m/e=481.3(M+H)。 3-({1-[2-(4-氨基-3,5-二氯-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122g)將化合物89的44.3mg(0.079mmol)樣品按照方法A水解得到30mg(81％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 5.40分鐘。LC-MS(ES+)m/e=473.2(M+H)。

3-({1-[2-(3-異丙氧基-苯甲?；被?-丙?；鵠吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122h)將化合物79的52.0mg(0.097mmol)樣品按照方法A水解得到30.0mg(69％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 8.92分鐘。LC-MS(ES+)m/e=448.3(M+H)。 3-({1-[2-(3-芐氧基-4-甲氧基-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122i)將化合物81的50.8mg(0.082mmol)樣品按照方法A水解得到22.4mg(52％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 6.72分鐘。LC-MS(ES+)m/e=526.3(M+H)。 4-氧代-3-[(1-{2-[(喹喔啉-2-羰基)-氨基]-丙?；鶀-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-丁酸(122j)將化合物80的38.0mg(0.072mmol)樣品按照方法A水解得到32.0mg(100％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 5.95分鐘。LC-MS(ES+)m/e=442.3(M+H)。

3-({1-[2-(3,5-二氯-4-羥基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122k)將化合物83的35mg(0.060mmol)樣品按照方法A水解得到29.4mg(75％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 7.91分鐘。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ1.47(m,3H).1.8-2.3(m,4H),2.49(m,1H),2.61(m,1H),3.5(br m,0.2H),3.69(br m,0.9H),3.84(br m,0.9H),4.27(m,1H),4.46(m,1H),4.57(m,1H),4.73(m,1H),7.83(m,2H)ppm,LC-MS(ES+) m/e=474.1(M+H)。 3-({1-[2-(4-氨基-3-三氟甲基-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(1221)將化合物98w的10mg(0.021mmol)樣品按照方法A水解得到7.9mg(94％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 6.64分鐘。LC-MS(ES+)m/e=473.3(M+H)。 3-({1-[2-(3-氯-4-二甲基氨基-苯甲?；被?-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122m)將化合物98x的10.0mg(0.021mmol)樣品按照方法A水解得到7.0mg(84％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 5.15分鐘。LC-MS(ES+)m/e=467.3(M+H)。 3-({1-[2-(4-二甲基氨基-3,5-二氟-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122n)將化合物98y的20.0mg(0.043mmol)樣品按照方法A水解得到16.78mg(100％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 5.86分鐘。LC-MS(ES+)m/e=469.3(M+H)。 3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲?；被?-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122o)將化合物98m的20.0mg(0.046mmol)樣品按照方法A水解得到16.7mg(100％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 8.47分鐘。LC-MS(ES+)m/e=439.2(M+H)。 3-({1-[2-(4-氨基-2,3,5,6-四氟-苯甲酰基氨基)丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122p)將化合物98z的20.0mg(0.042mmol)樣品按照方法A水解得到15.3mg(91％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 7.90分鐘。LC-MS(ES+)m/e=477.2(M+H)。 4-氧代-3-[(1-{2-[(喹啉-6-羰基)-氨基]丙?；鶀-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-丁酸(122q)將化合物93的44mg(0.080mmol)樣品按照方法A水解得到41mg(100％收率)的標(biāo)題化合物1H NMR(500MHz,CD3OD)δ1.24-1.69(m,3H)1.75-2.37(m,4H),2.39-2.87(m,2H),3.46-4.04(m,2H),4.11-4.77(m,3H),8.19(dd,1H),8.33(d,1H)8.56-8.58(m,1H),8.85(s,1H),9.27-9.39(m,2H)；分析HPLC 4.91分鐘。LC-MS(ES+) m/e=441.2(M+H)。 3-({1-[2-(4-乙?；被?5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122r)將化合物87的44.5mg(0.074mmol)樣品按照方法A水解得到34.5mg(91％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 6.88分鐘。LC-MS(ES+)m/e=511.2(M+H)。

3-[(1-{2-[3-氯-4-(2,2-二甲基-丙?；被?苯甲酰基氨基]-丙?；鶀-吡咯烷-2-羰基)氨基]-4-氧代-丁酸(122s)將98aa的19.0mg(0.036mmol)樣品按照方法A水解得到14.5mg(90％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 7.28分鐘。LC-MS(ES+)m/e=523.3(M+H)。 3-({1-[2-(3-氯-4-丙?；被?苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122t)將98ab的21.0mg(0.042mmol)樣品按照方法A水解得到17.5mg(97％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 5.72分鐘。LC-MS(ES+)m/e=495.2(M+H)。 3-({1-[2-(3-氯-4-苯基乙酰基氨基-苯甲?；被?丙?；鵠-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(122u)將98ac的10.0mg(0.017mmol)樣品按照方法A水解得到7.9mg(85％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 7.52分鐘。LC-MS(ES+)m/e=557.2(M+H)。

3-[(1-{2-[3-氯-4-(3-甲基-丁酰基氨基)苯甲?；被鵠-丙?；鶀-吡咯烷-2-羰基}-氨基]-4-氧代-丁酸(122v)將98ad的8.0mg(0.015mmol)樣品按照方法A水解得到6.5mg(96％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 6.92分鐘。LC-MS(ES+)m/e=523.2(M+H)。
方案ⅩⅩⅤ 108a,X=Cl,Y=NH2,Z=H,Q1=F,Q2=H116b,X=Cl,Y=AcNH,Z=H,Q1=Q2=F116c,X=Cl,Y=AcNH,Z=CH3O,Q1=Q2=F 123a,X=Cl,Y=NH2,Z=H,Q1=F,Q2=H123b,X=Cl,Y=AcNH,Z=H,Q1=Q2=F123c,X=Cl,Y=AcNH,Z=CH3O,Q1=Q2=F3-({1-[2-(4-氨基-3-氯-苯甲酰基氨基)-丙?；鵠-4-氟-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(123a)將108b的12.4mg(0.022mmol)樣品按照方法A水解得到9.6mg(93％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 6.99分鐘。LC-MS(ES+)m/e=473.2(M+H)。
3-({1-[2-(4-乙?；被?3-氯-苯甲?；被?丙?；鵠-4,4-二氟-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(123b)將116b的26.2mg(0.043mmol)樣品按照方法A水解得到10.8mg(49％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 9.89分鐘。LC-MS(ES+)m/e=517.2。
3-({1-[2-(4-乙酰基氨基-3-氯-2-甲氧基苯甲?；被?-丙酰基]-4,4-二氟-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-氧代-丁酸(123c)
將116c的23.1mg(0.036mmol)樣品按照方法A水解得到1.8mg(9％收率)的標(biāo)題化合物分析HPLC 11.87分鐘。LC-MS(ES+)m/e=547.1(M+H)。
生物學(xué)方法用下述方法獲得選擇的本發(fā)明混合物的體外、離體和體內(nèi)數(shù)據(jù)。結(jié)果見表2-8。符號“ND”表示此混合物在所述實(shí)驗(yàn)中沒有檢測。
在ICE卡斯帕酶實(shí)驗(yàn)中，“A”項(xiàng)表示＜10nM的抑制?！癇”項(xiàng)表示10-1000nM的抑制?！癈”項(xiàng)表示＞1000nM的抑制。見表2和3。
在PBMC檢測中，“A”項(xiàng)表示＜500nM的抑制?！癇”項(xiàng)表示500-1000nM的抑制。“C”項(xiàng)表示1001-2000nM的抑制。“D”項(xiàng)表示＞2000nM的抑制。見表4。
在全血實(shí)驗(yàn)中，“A”項(xiàng)表示＜2500nM的抑制。“B”項(xiàng)表示2500-7500nM的抑制。“C”項(xiàng)表示＞7500nM的抑制。見表5。
在原位代謝實(shí)驗(yàn)中，[f(g)×f(h)]值描述如下“A”項(xiàng)表示＜0.25?！癇”項(xiàng)表示0.25-0.49?！癈”項(xiàng)表示0.5-0.75?！癉”項(xiàng)表示＞0.75。膽汁分泌檢測中，“A”項(xiàng)表示＜5％?！癇”項(xiàng)表示5-10％?！癈”項(xiàng)表示＞10％。見表6。
在靜脈清除實(shí)驗(yàn)中，數(shù)值報告如下“A”項(xiàng)表示＜50。“B”向表示50-80?！癈”項(xiàng)表示＞80。見表7。
在生物利用度實(shí)驗(yàn)中，Cmax值(μg/ml)描述如下“A”項(xiàng)表示＜2.5。“B”項(xiàng)表示2.5-5.0?！癈”項(xiàng)表示＞5.0。AUC值(μg×hr/ml)描述如下“A”項(xiàng)表示＜2.5?！癇”項(xiàng)表示2.5-5.0。“C”項(xiàng)表示＞5.0。半衰期(小時)范圍描述如下“A”項(xiàng)表示＜1.5?！癇”項(xiàng)表示1.5-2.0。“C”項(xiàng)表示＞2.0。F值(％)描述如下“A”項(xiàng)表示＜33?！癇”項(xiàng)表示33-67?！癈”項(xiàng)表示＞67。見表8。
體外實(shí)驗(yàn)酶抑制通過Margolin等(J.Biol.Chem.,272pp.7223-7228(1997))的方法獲得被測化合物對不同卡斯帕酶的Ki值。在37℃，檢測在10mM Tris(Sigma Corp,St Louis MO)pH 7.5,1mM二硫蘇糖醇(DTT,Research organic INC,Cleveland,OH)和0.1％CHAPS(Pierce,Rockford IL)中檢測。對于卡斯帕酶-3，將8％甘油加入到檢測緩沖液中，以改善酶穩(wěn)定性。將65μL等份的檢測緩沖液和5μL等份的適當(dāng)稀釋度的存在于DMSO中的抑制劑加入到96孔板中，用10μL卡斯帕酶處理，然后在實(shí)驗(yàn)緩沖液中稀釋(由活性位點(diǎn)滴定測定的0.5-40nM活性蛋白)。對于每個測定包括含DMSO但不含化合物的對照。然后在加入適當(dāng)?shù)牡孜?20μL，最終濃度1-4XKM，最終實(shí)驗(yàn)體積100μL)前，將板在37℃溫育15分鐘以引發(fā)反應(yīng)。在37℃下檢測反應(yīng)速度，該檢測是通過在405nM(對于pNA底物)的吸收值隨時間的增加或熒光(Ex,390,Em460)(對于AMC底物)隨時間的增加。將所得速度相對于抑制劑的濃度繪制曲線，而地此數(shù)據(jù)符合競爭抑制劑的Morrison緊密結(jié)合方程(Morrison,J.F.,Biochem.Biophys.Acta,185pp.269-286(1969))。用于每個實(shí)驗(yàn)的底物如下卡斯帕酶-1 Suc-YVAD-pNA(Bachem,King of Prussia,PA)(實(shí)驗(yàn)中最終濃度80μM)，卡斯帕酶-3 Ac-DEVD-pNA(Bachem,-King of Prussia,PA)(實(shí)驗(yàn)中的最終濃度，60μM)，卡斯帕酶-4 AC-WERD-AMC(Synpep,Dublin,CA)(實(shí)驗(yàn)中的最終濃度為20μM)，卡斯帕酶-7 AC-DEVD-AMC(Bachem,King of Prussia,PA)(實(shí)驗(yàn)中的最終濃度50μM)，卡斯帕酶-8 Ac-DEVD-pNA(Bachem,King of Prussia,PA)(實(shí)驗(yàn)中的最終濃度80μM)。
表2．卡斯帕酶-1抑制數(shù)據(jù)









表3．卡斯帕酶-3，卡斯帕酶-4和卡斯帕酶-8抑制數(shù)據(jù)

PBMC細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用人外周學(xué)單核細(xì)胞(PBMC)或富含粘著單核細(xì)胞的混合群落進(jìn)行的IL-1β實(shí)驗(yàn)用多種細(xì)胞來源檢測細(xì)胞培養(yǎng)物中ICE加工原-IL-1β的情況。人PBMC得自健康的供者，該供者提供了淋巴細(xì)胞亞型和單核細(xì)胞的混合群落，該群落產(chǎn)生細(xì)胞介素和細(xì)胞因子對很多類型的生理刺激因子的反應(yīng)譜。得自PBMC的粘著單核細(xì)胞提供了正常單核細(xì)胞的豐富來源，該細(xì)胞被用于選擇研究被激活細(xì)胞的細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
實(shí)驗(yàn)方法制備被測化合物在DMSO或乙醇中的起始稀釋系列，再隨后用RPMI-10％FBS介質(zhì)稀釋(含2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES,50 U和50μg/ml pen/strep)分別至以最終實(shí)驗(yàn)濃度的4倍得到藥物濃度，其中含0.4％DMSO或0.4％乙醇。對于所有藥物的稀釋度DMSO的最終濃度是0.1％。在ICE抑制實(shí)驗(yàn)中檢測的滴定濃度，其在括號中表示被測化合物的表觀Ki，一般用于主要化合物篩選。
一般來說，檢測5-6化合物稀釋度且該實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞組份以雙份進(jìn)行，包括對每個細(xì)胞培養(yǎng)物上清液的雙份ELISA檢測。
PBMC分離和IL-1實(shí)驗(yàn)由一個品脫人血中分離的血沉棕黃色層細(xì)胞(最終得到40-45ml最終體積的血漿加細(xì)胞)，用介質(zhì)稀釋至80mL，且每個LeukoPREP分離試管(Becton Dickinson)中都用10ml細(xì)胞懸浮液覆蓋。以1500-1800xg離心15分鐘后，將血漿/介質(zhì)層吸出，然后用Pasteur吸量管收集單核細(xì)胞層，并轉(zhuǎn)移至15ml圓錐離心管(Corning)中。加入介質(zhì)使體積達(dá)到15ml，通過翻轉(zhuǎn)小心混合細(xì)胞并以300xg離心15分鐘。將PBMC沉淀再懸浮于小體積的介質(zhì)中，計數(shù)細(xì)胞并調(diào)節(jié)至6×106細(xì)胞/ml。
對于細(xì)胞檢測，將1.0ml的細(xì)胞懸浮液加至24孔平底組織培養(yǎng)板(Corning)的每個孔中，加入0.5ml被測化合物稀釋液和0.5mlLPS溶液(Sigma #L-3012；20ng/ml溶液，在完全RPMI介質(zhì)中制備；最終LPS濃度5ng/ml)。加入0.5ml被測化合物而LPS一般足以混合孔中的內(nèi)容物。每個實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3個對照，其為單獨(dú)的LPS、溶劑載體對照和/或其它調(diào)節(jié)最終培養(yǎng)體積至2.0ml的介質(zhì)。將細(xì)胞培養(yǎng)物在37℃下5％二氧化碳存在下溫育16-18小時。
在溫育期后，收獲細(xì)胞并將其轉(zhuǎn)移至15ml圓錐型離心管中。以200xg離心10分鐘后，收集上清液并轉(zhuǎn)移至1.5ml Eppendorf管中。注意可以在胞質(zhì)溶質(zhì)提取物中通過Western印跡或ELISA用原-IL-1β特異性抗血清，可以用細(xì)胞沉淀進(jìn)行原-IL-1β和/或成熟IL-1β含量的生物評價。
分離粘著單核細(xì)胞分離PBMC并如上所述制備。先將介質(zhì)(1.0ml)加入到孔中，隨后加入0.5ml的PBMC懸浮液。溫育1小時后，將板輕輕搖動并從每個孔中吸出非粘著細(xì)胞。然后用1.0ml介質(zhì)將孔輕輕洗滌3次，并最后懸浮于1.0ml介質(zhì)。濃集粘附細(xì)胞一般得到2.5-3.0×105細(xì)胞/每孔。被測化合物的加入、LPS、細(xì)胞溫育條件和上清液的處理方法如上所述。
ELISA:
Quantikine試劑盒(R & D Systems)可以用于檢測成熟IL-1β。按照制造商的說明進(jìn)行檢測。在PBMC和粘著單核細(xì)胞陽性對照中觀察到成熟IL-1β濃度為約1-3ng/ml。對LPS陽性對照的1∶5、1∶10和1∶20稀釋度的上清液進(jìn)行ELISA檢測以選擇實(shí)驗(yàn)組中的上清液的最佳稀釋度。
化合物的抑制效果可以由IC50值表示，該值是與陽性對照比較上清液中檢測到50％成熟IL-1β的抑制劑濃度。
熟練的操作者意識到在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中得到的值可能依賴于多種因素。這些值可能不需要表示精細(xì)定量的結(jié)果。
表4．PBMC細(xì)胞檢測數(shù)據(jù)







IL-1β產(chǎn)生的全血實(shí)驗(yàn)本發(fā)明化合物的全血檢測IC50值用如下方法獲得目的全血檢測是檢測IL-1β(或其它細(xì)胞因子)產(chǎn)生和潛在抑制劑活性的簡單方法。此檢測系統(tǒng)的復(fù)雜性、其淋巴和炎性細(xì)胞類型的完全補(bǔ)體、血漿蛋白的譜和紅細(xì)胞是表示人體內(nèi)生理?xiàng)l件的理想體外指標(biāo)。
材料無熱原注射器(約30cc)無熱原滅菌真空管，含凍干的Na2EDTA(4.5mg/10ml試管)人全血樣品(約30-50cc)1.5ml Eppendorf管被測化合物貯存液(約25mM，在DMSO或其它溶劑中)無內(nèi)毒素氯化鈉溶液(0.9％)和HBSS脂多糖(Sigma；Cat.#L-3012)貯存液，1mg/ml在HBSS中IL-1β ELISA試劑盒(R & D Systems；Cat # DLB50)TNFαELISA試劑盒(R & D Systems；Cat # DTA50)
水浴或溫育器全血檢測實(shí)驗(yàn)方法將溫育器或水浴設(shè)定在30℃。將0.25ml等份的血液加入1.5ml Eppendorf管。注意在每加兩個等份的血液后確保將全血樣品管倒轉(zhuǎn)。如果細(xì)胞沉淀沒有均勻懸浮則可能在重復(fù)實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生不同的結(jié)果。用陽性移液管可能也會減少重復(fù)等份之間的差異。
在滅菌的、無熱原鹽水中通過系列稀釋制備藥物的倍比稀釋液。在ICE抑制檢測中測定的被測化合物的系列稀釋度(其中在括號中表明了表觀Ki)一般用于主要化合物的篩選。對于極度疏水化合物，在由相同的血液供者獲得的新鮮血漿或在含5％PBS的DMSO中，制備化合物的稀釋液以提高溶解度。
加入25μl被測化合物的稀釋液或載體對照并輕輕混合樣品。然后加入5.0μl LPS溶液(250ng/ml由貯存液制備的新鮮溶液LPS最終濃度為5.0ng/ml)，并再次混合。在30℃下在水浴中溫育此試管16-18小時，不時混合?；蛘?，可以將此試管置于搖床中，在相同的溫育時期設(shè)置為4rpm。用下列對照可以將此實(shí)驗(yàn)進(jìn)行一式兩份或一式三份陰性對照(無LPS)；陽性對照(無被測抑制劑)；載體對照(最高濃度的DMSO或用于此實(shí)驗(yàn)的化合物溶劑)。向所有對照管中再加入鹽水以校準(zhǔn)對照和實(shí)驗(yàn)全血被測樣本的體積。
溫育期后，將全血在約2000rpm下在小型離心機(jī)中離心，如果需要將血漿轉(zhuǎn)移至小型離心管中并在1000xg離心以沉淀殘余的血小板。在通過ELISA檢測細(xì)胞因子水平前，血漿樣品可以在-70℃冷凍保存。
ELISA可以用R & D Systems(614 McKinley Place N.E.Minneapolis,MN 55413)Quantikine試劑盒檢測IL-1β和TNF-α。按照制造商的說明進(jìn)行這些檢測。在個體范圍中在陽性對照內(nèi)可以觀察到約1-5ng/ml水平的IL-1β。對于所有樣品血漿1∶200的稀釋度通常足以用于實(shí)驗(yàn)，使ELISA的結(jié)果符合ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍。如果在全血檢測中觀察到不同結(jié)果，可能需要將標(biāo)準(zhǔn)稀釋度最佳化。Nerad,J.L.等，J.Leukocyte Biol.,52,pp.687-692(1992)。
表5．全血檢測數(shù)據(jù)






離體檢測代謝和分泌進(jìn)行大鼠的一過性灌注研究以評價胃腸道(GI)壁代謝(f(g))，干代謝(f(h))和膽汁分泌。所用方法描述于Pang,C.S.,J.Pharmacol.Exp.Therapeutics,333,pp.788-798(1984)。
表6．代謝和分泌數(shù)據(jù)


體內(nèi)檢測體內(nèi)大鼠清除檢測-清除率本發(fā)明化合物在大鼠中的清除率(ml/min/kg)，可以用如下方法得到典型方法在藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)前，在麻醉下給大鼠進(jìn)行頸靜脈和頸動脈插管。M.J.Free,R.A.Jaffee；“收集血液和其它體液的插管技術(shù)”Animal Models；p.480-495；N.J.Alexander編輯；Academic Press,(1978)。通過頸靜脈給藥(10mg/ml)的載體通常組成為丙二醇/鹽水，含100mM碳酸氫鈉，比率為1∶1。以10-20mg藥物/kg給動物用藥，并在0,2,5,7,10,15,20,30,60和90分鐘從深處的頸動脈中采集血樣。將此血樣離心得到血漿并在-20℃下保存以備分析。通過非線性回歸法用標(biāo)準(zhǔn)軟件如Rstrip(MicroMath Software,UT)和/或Pcnonlin(SCI Software,NC)進(jìn)行數(shù)據(jù)的藥動學(xué)分析以得到清除率數(shù)值。
典型分析用等體積的乙腈(含0.1％TFA)提取鼠血漿。然后將樣本在約1000xg離心，并通過梯度HPLC分析上清液。典型的分析方法描述如下。
用200μL的0.1％三氟乙酸(TFA)的乙腈溶液和10μL的50％氯化鋅水溶液將200μL血漿沉淀，旋搖，然后以約1000xg離心，并收集上清液并通過HPLC分析。
HPLC方法柱Zorbax SB-CN(4.6×150mm),(5μ粒度)柱溫度50℃流速1.0mL/min注射體積75μL.
流動相A=0.1％TFA在水中和B=100％乙腈所用梯度100％A至30％A(在15.5分鐘內(nèi))，0％A(在16分鐘)，100％A(在19.2分鐘)波長214nm在20,10,5,2和1μg/mL濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
表7．清除率數(shù)據(jù)

生物利用度口服藥動學(xué)研究通過肌肉內(nèi)注射氯胺酮/甲苯噻嗪混合物來麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan,Indianapolis,IN,300-350g)。將PE-50插管插入右頸動脈以備采集動脈血樣。在用于此實(shí)驗(yàn)前讓大鼠從手術(shù)過夜恢復(fù)(≥16小時)。在25％Cremophor EL/水(w/w)或100％丙二醇(PG)中，以給藥體積10mL/kg口服被測化合物。給藥后在0.25,0.50,1.0,1.5,2,3,4,6和8小時采集血樣(約0.30mL)，通過離心分離出血漿并在-20℃保存以備分析。用梯度HPLC/MS/MS或酶方法進(jìn)行血漿樣本的定量分析在大鼠血漿中定量測定ICE抑制劑的HPLC/MS/MS方法樣本的制備·將50μl的血漿等份加入Eppendorf離心管。
·向此血漿中加入等體積的乙腈以沉淀血漿蛋白。
·將樣品翻轉(zhuǎn)5分鐘，并以14,000rpm離心5分鐘。
·將75μL的上清液加入到12mm HPLC液體樣本小瓶中。
·注射50μL樣本通過質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。
HPLC儀器參數(shù)HPLC:Hewlett Packard HP1100二元溶劑轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。
HPLC梯度體積A=水0.2％甲酸B=乙腈0.2％甲酸流動相時間 ％A ％B0 100 02 100 05 0 100110 10011.5 100 017100 0HPLC分析柱Keystone Phenyl-2 Hypersil 2.0×100mm,5μ120?？讖剑琍/N# 105-39-2注射體積50μl流速0.20mL/分鐘。
質(zhì)譜儀器參數(shù)儀器P E Sciex API-365 Tandem質(zhì)譜儀離子化技術(shù)Turbo-Ionspray(ESI)極性正存在時間300msec暫停時間5msec掃描時間0.9sec掃描狀態(tài)MRM(多反應(yīng)監(jiān)控)用于大鼠血漿中ICE抑制劑定量檢測的ICE酶檢測用150μL乙腈提取50μL血漿，超聲波處理，旋轉(zhuǎn)，以10000xg離心，并將180μL上清液在Sorvall旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中室溫下干燥。超聲波處理下，將樣本再溶解于100μL緩沖液(10mM tris-HCl,pH7.5,含0.1％CHAPS,1mM DTT)中。將10μL每個樣本與10μL ICE(1.1mg/mL)在微量滴定板中與60μL緩沖液混合。將樣本室溫下溫育15分鐘，然后加入20μL Succ YVAD-pNA(400μM，預(yù)溫至37℃)，并用SpectraMax讀數(shù)器在405nm監(jiān)控此板20分鐘。此數(shù)據(jù)符合用符合SpectraMax軟件的4個參數(shù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線。此檢測從0.15至2.0-3.0μg/mL醛是線性的。
藥代動力學(xué)參數(shù)用非分隔法進(jìn)行這些血漿濃度數(shù)據(jù)的藥代動力學(xué)分析。從0至最近檢測時間點(diǎn)用線性梯形規(guī)則估計曲線下的面積(AUC(0-t))。通過對數(shù)線性回歸由血漿濃度時間曲線的最終相估計清除速率(Ke)。在曲線尾部的面積估價為最近檢測濃度與Ke的比例。從時間0至無窮大曲線下面積(AUC(0-∝))是通過加上尾部至AUC(0-t)面積獲得的。清除半衰期估計為0.693/ke。記錄觀察到的峰值血漿濃度(Cmax)值。對前藥的研究醛利用度(生物利用度)計算為(AUC醛/前藥p.o.)/(AUC醛/醛i.v.)×(醛的給藥量，醛i.v./前藥的給藥量，前藥p.o.)×(MW前藥/MW醛)。
表8．生物利用度數(shù)據(jù)

抗病毒檢測本發(fā)明化合物治療或預(yù)防抗病毒相關(guān)疾病、紊亂或病癥的效果，可在多種體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中評價。例如，可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以測定這些化合物抑制與病毒感染有關(guān)的炎性反應(yīng)的能力。體外實(shí)驗(yàn)可以使用全細(xì)胞或分離的細(xì)胞組份。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)包括病毒疾病的動物模型。這些動物模型的實(shí)例包括但不限于HBV或HCV感染的嚙齒類動物模型，HBV感染的土撥鼠模型和HCV感染的黑猩猩模型。
本發(fā)明的化合物也可以在動物模型中評價治療酒精引起的疾病的結(jié)果。
可以用于評價本發(fā)明化合物的其它實(shí)驗(yàn)公開于PCT申請PCT/US96/20843(公開于1997年6月26日)，公開號WO 97/22619。這些實(shí)驗(yàn)包括在小鼠中的體內(nèi)藥代動力學(xué)研究，抑制ICE類似物，抑制編程性細(xì)胞死亡，體內(nèi)抗炎性效果的急性實(shí)驗(yàn)，檢測藥物的血液濃度，IGIF實(shí)驗(yàn)，小鼠角叉菜膠腹膜炎實(shí)驗(yàn)和Ⅱ型膠原誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明化合物在體外能抑制卡斯帕酶，特別是ICE，并還可以給哺乳動物口服給藥，它們對治療IL-1、編程性細(xì)胞死亡、IGIF和IFN-γ介導(dǎo)疾病具有明顯的臨床用途。
雖然我們已描述了一些本發(fā)明的實(shí)施方案，但是顯然我們的基礎(chǔ)內(nèi)容是可以改變的，這樣可以提供其它實(shí)施方案，這些方案用于本發(fā)明的產(chǎn)物和方法。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ表示的化合物 其中Y是(a) 條件是當(dāng)R7是羥基時，Y也可以是(b) X是-C(R3)2-或-N(R3)-；m是0或1；R1是H、-R8、-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或者每個R3與和它連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)環(huán)系，或者R2和一個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R4是-H而每個R5獨(dú)立地是H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或者R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R6是-H；R7是-OH,-OR8或-N(H)OH；每個R8獨(dú)立地是-烷基，-環(huán)烷基，-芳基，-雜芳基，-雜環(huán)基，-烷基環(huán)烷基-烷基芳基，-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R9獨(dú)立地是-芳基，-雜芳基，環(huán)烷基或-雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)O烷基、-N(H)C(O)O芳基、-N(H)C(O)O烷芳基、-N(H)C(O)O雜芳基、-N(H)C(O)O烷基雜芳基、-N(H)C(O)O環(huán)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)N(H)芳基、-N(H)C(O)N(H)烷芳基、-N(H)C(O)N(H)雜芳基、-N(H)C(O)N(H)烷基雜芳基、-N(H)C(O)N(H)環(huán)烷基、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；而每個R11獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-烷基、-環(huán)烷基、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2。
2．式Ⅰ表示的化合物， 其中Y是 條件是當(dāng)R6不是氫原子時，R6和Y與它們連接的氮原子一起形成環(huán)(g) X是-C(R3)2-或-N(R3)-；m是0或1；R1是H、-R8,-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或者每個R3與和它連接的原子一起形成3至7個元環(huán)或雜環(huán)環(huán)系，或者R2和一個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R4是-H而每個R5獨(dú)立地是H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9,或者R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R6是-H；每個R8獨(dú)立地是-烷基，-環(huán)烷基，-芳基，-雜芳基，-雜環(huán)基，-烷基環(huán)烷基-烷基芳基，-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R9獨(dú)立地是-芳基，-雜芳基，環(huán)烷基或-雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)O烷基、-N(H)C(O)O芳基、-N(H)C(O)O烷芳基、-N(H)C(O)O雜芳基、-N(H)C(O)O烷基雜芳基、-N(H)C(O)O環(huán)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)N(H)芳基、-N(H)C(O)N(H)烷芳基、-N(H)C(O)N(H)雜芳基、-N(H)C(O)N(H)烷基雜芳基、-N(H)C(O)N(H)環(huán)烷基、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；而每個R11獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-烷基、-環(huán)烷基、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2H2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2；R12是-C(O)烷基、-C(O)環(huán)烷基、-C(O)鏈烯基、-C(O)烷芳基、-C(O)烷基雜芳基、-C(O)雜環(huán)基或-C(O)烷基雜環(huán)基；而R13是-H，-烷基，-芳基，-烷芳基或-烷基雜芳基。
3．式Ⅰ表示的化合物 其中Y是(a) 或 m是0或1；X是-C(R3)2-；R1是H、-R8、-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或每個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R4是-H而每個R5獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，-鏈烯基-R9或-炔基-R9，或R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R6是-H；R7是-OH、-OR8、-N(H)OH或-N(H)S(O)2R8；每個R8獨(dú)立地是-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R9獨(dú)立地是-芳基，-雜芳基，環(huán)烷基或-雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)O烷基、-N(H)C(O)O芳基、-N(H)C(O)O烷芳基、-N(H)C(O)O雜芳基、-N(H)C(O)O烷基雜芳基、-N(H)C(O)O環(huán)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)N(H)芳基、-N(H)C(O)N(H)烷芳基、-N(H)C(O)N(H)雜芳基、-N(H)C(O)N(H)烷基雜芳基、-N(H)C(O)N(H)環(huán)烷基、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；而每個R11獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-烷基、-環(huán)烷基、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2；條件是如果一個R3是-H，則另一個R3不是-H。
4．式Ⅰ表示的化合物， 其中Y是 m是0或1；X是-C(R3)2-；R1是H、-R8、-C(O)R8、-C(O)C(O)R8、-S(O)2R8、-S(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)N(H)R8、-S(O)2N(H)-R8、-S(O)N(H)-R8、-C(O)C(O)N(H)R8、-C(O)CH=CHR8、-C(O)CH2OR8、-C(O)CH2N(H)R8、-C(O)N(R8)2、-S(O)2N(R8)2、-S(O)N(R8)2、-C(O)C(O)N(R8)2、-C(O)CH2N(R8)2、-CH2R8、-CH2-鏈烯基-R8或-CH2-炔基-R8；R2是-H而每個R3獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，鏈烯基-R9或炔基-R9，或每個R3與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R4是-H而每個R5獨(dú)立地是-H，氨基酸側(cè)鏈，-R8，-鏈烯基-R9或-炔基-R9，或R4和一個R5與它們連接的原子一起形成3至7元環(huán)或雜環(huán)系統(tǒng)，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在此環(huán)系的任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；R6是-H；每個R8獨(dú)立地是-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R9獨(dú)立地是-芳基，-雜芳基，環(huán)烷基或-雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何烷基或環(huán)烷基碳原子上的氫原子選擇性地被R10代替，結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；每個R10獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)O烷基、-N(H)C(O)O芳基、-N(H)C(O)O烷芳基、-N(H)C(O)O雜芳基、-N(H)C(O)O烷基雜芳基、-N(H)C(O)O環(huán)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)N(H)芳基、-N(H)C(O)N(H)烷芳基、-N(H)C(O)N(H)雜芳基、-N(H)C(O)N(H)烷基雜芳基、-N(H)C(O)N(H)環(huán)烷基、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2、-烷基、-環(huán)烷基、-芳基、-雜芳基、-雜環(huán)基、-烷基環(huán)烷基、-烷芳基、-烷基雜芳基或-烷基雜環(huán)基，其中結(jié)合在任何芳基或雜芳基碳原子上的氫原子選擇性地被R11代替，結(jié)合在任何氮原子上的氫原子選擇性地被R1代替；而每個R11獨(dú)立地是-OH、-SH、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-CN、-NH2、-CO2H、-C(O)NH2、-N(H)C(O)H、-N(H)C(O)NH2、-烷基、-環(huán)烷基、-全氟代烷基、-O-烷基、-O-芳基、-O-烷芳基、-N(H)烷基、-N(H)芳基、-N(H)-烷芳基、-N(烷基)2、-C(O)N(H)烷基、-C(O)N(烷基)2、-N(H)C(O)烷基、-N(H)C(O)N(H)烷基、-N(H)C(O)N(烷基)2、-S-烷基、-S-芳基、-S-烷芳基、-S(O)2烷基、-S(O)烷基、-C(O)烷基、-CH2NH2、-CH2N(H)烷基或-CH2N(烷基)2；R12是-C(O)烷基、-C(O)環(huán)烷基、-C(O)鏈烯基、-C(O)烷芳基、-C(O)烷基雜芳基、-C(O)雜環(huán)基或-C(O)烷基雜環(huán)基。
5．權(quán)利要求2或4的化合物，其中Y是 而V是CH3O， 或
6．權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其中R4和一個R5與它們連接的原子一起形成選自如下的環(huán)系 或
7．權(quán)利要求6的化合物，其中一個R3是-H，而另一個R3是甲基、異丙基、叔丁基、-CH2SR8、-CH2SO2R8、-CH2CH2SR8或-CH2CH2SO2R8。
8．權(quán)利要求7的化合物，其中一個R3是-H，而另一個R3是甲基。
9．權(quán)利要求8的化合物，其中R1是-C(O)R8或-C(O)C(O)R8。
10．權(quán)利要求6的化合物，其中R4和一個R5與它們連接的原子一起形成環(huán)系 而另一個R5是H。
11．權(quán)利要求10的化合物，其中一個R3是-H而另一個R3是甲基。
12．權(quán)利要求11的化合物，其中R1是-C(O)R8或-C(O)C(O)R8。
13．權(quán)利要求10的化合物，其中R10是4-氟或4,4-二氟。
14．權(quán)利要求13的化合物，其中一個R3是-H而另一個R3是甲基。
15．權(quán)利要求14的化合物，其中R1是-C(O)R8或-C(O)C(O)R8。
16．權(quán)利要求1或3的化合物，選自5a-5bd,7a-7at,9a-9g,15a-15f,16a-16b,17a-17e,18a-18f,20a-20t,23a-23i,24a-24e,25a-25e,26a-26h,27a-27n,28a-28c,29a-29s,32a-32e,34,42,46,52,56,57,61,65,69,73,121,122 a-v及123 a-c。
17．權(quán)利要求4的化合物，選自41,45,51,56,60,64,68,72,76-93,98a-z,aa-az和ba-bb,101,102a,102b,108a-d,110,111,116a-h及120a和b。
18．藥物組合物，其中含有a)權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物；和b)藥用載體、輔劑或載體。
19．治療或預(yù)防患者中選自如下疾病的方法，該方法包括給所述患者使用權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物或權(quán)利要求18的藥物組合物的步驟IL-1介導(dǎo)的疾病、編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞骨的紊亂、增殖紊亂、傳染病、變性疾病、壞死性疾病、酗酒引起的疾病、病毒介導(dǎo)的疾病、炎性腹膜炎、骨關(guān)節(jié)炎、胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、腎小球性腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、Graves病、自身免疫性胃炎、胰島素依賴性糖尿病(Ⅰ型)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、炎性腸疾病、克羅恩氏病、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、移植物抗宿主病、骨質(zhì)疏松、白血病及相關(guān)疾病、脊髓發(fā)育不良綜合征、與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的骨疾病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、膿毒病、膿毒性休克、志賀氏菌病、早老性癡呆、帕金森氏病、腦局部缺血、心肌局部缺血、脊柱肌肉萎縮、多發(fā)性硬化、AIDS相關(guān)腦炎、HIV相關(guān)腦炎、衰老、脫發(fā)、中風(fēng)導(dǎo)致的神經(jīng)損傷、潰瘍性結(jié)腸炎、腦外傷、器官移植排斥、乙型肝炎、丙型肝炎、G型肝炎、黃熱病、登革熱病和日本腦炎。
20．權(quán)利要求19的方法，其中疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腹膜炎、膿毒性休克、胰腺炎、腦外傷、器官移植排斥、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、牛皮癬、早老性癡呆、特應(yīng)性皮炎、白血病和相關(guān)疾病、骨髓發(fā)育不良綜合征或多發(fā)性骨髓瘤。
21．抑制患者中ICE介導(dǎo)的功能的方法，包括給所述患者使用權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物或權(quán)利要求18的藥物組合物的步驟。
22．降低患者中IGIF或IFN-γ產(chǎn)生的方法，包括給患者使用權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物或權(quán)利要求18的藥物組合物的步驟。
23．權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)所述化合物或權(quán)利要求18的藥物組合物在制備治療或預(yù)防患者的如下疾病的藥物中的用途IL-1介導(dǎo)的疾病、編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞骨的紊亂、增殖紊亂、傳染病、變性疾病、壞死性疾病、酗酒引起的疾病、病毒介導(dǎo)的疾病、炎性腹膜炎、骨關(guān)節(jié)炎、胰腺炎、哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、腎小球性腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、Graves病、自身免疫性胃炎、胰島素依賴性糖尿病(Ⅰ型)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、炎性腸疾病、克羅恩氏病、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、移植物抗宿主病、骨質(zhì)疏松、白血病及相關(guān)疾病、脊髓發(fā)育不良綜合征、與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的骨疾病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、膿毒病、膿毒性休克、志賀氏菌病、早老性癡呆、帕金森氏病、腦局部缺血、心肌局部缺血、脊柱肌肉萎縮、多發(fā)性硬化、AIDS相關(guān)腦炎、HIV相關(guān)腦炎、衰老、脫發(fā)、中風(fēng)導(dǎo)致的神經(jīng)損傷、潰瘍性結(jié)腸炎、腦外傷、器官移植排斥、乙型肝炎、丙型肝炎、G型肝炎、黃熱病、登革熱病和日本腦炎。
24．權(quán)利要求23的用途，其中疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腹膜炎、膿毒性休克、胰腺炎、腦外傷、器官移植排斥、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、牛皮癬、早老性癡呆、特應(yīng)性皮炎、白血病和相關(guān)疾病、骨髓發(fā)育不良綜合征或多發(fā)性骨髓瘤。
25．權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)所述化合物或權(quán)利要求18的藥物組合物在制備抑制患者ICE介導(dǎo)的功能的藥物中的用途。
26．權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)所述化合物或權(quán)利要求18的藥物組合物在制備降低患者的IGIF或IFN-γ產(chǎn)生的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型化合物,它們是卡斯帕酶抑制劑,特別是白介素－1β轉(zhuǎn)化酶(“ICE”)抑制劑。本發(fā)明還涉及含這些化合物的藥物組合物。本發(fā)明的這些化合物和藥物組合物特別適于抑制卡斯帕酶活性,并因此可以有利地用作抗白介素－1－(“IL－1”)、編程性細(xì)胞死亡、干擾素－γ誘導(dǎo)因子(IGIF)或干擾素－γ(“IFN－γ”)介導(dǎo)的疾病的試劑,這些疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、骨破壞疾病、增殖疾病、感染性疾病和變性疾病。本發(fā)明還涉及抑制卡斯帕酶活性和降低IGIF產(chǎn)生及IFN－γ產(chǎn)生的方法,以及用本發(fā)明的化合物和組合物治療白介素－1、編程性細(xì)胞死亡和干擾素－γ介導(dǎo)疾病的方法。本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明化合物的方法。
文檔編號A61P31/04GK1323314SQ99805973
公開日2001年11月21日 申請日期1999年3月19日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月19日
發(fā)明者M·W·溫納姆科, G·W·比米斯, P·S·查理弗森, D·J·勞弗爾, M·D·馬里坎, M·A·默科, K·P·威爾森, J·W·珍尼特卡, R·J·戴維斯, A-L·格里洛特, 施展, C·J·福斯特 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司