專利名稱：鐵－葡聚糖化合物的制法的制作方法
缺鐵貧血癥已經(jīng)被廣泛認(rèn)為是全球普通-可能是最普通-的人類的疾病。同樣，在生豬和其他家養(yǎng)動(dòng)物的現(xiàn)代飼養(yǎng)場(chǎng)中，除非采取適宜的預(yù)防措施，否則缺鐵貧血癥也是一個(gè)問題。
雖然通過口服含鐵制劑可以防止或治療缺鐵貧血癥，但是，在許多病例，優(yōu)選使用非腸道服用鐵制劑，以避免口服的生物藥效的變化和確保有效的功能。
因此，非腸道例如皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)服用的含鐵制劑在獸醫(yī)或醫(yī)師處方中已經(jīng)使用多年。
已經(jīng)將各種含鐵物質(zhì)用于或建議作為對(duì)付缺鐵貧血癥的非腸道注射制劑的成分，如含糖的氧化鐵。但是，目前可接受的最常用制劑是包括有羥基氧化鐵(或氫氧化鐵)同葡聚糖締合物的制劑，因?yàn)檫@些制劑毒性比鐵的糖合物小。葡聚糖是由微生物腸系膜明串珠菌產(chǎn)生的聚合碳水化合物。
用于非腸道注射的含鐵制劑顯然應(yīng)滿足幾項(xiàng)要求，包括在血紅蛋白合成中容易得到鐵、沒有局部或一般的副反應(yīng)以及在常溫下具有滿意的儲(chǔ)存壽命的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
用于治療貧血癥的鐵-葡聚糖制劑已經(jīng)在市場(chǎng)上銷售幾十年，從改進(jìn)這些制劑的穩(wěn)定性和減少在服用時(shí)的副反應(yīng)程度出發(fā)，在生產(chǎn)方法和原料的選擇上已經(jīng)出現(xiàn)許多變化。
下面是有關(guān)這些問題的一些專利的實(shí)例US2,885,393(1959)討論了生產(chǎn)鐵-葡聚糖復(fù)合物的基本方法，其中葡聚糖的平均分子量為30,000-80,000道爾頓或更低。在這一專利說明書中似乎沒有提到這些復(fù)合物是否適合用于人類的治療。
US Re24,642(1959)包括了對(duì)用于肌肉內(nèi)注射的鐵溶液要求的詳細(xì)解釋，在此引為參考。這篇專利提到氫氧化鐵同在25℃平均特性粘度為約0.025-0.25的葡聚糖形成的實(shí)質(zhì)上非離子的復(fù)合物，以及通過將所述的葡聚糖同鐵鹽與堿之間的反應(yīng)就地生成的氫氧化鐵接觸，以制備這種復(fù)合物的方法。除了部分解聚外，這篇專利沒有提到所說的葡聚糖的分子量以及該葡聚糖的化學(xué)改性。
US3,093,545(1963)公開了和上述最后專利非常相似的改進(jìn)的方法中的某些細(xì)節(jié)，如溫度和pH值。
GB1,200,902(1970)中提到，與就地制備氫氧化鐵相比，在控制條件下預(yù)先制成氫氧化鐵是有利的，因?yàn)檫@種氫氧化鐵同葡聚糖容易生成復(fù)合物。據(jù)說，不僅部分解聚的葡聚糖(重均分子量為500-50,000道爾頓，優(yōu)選為1,000-10,000道爾頓)，而且葡聚糖的改進(jìn)形式或衍生物如氫化葡聚糖或氧化的葡聚糖或堿處理的葡聚糖在理論上都有考慮的可能性。但是，只有唯一專門討論的葡聚糖是平均分子量分別為3,000和5,000道爾頓的氧化葡聚糖。氫氧化鐵是在同葡聚糖接觸之前預(yù)先制備的，意味著產(chǎn)物是由羥基氧化鐵組成，在其上葡聚糖形成涂層。而通過就地沉淀氫氧化鐵形成的產(chǎn)物更均勻，后者是在葡聚糖存在下發(fā)生的。
DK117,730(1970)討論一種方法，其中分子量為2,000-10,000道爾頓的氫化葡聚糖同氫氧化鐵在水介質(zhì)中反應(yīng)。用在該實(shí)施方案實(shí)施例中的葡聚糖的平均分子量沒有說明，但是，特性粘度約為0.05，這相當(dāng)于平均分子量約為5,000道爾頓。
DK122,398(1972)也公開了使用氫化的葡聚糖同氫氧化鐵制備復(fù)合化合物，并解釋說，比使用未氫化的氫氧化鐵得到的產(chǎn)物毒性低的多。該專利的題目是一種方法，其中溫的氫氧化鐵同干的氫化的葡聚糖混合，在任選加入檸檬酸或檸檬酸鹽后，將混合物加熱和提純。
US3,697,502(1972)公開了一種制備鐵-葡聚糖的方法，其中將檸檬酸加入到葡聚糖中，同時(shí)加入堿金屬氫氧化物溶液，制成氯化鐵溶液。葡聚糖的平均分子量是3,000-20,000道爾頓。用在實(shí)施方案的實(shí)施例的葡聚糖的分子量分別為7,000-10,000道爾頓。
DK129,353(1974)涉及制備氫氧化鐵-葡聚糖衍生物的類似方法，葡聚糖的平均分子量最多為50,000道爾頓，其聚合物鏈端基已通過改性將末端還原葡糖酐單元轉(zhuǎn)變?yōu)橄喈?dāng)?shù)聂人峄鶊F(tuán)。雖然對(duì)葡聚糖的分子量限制是很寬的，即500-50,000道爾頓，優(yōu)選為1,000-10,000道爾頓，但是唯一列舉的葡聚糖的平均分子量為5,000道爾頓。
DK129,942(1974)相似于上述最后的DK專利，它是討論生產(chǎn)氫氧化鐵同葡聚糖庚糖酸或糊精葡糖酸的復(fù)合物，由水解相應(yīng)的氫化氰制備庚糖酸。
US4,827,945(1989)和US5,102,652(1992)都討論了超順磁金屬氧化物，如涂以聚合物材料或同聚合物材料如葡聚糖締合的氧化鐵。將聚合物同不同氧化階段的金屬氧化物的混合物接觸，得到超順磁混合產(chǎn)物，然后將后者所有的金屬氧化物氧化成最高氧化階段。產(chǎn)物特別適用作醫(yī)學(xué)診斷中磁共振成象的造影劑。但是也提到，可以用于治療缺鐵的貧血癥。包括碳水化合物如葡聚糖的聚合物的分子量?jī)?yōu)選為5,000-250,000道爾頓。
盡管幾次試圖改進(jìn)用于治療貧血癥的鐵-葡聚糖制劑，如上面諸專利所反映的，但是，按照現(xiàn)有技術(shù)制備的制劑仍有一些缺點(diǎn)。
這是因?yàn)樵谀承┗颊咧?，這些制劑可能引起遲發(fā)的超敏反應(yīng)或嚴(yán)重的過敏的副反應(yīng)，造成如呼吸困難、低血壓、休克和死亡。也觀察到其它的毒性反應(yīng)。
此外，幾種現(xiàn)有技術(shù)的制劑不能滿足現(xiàn)在對(duì)穩(wěn)定性的要求。缺乏穩(wěn)定性可能使本身顯示出液體的凝膠化或氫氧化鐵或羥基氧化鐵的沉淀。
而且，市場(chǎng)可以購得的鐵-葡聚糖制劑對(duì)接受所說制劑的患者的血紅蛋白合成的促進(jìn)活動(dòng)使服用后更延遲，所要求的血紅蛋白的水平的重新建立比所希望的更慢。
共同未決的未公布的丹麥專利申請(qǐng)420/98(這里引為參考)公開了一發(fā)明，用此法可以克服某些上述缺點(diǎn)。所說的發(fā)明是基于下面的認(rèn)識(shí)許多特殊的缺點(diǎn)是與在用作原料的葡聚糖中存在水解不足的高分子量的葡聚糖有關(guān)，以及與在其中存在低分子量的糖化物有關(guān)。
這種認(rèn)識(shí)被用來通過膜技術(shù)生產(chǎn)鐵-葡聚糖化合物，其特征在于，包括重均分子量(MW)為700-1400道爾頓，優(yōu)選為約1,000道爾頓，數(shù)均分子量(Mn)為400-1,400道爾頓的氫化的葡聚糖，其中在同羥基氧化鐵的穩(wěn)定的締合中，90％重量的葡聚糖的分子量低于2,700道爾頓，具有最高分子量的葡聚糖的10％重量分?jǐn)?shù)的MW低于3,200道爾頓。
雖然上述丹麥專利申請(qǐng)420/98中的產(chǎn)物有了重大改進(jìn)，降低了毒性反應(yīng)，減少了引起超敏性或過敏反應(yīng)等副反應(yīng)，并改進(jìn)了穩(wěn)定性，但是仍然需要能控制最后鐵-葡聚糖化合物分子量的方法，從而，可以得到用于人和動(dòng)物機(jī)體中血紅蛋白合成中所需的鐵。
如果用重均分子量為約1,000道爾頓的葡聚糖制備含鐵15-45％的鐵-葡聚糖化合物，其中葡聚糖中幾乎所有的還原醛基已經(jīng)氫化成醇基，則表觀峰值分子量(Mp)一般約為140,000道爾頓。
希望能夠生產(chǎn)較低分子量和改進(jìn)穩(wěn)定性的鐵-葡聚糖化合物，尤其是生產(chǎn)的化合物中的鐵容易為人或動(dòng)物的有機(jī)體血紅蛋白合成所利用。
本發(fā)明是根據(jù)如下認(rèn)識(shí)如果水解的葡聚糖的還原醛基在同鐵成分反應(yīng)之前，僅僅部分氫化成醇基，而幾乎所有的其余的醛基氧化成羧基，則可以得到相當(dāng)?shù)头肿恿康姆€(wěn)定鐵-葡聚糖。當(dāng)葡聚糖已經(jīng)受到這種預(yù)處理時(shí)形成的鐵-葡聚糖的分子量明顯低于用已經(jīng)用完全氫化預(yù)處理過的相同的水解葡聚糖生成的鐵-葡聚糖的分子量。通過調(diào)節(jié)氫化的還原基團(tuán)的量與氧化的還原基團(tuán)量的比值，可以影響產(chǎn)生的鐵-葡聚糖化合物的平均分子量。但是，如果葡聚糖中氧化基團(tuán)的比例太高，則鐵-葡聚糖的穩(wěn)定性不足。從而為了得到穩(wěn)定的產(chǎn)物，在葡聚糖中還原基團(tuán)的量在氧化前不能超過相當(dāng)于15％重量的值。
這樣，本發(fā)明討論生產(chǎn)低分子量和窄分子量分布的穩(wěn)定鐵-葡聚糖化合物的方法，在本方法中，葡聚糖的分子量通過水解降低，它們的末端醛基官能團(tuán)通過氫化轉(zhuǎn)化為醇基，氫化的葡聚糖作為水溶液同至少一種水溶性鐵鹽混合，在得到的溶液中加入堿，生成氫氧化鐵，將得到的混合物加熱使氫氧化鐵轉(zhuǎn)變成作為同葡聚糖的締合化合物的羥基氧化鐵。這種方法的特征在于，氫化只是部分的，但是得到最多為碳水化合物總量15％重量的還原糖。在同鐵鹽混合前和進(jìn)行氫化后，將所說的葡聚糖進(jìn)行氧化，所說的氫化和氧化，得到幾乎所有的醛基轉(zhuǎn)化成醇和羧基的葡聚糖。
這樣，在氧化前經(jīng)部分氫化，得到葡聚糖的一部分醛基尚未反應(yīng)，隨后進(jìn)行氧化，使基本上所說的部分醛基完全轉(zhuǎn)化成羧酸基團(tuán)。
可以認(rèn)為，通過這種氫化和氧化順序，得到有利的醇基和羧酸基團(tuán)的分布。因?yàn)?，通過作為初步操作的氫化，形成醇的氫化主要發(fā)生在連接到低分子量的葡聚糖分子的醛基上，而在高分子量葡聚糖的醛基主要在氧化步驟中反應(yīng)，這意味著，由氧化形成的羧酸基團(tuán)在很大程度上將引入到高分子量的葡聚糖。
這種醇基和羧酸基團(tuán)分別在低分子量和高分子量級(jí)分的分布是有利的，因?yàn)?，預(yù)期得到的產(chǎn)物的穩(wěn)定性會(huì)好于醇基和羧酸基團(tuán)的隨機(jī)分布，尤其好于羧酸基團(tuán)主要存在于低分子量部分的葡聚糖。
但是，本發(fā)明不限于有關(guān)由所說的優(yōu)選實(shí)施方案得到的產(chǎn)物的滿意的穩(wěn)定性的理由的任何專門理論。
在本發(fā)明主要考慮的相當(dāng)?shù)头肿恿康钠暇厶侵?，末端基團(tuán)(氫化成醇基或氧化成羧酸基團(tuán)的醛基)對(duì)聚合物鏈的影響比在高分子量葡聚糖明顯，因?yàn)槟┒斯倌軋F(tuán)所占的重量分?jǐn)?shù)更高。因此，重要的是，否則會(huì)引起不穩(wěn)定性的羧基基團(tuán)存在于葡聚糖的高分子量級(jí)分中。
在水溶液中優(yōu)選用硼氫化鈉進(jìn)行氫化。
氧化優(yōu)選在堿性水溶液中使用次氯酸鹽，優(yōu)選使用次氯酸鈉進(jìn)行氧化。
重要的是，使用的氧化劑應(yīng)有適于將醇基轉(zhuǎn)變?yōu)轸人峄鶊F(tuán)而沒有影響葡聚糖分子的其它位置的氧化能力。通過基于產(chǎn)物葡聚糖的NMR-分析的試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，次氯酸鈉是適宜的氧化劑，因?yàn)閹缀跹趸氲乃械难踉哟嬖谟隰人峄鶊F(tuán)。
本發(fā)明的方法原則上不限于使用專門分子量和分子量分布的葡聚糖，但是，在生成鐵-葡聚糖之前，優(yōu)選使用分子量低于7，500道爾頓的葡聚糖。為了得到從全面考慮是最適宜的治療缺鐵貧血癥的產(chǎn)品，本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施方案特征是，在水解后但是同水溶性的鐵鹽混合之前，使用一種或多種膜方法用截止值適宜于防止葡聚糖分子量高于2，700道爾頓的膜提純葡聚糖，隨后加以進(jìn)一步水解，接著再用截止值340-800道爾頓除去小分子的膜進(jìn)行一或多次膜處理。
一種更特殊的優(yōu)選實(shí)施方案包括下面的結(jié)束步驟制備包括提純和氫化的和氧化的葡聚糖和至少一種水溶性的鐵鹽的水溶液；加入堿將所說水溶液的pH值調(diào)節(jié)到高于10；將該混合物加熱到溫度高于100℃直到變成黑色或暗棕色的膠態(tài)溶液，該膠態(tài)溶液可以經(jīng)0.45微米濾器過濾；以及用過濾、加熱和膜處理以及加入一種或多種穩(wěn)定劑以進(jìn)行中和、提純和穩(wěn)定化，并任選將溶液干燥，以得到穩(wěn)定粉狀的所要求的鐵-葡聚糖化合物。通過重新將這種粉末溶解、調(diào)節(jié)pH、過濾消毒以及裝進(jìn)安瓿或小瓶中，制成注射液。消毒也可以通過將裝滿的安瓿或小瓶進(jìn)行高壓滅菌完成。
或者將干燥操作省略，由提純的溶液生產(chǎn)注射液，而不用中間的干燥。
如上面解釋的，本發(fā)明的特征是，調(diào)節(jié)氫化葡聚糖醛基與氧化的葡聚糖醛基的比值和這些基團(tuán)的總百分比。
實(shí)質(zhì)上是，用作原料的水解葡聚糖中幾乎所有的還原基團(tuán)通過氫化或氧化轉(zhuǎn)化。這是因?yàn)椋魏纹溆嗟倪€原基團(tuán)同鐵化合物在接觸時(shí)發(fā)生反應(yīng)，會(huì)生成亞鐵化合物，這種亞鐵化合物非腸道服用時(shí)比鐵化合物毒性大。
這樣，本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方案的特征在于，將水解和氫化的葡聚糖氧化將還原糖的含量減少到不高于4％重量，氫化前水解的葡聚糖中的還原糖的量不是嚴(yán)格的，但是一般為20-50％重量。
本發(fā)明還包括用上述方法生產(chǎn)的鐵-葡聚糖化合物，這種化合物的特征在于，其表觀峰值分子量(Mp)為50,000-150,000道爾頓，優(yōu)選為70,000-130,000道爾頓，更優(yōu)選為80,000-120,000道爾頓，其鐵含量為15-45％重量。當(dāng)將這種鐵-葡聚糖化合物的含水制劑對(duì)患有缺鐵貧血癥的患者通過肌肉內(nèi)注入時(shí)，可以觀察到對(duì)血紅蛋白生產(chǎn)的積極的影響早于注入相應(yīng)量的表觀峰值分子量不低于150,000道爾頓的商業(yè)鐵-葡聚糖。
在本說明書和所附的權(quán)利要求中有關(guān)分子量的指標(biāo)是用凝膠透過色譜測(cè)定的重量。
穩(wěn)定性是根據(jù)沒有可見的不利變化進(jìn)行評(píng)價(jià)的，如在加熱到70℃或更高溫度10分鐘后，產(chǎn)物是否生成凝膠或沉淀。
本發(fā)明還包括通過非腸道服用的用于預(yù)防和治療缺鐵貧血癥的藥物組合物。這種組合物的特征是，包括上述的化合物。
這種藥物組合物優(yōu)選還包括有機(jī)羥基酸的鹽，優(yōu)選選自檸檬酸鹽和葡糖酸鹽作穩(wěn)定劑。
最后，本發(fā)明包括使用上述的鐵-葡聚糖化合物用于制備非腸道服用預(yù)防和治療缺鐵貧血癥的組合物。
通過下面的非限制實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)施例1(ⅰ)葡聚糖的水解、氫化和氧化在溫度95℃和pH1.5下從具有截止值5,000道爾頓的膜的滲透物收集的水解過2.522千克的葡聚糖進(jìn)行水解。
水解用凝膠透過色譜(GPC)法監(jiān)測(cè)，當(dāng)被水解材料的分子量達(dá)到所要求的值，即重均分子量為700-1,400道爾頓時(shí)，通過冷卻以終止反應(yīng)。
通過水解，生成低分子量葡聚糖，但是也生成葡萄糖。在冷卻和中和后，由具有截止值340-800道爾頓的膜法降低葡萄糖和很低分子量低聚物的量，此后，通過旋光性(αD20-200)測(cè)定葡聚糖的含量是1,976克，使用Somogyi’s試劑測(cè)定的還原糖量是32.0％重量。
通過用次氯酸鈉處理，首先降低還原能力。對(duì)于939千克葡聚糖在堿性的pH下加入18.4千克次氯酸鈉。通過這種部分氫化，預(yù)期在要?dú)浠娜┗?，具有低分子量的葡聚糖是主要的?br> 在硼氫化鈉處理后，測(cè)定的還原能力為6.53％重量。
此后，將溶液中和成pH＜7.0，隨后去離子化。通過色譜法測(cè)定平均分子量和分子量分布。
色譜法還表明，90％重量的葡聚糖的分子量低于2,700道爾頓，10％重量分?jǐn)?shù)的具有最高分子量的葡聚糖重均分子量(MW)低于3,200道爾頓。
MW實(shí)測(cè)為1,200，數(shù)均分子量(Mn)800道爾頓。
此后，使用次氯酸鈉在pH值9.5和50℃下進(jìn)行氧化。加入1075升的15％重量/體積的NaOCl水溶液。
在氧化終止后，還原糖經(jīng)測(cè)定為0.9％重量。
在氧化后，對(duì)純水進(jìn)行透析過濾，得到比電導(dǎo)為3mS/cm。葡聚糖的量在此階段為635千克。NMR-分析表明，所有的雙鍵氧原子作為羧酸存在。
(ⅱ)鐵-葡聚糖的合成將300千克的上述制備的葡聚糖同300千克的FeCl3,6H2O混合，制成15％的水溶液。
在攪拌著的該混合物中，加入飽和的250克千克的碳酸鈉水溶液，得到pH為3.5，此后用50升的濃NaOH水溶液(27％重量/體積)將pH升高到11.5。
將如此得到的混合物加熱到100℃以上，直到成為可以由0.45微米濾器過濾的黑色或暗棕色膠態(tài)溶液。將該溶液冷卻，用濃鹽酸中和成pH5.00，并過濾。用膜法提純?cè)撊芤褐钡揭院?％重量/體積鐵的溶液計(jì)算的溶液中的氯化物含量低于0.68％。
如果溶液的氯化物含量低于為得到等滲溶液所要求的，則加入氯化鈉，pH最后調(diào)節(jié)成5.6，將溶液經(jīng)0.45微米(或0.2微米)的膜濾器過濾。
將溶液噴霧干燥，將鐵-葡聚糖準(zhǔn)備出售，或用于進(jìn)一步加工。
或者不用噴霧干燥，而是將溶液直接用于生產(chǎn)具有如上述鐵含量例如5％的注射液。
當(dāng)使用鐵-葡聚糖粉末生產(chǎn)注射液或灌輸液時(shí)，將粉末重新溶解在水介質(zhì)中，檢查pH，如果需要?jiǎng)t加以調(diào)節(jié)，在將溶液進(jìn)行過濾滅菌后將溶液裝入安瓿或小瓶中?；蛘?，在裝入安瓿或小瓶后，通過高壓滅菌以消毒。
實(shí)施例2(ⅰ)葡聚糖的水解、氫化和氧化。
這部分合成以在實(shí)施例1中(ⅰ)討論的方法進(jìn)行。
(ⅱ)鐵-葡聚糖的合成將240千克的上述制備的葡聚糖同300千克的FeCl3,6H2O混合，制成12％的水溶液。
在攪拌著的該混合物中，加入飽和的250千克的碳酸鈉水溶液，使pH成為3.5，此后用50升的濃NaOH水溶液(27％重量/體積)將pH升高到11.6。
將如此得到的混合物加熱到100℃以上，直到成為可以用0.45微米濾器過濾的黑色或暗棕色膠態(tài)溶液。將該溶液冷卻，用濃鹽酸中和成pH5.3并過濾。用膜法提純?cè)撊芤褐钡揭院?％重量/體積鐵的溶液計(jì)算的溶液中的氯化物含量低于0.68％。
如果將在該階段的溶液加熱到100℃約2小時(shí)，則在冷卻后的表觀峰值分子量(Mp)為104898道爾頓。這溶液是穩(wěn)定的。
將溶液噴霧干燥，從而得到鐵-葡聚糖粉末。
這種粉末適宜于生產(chǎn)含約5％重量/體積鐵的鐵-葡聚糖制劑。
在這兩個(gè)實(shí)施例中，按用在該法中的鐵計(jì)算，鐵-葡聚糖粉末的產(chǎn)率是95％以上。
實(shí)施例3用類似于在實(shí)施例1和2中討論的方法還生產(chǎn)了鐵-葡聚糖制劑，原料的特性、中間體以及結(jié)果示于下表中。
表
*)在70℃進(jìn)行10分鐘的穩(wěn)定性試驗(yàn)。
因此，在本發(fā)明范圍內(nèi)將葡聚糖氫化和氧化到不同程度可以制成穩(wěn)定的低分子量的鐵-葡聚糖的制劑。
實(shí)施例4(對(duì)比實(shí)施例)MW為1209道爾頓和還原糖含量為26，6％重量的葡聚糖604千克，沒有先前的氫化，而是用1780升15％(重量/體積)的NaOCl的水溶液在pH9.5和溫度50℃下進(jìn)行氧化。氧化后，還原糖的含量經(jīng)測(cè)定為0.54％。
用這種氧化的葡聚糖合成鐵-葡聚糖化合物沒有成功，因?yàn)樯踔猎谒械奶妓徕c加入前，含鐵和葡聚糖的混合物形成凝膠。加熱這種凝膠溶液不會(huì)導(dǎo)致生成穩(wěn)定的膠態(tài)和可過濾的溶液。
這一實(shí)施例表明，在進(jìn)行氧化前，必須通過氫化以降低在葡聚糖中的還原糖的比例。
實(shí)施例5如在實(shí)施例2中制備鐵-葡聚糖溶液。
在用膜法除去氯化物后，用溶于氫氧化鈉水溶液的10.5千克檸檬酸將pH調(diào)節(jié)成8.5，然后將溶液加熱到100℃以上2小時(shí)。冷卻后，用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)成5.6。溶液被調(diào)節(jié)成相當(dāng)于5.0％重量/體積鐵的濃度。表觀峰值分子量經(jīng)測(cè)定為111,666，該化合物是穩(wěn)定的。
通過將此實(shí)施例同實(shí)施例2比較，似乎加入檸檬酸鹽不會(huì)顯著改變鐵-葡聚糖產(chǎn)物的分子量。
權(quán)利要求
1．一種生產(chǎn)鐵-葡聚糖的方法，其中通過水解將葡聚糖的分子量降低，通過氫化將末端醛基官能團(tuán)轉(zhuǎn)化為醇基，所說的葡聚糖作為水溶液同至少一種水溶性的鐵鹽混合，在得到的溶液中加入堿，生成氫氧化鐵，將得到的混合物加熱，將氫氧化鐵轉(zhuǎn)化成羥基氧化鐵，作為同葡聚糖的締合化合物，此法的特征在于，氫化只是部分的，得到為碳水化合物的最多15％的還原糖(以碳水化合物總量計(jì)算)，在與鐵鹽混合前和進(jìn)行氫化后，所說的葡聚糖進(jìn)行氧化，所說的氫化和氧化可以得到具有基本上所有醛基轉(zhuǎn)化成醇和羧基的葡聚糖。
2．權(quán)利要求1的方法，其特征在于，在同至少一種鐵鹽混合前，葡聚糖的重均分子低于7,000道爾頓。
3．權(quán)利要求1的方法，其特征在于，水解后但是在與水溶性鐵鹽混合物前，通過一種或多種具有適宜于抑制葡聚糖分子2,700道爾頓以上的截止值的膜分離，可能隨之以進(jìn)一步水解以及一種或多種具有340-800道爾頓之間截止值的膜分離除去小分子以提純葡聚糖。
4．權(quán)利要求1-3的方法，其特征在于，在氧化后，葡聚糖分子的還原糖含量不能超過4％重量。
5．權(quán)利要求1-4的任何一項(xiàng)的方法，其特征在于，通過硼氫化鈉在水溶液中進(jìn)行氫化。
6．權(quán)利要求1-5的任何一項(xiàng)的方法，其特征在于，通過次氯酸鹽，優(yōu)選為次氯酸鈉在堿性水溶液中進(jìn)行氧化。
7．上述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的方法，其特征在于，包括下列步驟制備包括氫化和氧化的葡聚糖和至少一種水溶性鐵鹽的水溶液；加入堿將所說的水溶液pH調(diào)節(jié)到10以上；將混合物加熱到100℃以上直到混合物成為黑色或暗棕色膠態(tài)溶液，并可以經(jīng)0.45微米濾器過濾；通過過濾、加熱和膜分離以及加入穩(wěn)定劑將溶液提純和穩(wěn)定化；任選將溶液干燥，得到所要求的穩(wěn)定的粉狀的鐵-葡聚糖化合物。
8．權(quán)利要求7的方法，其特征在于，穩(wěn)定化包括加入至少一種有機(jī)羥基酸的鹽，優(yōu)選選自檸檬酸鹽和葡萄糖酸鹽。
9．權(quán)利要求1-8生產(chǎn)的鐵-葡聚糖化合物，其特征在于，表觀峰值分子量(Mp)是50,000-150,000道爾頓，優(yōu)選為70,000-13,000道爾頓，更優(yōu)選為80,000-120,000道爾頓，其鐵含量為15-45％重量。
10．通過非腸道服用的包括權(quán)利要求9的化合物的用于預(yù)防和治療缺鐵的藥物組合物
11．權(quán)利要求10的藥物組合物，其特征在于，該組合物包括有機(jī)羥基酸的鹽，優(yōu)選選自檸檬酸鹽和葡萄糖酸鹽作為穩(wěn)定劑。
12．使用權(quán)利要求9的鐵-葡聚糖化合物用于制備非腸道服用的治療組合物以通過非腸道服用預(yù)防和治療缺鐵癥。
全文摘要
非腸道服用的治療人類和動(dòng)物的缺鐵癥的鐵－葡聚糖化合物的生產(chǎn)方法,在同鐵反應(yīng)前,通過首先氫化然后氧化將葡聚糖分子的末端還原基團(tuán)轉(zhuǎn)化。通過改變氫化基團(tuán)與氧化基團(tuán)的比值,可以變化得到的鐵－葡聚糖化合物的平均分子量。
文檔編號(hào)A61K9/14GK1308539SQ99807988
公開日2001年8月15日 申請(qǐng)日期1999年7月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月20日
發(fā)明者H·B·安德烈森, L·克里斯坦森 申請(qǐng)人:法瑪科思莫斯控股有限公司