專利名稱：新型組合物的制作方法
用于預(yù)防甲肝和乙肝的疫苗已為人們所熟知。例如，SmithKlineBeecham生物制品公司出售的用于預(yù)防乙肝的Engerix-B(商標(biāo)名)疫苗。該疫苗包含乙肝表面抗原(特別是Harford等人在Postgraduate Medical Journal,1987,63(Suppl.2),65-70一文中描述的226個氨基酸的S抗原)，并用氫氧化鋁作佐劑配制而成。疫苗Havrix(商標(biāo)名)也來自SmithKline Beecharn生物制品公司，可以用于預(yù)防甲肝感染，也是用氫氧化鋁作佐劑配制而成。該疫苗包含經(jīng)福爾馬林(甲醛)滅活過的HM-175甲肝病毒減毒株；參見Andre et al[Prog Med.Virol.1990,vol 37；p72-95]。疫苗Twinrix(商標(biāo)名)是上述甲肝及乙肝抗原的聯(lián)苗，可以用來同時預(yù)防甲肝和乙肝。
歐洲專利EPO339667(Chemo Sero)中記述了通過合并甲肝和乙肝抗原制備聯(lián)苗的常規(guī)概念。該專利說明書中寫明，其中所用佐劑無嚴(yán)格規(guī)定唯一必須的要求是它能夠?qū)⒚庖呋钚栽鰪?qiáng)到期望的程度，但不帶來任何副作用。其中還指明可以使用鋁凝膠，具體為氫氧化鋁凝膠和磷酸鋁凝膠。
PCT申請WO 93/24148(SmithKline Beecham)中描述了包含乙肝表面抗原的制備方法，其中使用磷酸鋁作為佐劑。另外還描述了任選包含甲肝抗原的多價聯(lián)苗。福爾馬林的使用未見公開。
序號為0 633 784的歐洲專利申請(SmithKline Beecham)中描述了含有與磷酸鋁結(jié)合的乙肝成分和3脫氧?；瘑瘟姿嶂|(zhì)A的新疫苗制劑。
令人驚奇的是現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)如果含有乙肝和/或甲肝抗原的疫苗以特定的方式配制，那么該疫苗發(fā)揮出奇好的效果。
使用本發(fā)明的疫苗，可以2倍而非3倍劑量方式施用。
本發(fā)明的第一個方面，本發(fā)明提供的水性疫苗組合物中包含有用磷酸鋁作佐劑配制的乙肝表面抗原，磷酸鋁濃度的選用原則是乙肝表面抗原和磷酸鋁之間用量之比為每μg乙肝表面抗原對應(yīng)0.015-0.1mg磷酸鋁。
優(yōu)選地，所述比例為每μg HBsAg對應(yīng)0.02～0.08mg磷酸鋁。
本發(fā)明的另一方面，可以任選地將一種滅活后的甲肝病毒(HAV)加入本發(fā)明所述制劑，前提是甲肝和乙肝聯(lián)苗可以2倍劑量的方案給藥。
所述甲肝抗原優(yōu)選為商品化疫苗Havrix(SmitMUine BeechamBiologicals)中所使用的HM-175毒株。
本發(fā)明所述疫苗中甲肝抗原的濃度優(yōu)選約720-2880 EU單位/ml。EU單位的定義參見Andre et al(1990)，在上述引文中。
本發(fā)明所述含有HAV的組合物此外還可以包含氫氧化鋁，通常氫氧化鋁總量為0.05-0.10mg/ml。
正常地，每0.5～lml劑量中鋁鹽總量為0.4～1.0mg。
本發(fā)明所述疫苗組合物中，優(yōu)選加入福爾馬林(甲醛)并使其濃度為10～200μg/ml．優(yōu)選地，所述福爾馬林濃度約為20-160μg/ml。
正常地，所述乙肝抗原為乙肝表面抗原(HBsAg)。乙肝表面抗原的制備已被充分公開。參見例如，Harford et al in Develop.Biol.Standard54,page125(1983),Gregg et al in Biotechnology,5,page479(1987),EP-A-0226846,EP-A-0 299 108以及其中的參考文獻(xiàn)。
本發(fā)明使用的表述方法“乙肝表面抗原”或“HbsAg”包括能夠展示HBV表面抗原抗原性的任一種HBsAg抗原或其片段。應(yīng)該理解的是除HBsAg S抗原的226氨基酸序列(參見Tiollais et al,Nature,317,489(1985)及其中所引文獻(xiàn))外，如果需要，本發(fā)明所述的HbsAg還可以包括上述文獻(xiàn)以及EP-A-0278 940中描述的原-S序列的全長或部分序列。本發(fā)明所述的HBsAg還可以指變體，例如，WO 91/14703中描述的“脫逸突變體”。另一方面，所述HbsAg可以包含序列號為0414374歐洲專利申請中描述為SL*的蛋白質(zhì)，即這樣一種蛋白，它的氨基酸序列包含乙肝病毒大(L)蛋白(ad或ay亞型)氨基酸序列的多個部分，其特征在于所述蛋白氨基酸序列由下述二者之一組成(a)所述L蛋白的殘基12-52后接殘基133-145再后接殘基175-400；或者(b)所述L蛋白的殘基12后接殘基14-52后接殘基133-145再后接殘基175-400。
HBsAg也可以指EP 0 198 474或EP 0 304 578中所述的多肽。
正常地，HbsAg為顆粒形式。它可以只包含S蛋白，或者也可以是合成顆粒，例如(L*S)其中L*同上述定義，S代表乙肝表面抗原的S蛋白。
優(yōu)選地，按照WO93/24148描述，將HbsAg吸附到磷酸鋁上。
優(yōu)選地，所述乙肝抗原為商品化疫苗Engerix-B(SmithklineBeecham Biologicals)中所用的HbsAgS抗原。
本發(fā)明所述疫苗制劑包括免疫保護(hù)量的抗原，可以用常規(guī)技術(shù)制備。疫苗制備的一般描述見Voller等人編著的疫苗的新趨勢及進(jìn)展，University Park Press,Baltimore,Maryland,U.S.A.1978。包裹于脂質(zhì)體的方法見，例如，F(xiàn)ullerton在美國專利4,235,877中的描述。將蛋白質(zhì)與大分子偶聯(lián)的描述見，例如Likhite的美國專利4,372,645和Armor等人的美國專利4,474,757。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述的疫苗組合物采用0,6月的方案施用，也就是說，第一劑量在0月，第二劑量在第6個月時給藥。
本發(fā)明所述的疫苗組合物特別適用于成人，也適用于青少年和兒童。
下列實施例是為了說明而并非限制本發(fā)明。
實施例實施例1．具體制劑本發(fā)明范圍內(nèi)的具體制劑包括下述方案a)一種施用給成人的疫苗組合物，其中包含40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福爾馬林劑量為0.5mlb)一種給成人施用的疫苗組合物，其中包含40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福爾馬林劑量為1.0mlc)一種給青少年和/或兒童施用的疫苗組合物，其中包含20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福爾馬林劑量為1mld)一種給青少年和/或兒童施用的疫苗組合物，其中包含20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福爾馬林劑量為0.5ml實施例2研究“HAB 054”2.1 用含有下述成分的疫苗組合物接種一組共47名健康成人個體1440 EU HAV抗原40μg HBsAg(S-抗原)0.8mg AlPO40.05mg氫氧化鋁20μg/ml福爾馬林表格中該組合物縮寫為“1440/NF40”2.2 接種一組共47名健康成人個體a)在一只胳膊上接種劑量為1ml的疫苗組合物，其中含有用0.8mg AlPO4配制的40μgHbsAg和20μg/ml福爾馬林(下文中給組合物縮寫為’NF40’)；以及b)在另一只胳膊上接種劑量為1ml的HAVRIX 1440，其中含有用0.5mgAlPO4配制的1440 EU HAV抗原和20μg/ml福爾馬林。HAB 054的免疫方案為0,6(即在0月和第6個月劑量接種)。
與使用同一年齡組志愿者進(jìn)行的另一項研究(HBV NF 021)中得到組織學(xué)結(jié)果相比，第2、6和7月時乙肝血清學(xué)結(jié)果(血清轉(zhuǎn)化(SC)、血清保護(hù)(SP)及幾何平均滴度(GMT))都出乎意料的高。HBV NF 021的研究(參見表1)包括下列3組組1用體積為0.5ml的一種制劑接種，其中含有用0.5μgAlPO4配制的40μg HbsAg但不含福爾馬林，接種方案為0,6月(該方案在表格中縮寫為NF40μg,0,6M)組2用體積為0.5ml的一種制劑接種，其中含有用0.5μg AlPO4配制的20μg HbsAg但不含福爾馬林，接種方案為0,6月(該方案在表格中縮寫為NF40μg,0,6M)組3采用典型的0,1,6月3劑量免疫方案(表1中的第3行數(shù)據(jù))，接種Engerix B制劑(20μg)結(jié)果1)在HBV NF 021研究中，組1和組2第7月乙肝血清學(xué)結(jié)果不如組3的結(jié)果令人滿意(較低的SC、SP結(jié)果以及GMT+/-1/3(500～600)3劑量Engerix-B后得到的水平(1500))。
2)在HAB 054研究中，2劑量疫苗后得到的滴度與3劑量EngerixB后得到的滴度為同一數(shù)量級。
表1HBV-NF 021研究
表2HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表3HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表4HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表5HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
表6HAB 054研究成人中的HAB 2-劑量程序(0,6月方案)N=94
實施例3研究“HAB063,HAB071和HAB075”11～18年齡段青少年中的HAB 2劑量程序3.1研究HAB 063含有下列成分的疫苗組合物720HAV EU/20μg HBsAg0.25mg Al鹽40μg福爾馬林共0.5ml劑量結(jié)果見表7。
表7HAB 063研究11～18年齡段青少年中的HAB2劑量程序(0,6月方案)N=52
3.2研究HAB071用于該研究中的兩組。組1中的疫苗組合物720HAV EU/20μg HBsAg0.425mg Al鹽40μg福爾馬林共0.5ml劑量和0,6月方案組2中的疫苗組合物(TwinrixTMJunior):
360 HAV EU/10μg HBsAg0,225mg Al鹽40μg福爾馬林共0.5ml劑量0,6月方案表8HAB071研究
3.3 研究HAB075用于該研究中的兩組。疫苗組合物組1(TwinrixTM):720HAV EU/20μgHBsAg0.45mg Al鹽80μg福爾馬林總劑量為1ml,0,6月方案N=67疫苗組合物組21440HAV EU/40μgHBSAg0.85mg Al鹽80μg福爾馬林總劑量1ml，采用0,6月方案
N=55表9HAB 075研究
實施例4研究“HAB 084”12～15年齡段青少年中的HAB 2劑量程序用于該研究中的兩組。疫苗組合物組1(TwinrixTM)720HAV EU/20μgHBsAg0.45mg Al鹽80μg福爾馬林總劑量為1ml，采用0,6月方案疫苗組合物組2(TwinrixTM):360HAV EU/10μgHBS Ag0.225mg Al鹽40μg福爾馬林總劑量0.5ml，采用0,1,6月方案表10HAB 084研究
實施例5研究HAB 076疫苗組合物包括720HAV EU/20μgHBsAg0.45mg Al鹽80μg福爾馬林總劑量為1ml，采用0,1月方案結(jié)果見表11表11HAB 076研究
綜述上述實施例的臨床結(jié)果清楚表明實施例了完全方案后，即第7月時，兒童、青少年以及成人都能夠獲得滿意的針對甲肝和乙肝二者的免疫應(yīng)答。
權(quán)利要求
1．一種含水的疫苗組合物，其中包含每μg乙肝表面抗原對應(yīng)0.015～0.1mg磷酸鋁。
2．權(quán)利要求1中的疫苗組合物，其中還包括一種滅活的甲肝病毒(HAV)。
3．權(quán)利要求2中的疫苗組合物，其中還包含有氫氧化鋁。
4．權(quán)利要求3中的疫苗組合物，其中每毫升含有0.05～0.10mg氫氧化鋁。
5．上述任一權(quán)利要求中所述的疫苗組合物，其中還包含福爾馬林。
6．權(quán)利要求5中的疫苗組合物，其中所述福爾馬林的濃度為約10～200μg/ml。
7．權(quán)利要求2～6任一項中所述的疫苗，其中所述HAV的濃度為約720～2880EU/ml。
8．用于成人的權(quán)利要求7所述疫苗組合物，其中包括40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福爾馬林劑量為0.5ml。
9．用于成人的權(quán)利要求7所述疫苗組合物，其中包括40μg HBsAg1440 EU HAV0.85mg鋁鹽(0.8mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)20μg福爾馬林劑量為1.0ml。
10．用于青少年和/或兒童的權(quán)利要求7所述疫苗組合物，其中包括20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福爾馬林劑量為1.0ml。
11．用于青少年和/或兒童的權(quán)利要求7所述疫苗組合物，其中包括20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽(0.4mg磷酸鋁加0.05mg氫氧化鋁)80μg福爾馬林劑量為0.5ml。
12．用于青少年和/或兒童的權(quán)利要求7所述疫苗組合物，其中包括20ug HBsAg720 EU HAV0.25mg鋁鹽40μg福爾馬林劑量為0.5ml。
13．用于青少年和/或兒童的權(quán)利要求7所述疫苗組合物，其中包括20μg HBsAg720 EU HAV0.45mg鋁鹽40μg福爾馬林劑量為0.5ml。
14．上述任一權(quán)利要求中所述的疫苗組合物，其中所述的乙肝表面抗原為S-抗原。
15．權(quán)利要求2～13中任一項中所述的疫苗組合物，其中所述的甲肝抗原衍生自HM-175毒株。
16．一種以2劑量方案給人接種的甲肝加乙肝疫苗組合物。
17．權(quán)利要求16中的疫苗組合物，其中包括權(quán)利要求8～15任一項中所述的制劑。
18．權(quán)利要求16或17中所述的疫苗組合物，其中所述的兩劑量為0,6(即，劑量在第0和第6月接種)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用磷酸鋁配制的含乙肝抗原的新型疫苗組合物。所述疫苗組合物還可以包括一種滅活后的甲肝病毒、氫氧化鋁以及福爾馬林。如果需要,所述的甲肝乙肝聯(lián)苗可以2劑量方案給人接種。本發(fā)明公開了合適的制劑。
文檔編號A61K47/02GK1308547SQ99808141
公開日2001年8月15日 申請日期1999年4月27日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月1日
發(fā)明者C·阿托伊斯, M·J·克拉克, C·迪里爾特, S·G·J·特倫 申請人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司