專利名稱：三環(huán)類抗抑郁劑在局部止痛方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療組合物及其使用方法。在一個(gè)特定方面，本發(fā)明涉及用于緩解疼痛的組合物及其使用方法。
背景技術(shù)：
神經(jīng)病性疼痛是一種損傷后能持續(xù)數(shù)月、數(shù)年或幾十年的慢性疼痛，并且是由于周圍神經(jīng)、神經(jīng)根、脊髓或一些腦區(qū)域受損傷所致。其與感受傷害性疼痛在持續(xù)時(shí)間、特征、發(fā)生機(jī)制、和治療方面有所不同(Bennett G.J.(1994a)在Textbook of Pain(Ed.Wall PD，Melzack R)Churchill Livingstone，London 3rd edn，201)。神經(jīng)病性疼痛可包括自發(fā)性疼痛(例如燒傷、割傷、刺痛)、激發(fā)性疼痛(例如由非感受傷害性傳入神經(jīng)的刺激所致的異常性疼痛、和由非感受傷害性傳入神經(jīng)的刺激所致的痛覺(jué)過(guò)敏)和陣發(fā)性疼痛(例如源自觸發(fā)點(diǎn)的陣發(fā)性疼痛，表現(xiàn)為劇烈而突然的、刀刺般的、休克樣疼痛)(Bennett G.J.(1994a)在Textbook of Pain(Ed.Wall P.D.，Melzack R)Churchill Livingstone，London 3rd edn，201)。神經(jīng)病性疼痛可伴有感受傷害性疼痛，并且為了最好地緩解疼痛，可能需要復(fù)合治療措施(Portenoy R.K.(1991)在Towards a NewPharmacology of Pain(Ed.Basbaum A.I.，Besson J.M.)John Wiley& Sons Ltd，New York，393；Devor M.等人(1991)在Towards a NewPharmacology of Pain(Ed.Basbaum A.I.，Besson J.M.)John Wiley& Sons，New York，417)。神經(jīng)病綜合征通常是依據(jù)導(dǎo)致它們的疾病或病理事件分類的(例如帶狀皰疹后發(fā)生的帶狀皰疹后神經(jīng)痛、主干神經(jīng)部分損傷后發(fā)生的灼痛、丘腦梗塞后發(fā)生的中樞性疼痛)(Portenoy R.K.(1991)在Towards a New Pharmacology of Pain(Ed.Basbaum A.I.，Besson J.M.)JohnWiley & Sons Ltd，New York，393；Merskey H.，Bogaduk N.(1994)在《慢性疼痛分類，慢性疼痛綜合征的描述和疼痛術(shù)語(yǔ)的定義》，2nd edn.，IASP Press，Seattle，第40頁(yè))。前段時(shí)間人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到在這些病癥中涉及交感神經(jīng)系統(tǒng)。涉及交感神經(jīng)的疼痛綜合征被認(rèn)為是交感維持性疼痛(反映交感營(yíng)養(yǎng)不良、灼痛)(Bonica J.J(1990)在The Management of Pain(Ed.Bonica J.J.)Lea & Fibiger，Philadelphia 2nd edn.，220；Blumeberg H.，Janig W.(1994)在Textbook of Pain(Ed.Wall P.D.，Melzack R。)Churchill Livingstone，London 3rd edn，685)。
在臨床上神經(jīng)病性疼痛特別難以治療。使用類阿片引起了很多爭(zhēng)議，所發(fā)布的論點(diǎn)是，與感受傷害性疼痛相比，神經(jīng)病性疼痛相對(duì)難治，而為了達(dá)到部分效果，就需要較高劑量，這會(huì)使副作用發(fā)生率提高，并且長(zhǎng)期使用類阿片讓人擔(dān)心會(huì)產(chǎn)生有害作用(Arner S.，Meyerson B.A.(1988)Pain 2211；Kuypers H.，Konig H.，Adriaenson H.，Gybels J.M.(1991)Pain 475；Portenoy R.K.FoleyK.M.Inturrisi C.E.(1990)Pain 43273；Portenoy R.K.(1994)在Progress in Pain Research and Management(Ed.Fields H.L.，Liebskind J.C.)IASP Press，Seattle，247)。目前治療神經(jīng)病性疼痛所使用的主要治療劑包括系統(tǒng)遞送的抗抑郁劑、抗驚厥劑、局麻劑、和專用治療劑例如肌肉松弛劑、以及抗交感藥物(Portenoy R.K.(1991)在Towards a New Pharmacology of Pain(Ed.Basbaum A.I.，Besson J.M.)JohnWiley & Sons Ltd，New York，393；Portenoy R.K.(1993)Drug Therapy 2341；Max M.B.(1994)在Progress in PainResearch and Management(Ed.Fields H.L.，Liebskind J.C.)IASPPress，Seattle，229)。然而，這些治療有很多僅表現(xiàn)出有限的有效性(很少能達(dá)到完全的疼痛緩解)，并且致虛弱副作用的發(fā)生率很高(Portenoy R.K.(1993)Drug Therapy 2341；Bennett G.J.(1994a)在Textbook of Pain(Ed.Wall P.D.，Melzack R.)ChurchillLivingstone，London 3edn，201；Mac Farlane等人(1997)Pharmacol.Ther.751)。
神經(jīng)損傷可導(dǎo)致周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)變化，這些變化導(dǎo)致神經(jīng)病性疼痛的特征表現(xiàn)。對(duì)于周圍神經(jīng)系統(tǒng)，可能涉及下述機(jī)制(Devor M等人(1991)在Towards a New Pharmacology of Pain(Ed.BasbaumA.I.，Besson J.M.)JohnWiley & Sons，New York，417；Devor M.(1994)在Textbook of Pain(Ed.Wall P.D.，Melzack R.)ChurchillLivingstone，London 3edn，79；Blumeberg H.，Janig W.(1994)在Textbook of Pain(Ed.Wall P.D.，Melzack R.)ChurchillLivingstone，London 3edn，685)。(1)損傷后，靜止的傷害感受器通常變得敏感，并獲得進(jìn)行性自發(fā)活性、激活閾降低、以及對(duì)閾上刺激的反應(yīng)增強(qiáng)。(2)在損傷位點(diǎn)、再生和神經(jīng)瘤形成位點(diǎn)、或在脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)可能發(fā)生異位排放。(3)損傷后，交感神經(jīng)傳入可能刺激感覺(jué)神經(jīng)末梢、再生性神經(jīng)生長(zhǎng)、神經(jīng)瘤和脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。神經(jīng)病性疼痛涉及的中樞機(jī)制如下(Coderre等人，(1993)Pain 52259；Bennett(1994)在Textbook of Pain(P.D.Wall等人編寫(xiě)，Lond，3rd edn.，201)；Woulff和Doubell(1944)Curr.Opin.Neurobiol.4525)(1)脊髓內(nèi)的傳遞神經(jīng)元對(duì)興奮性氨基酸(EAAs)和P物質(zhì)(SP)的刺激的敏感性增強(qiáng)。這種情況導(dǎo)致異常性疼痛(Aβ纖維激活后)和痛覺(jué)過(guò)敏(Aδ和C纖維激活后)。(2)對(duì)投射蛋白的抑制性輸入的損失所致的抑制解除，和對(duì)大直徑傳入神經(jīng)激活的異常反應(yīng)模式。(3)使投射到內(nèi)部并與淺處板突觸連接的深處板衰弱的有髓傳入神經(jīng)。這可能是產(chǎn)生異常性疼痛的機(jī)制。
為了給了解神經(jīng)損傷后發(fā)生的神經(jīng)病性變化提供基礎(chǔ)，和提供用于測(cè)試新治療手段的模型系統(tǒng)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了多種神經(jīng)病性疼痛模型(Bennett G.J.(1994b)在Progress in Pain Research andManagement Vol2(Ed.Gebhart C.F.，Hammond D.L.，Jensen T.S.)IASP Press，Seattle，495)。最佳特征確定模型是新近開(kāi)發(fā)出的多種神經(jīng)損傷模型(由于坐骨神經(jīng)松散結(jié)扎所致的慢性狹窄性損傷，Bennett G.J.，Xie Y.K.(1988)Pain 3387；由于將一部分坐骨神經(jīng)緊緊結(jié)扎所致的部分坐骨神經(jīng)結(jié)扎(Seltzer等人(1990)Pain43205)；將兩條坐骨神經(jīng)緊緊結(jié)扎(Kim S.H.，Chung J.M.(1992)Pain 50355))。這些模型系統(tǒng)展現(xiàn)出神經(jīng)病性疼痛的不同表現(xiàn)(例如自發(fā)性疼痛行為的表現(xiàn)程度、機(jī)械或熱異常性疼痛、機(jī)械或熱痛覺(jué)過(guò)敏)和涉及交感神經(jīng)的程度(Neil A.，等人(1991)Brain Res 565237；Shir Y.，Seltzer Z.(1991)Pain 45309；Kim S.H.，Na H.S.，SheenKi，Chung J.M.(1993)Pain 5585；Kim K.J.，Yoon Y.W.，Chung J.M.(1997)Exp Brain Res 113200)。與部分坐骨神經(jīng)結(jié)扎或慢性狹窄性損傷模型相比，脊神經(jīng)結(jié)扎(SNL)模型展現(xiàn)出更高程度的激發(fā)性疼痛(機(jī)械異常性疼痛)和交感卷入(在該參數(shù)中)，而慢性狹窄性損傷模型展現(xiàn)出更高程度的自發(fā)性疼痛。然而應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，這些特征可能是相對(duì)的，并且可能隨時(shí)間而改變(即在動(dòng)物模型和臨床神經(jīng)病性疼痛中，交感依賴性可能會(huì)隨時(shí)間而改變，Staton-Hicks M，等人(1995)Pain 63127)。
系統(tǒng)施用抗抑郁劑給神經(jīng)病性和慢性疼痛提供了另一療法。為了找到系統(tǒng)施用抗抑郁劑的精確機(jī)制，已經(jīng)考慮了與生物體所產(chǎn)生的胺、內(nèi)源性類阿片、興奮性氨基酸受體、P物質(zhì)以及鈣和鈉通道的相互作用(Eschalier A.等人(1994)CNS Drugs 2261)。弄清楚的是，抗抑郁劑既可作用于脊椎上面位點(diǎn)(Spiegel，K.等人，Ann.Neurol.13(1983)462-465，Eschalier A.等人(1994)CNS Drugs 2261)也可作用于脊椎位點(diǎn)(Hwang，A.S.和Wilcox，G.L.，Pain 28(1987)343-355；Iwashita，T.和Shimizu，T.，Brain Research 581(1992)59-66；Eisenachand J.和Gebhart G.F.，Anesthesiology 83(1995)1046-1054)。
該止痛作用不依賴于抗抑郁作用，因?yàn)槠涫窃诜且钟魝€(gè)體中產(chǎn)生的，并且在抑郁個(gè)體中是以不依賴于情緒改變的方式發(fā)生的(Magni G.(1991)Drugs 42730；Onghena P.和Van Houdenhove B(1992)Pain49205；Max M.B.(1994)在Progress in Pain Research andManagement Vol2(Ed.Fields H.L.，Liebskind J.C.)IASP Press，Seattle，229，McQuay H.J.，Tramer M.，Nye B.A.，Carroll D.，Wiffen P.J.，Moore R.A.(1996)Pain 68217)。既阻斷去甲腎上腺素(NA)攝取又阻斷5-羥色胺(5-HT)攝取的活性劑例如阿米替林、或阻斷NA攝取但不阻斷5-HT攝取的活性劑例如去郁敏比對(duì)5-HT有選擇性的活性劑例如氟西汀更有效(Max M.B.(1994)在Progress in PainResearch and Management Vol2(Ed.Fields H.L.，Liebskind J.C.)IASP Press，Seattle，229)。據(jù)報(bào)道在治療一周內(nèi)有明顯的疼痛緩解(McQuay H.J.，Carroll D.，Glynn C.J.，(1992)Anaesthesia47646)。該時(shí)間過(guò)程與達(dá)到穩(wěn)定血漿水平所需的時(shí)間相一致(在人中t1/2為17-36小時(shí)，Ziegler V.E.，Biggs J.T.，Aardekani A.B.，Rosen S.H.(1978)J Clin Pharmacol 18462)。與之相反，這些化合物的抗抑郁活性需要4-6周才變得明顯(Potter W.Z.，Rudorfer M.，Manji H.(1991)New Eng J Med 325633)。在活性藥物、時(shí)間過(guò)程、以及獨(dú)立表現(xiàn)方面的不同意味著疼痛緩解和抑郁緩和的機(jī)制不同。
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，在多種非感受傷害性疼痛實(shí)驗(yàn)中，系統(tǒng)和脊柱施用抗抑郁劑都表現(xiàn)出固有效力，并增強(qiáng)了類阿片產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用(Eschalier A，Mestre C，Dubray C，Ardid D(1994)CNS Drugs2261)。然而，這種特性可變化，并且在一些病例中觀察到了抑制嗎啡活性的作用(上文所述Eschalier等人的綜述)。有人報(bào)道采用組織方法分析(例如測(cè)試范例、刺激強(qiáng)度、劑量、急性和慢性施用方案)來(lái)解釋這些不同(Kellstein D.E.，Malseed R.T.，Goldstein F.J.(1984)Pain 60275；Kellstein D.E.，Malseed R.T.，Ossipov M.H.，Goldstein F.J.(1988)Neuropharmacology 271；Fialip J.，MartyH.，Makambila M.C.，CiViate M.A.，Eschalier A.(1989)JPharmacol Exp Ther 248747)。在包括神經(jīng)處理(Seltzer Z.，TalM.，Sherav Y.(1989)Pain 37245)、單神經(jīng)病(Ardid D，GilbaudG(1992)Pain 49279)和糖尿病性神經(jīng)病模型(C.Courteix等人(1994)Pain 57153-160)的多種神經(jīng)病性疼痛測(cè)試中，系統(tǒng)施用抗抑郁劑也表現(xiàn)出了固有活性。有人試驗(yàn)了慢性和急性施用方案(Ardid D，Gilbaud G(1992)Pain 49279)，觀察到似乎是累積劑量而不是定性差異可解釋采用慢性施用方式的活性。
發(fā)明簡(jiǎn)述依據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)局部施用三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑能產(chǎn)生局部抗感受傷害性作用、尤其是抗炎性和神經(jīng)病性疼痛。當(dāng)對(duì)炎性(福爾馬林試驗(yàn))和神經(jīng)病性疼痛(脊髓神經(jīng)結(jié)扎)動(dòng)物模型局部施用阿米替林—一種非選擇性去甲腎上腺素(NA)和5-羥色胺(5-HT)再攝取抑制劑與去郁敏—一種選擇性NA再攝取抑制劑時(shí)，可產(chǎn)生局部抗感受傷害性作用。
因此，一方面，本發(fā)明提供了在惰性載體中含有治療有效量三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑的組合物。所述組合物優(yōu)選配制成局部施用劑型，例如在鹽水溶液中配制，或配制成霜?jiǎng)⒛z劑、軟膏劑、或噴霧劑。
局部施用制劑的優(yōu)點(diǎn)是，與系統(tǒng)施用抗抑郁劑相比，可在感覺(jué)神經(jīng)末梢區(qū)域獲得更高和更有效濃度的抗抑郁劑。此外，局部施用能大大減輕系統(tǒng)施用三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑的副作用。
另一方面，本發(fā)明提供了在具有局部不適位點(diǎn)、例如由炎癥或神經(jīng)病性病癥引起的不適的個(gè)體中產(chǎn)生局部止痛作用的方法。在本發(fā)明方法中，是通過(guò)將有效量的三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑局部施用到不適位點(diǎn)，例如通過(guò)注射、超聲波粉末注射、透皮電穿孔、局部涂敷、或包封在緩釋載體中來(lái)施用到不適位點(diǎn)而獲得局部止痛效果的。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明附

圖1是表示在進(jìn)行過(guò)神經(jīng)結(jié)扎的大鼠的同側(cè)和對(duì)側(cè)爪子中、閾疼痛反應(yīng)在22天期間的差異的圖。該附圖后面的一行棒形圖表示的是神經(jīng)結(jié)扎大鼠的靜電機(jī)械異常性疼痛50％收回閾(克)，該附圖前面的一行棒形圖表示的是脊髓神經(jīng)結(jié)扎后在連續(xù)各天的熱痛覺(jué)過(guò)敏(秒)。值是指組平均值(n＝6/組)。
附圖2A-C是表示在神經(jīng)結(jié)扎大鼠的同側(cè)爪子中不同劑量的系統(tǒng)施用的阿米替林(AMI)對(duì)熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響(附圖2A)、和在對(duì)側(cè)爪子中的熱收回閾(附圖2B)的時(shí)間過(guò)程的一系列圖，其中●＝鹽水對(duì)照；■＝1mg/kg AMIT；▲＝3mg/kg AMI，且＝10mg/kg AMI。附圖2C表示的是，對(duì)于同側(cè)(ipsi)和對(duì)側(cè)(contra)爪子、最大可能作用隨時(shí)間的累積變化(ΔMPE)，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照，具有右傾斜線的棒形圖代表1mg/kg AMIT，具有左傾斜線的棒形圖代表3mg/kgAMI，具有交叉線的棒形圖代表10mg/kg AMI。值代表MPE±s.e.m.(對(duì)于1和3mg/kg，n＝5，對(duì)于10mg/kg，n＝15)。與鹽水對(duì)照相比，*＝P＜.05。
附圖3A-C是表示在同側(cè)爪子中脊椎施用的阿米替林(60μg)對(duì)熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響(附圖3A)、和在對(duì)側(cè)爪子中的熱收回閾(附圖3B)的時(shí)間過(guò)程的一系列圖，其中●＝鹽水對(duì)照；■＝60μg AMIT。附圖3C表示的是，對(duì)于同側(cè)(ipsi)和對(duì)側(cè)(contra)爪子、MPE隨時(shí)間的累積變化(ΔMPE)，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照，具有右傾斜線的棒形圖代表100nmol AMI(ipsi)，具有左傾斜線的棒形圖代表100nmolAMI(contra)。值代表MPE±s.e.m.(對(duì)于這兩組n＝6)。與鹽水對(duì)照相比，*＝P＜.05。
附圖4A-C是表示局部注射100nmol阿米替林對(duì)痛覺(jué)過(guò)敏的影響的時(shí)間過(guò)程的一系列圖。附圖4A表示的是，當(dāng)把該抗抑郁劑注射到神經(jīng)損傷爪子(ipsi)和未損傷爪子(contra)內(nèi)時(shí)同側(cè)爪子中的作用，附圖4B表示的是，當(dāng)把該抗抑郁劑注射到神經(jīng)損傷爪子(ipsi)和未損傷爪子(contra)內(nèi)時(shí)在對(duì)側(cè)爪子中熱收回潛伏隨時(shí)間的改變，其中●＝鹽水對(duì)照；■＝AMI ipsi；且▲＝AMI contra。附圖4C表示的是MPE值隨時(shí)間的累積變化(ΔMPE)，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照(ipsi)，具有右傾斜線的棒形圖代表100nmol AMI(ipsi)，具有左傾斜線的棒形圖代表100nmol AMI(contra)。值代表MPE±s.e.m.(對(duì)于所有組n＝9)。與鹽水對(duì)照相比，*＝P＜.05，與對(duì)側(cè)對(duì)照相比，t＝P＜.01。
附圖5A-C是表示系統(tǒng)施用的阿米替林在同側(cè)爪子中對(duì)靜電機(jī)械異常性疼痛的影響(附圖5A)、和在對(duì)側(cè)爪子中對(duì)靜電機(jī)械刺激的收回閾的影響(附圖5B)的時(shí)間過(guò)程的一系列圖，其中●＝鹽水對(duì)照；■＝1.5mg/kg AMI；▲＝5mg/kg AMI，且＝10mg/kg AMI。附圖5C表示的是MPE的累積變化(ΔMPE)，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照，具有右傾斜線的棒形圖代表1.5mg/kg AMI，具有左傾斜線的棒形圖代表5mg/kg AMI，具有交叉線的棒形圖代表10mg/kg AMI。值代表MPE±s.e.m.(對(duì)于1.5和5mg/kg，n＝5，對(duì)于10mg/kg，n＝15)。與鹽水對(duì)照相比，*＝P＜.05，與1.5和5.0mg/kg相比，t＝P＜.05。
附圖6A-C是表示脊椎施用的阿米替林在同側(cè)爪子中對(duì)靜電機(jī)械異常性疼痛的影響(附圖6A)、和在對(duì)側(cè)爪子中對(duì)靜電機(jī)械刺激的收回閾的影響(附圖6B)的時(shí)間過(guò)程的一系列圖，其中●＝鹽水對(duì)照；■＝30μg AMI；▲＝60μg AMI，且＝90μg AMI。附圖6C表示的是MPE的累積變化(ΔMPE)，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照，具有右傾斜線的棒形圖代表30μg AMI，具有左傾斜線的棒形圖代表60μg AMI，具有交叉線的棒形圖代表90μg AMI。值代表MPE±s.e.m.(對(duì)于30μg和90μg，n＝3，對(duì)于60μg，n＝5)。與鹽水對(duì)照相比，*＝P＜.05。
附圖7A-C是表示局部外周注射阿米替林(100nmol)對(duì)痛覺(jué)過(guò)敏的影響的時(shí)間過(guò)程的一系列圖。附圖7A表示的是，當(dāng)把該抗抑郁劑局部注射到神經(jīng)損傷爪子(ipsi)和未損傷爪子(contra)內(nèi)時(shí)同側(cè)爪子中的作用。附圖7B表示的是，當(dāng)把該抗抑郁劑注射到神經(jīng)損傷爪子(ipsi)和未損傷爪子(contra)內(nèi)時(shí)在對(duì)側(cè)爪子中機(jī)械閾隨時(shí)間的改變，其中●＝鹽水對(duì)照；■＝AMI(ipsi)；且▲＝AMI(contra)。附圖7C表示的是MPE值隨時(shí)間的累積變化(ΔMPE)，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照(ipsi)，具有右傾斜線的棒形圖代表100nmol AMI(ipsi)，具有左傾斜線的棒形圖代表100nmol AMI(contra)。值代表MPE±s.e.m.(對(duì)于所有組n＝9)。與鹽水對(duì)照相比，*＝P＜.05，與對(duì)側(cè)對(duì)照相比，t＝P＜.01。
附圖8A-B是表示將阿米替林(AMI)與2.5％福爾馬林對(duì)大鼠共施用所產(chǎn)生的、通過(guò)退縮數(shù)目測(cè)定的(附圖8A)或通過(guò)咬和舔時(shí)間消耗測(cè)定的(附圖8B)、局部抗感受傷害性作用的時(shí)間過(guò)程的兩個(gè)圖?！瘢?.5％福爾馬林；中空三角形＝2.5％福爾馬林+10nm AMI；中空正方形＝2.5％福爾馬林+30nm AMI；中空菱形＝2.5％福爾馬林+100nmAMI。值是組平均值(n＝5-11/組)；為了清楚起見(jiàn)，省略s.e.m.的誤差線。
附圖9A-C是表示將阿米替林(100nmol)與2.5％福爾馬林(F)對(duì)大鼠共施用后1期退縮(附圖9A)、2期退縮(附圖9B)和咬/舔時(shí)間(附圖9C)的累積得分的一系列棒形圖。將阿米替林施用到對(duì)側(cè)(CONT)后爪內(nèi)沒(méi)有再產(chǎn)生施用阿米替林對(duì)同側(cè)爪子的抗感受傷害性作用(局部作用)。值代表±s.e.m.值(n＝5-11)。與僅用福爾馬林的組相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，和***＝P＜0.001。
附圖10A-C是表示對(duì)大鼠共施用后阿米替林(100nmol)(中空菱形)對(duì)不同濃度福爾馬林誘導(dǎo)的行為(實(shí)心園環(huán))的抑制作用、即對(duì)1期退縮(附圖10A)、2期退縮(附圖10B)和咬與舔時(shí)間消耗(附圖10C)的抑制作用的一系列圖。n＝6-11/組。與僅用福爾馬林的組相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，和***＝P＜0.001。
附圖11A-C是表示在2.5％福爾馬林(F)測(cè)試中通過(guò)與咖啡因(CAFF)共施用、通過(guò)1期退縮(附圖11A)、2期退縮(附圖11B)和咬與舔時(shí)間消耗(附圖11C)測(cè)定的阿米替林局部抗感受傷害性作用的部分逆轉(zhuǎn)的一系列圖。除了咖啡因(1500nmol)組n＝5之外，n＝10-15。與僅用福爾馬林的組相比，*＝P＜0.05，***＝P＜0.001；與福爾馬林/阿米替林組相比，t＝P＜0.05，tt＝P＜0.01。實(shí)心棒形圖表示單獨(dú)施用的2.5％福爾馬林，空心棒形圖表示單獨(dú)施用的AMI，具有左傾斜線的棒形圖表示AMI+500nmol CAFF，具有交叉線的棒形圖表示單獨(dú)施用或與100nmol AMI一起施用的1500nmol咖啡因。
附圖12A-B是表示對(duì)于附圖4A-C所示實(shí)驗(yàn)、在2.5％福爾馬林(F)測(cè)試中通過(guò)退縮數(shù)目測(cè)定的(附圖12A)和通過(guò)咬和舔時(shí)間消耗測(cè)定的(附圖12B)咖啡因逆轉(zhuǎn)阿米替林(AMI)作用的時(shí)間過(guò)程的兩個(gè)圖。●＝2.5％福爾馬林；中空朝上三角形＝2.5％F+10nmol AMIT；■＝2.5％F+100nmol AMI+1500nmol CAFF；◆＝2.5％F+1500nmol CAFF。值是組平均值(n＝5-11/組)；為了清楚起見(jiàn)，省略s.e.m.的誤差線。
附圖13A-B是表示咖啡因(CAFF)(附圖13A)和8-環(huán)戊基-1，3-二甲基黃嘌呤(CPT)(附圖13B)逆轉(zhuǎn)阿米替林(AMI)抗1.5％福爾馬林(F)的抗感受傷害作用的圖。n＝5-6/組。與僅用福爾馬林的組相比，**＝P＜0.05，***＝P＜0.001；與福爾馬林/阿米替林組相比，t＝P＜0.05，ttt＝P＜0.001。實(shí)心棒形圖表示單獨(dú)施用的1.5％福爾馬林，具有下傾斜線的棒形圖表示單獨(dú)施用或與AMI一起施用的CAFF，中空棒形圖表示單獨(dú)施用的AMI的作用。
附圖14表示在福爾馬林測(cè)試中、通過(guò)2期退縮測(cè)定的、由共施用的腺激酶抑制劑NH2dAD(100nmol)(具有右傾斜線的棒形圖)而不是腺脫氨基酶抑制劑2′-去氧助間型霉素(DCF)(100nmol)(具有交叉線的棒形圖)所引起的、30nM和100nM阿米替林(中空棒形圖)抗2.5％(實(shí)心棒形圖)的局部抗感受傷害性作用的增強(qiáng)的棒形圖。n＝6-8/組。與僅用福爾馬林的組相比，*＝P＜0.05；與福爾馬林/阿米替林組合相比，t＝P＜0.05。
附圖15A-B是表明當(dāng)與MK-801(20nM或100nM)(中空棒形圖)共施用到同側(cè)(I)爪子或?qū)?cè)(C)爪子內(nèi)時(shí)抑制大鼠對(duì)2.5％福爾馬林(實(shí)心棒形圖)的反應(yīng)的棒形圖。n＝6-8/組。與僅用福爾馬林的組相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，和***＝P＜0.001。
附圖16A-B是表明阿米替林(20nmol和100nmol)抗2.5％福爾馬林(F)(深色棒形圖)的抗感受傷害作用沒(méi)有被共施用酚妥拉明(PTA)(100nmol和500nmol)(具有交叉線的棒形圖)和納洛酮(NLX)(100nmol和300nmol)(具有水平線的棒形圖)降低的棒形圖。n＝5-8/組。與僅用福爾馬林的組相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.001；與福爾馬林/阿米替林組合相比，t＝P＜0.05。
附圖17A-C是表明局部施用三環(huán)類抗抑郁劑對(duì)福爾馬林誘導(dǎo)的疼痛反應(yīng)行為的劑量相關(guān)抑制的一系列棒形圖。這些棒形圖描述了當(dāng)對(duì)側(cè)注射時(shí)福爾馬林(實(shí)心棒形圖)和鹽水(中空棒形圖)的對(duì)照值；這些劑量圖描述了當(dāng)注射抗抑郁劑而不是對(duì)照時(shí)的結(jié)果。附圖17A和17B分別表示了1期和2期退縮行為的改善，附圖17C表示，當(dāng)把福爾馬林與去郁敏(DES)或氟西汀(FLUOX)共施用到背側(cè)后爪內(nèi)(局部作用)或注射到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)(系統(tǒng)作用)時(shí)，由注射到大鼠背側(cè)后爪內(nèi)的2.5％福爾馬林(■)引起的咬/舔行為得到了改善?！酵瑐?cè)DES；中空三角形＝對(duì)側(cè)DES；●＝同側(cè)FLUOX；○＝對(duì)側(cè)FLUOX。數(shù)據(jù)是平均值±s.e.m.(n＝5-6；對(duì)于同側(cè)對(duì)照，n＝8)。與相應(yīng)的福爾馬林組相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，和***＝P＜0.001。
附圖18A-D是表示通過(guò)將去郁敏與2.5％福爾馬林共施用而抑制疼痛相關(guān)行為的一系列圖。附圖18A和18B表示的是通過(guò)將DES與福爾馬林共施用到同側(cè)(附圖18A)或?qū)?cè)(附圖18B)爪子內(nèi)而抑制退縮行為的時(shí)間過(guò)程。附圖18C和18D表示的是將最高劑量注射到同側(cè)(附圖18C)或?qū)?cè)(附圖18D)爪子內(nèi)而抑制咬/甜行為的時(shí)間過(guò)程。值是平均值，為了清楚起見(jiàn)，省略誤差線。數(shù)據(jù)與附圖17一致。
附圖19A-C是表示局部注射去郁敏(DES)(100nmol)與氟西汀(FLX)(100nmol)的結(jié)果的一系列圖。附圖19A描述了當(dāng)注射到相當(dāng)于脊髓神經(jīng)結(jié)扎的同側(cè)(ipsi)爪子內(nèi)時(shí)去郁敏而不是氟西汀的局部抗感受傷害作用，附圖19B描述了在對(duì)側(cè)爪子(contra)中缺乏該作用，●＝鹽水對(duì)照；■＝DES；▲＝FLUOX。附圖19C表示的是MPE的累積改變，其中中空棒形圖代表鹽水對(duì)照，具有右傾斜線的棒形圖代表DES，具有左傾斜線的棒形圖代表FLUOX。n＝9/組。與鹽水組相比，*＝P＜0.05。
附圖20A-B是表示當(dāng)共施用到相當(dāng)于脊椎結(jié)扎的同側(cè)爪子內(nèi)時(shí)咖啡因(1500nmol)(CAFF)抑制去郁敏的抗感受傷害作用的效果的兩個(gè)圖。附圖20A表示的是在一定時(shí)間的抗痛覺(jué)過(guò)敏MPE，其中●＝100nmolDES；■＝1500nmol CAFF；且▲＝DES+CAFF。附圖20B表示的是MPE的累積變化(ΔMPE)，中空棒形圖代表100nmol DES；具有右傾斜線的棒形圖代表1500nmol CAFF；具有交叉線的棒形圖代表DES+CAFF。n＝9/組；與鹽水組相比，*＝P＜0.05。
附圖21A-C是表明在1.5％福爾馬林測(cè)試中、共施用咖啡因(CAFF)(1500nmol)沒(méi)有抑制去郁敏(DES)或氟西汀(FLUOX)的局部抗感受傷害作用的一系列圖。附圖21A表示的是對(duì)1期退縮的影響，附圖21B表示的是對(duì)2期退縮的影響，附圖21C表示的是對(duì)2期咬/舔時(shí)間的影響。中空棒形圖代表鹽水對(duì)照；具有右傾斜線的棒形圖代表單獨(dú)施用或與測(cè)試藥物聯(lián)合施用的咖啡因(CAFF)的作用。值是平均值±s.e.m.(n＝6/組)。與相應(yīng)的福爾馬林組相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，和***＝P＜0.001。NS是指與相應(yīng)的抗抑郁劑組沒(méi)有顯著差異。
附圖22A-B是表示在福爾馬林存在下局部施用的去郁敏和氟西汀對(duì)爪子體積的影響的圖。附圖22A表示的是與福爾馬林共施用到同側(cè)爪子內(nèi)之后在福爾馬林存在下鹽水(對(duì)照)、去郁敏、或氟西汀對(duì)爪子體積的影響?！瘢礁栺R林+鹽水；中空菱形＝福爾馬林+100nmolFLUOX；中空朝下的三角形＝福爾馬林+300nmol DES；中空正方形＝福爾馬林+300nmol FLUOX。附圖22B表示的是以在附圖22A中使用的濃度注射到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)(系統(tǒng)作用)的去郁敏或氟西汀對(duì)爪子膨脹的影響。爪子體積是在行為觀察期間結(jié)束時(shí)測(cè)定的。n＝5-6/組。與鹽水處理組相比，***＝P＜0.001。
附圖23A-C是表明當(dāng)注射到大鼠背側(cè)后爪內(nèi)時(shí)、與鹽水對(duì)照相比去郁敏、氟西汀、和阿米替林對(duì)爪子體積的影響的圖。附圖23A表示的是100nmol DES(中空菱形)和300nmol DES(中空正方形)的作用。附圖23B表示的是10nmol FLUOX(中空朝上的三角形)、30nmolFLUOX(中空朝下的三角形)、100nmol FLUOX(中空菱形)、和300nmol FLUOX(中空正方形)的作用。附圖23C表示的是100nmol(中空三角形)和300nmol(中空正方形)阿米替林對(duì)背側(cè)爪子體積的影響。n＝6/組。與鹽水注射組相比，*＝P＜0.05，***＝P＜0.001。
附圖24A-B是表示選擇性5-HT受體拮抗劑普萘洛爾(5-HT1)、酮舍林(5-HT2)、托吡西隆(5-HT3/4)和GR1l3808A(5-HT4)對(duì)由于局部注射氟西汀(FLX)(100nmol)引起的爪子體積增長(zhǎng)的作用的圖。附圖24A表示的是在施用單獨(dú)的100nmol FLX(●)、FLX+300nmol普萘洛爾(中空菱形)、FLX+500nmol酮舍林(□)、FLX+300nmol托吡西隆(中空朝上的三角形)、和FLX+500nmol GR113808A(中空朝下的三角形)的3個(gè)小時(shí)期間內(nèi)爪子體積的增長(zhǎng)百分比。附圖24B表示的是在相同時(shí)間內(nèi)附圖24A的增加的累積效應(yīng)，其中中空棒形圖代表單獨(dú)的FLX；具有水平線的棒形圖代表FLX+普萘洛爾；具有垂直線的棒形圖代表FLX+酮舍林；具有右傾斜線的棒形圖代表FLX+托吡西隆；具有左傾斜線的棒形圖代表FLX+GLR113808A。n＝5/組，與氟西汀相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001。
附圖25是表示在大鼠1％福爾馬林測(cè)試中、劑量為50nmol、150nmol和500nmol的酮舍林(KET)—一種選擇性5-HT受體拮抗劑對(duì)福爾馬林激起的行為(2期退縮)沒(méi)有影響的圖。值是每組6個(gè)測(cè)定值的平均值?！瘢?.5％福爾馬林對(duì)照；□＝普萘洛爾；△＝酮舍林；中空菱形＝托吡西??；中空六角形＝GR113808A。與福爾馬林對(duì)照相比，*＝P＜0.05。
附圖26是表示在大鼠1％福爾馬林測(cè)試中、劑量為50nmol和500nmol的酮舍林(KET)對(duì)福爾馬林激起的行為(退縮)沒(méi)有影響的圖。值是每組6個(gè)測(cè)定值的平均值。■＝1％福爾馬林對(duì)照；□＝50nmolKET；▲＝500nmol KET。
附圖27A和B是表示通過(guò)將3nmol或30nmol酮舍林與5-HT共施用而阻斷由于局部注射3nmol 5-HT所致的大鼠爪子水腫的圖。附圖27A是表明180分鐘期間內(nèi)爪子體積累積增加的圖。中空棒形圖＝單獨(dú)的5-HT；具有交叉線的棒形圖＝5-HT+KET(3nmol 5-HT＝左邊欄；30nmol 5-HT＝右邊欄)。附圖27B是表示按照180分鐘期間內(nèi)爪子體積的％增加表示的作用時(shí)間過(guò)程的圖。■＝單獨(dú)的3nmol 5-HT；□＝3nmol 5-HT+500nmol KET；●＝單獨(dú)的30nmol 5-HT；○＝30nmol5-HT+500nmol KET。與5-HT反應(yīng)相比，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001。
附圖28A-C是表示劑量為10、30、100、300和1000nmol的阿托品、美加明和d-筒箭毒堿對(duì)大鼠中由2.5％福爾馬林導(dǎo)致的退縮和咬/舔行為的影響的一系列圖。附圖28A表示的是藥物對(duì)1期退縮數(shù)目的影響，附圖28B表示的是藥物對(duì)2期退縮數(shù)目的影響，附圖28C表示的是藥物對(duì)2期咬/舔時(shí)間的影響。暗色六角形＝2.5％福爾馬林；○＝阿米替林；□＝美加明；△＝阿托品(同側(cè))；暗色三角形＝阿托品(對(duì)側(cè))；中空菱形＝d-筒箭毒堿。與各自的福爾馬林對(duì)照相比，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001。
發(fā)明詳述依據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了通過(guò)將三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑局部施用到局部不適身體位點(diǎn)上來(lái)產(chǎn)生局部止痛作用的新方法。
可用于實(shí)施本發(fā)明的三環(huán)類抗抑郁劑的實(shí)例是具有下述結(jié)構(gòu)的化合物Ar1-Z(R)-Ar2其中Z是任選包含1個(gè)或2個(gè)生物可相容雜原子的7元環(huán)、或8元二環(huán)，Ar1和Ar2是稠合到Z上的任選被取代的芳香環(huán)，且R是烷基氨基或芳基氨基取代基。
作為8元二環(huán)的Z的實(shí)例包括(2，2，2)二環(huán)辛烷和(3，2，1)二環(huán)辛烷等。對(duì)于任選包含在Z-三環(huán)結(jié)構(gòu)的中央環(huán)中的雜原子，氧和氮是優(yōu)選的，但是也可包含硫。R可以是烷基氨基或芳基氨基取代基、或它們的N-氧化物，并且通常包含4-5個(gè)碳原子，但是R中也可包含少至2個(gè)碳原子、或多至7個(gè)碳原子、甚至多至10個(gè)碳原子。如果R是烷基氨基取代基，則在一些實(shí)施方案中該烷基氨基是叔氨基或仲氨基。例如，R可以是-(CH2)3N(CH3)2、-(CH2)3NHCH3、-(CH2)3N(CH3)2、-CH2CH(CH3)CH2N(CH3)2、＝CH(CH2)2N(CH3)2、-(CH2)3NHCH3、＝CH(CH2)2NHCH3等。
R與三環(huán)結(jié)構(gòu)連接的點(diǎn)優(yōu)選為5位碳，或者連接在環(huán)結(jié)構(gòu)的5位雜原子上。
Ar1和/或Ar2上的任選的生物可相容鹵素取代基的實(shí)例是氯、溴和氟，氯是優(yōu)選的。例如Ar1和/或Ar2可被1個(gè)或2個(gè)生物相容性鹵素原子取代。
可用于實(shí)施本發(fā)明的三環(huán)類抗抑郁劑的非限制性實(shí)例是氯丙咪嗪、丙咪嗪、阿米替林、去郁敏、去甲替林、阿莫沙平、馬普替林、曲米帕明等，以及它們當(dāng)中兩種或更多種的合適組合。阿米替林和去郁敏是優(yōu)選的。
其它可用于本發(fā)明的抗抑郁劑包括具有與本文所述三環(huán)類抗抑郁劑相似的藥動(dòng)學(xué)特征和效力的、有時(shí)稱為“第二代”或“第三代”抗抑郁劑的化合物?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的第二代或第三代抗抑郁劑是具有下述結(jié)構(gòu)的化合物Ar3(Y)-X-Ar4(Q)其中Ar3是含氮雜環(huán)，例如取代的1，2，4-三唑或三嗪酮，Y是稠合到雜環(huán)上的芳基，或選自下述基團(tuán)的1個(gè)或2個(gè)取代基包含總共約4-8個(gè)碳原子的連接在Ar3上的烷基、烷氧基、芳基烷基、芳基烷氧基、芳基和雜芳基取代基，X是連接Ar3和Ar4的包含2-5個(gè)碳原子的烷基，Ar4是通過(guò)Ar4上的第一個(gè)氮原子連接在X上的哌嗪，且Q是任選被生物可相容鹵素取代、并且連接在Ar4上的另一個(gè)氮原子的苯環(huán)。
例如，X可包含3個(gè)碳原子，且Ar3可以是在4位被包含6-8個(gè)碳原子的芳基烷氧基取代的1，2，4-三嗪酮。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y是包含氧原子的雜芳基烷基取代基。
對(duì)于Q，優(yōu)選的生物可相容鹵素取代基選自氯、溴和氟。
可用于實(shí)施本發(fā)明的第二代或第三代抗抑郁劑的代表性實(shí)例是曲唑酮、安非他酮、米爾塔扎平(mirtazapine)、文拉法辛(venlafaxine)、fefazodone等。
一方面，本發(fā)明包括用于將三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑局部施用到具有局部不適位點(diǎn)的個(gè)體中的組合物。本發(fā)明組合物尤其是配制成保證基本上局部而不是系統(tǒng)施用抗抑郁劑。除了一種或多種本文所述抗抑郁劑之外，本發(fā)明組合物可含有一種或多種促進(jìn)遞送的輔料，例如插入載體、滲透促進(jìn)劑、膠態(tài)分散系統(tǒng)。
這種惰性載體的代表性且非限制性實(shí)例可選自水、異丙醇、氣態(tài)碳氟化合物、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮、丙二醇、香料、凝膠生成材料、硬脂醇、硬脂酸、鯨蠟、脫水山梨醇一油酸酯、甲基纖維素、以及它們當(dāng)中兩種或更多種的組合。
局部施用制劑還可包含具有最小變應(yīng)性或刺激作用的一種或多種已知的滲透促進(jìn)劑。已知的滲透促進(jìn)劑包括DMSO和氮雜環(huán)化合物，例如在US 4755535、US 4801586、US 4808414和US 4920101中公開(kāi)的滲透促進(jìn)劑，這些文獻(xiàn)全文引入本發(fā)明以作參考。局部施用組合物中包含的滲透促進(jìn)劑至多與基本上達(dá)到局部遞送而不是系統(tǒng)遞送三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑的目標(biāo)一致。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能選擇適用于所需特定滲透度的滲透促進(jìn)劑。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物是配制成局部注射制劑。在該實(shí)施方案中，組合物通常包含生理可相容鹽水溶液，并且可任選包封在適于局部注射的緩釋載體例如膠態(tài)分散系統(tǒng)或聚合物穩(wěn)定晶體內(nèi)。膠態(tài)分散系統(tǒng)包括毫微膠囊、微球、小珠、和以脂質(zhì)為基質(zhì)的系統(tǒng)、包括水包油型乳劑、微膠粒、混合微膠粒、以及脂質(zhì)體。優(yōu)選的本發(fā)明膠態(tài)分散系統(tǒng)是脂質(zhì)體或微球。脂質(zhì)體是當(dāng)注射或植入時(shí)或者當(dāng)包含在局部施用制劑中時(shí)用作緩釋載體的人造膜小囊。適用于局部注射的包囊藥物的微球是如D.Fletcher在Anesth.Analg.8490-94，1997中所述的聚(D，L)交酯微球。
本發(fā)明組合物可配制成適于局部施用的劑型，例如霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠劑、軟膏劑、噴霧劑、或氣霧劑。三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑自身是完全脂溶性藥物，能輕易穿過(guò)脂質(zhì)屏障以到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)位點(diǎn)。該同一特性使得它們能穿過(guò)環(huán)繞外周神經(jīng)末梢的神經(jīng)周屏障(該屏障限制一些治療劑到達(dá)這些位點(diǎn)，I.Antonijevic等人，炎癥中的神經(jīng)周缺損和外周類阿片止痛，J.Neurosci 15(1995)165-172)，使得它們能輕易到達(dá)外周神經(jīng)末梢和相鄰位點(diǎn)。還可以通過(guò)緩釋“貼劑”遞送本發(fā)明組合物來(lái)進(jìn)行局部施用。因此，在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物還包括用于施用在皮膚或粘膜上以緩釋、具有被螯合的抗抑郁劑的貼劑遞送系統(tǒng)。
另一方面，本發(fā)明提供了通過(guò)將有效量的三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑局部施用到局部不適位點(diǎn)、來(lái)在個(gè)體例如哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生局部止痛作用的方法。術(shù)語(yǔ)“局部施用”包括本領(lǐng)域已知的任一局部施用方法。在本發(fā)明實(shí)施過(guò)程中使用的抗抑郁劑可局部注射，例如皮下或關(guān)節(jié)內(nèi)注射?；蛘撸h(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑可通過(guò)將包含任一適用于本發(fā)明的抗抑郁劑的霜?jiǎng)④浉鄤?、噴霧劑或凝膠劑施用到疼痛位點(diǎn)來(lái)局部給藥。其它本發(fā)明所述局部施用途徑包括局部涂敷、局部注射或皮下植入包封在緩釋載體例如脂質(zhì)體或微球中的抗抑郁劑。
術(shù)語(yǔ)“有效量”是指預(yù)防、治愈、或至少部分抑制個(gè)體中局部疼痛癥狀或不適所需的本發(fā)明化合物的量。個(gè)體是所有哺乳動(dòng)物、優(yōu)選是人。產(chǎn)生基本上局部療效的有效量當(dāng)然取決于引起疼痛癥狀的疾病的嚴(yán)重程度、個(gè)體體重和身體一般狀況。動(dòng)物模型，例如在本說(shuō)明書(shū)背景技術(shù)和實(shí)施例中描述的動(dòng)物模型一般可用于確定為了實(shí)現(xiàn)基本上局部遞送三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑所需要使用的合適劑量。Galer等人(特定用于神經(jīng)病性疼痛的疼痛測(cè)定的發(fā)展和初步確認(rèn)神經(jīng)病性疼痛評(píng)分體系，Neurology 48(1997)332-338)最近開(kāi)發(fā)出的、使用神經(jīng)病性疼痛特定術(shù)語(yǔ)的疼痛評(píng)分體系能更好地描繪綜合征中的癥狀。此外，在確定“治療有效量”中考慮的各種一般因素是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且描述在例如Gilman等人eds.，Goodman AndGilman′sThe Pharmacological Bases of Therapeutics，8th ed.，Pergamon Press，1990；和Remington′s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1990，這兩篇文獻(xiàn)都引入本發(fā)明以作參考。
本發(fā)明方法和組合物特別適于對(duì)本領(lǐng)域稱為“神經(jīng)病性疼痛”的疼痛癥狀產(chǎn)生局部止痛作用。本說(shuō)明書(shū)所用術(shù)語(yǔ)“神經(jīng)病性疼痛”是指屬于神經(jīng)病的疼痛癥狀(即由神經(jīng)系統(tǒng)的損害或功能障礙引起的)，包括一些相當(dāng)廣義的綜合征，例如外周神經(jīng)病、幻覺(jué)疼痛、反射交感性營(yíng)養(yǎng)不良、灼痛、中樞性疼痛、脊髓空洞癥、疼痛性瘢痕等。一些相當(dāng)局部化的綜合征也被認(rèn)為是神經(jīng)病。在這些病癥當(dāng)中有在身體、頭部或面部任意位點(diǎn)的特定神經(jīng)痛；糖尿病性、酒精性、代謝性或炎性神經(jīng)??；皰疹后的神經(jīng)痛；創(chuàng)傷后和牙髓受傷后的牙痛；胸廓出口綜合征；具有神經(jīng)壓迫的頸、胸、或腰神經(jīng)根病；侵襲神經(jīng)的癌癥；創(chuàng)傷后撕脫損傷；乳房切除術(shù)后的疼痛、胸廓切開(kāi)術(shù)后的疼痛；脊髓損傷后的疼痛；中風(fēng)后的疼痛；腹部皮下神經(jīng)包埋；神經(jīng)組織的原發(fā)性腫瘤；和蛛網(wǎng)膜炎等。
據(jù)信具有神經(jīng)病性組成的其它疼痛綜合征是殘肢疼痛、纖維瘤(fibromyalgia)、局部扭傷或勞損(壓碎性損傷)、肌筋膜疼痛、牛皮癬性關(guān)節(jié)病、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、骨髓炎、涉及神經(jīng)損傷的燒傷、AIDS相關(guān)疼痛綜合征、和結(jié)締組織障礙例如全身性紅斑狼瘡、全身性硬化、多肌炎、和皮膚肌炎等。
本發(fā)明組合物和方法還可特別適于對(duì)由炎性病癥引起的局部疼痛和不適癥狀產(chǎn)生局部止痛作用。可采用本發(fā)明治療的炎性病癥包括急性炎癥(例如創(chuàng)傷、手術(shù)和感染)或慢性炎癥(例如關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng))。
采用本發(fā)明組合物和方法治療伴有炎性或神經(jīng)病性疼痛的不適時(shí)，通過(guò)局部施用可獲得相當(dāng)高濃度的藥物，并且副作用(是系統(tǒng)吸收的特征)的發(fā)生率很低，產(chǎn)生了特別的益處。
如本說(shuō)明書(shū)實(shí)施例中詳細(xì)描述，使用大鼠脊髓神經(jīng)結(jié)扎(SNL)模型來(lái)確定三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑抗神經(jīng)病性疼痛的作用。在該模型中，局部施用三環(huán)類抗抑郁劑阿米替林和去郁敏在減緩熱痛覺(jué)過(guò)敏中表現(xiàn)出作用。觀察到了施用到神經(jīng)損傷后爪的阿米替林和去郁敏的局部抗痛覺(jué)過(guò)敏作用，對(duì)于對(duì)側(cè)爪子沒(méi)有共存的止痛作用。局部施用的阿米替林的最大作用在大小方面與系統(tǒng)注射的阿米替林相同，但是神經(jīng)病性疼痛的緩解表現(xiàn)所持續(xù)的時(shí)間比系統(tǒng)施用該藥物長(zhǎng)。局部施用后，局部作用在幼小動(dòng)物的對(duì)側(cè)爪子或爪子的熱閾方面沒(méi)有導(dǎo)致任何改變。此外，當(dāng)注射到對(duì)側(cè)爪子內(nèi)時(shí)，發(fā)現(xiàn)對(duì)同側(cè)反應(yīng)潛伏期沒(méi)有任何顯著影響，這證實(shí)了該作用的局部性質(zhì)。
與局部施用的阿米替林抗熱痛覺(jué)過(guò)敏的有益作用相反，觀察到阿米替林在神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的機(jī)械異常性疼痛的治療中無(wú)效。脊椎施用阿米替林(60μg)后，甚至可能有輕度事與愿違的作用，當(dāng)分析最大可能作用的累積變化(ΔMPE)時(shí)(附圖6C)，這種作用在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著意義。然而，將阿米替林的脊椎劑量增加至90μg時(shí)，引起了顯著的鎮(zhèn)靜作用，因此動(dòng)物在測(cè)試裝置中表現(xiàn)出軟弱無(wú)力，該結(jié)果阻礙它們對(duì)刺激作出反應(yīng)。在異常性疼痛測(cè)試中使用阿米替林所觀察到的值得關(guān)注的結(jié)果是在對(duì)側(cè)爪子中觀察到反應(yīng)閾下降了(附圖5A-C、6A-C、和附圖7A-C)，這是在本說(shuō)明書(shū)中稱為“感覺(jué)過(guò)敏觸覺(jué)反應(yīng)”的作用。雖然該感覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)閾與神經(jīng)損傷爪子的感覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)閾在性質(zhì)上相似，但是觀察到的行為反應(yīng)(活力收回)與正常神經(jīng)病性疼痛反應(yīng)表現(xiàn)出的行為反應(yīng)(即咬、舔、和防衛(wèi)動(dòng)作)不同。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，通過(guò)所有施用途徑給予的阿米替林良好地緩解了熱痛覺(jué)過(guò)敏，但是對(duì)異常性疼痛沒(méi)有作用。
這些發(fā)現(xiàn)意味著，熱痛覺(jué)過(guò)敏和觸覺(jué)異常性疼痛的病生理是通過(guò)不同機(jī)制維持的，關(guān)于這一點(diǎn)，已經(jīng)有人通過(guò)其它藥物例如右甲嗎南對(duì)這兩個(gè)終點(diǎn)具有不同作用特性而提出過(guò)暗示(M.Tal和G.J.Bebbett(1994)Neuroreport 51438-1440)。因此，三環(huán)類抗抑郁劑例如阿米替林在患者中的效力可通過(guò)其中神經(jīng)病性癥狀被最強(qiáng)地表現(xiàn)出的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。例如，在表現(xiàn)出嚴(yán)重異常性疼痛樣癥狀的患者中，阿米替林和具有類似活性的抗抑郁劑可能在疼痛方面沒(méi)有導(dǎo)致任何可覺(jué)察的不同。然而，如果主要病情的特征是痛覺(jué)過(guò)敏，則阿米替林和具有類似活性的藥物可緩解病情。
本發(fā)明所基于的實(shí)驗(yàn)還證實(shí)了抗抑郁劑例如三環(huán)類、第二代和第三代抗抑郁劑抗炎癥的局部外周抗感受傷害作用。在大鼠福爾馬林測(cè)試—一個(gè)眾所周知的炎癥動(dòng)物模型中，是通過(guò)減輕由于將福爾馬林注射到大鼠爪子中所致的疼痛反應(yīng)(退縮行為和咬/舔時(shí)間)來(lái)表明該抗感受傷害作用的。在該動(dòng)物模型中，注射到對(duì)側(cè)后爪中的阿米替林沒(méi)有作用，這證實(shí)了該作用的局部性質(zhì)。局部注射高達(dá)100nmol(相當(dāng)于0.22mg/kg系統(tǒng)劑量(對(duì)于142g大鼠))劑量的阿米替林時(shí)，觀察到了抗感受傷害作用。在2.5％福爾馬林測(cè)試中，當(dāng)與炎癥刺激劑福爾馬林共施用時(shí)，阿米替林、去郁敏和氟西汀10-300nmol使2期(16-60分鐘)退縮和咬/舔行為表現(xiàn)出與劑量相關(guān)的減輕。在最高劑量時(shí)，使1期退縮行為(0-12分鐘)減輕。該作用是局部介導(dǎo)的，這是因?yàn)楫?dāng)把這些抗抑郁劑(100和300nmol)注射到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)時(shí)，沒(méi)有觀察到該作用。通過(guò)與1500nmol咖啡因共施用，去郁敏和氟西汀的局部作用被部分改變了，但是阿米替林的作用被咖啡因逆轉(zhuǎn)了。
如本說(shuō)明書(shū)實(shí)施例所示，阿米替林的外周作用涉及與內(nèi)源性腺苷系統(tǒng)的相互作用。在大鼠福爾馬林測(cè)試中也表現(xiàn)出了通過(guò)改變腺苷細(xì)胞外可利用性而起作用的NH2dAD-腺苷激酶抑制劑的類似外周抗感受傷害作用。
在該福爾馬林測(cè)試中證實(shí)的局部施用的三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑的局部作用很強(qiáng)，1期和2期退縮行為和總的咬/舔時(shí)間被顯著抑制。
雖然抗抑郁劑的作用機(jī)制不構(gòu)成本發(fā)明一部分，但是已經(jīng)證實(shí)阿米替林的外周抗感受傷害作用涉及內(nèi)源性腺苷，隨后在感覺(jué)神經(jīng)末梢激活腺苷A1受體(Sawynok J.(1997)在Purinergic Approaches toExperimental Therapeutics(Ed.Jacobsen K.，Jarvis M.)Wiley-Liss Inc.，New York，495)。該觀測(cè)是基于咖啡因—一種非選擇性腺苷A1和A2受體拮抗劑、和CPT—一種選擇性腺苷A1受體拮抗劑抑制阿米替林對(duì)2期退縮反應(yīng)和咬/舔時(shí)間的影響的能力作出的。1期反應(yīng)不受咖啡因的影響，這可能是因?yàn)榱硪粰C(jī)制。
本發(fā)明所基于的實(shí)驗(yàn)還證實(shí)了腺苷激酶抑制劑(NH2dAD)可增強(qiáng)阿米替林的局部作用。腺苷激酶是細(xì)胞內(nèi)酶(J.D.Geiger等人，作為治療劑的內(nèi)源性腺苷水平調(diào)節(jié)劑Purinergic approaches inExperimental Therapeutics，Ed.Jacobsen，K.A.和Jarvis，M.F.，Wiley-Liss Inc.，New York(1997)55-84)，并且將其抑制會(huì)導(dǎo)致腺苷在細(xì)胞內(nèi)積聚，腺苷沿著濃度梯度從細(xì)胞中流出。這種作用將增強(qiáng)細(xì)胞外腺苷的攝取、和與阿米替林的相互作用。用2′-去氧助間型霉素抑制腺苷脫氨基酶不會(huì)產(chǎn)生相同反應(yīng)，這與這兩種活性劑表現(xiàn)出的相對(duì)內(nèi)在作用一致。
需要指出，在本說(shuō)明書(shū)描述的所有實(shí)驗(yàn)中，對(duì)腺苷可利用性的所有這些影響都附加在炎性刺激(福爾馬林)上。內(nèi)源性腺苷通常是由于福爾馬林的作用(Doak GJ，Sawynok J.(1995)Eur J Pharmacol 281311)以及炎癥過(guò)程(Cronstein，1994)在外周釋放的。因此，該刺激產(chǎn)生與阿米替林相互作用的物質(zhì)(腺苷及其攝取)。在低濃度福爾馬林模型中沒(méi)有觀察到或觀察到很有限的阿米替林的作用(附圖10A-C)可能是由于在較低刺激強(qiáng)度下內(nèi)源性腺苷的釋放不充分所致。
同樣，本發(fā)明所基于的實(shí)驗(yàn)表明在1.5％福爾馬林存在下咖啡因和CPT沒(méi)有內(nèi)在作用，或輕微降低了2.5％的福爾馬林的作用(參見(jiàn)附圖11A-C、12A-B和13A-B)。缺乏CPT作用表明由福爾馬林產(chǎn)生的內(nèi)源性腺苷的量不足以產(chǎn)生抗感受傷害作用；只有當(dāng)施用阿米替林并抑制腺苷攝取時(shí)才表現(xiàn)出該反應(yīng)。在2.5％福爾馬林測(cè)試中，咖啡因的適度作用可反映出在該實(shí)驗(yàn)中腺苷A2受體激活占輕微的主導(dǎo)地位。已表明咖啡因由于阻斷腺苷A1和A2受體的相反影響而缺乏外周內(nèi)在活性(Doak GJ，Sawynok J.(1995，上文))。
在脊髓神經(jīng)模型中，當(dāng)用熱爪刺激器測(cè)定閾值時(shí)，阿米替林(100nmol)和去郁敏(100nmol)在與結(jié)扎一側(cè)相一致的后爪中產(chǎn)生了局部和完全的抗痛覺(jué)過(guò)敏作用，氟西汀(100nmol)則沒(méi)有。最大有效劑量(100和300nmol)的去郁敏和阿米替林使爪子體積有輕微增加，但是在整個(gè)劑量范圍內(nèi)(10-300nmol)的氟西汀使爪子體積有顯著和持續(xù)增加。在該炎性疼痛模型中，當(dāng)與福爾馬林共注射時(shí)，沒(méi)有一種治療劑改變了福爾馬林導(dǎo)致的爪子膨脹程度。酮舍林—一種選擇性5-HT2受體拈抗劑抑制了氟西汀導(dǎo)致的爪子體積增加，但是其它選擇性5-HT受體拈抗劑則沒(méi)有。在福爾馬林測(cè)試和脊髓神經(jīng)結(jié)扎模型中，三環(huán)類抗抑郁劑去郁敏和阿米替林產(chǎn)生了顯著局部疼痛緩解作用，同時(shí)沒(méi)有導(dǎo)致爪子體積有明顯改變，這表明三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑可用于產(chǎn)生局部止痛作用，例如在炎性和神經(jīng)病性疼痛中產(chǎn)生局部止痛作用。
通過(guò)下述非限制性實(shí)施例來(lái)更詳細(xì)地描述本發(fā)明。
實(shí)施例1用雄性Sprague-Dawley大鼠(100-120g)(Charles River，Quebec，Canada)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物成對(duì)飼養(yǎng)，在22±1℃維持12∶12小時(shí)光照-黑暗循環(huán)，并使它們能任意攝取食物和水。A.制備脊髓神經(jīng)結(jié)扎動(dòng)物模型用無(wú)菌技術(shù)在解剖顯微鏡下對(duì)雄性大鼠進(jìn)行手術(shù)，并粘合上在疼痛研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中使用的IASP導(dǎo)線。通過(guò)將腰神經(jīng)后根L-5和L-6緊緊結(jié)扎來(lái)產(chǎn)生神經(jīng)病性癥狀。用氟烷(1.5-2.0％)將SpragueDawley大鼠(100-125g)麻醉并在手術(shù)期間維持麻醉。將動(dòng)物在背部骨盆區(qū)域進(jìn)行修剪，將抗菌滴眼劑滴到眼睛中以防止手術(shù)操作期間變干燥。將動(dòng)物置于熱水墊上(37±0.5℃)。將手術(shù)切開(kāi)區(qū)域洗凈，并用乙醇和碘滅菌。沿著背部中線切開(kāi)長(zhǎng)3cm的切口，以髂骨嵴的位置指示切口中線。在椎骨柱的左側(cè)骶骨水平上切一個(gè)穿刺切口。將粘附在脊髓上的韌帶朝著穿刺切口方向切2cm。采用鈍器解剖法來(lái)進(jìn)一步將剩余組織從脊髓上斷開(kāi)和分離。將一個(gè)牽開(kāi)器置于L-4脊椎上，使用另一個(gè)牽開(kāi)器來(lái)將肌肉從骶髂嵴上計(jì)數(shù)縮回。采用鈍器解剖法來(lái)清除骶髂嵴、L-6/S-1關(guān)節(jié)(小平面)關(guān)節(jié)、和L-6椎骨橫突。用咬骨鉗將小平面夾住。使用第三個(gè)牽開(kāi)器將肌肉從L-6椎骨橫突上縮回。
在解剖顯微鏡下，使用珠寶商用的鑷子，除去L-6椎骨橫突和骶髂嵴之間的結(jié)締組織。使用咬骨鉗緩慢地將L-6椎骨橫突夾住，并暴露出接近L-5/L-6神經(jīng)束的區(qū)域。使用玻璃探針將L-4/L-5神經(jīng)束鉤住，并操作以分離L-5神經(jīng)。一旦與L-4神經(jīng)分開(kāi)，即用6-0絲線將L-5神經(jīng)緊緊結(jié)扎，從而使神經(jīng)在結(jié)扎線兩側(cè)凸出。修剪縫線末端，將神經(jīng)放置回其原來(lái)位置。再使用玻璃探針將L-6神經(jīng)從骶髂嵴下鉤住，緊緊結(jié)扎(6-0絲線)，并放回骶髂嵴下面位置。清除所有損傷組織，擦干凈切口位點(diǎn)的所有血液。將肌肉和組織輕輕地反繞回原來(lái)位置以防止出現(xiàn)任何皮下氣皰。將肌肉筋膜和皮膚先后縫合(都使用3-0 Vicryl)。
手術(shù)后，將動(dòng)物置于具有熱燈的恢復(fù)箱中以進(jìn)行觀察。進(jìn)行完成功的手術(shù)后，大鼠能完全走動(dòng)，沒(méi)有表現(xiàn)出任何自發(fā)性疼痛的跡象(舔、咬、或神經(jīng)病性腳自主性、或發(fā)音)。如果大鼠起初表現(xiàn)出神經(jīng)病性足下垂，這種癥狀在手術(shù)后1-2天內(nèi)就消失了。用過(guò)量氟烷將手術(shù)后2天內(nèi)表現(xiàn)出行動(dòng)不足或自發(fā)性疼痛的動(dòng)物迅速實(shí)施安樂(lè)死。B.行為測(cè)試每天所有行為測(cè)試都在0800-1400進(jìn)行，并在神經(jīng)損傷后第7、12、17和22天進(jìn)行。但是插套管的動(dòng)物例外，其在插套管后第7和12天(分別是神經(jīng)損傷后第14和19天)進(jìn)行測(cè)試。7天的恢復(fù)期后，將大鼠從動(dòng)物室中取出，稱重，并在測(cè)試室中適應(yīng)40分鐘環(huán)境。然后將大鼠在測(cè)試裝置中放置30-40分鐘或者直至行為測(cè)試停止。
B.1.在測(cè)試期間建立和維持神經(jīng)病性疼痛為了確定由于將L5和L6脊髓神經(jīng)結(jié)扎所致的外周單神經(jīng)病，進(jìn)行靜態(tài)機(jī)械異常性疼痛和熱痛覺(jué)過(guò)敏測(cè)試。
B.2.測(cè)定熱痛覺(jué)過(guò)敏用Paw Thermal Stimulator System評(píng)價(jià)手術(shù)誘導(dǎo)的熱痛覺(jué)過(guò)敏。在測(cè)試前讓動(dòng)物適應(yīng)2次環(huán)境(從飼養(yǎng)設(shè)施中取出后30分鐘；在單獨(dú)測(cè)試室中20分鐘)。將大鼠成對(duì)置于刺激器保溫玻璃面(30±1℃)頂上的有機(jī)玻璃箱中。初始環(huán)境適應(yīng)之后，測(cè)試大鼠兩個(gè)爪子的基線收回潛伏期(秒)，每20分鐘測(cè)定一次，直至達(dá)到3個(gè)穩(wěn)定的基線為止。然后在施用藥物前，將動(dòng)物在其籠子中放置30-40分鐘，并讓它們能自由攝取食物和水。施用藥物后，將動(dòng)物放回測(cè)試箱中以進(jìn)行測(cè)試。
B.3.靜態(tài)機(jī)械異常性疼痛稱重并適應(yīng)測(cè)試室的環(huán)境之后，將大鼠置于升高的有機(jī)玻璃容器中，該容器具有金屬絲網(wǎng)底部，以使后爪的腹側(cè)表面能通過(guò)。再次讓大鼠適應(yīng)測(cè)試室的環(huán)境，并用Semmes-Weinstein單絲(StoeltingComp.，Wood Dale IL.)測(cè)定實(shí)驗(yàn)基線(在一個(gè)小時(shí)內(nèi)測(cè)定2次)。用Dixons上下法(Chaplan等人，1994)測(cè)定50％收回閾。簡(jiǎn)言之，將單絲置于爪子腹側(cè)表面上，從4.31絲(2.04g)開(kāi)始，并記錄反應(yīng)。陽(yáng)性反應(yīng)(爪子退縮，表現(xiàn)出疼痛行為特征)之后，施加較低重量的單絲。如果沒(méi)有表現(xiàn)出反應(yīng)，增加所施加單絲的重量。然后從列成表的關(guān)于反應(yīng)方式的值(k)、最后的單絲值(Xf，對(duì)數(shù)單位)確定收回閾，并用下述公式進(jìn)行內(nèi)插值替換50％g閾＝(10[X+kδ]f)/10000其中δ是刺激之間的平均差異。確定出基準(zhǔn)值后，將大鼠放回其最初的籠子中，并讓它們?nèi)我鈹z取食物和水，放置30-40分鐘。施用藥物后，將大鼠再次置于測(cè)試室中，并監(jiān)測(cè)取決于藥物施用途徑的適當(dāng)行為期限。測(cè)試結(jié)果如附圖1所示。
B.4.數(shù)據(jù)分析對(duì)于每一實(shí)驗(yàn)，記錄關(guān)于每一動(dòng)物兩只爪子的反應(yīng)閾的原始數(shù)據(jù)，并填入電子表格(Microsoft Excel 5.0)。然后依據(jù)所測(cè)試的神經(jīng)病性癥狀的逆轉(zhuǎn)(MPE(抗痛覺(jué)過(guò)敏或抗異常性疼痛))或依據(jù)對(duì)側(cè)爪子的止痛作用(MPE(止痛))將每一動(dòng)物的數(shù)據(jù)歸一成最大可能作用(MPE)。如下所述計(jì)算這些值MPE(抗神經(jīng)病)＝(PDR-IBR)/(CBR-IBR)其中PDR是同側(cè)爪子的給藥后反應(yīng)，IBR是同側(cè)爪子的基準(zhǔn)反應(yīng)，CBR是對(duì)側(cè)爪子的基準(zhǔn)反應(yīng)。同樣，如下所述計(jì)算MPE(止痛)MPE(止痛)＝(PDR-CBR)/(截距-CBR)其中截距是從熱刺激開(kāi)始算起的20秒，對(duì)于觸覺(jué)異常性疼痛，是15g，PDR是對(duì)側(cè)爪子給藥后的收回閾。因此，所報(bào)道或描述的各單個(gè)值是MPE±SEM。對(duì)于每一治療和給藥途徑，還以MPE中的累積變化(ΔMPE)表示藥物作用的時(shí)間過(guò)程。該值計(jì)算為整個(gè)時(shí)間過(guò)程中的各MPE值的總和(∑n)，假定對(duì)于基準(zhǔn)值MPE值為0(附圖中沒(méi)有顯示)。采用進(jìn)行成對(duì)比較的單向ANOVA(用于重復(fù)測(cè)定)(Dunnetts后hoc分析)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。為了比較多個(gè)治療組的ΔMPE，采用進(jìn)行成對(duì)比較的單向ANOVA(Student-Neuman-Keuls后hoc分析)。當(dāng)比較在各時(shí)間點(diǎn)或ΔMPE值中的平均值時(shí)，使用進(jìn)行Student-Neuman-Keuls后hoc校正的Student′s T-檢驗(yàn)。對(duì)于所有測(cè)試，認(rèn)為小于.05(P＜.05)的P值是顯著的。
這些測(cè)試表明，在大鼠中進(jìn)行脊髓結(jié)扎導(dǎo)致神經(jīng)病性疼痛，表現(xiàn)出靜態(tài)機(jī)械異常性疼痛和熱痛覺(jué)過(guò)敏癥狀，并在整個(gè)測(cè)試期間維持該癥狀(第7、12、17、22天)。如總結(jié)在附圖1中的數(shù)據(jù)所示，對(duì)于同側(cè)爪子，熱痛覺(jué)過(guò)敏的閾值為7.98±0.48秒，對(duì)于對(duì)側(cè)爪子，熱痛覺(jué)過(guò)敏的閾值為10.35±0.63秒。對(duì)于同側(cè)爪子，異常性疼痛表現(xiàn)的50％收回閾為2.20±0.28g，對(duì)于對(duì)側(cè)爪子，為13.37±0.37g。在每一隨后測(cè)試天，對(duì)于同側(cè)或?qū)?cè)爪子，閾值保持相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性，并且在基準(zhǔn)值中沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著差異。
B.5.藥物治療在結(jié)扎大鼠模型中進(jìn)行測(cè)試以確定三環(huán)類抗抑郁劑阿米替林的抗感受傷害作用。所有藥物治療都是盲的。在這兩個(gè)行為測(cè)試中，阿米替林(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)或鹽水都是系統(tǒng)施用(通過(guò)腹膜內(nèi)(i.p.)注射)、脊椎施用(通過(guò)植入鞘內(nèi)插管(i.t.))、或局部施用(通過(guò)皮下注射(s.c.)到爪子的背側(cè)表面內(nèi))。對(duì)于系統(tǒng)注射，藥物注射體積為5ml/kg，對(duì)于鞘內(nèi)注射，總體積為20μl(10μl藥物+10μl鹽水)。對(duì)于局部注射，用氟烷將大鼠短暫麻醉，將50μl溶液皮下注射到同側(cè)或?qū)?cè)爪子的背側(cè)表面內(nèi)。
C1.系統(tǒng)施用的阿米替林對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響如附圖2A-C中總結(jié)的數(shù)據(jù)所示，通過(guò)腹膜內(nèi)注射將劑量為1、3和10mg/kg體重的阿米替林系統(tǒng)施用到神經(jīng)損傷大鼠中，結(jié)果對(duì)神經(jīng)損傷爪子的熱閾產(chǎn)生了抗痛覺(jué)過(guò)敏作用。該作用在10mg/kg時(shí)最大；注射后60-80分鐘，熱痛覺(jué)過(guò)敏幾乎達(dá)到了完全逆轉(zhuǎn)(MPE＝0.94±-0.17)(附圖2A)。對(duì)于10mg/kg劑量，在對(duì)側(cè)爪子中觀察到閾值有輕微但是有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義的提高(附圖2B)。比較同側(cè)爪子的ΔMPE值(附圖2C)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與鹽水對(duì)照相比，10mg/kg阿米替林表現(xiàn)出有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義的抗感受傷害作用，對(duì)于1mg/kg和3mg/kg劑量也是如此。雖然1mg/kg和3mg/kg劑量產(chǎn)生的結(jié)果與鹽水對(duì)照相比有顯著差異，但是它們彼此之間沒(méi)有顯著差異。在少數(shù)幾只大鼠中觀察到了10mg/kg劑量的輕微鎮(zhèn)靜作用，但是對(duì)于其它劑量沒(méi)有觀察到任何這種鎮(zhèn)靜作用。該作用沒(méi)有影響動(dòng)物對(duì)刺激作出反應(yīng)的能力，在閾值的反應(yīng)強(qiáng)度與在基準(zhǔn)確定期間觀察到的反應(yīng)相似。
C2.鞘內(nèi)插管在用于測(cè)定脊椎施用阿米替林的作用的動(dòng)物中，神經(jīng)損傷后7天植入鞘內(nèi)插管。為了植入鞘內(nèi)插管以脊椎遞送藥物，用氟烷將大鼠麻醉，并固定在定向裝置的耳桿上。暴露出在腦殼基質(zhì)上的腦池膜，切一個(gè)小口，并把插管(7.5cm PE-10管)插到蛛網(wǎng)膜下空間。將該插管充滿鹽水，用小線塞將外端封閉。給大鼠注射Penlong XLR(0.15mli.m.)和乳酸鹽林格氏溶液(10ml s.c.)，同時(shí)維持麻醉。在測(cè)試當(dāng)天，將大鼠置于塑料容器中以進(jìn)行鞘內(nèi)注射(10μl體積，然后用10μl鹽水沖洗插管)。
C3.脊椎施用的阿米替林對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響如附圖3A-C中的數(shù)據(jù)所示，鞘內(nèi)注射阿米替林(60μg)使得神經(jīng)損傷大鼠對(duì)側(cè)爪子的熱痛覺(jué)過(guò)敏部分逆轉(zhuǎn)，這種作用在注射20分鐘后變明顯，并持續(xù)60分鐘測(cè)試期間。因?yàn)?0μg劑量在異常性疼痛測(cè)試中無(wú)效，并且90μg劑量產(chǎn)生高度鎮(zhèn)靜作用，因此沒(méi)有使用這些劑量來(lái)測(cè)試熱痛覺(jué)過(guò)敏作用。雖然各時(shí)間點(diǎn)的值自身之間沒(méi)有顯著差異(附圖3A)，但是鹽水和阿米替林(60μg)的ΔMPE值有顯著差異(附圖3C)。在對(duì)側(cè)爪子收回閾中，無(wú)論是各時(shí)間點(diǎn)的值還是ΔMPE值的比較，都沒(méi)有觀察到顯著差異(附圖3B和3C)。
C4.局部注射的阿米替林對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響當(dāng)局部注射到神經(jīng)病性爪子內(nèi)時(shí)，如本說(shuō)明書(shū)實(shí)施例2所述在大鼠福爾馬林測(cè)試中產(chǎn)生了局部抗感受傷害作用(附圖8)的劑量為100nmol的阿米替林在神經(jīng)損傷大鼠中具有迅速的有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義的抗感受傷害作用，幾乎將熱痛覺(jué)過(guò)敏完全逆轉(zhuǎn)(附圖4A)。在前120分鐘，這些MPE值與鹽水的MPE值有顯著差異。對(duì)側(cè)局部注射阿米替林(100nmol)對(duì)同側(cè)爪子的收回潛伏期沒(méi)有任何顯著影響(附圖4A)，該結(jié)果表明沒(méi)有系統(tǒng)作用。對(duì)于注射鹽水(同側(cè)爪子)的大鼠或在對(duì)側(cè)爪子中注射阿米替林(100nmol)的大鼠，沒(méi)有觀察到注射爪子的任何局部作用。
局部注射阿米替林100nmol后，幼小動(dòng)物的收回閾中沒(méi)有任何顯著改變(n＝4，沒(méi)有給出數(shù)據(jù))。此外，同側(cè)和對(duì)側(cè)局部注射都沒(méi)有對(duì)對(duì)側(cè)爪子收回潛伏期表現(xiàn)出任何顯著影響(附圖4B)。比較ΔMPE值表明，在對(duì)熱痛覺(jué)過(guò)敏的影響方面，局部注射的阿米替林與鹽水對(duì)照和對(duì)側(cè)注射對(duì)照相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義的差異(附圖4C)。
C5.系統(tǒng)施用的阿米替林對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的機(jī)械異常性疼痛的影響將阿米替林以1.5、5.0、和10.0mg/kg體重的劑量對(duì)神經(jīng)損傷大鼠系統(tǒng)給藥。對(duì)于任一劑量，在同側(cè)爪子中都沒(méi)有觀察到對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的異常性疼痛的任何顯著影響(附圖5A)。因?yàn)?0mg/kg劑量在一些大鼠中產(chǎn)生輕度鎮(zhèn)靜作用，所以沒(méi)有使用較高劑量。在對(duì)側(cè)爪子中，所有劑量的阿米替林都引起了感覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)，使得MPE(止痛)值下降，為-0.4--0.8(附圖5B)。每一劑量的ΔMPE值都與鹽水有顯著差異(附圖5C)。觀察到感覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)為對(duì)單絲的強(qiáng)烈收回，沒(méi)有任何局部神經(jīng)病性疼痛的征兆例如咬、舔、發(fā)聲或爪子有防衛(wèi)動(dòng)作。雖然未損傷爪子中的反應(yīng)閾值與損傷爪子中的反應(yīng)閾值非常相似，但是這些反應(yīng)沒(méi)有歸為“神經(jīng)病性疼痛反應(yīng)”。給藥24小時(shí)后測(cè)定的閾值表明同側(cè)和對(duì)側(cè)基準(zhǔn)返回給藥前的值(沒(méi)有給出數(shù)據(jù))。
C6.脊椎施用的阿米替林對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的機(jī)械異常性疼痛的影響還對(duì)脊椎施用阿米替林來(lái)測(cè)試其在同側(cè)爪子中抗神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的機(jī)械異常性疼痛的抗感受傷害作用。以30、60和90μg的劑量脊椎施用時(shí)，阿米替林在同側(cè)爪子中對(duì)異常性疼痛沒(méi)能產(chǎn)生顯著作用(附圖5A和6C)。然而，比較這3組的ΔMPE表明，60μg組與30μg和90μg組以及鹽水組之間有顯著差異(附圖6C)。脊椎施用的阿米替林(60μg)在對(duì)側(cè)爪子中引起了感覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)(附圖6B和6C)，該反應(yīng)在大小方面與系統(tǒng)給藥后觀察到的反應(yīng)相似。雖然90μg劑量(n＝3)看上去不能促進(jìn)感覺(jué)過(guò)敏，這種結(jié)果很可能是由于該劑量的阿米替林具有顯著的鎮(zhèn)靜作用、該鎮(zhèn)靜作用干擾收回閾值的精確測(cè)定所致。
C7.局部施用的阿米替林對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的機(jī)械異常性疼痛的影響還局部注射阿米替林來(lái)測(cè)試對(duì)神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的機(jī)械異常性疼痛的局部作用。局部注射阿米替林(100nmol)對(duì)于神經(jīng)損傷爪子對(duì)觸覺(jué)刺激的收回反應(yīng)沒(méi)有表現(xiàn)出任何顯著作用(附圖7A和7C)。然而，將阿米替林局部注射到神經(jīng)損傷爪子內(nèi)使對(duì)側(cè)爪子的反應(yīng)閾下降。將阿米替林(100nmol)直接局部注射到未損傷對(duì)側(cè)爪子內(nèi)之后也產(chǎn)生了該作用(附圖7B)。在對(duì)側(cè)爪子中觀察到的對(duì)局部施用的藥物的反應(yīng)與對(duì)鹽水的反應(yīng)有顯著差異，但是在各時(shí)間點(diǎn)與注射到未損傷爪子內(nèi)之后的反應(yīng)沒(méi)有不同(附圖7B)，并且比較ΔMPE也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)不同(附圖7C)。
實(shí)施例2用雄性Sprague-Dawley大鼠(120-160g；組平均142±4g)(CharlesRiver，Quebec，Canada)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物成對(duì)飼養(yǎng)，在22±1℃維持12∶12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)，并使它們能任意攝取食物和水。
測(cè)試藥物是阿米替林、咖啡因、5′-氨基-5′-去氧腺苷(NH2dAD)、鹽酸酚妥拉明、二甲亞砜(DMSO)(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)、8-環(huán)戊基-1，3-二甲基黃嘌呤(CPT)、N6-芐基-N-乙基甲酰胺腺苷(N6-芐基-NECA)、MK-801馬來(lái)酸氫鹽、鹽酸納洛酮(ResearchBiochemicals Inc.，Natick，NJ)、2′-去氧助間型霉素(Parke DavisPharmaceutical Research Division，Ann Arbor，MI)。福爾馬林(37％甲醛)(British Drug House，Toronto，Ontario)是對(duì)照刺激劑。除了CPT外所有藥物都溶于鹽水，并用福爾馬林稀釋至適當(dāng)劑量。將CPT以15％的終濃度溶于DMSO，并包括合適的對(duì)照組。A.福爾馬林測(cè)試在測(cè)試當(dāng)天，將大鼠在28×28×28cm有機(jī)玻璃觀察室中放置20分鐘，以使它們熟悉環(huán)境。將在50μl體積內(nèi)的指定劑量的福爾馬林(0.5-2.5％)和福爾馬林/藥物組合皮下注射到大鼠背側(cè)后爪內(nèi)。為了確定是否疼痛反應(yīng)的抑制是由于系統(tǒng)作用而不是局部作用，將測(cè)試藥物施用到對(duì)側(cè)爪子內(nèi)。為了注射到對(duì)側(cè)爪子內(nèi)，在將福爾馬林注射到另一爪子內(nèi)之前，立即注射藥物。注射后，將大鼠放回觀察室中，在2個(gè)時(shí)間期間-1期(給藥后0-12分鐘)和2期(給藥后16-60分鐘)內(nèi)監(jiān)測(cè)退縮行為(抬高、搖動(dòng)或輕晃臀部)。還監(jiān)測(cè)咬/舔時(shí)間。記錄是迅速事件的退縮作為不連續(xù)的發(fā)作，累積記錄咬或舔所消耗的時(shí)間。同時(shí)觀察在相鄰觀察室中的兩只大鼠，以交替的2分鐘二進(jìn)制位進(jìn)行觀察。記錄的發(fā)作和時(shí)間沒(méi)有校正，結(jié)果是獲得的值代表約一半總表現(xiàn)行為。
依次采用差異分析、和Student-Neuman-Keuls檢驗(yàn)(對(duì)于多組)或Student t-檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。B.阿米替林的局部抗感受傷害作用為了測(cè)試局部施用的抗抑郁劑的抗感受傷害作用，將阿米替林以10、30、和100nmol的劑量與2.5％福爾馬林一起施用。在注射后1期和2期內(nèi)都觀察到退縮行為表現(xiàn)出劑量依賴性減少。這些作用的時(shí)間過(guò)程呈現(xiàn)在附圖8A中，2個(gè)時(shí)期的累積分?jǐn)?shù)呈現(xiàn)在附圖9A和9B中。獲得了對(duì)咬/舔行為的類似劑量依賴性抑制(附圖8B和9C)；然而，在咬/舔行為中沒(méi)有觀察到任何顯著1期作用(附圖8B)。將阿米替林施用到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)之后，阿米替林對(duì)這兩個(gè)參數(shù)都沒(méi)有表現(xiàn)出抑制作用(附圖9A-B)。缺乏對(duì)對(duì)側(cè)后爪的抑制作用表明阿米替林的抗感受傷害作用是局部作用。
在較高濃度福爾馬林存在下，疼痛抑制非常明顯。例如對(duì)于0.75％福爾馬林，僅在退縮行為方面觀察到疼痛抑制作用，而對(duì)于0.5％的福爾馬林，根本沒(méi)有觀察到這種作用(附圖3)。C.腺苷參與阿米替林的局部抗感受傷害作用為了測(cè)定腺苷參與阿米替林的抗感受傷害作用，將咖啡因—一種非選擇性腺苷拮抗劑以500和1500nmol的劑量與阿米替林一起施用。在2期退縮和總的咬/舔時(shí)間中觀察到阿米替林的抗感受傷害作用被顯著逆轉(zhuǎn)，但是1期退縮沒(méi)有受到影響(附圖11A-C)。雖然在2.5％福爾馬林存在下咖啡因僅使阿米替林的作用被部分逆轉(zhuǎn)，但是咖啡因清楚地逆轉(zhuǎn)了腺苷的局部作用。因此，可推測(cè)腺苷的表達(dá)可取決于疼痛刺激的強(qiáng)度。為了檢驗(yàn)該假設(shè)，用低濃度福爾馬林進(jìn)行一些實(shí)驗(yàn)。100nmol濃度的阿米替林在1.5％福爾馬林測(cè)試中使2期退縮減輕的程度比在2.5％福爾馬林測(cè)試中減輕的程度低，但是咖啡因使阿米替林的抗感受傷害作用完全逆轉(zhuǎn)(附圖13A)。然而，在2.5％福爾馬林測(cè)試中，更高劑量的阿米替林(300nmol)產(chǎn)生的抑制程度可比100nmol阿米替林相比，咖啡因的逆轉(zhuǎn)程度仍然僅是部分逆轉(zhuǎn)(附圖13A)。
在1.5％福爾馬林測(cè)試中，將CPT—一種選擇性腺苷A1受體拮抗劑以150nmol的劑量與100nmol阿米替林一起施用，結(jié)果使阿米替林的作用被逆轉(zhuǎn)到施用咖啡因所達(dá)到的類似程度(圖13B)。對(duì)于1.5％福爾馬林，在許多實(shí)驗(yàn)中阿米替林對(duì)1期退縮的作用沒(méi)有被逆轉(zhuǎn)，只有與100nmol阿米替林一起施用的咖啡因逆轉(zhuǎn)了對(duì)咬/舔的作用(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。在1.5％福爾馬林測(cè)試中，咖啡因和CPT沒(méi)有產(chǎn)生內(nèi)在作用(附圖13A-B)，但是在2.5％福爾馬林濃度下，如比較數(shù)據(jù)所示，咖啡因使退縮輕微下降(附圖11A-C和附圖12A-B)。
在2.5％福爾馬林測(cè)試中，將NH2dAD—一種腺苷激酶抑制劑以100nmol一起施用，結(jié)果增強(qiáng)了部分有效劑量的阿米替林對(duì)2期退縮的作用(附圖14)，但是對(duì)1期退縮和咬/舔時(shí)間沒(méi)有影響(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。在該福爾馬林濃度下，該劑量水平的NH2dAD對(duì)福爾馬林行為沒(méi)有內(nèi)在作用。D.與阿米替林的局部抗感受傷害作用有關(guān)的其它機(jī)制已知阿米替林具有多種藥理作用。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過(guò)測(cè)定各自受體拮抗劑的作用來(lái)確定潛在涉及與興奮性氨基酸受體、生物所產(chǎn)生的胺(去甲腎上腺素、5-羥色胺或5-HT、組胺)和內(nèi)源性類阿片的相互作用。將非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA受體拮抗劑MK-801以20和100nmol的劑量與福爾馬林一起施用，結(jié)果使2期退縮行為和咬/舔時(shí)間產(chǎn)生劑量依賴性下降(附圖15A-B)，其中后一行為對(duì)抑制產(chǎn)生了更強(qiáng)的敏感性。沒(méi)有觀察到對(duì)1期退縮行為有任何顯著作用(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。將MK-810施用到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)之后觀察到了相同作用(附圖15A-B)，這表明MK-801的作用不是局部介導(dǎo)的。這些結(jié)果表明MK-801是通過(guò)系統(tǒng)途徑起作用的。在同側(cè)和對(duì)側(cè)后爪內(nèi)注射100nmol(不是20nmol)還在觀察間隔內(nèi)產(chǎn)生了行為活動(dòng)過(guò)強(qiáng)。與福爾馬林一起施用的較低劑量的MK-810(0.03和0.3nmol)對(duì)任何測(cè)試都沒(méi)有影響(n＝4，沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。
以100nmol的劑量共施用的酚妥拉明(PTA)—一種非選擇性腎上腺受體拮抗劑阿米替林的作用沒(méi)有任何顯著影響，但是以500nmol的劑量共施用增強(qiáng)了阿米替林的作用(附圖16A)。這種加強(qiáng)是由于酚妥拉明的內(nèi)在作用與阿米替林的內(nèi)在作用有加和效果，因?yàn)樵搫┝康姆油桌饕材塥?dú)自抑制福爾馬林的作用(附圖16A)。對(duì)于2期咬/舔時(shí)間也觀察到了相同的作用模式，但是沒(méi)有觀察到酚妥拉明對(duì)1期退縮有任何顯著作用(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。
為了測(cè)定阿米替林的抗組胺或抗血清素激活作用，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定阿米替林是否能夠改變N6-芐基NECA—一種腺苷A3受體激動(dòng)劑(該激動(dòng)劑是通過(guò)從肥大細(xì)胞中釋放組胺和5-HT而產(chǎn)生內(nèi)在感受傷害性行為)所導(dǎo)致的退縮行為。在這些測(cè)試中，100nmol阿米替林沒(méi)有改變由N6-芐基-NECA導(dǎo)致的退縮數(shù)目(不存在阿米替林時(shí)25.5±6.3次退縮，存在阿米替林時(shí)27.8±4.3次退縮，n＝6/組)。納洛酮—一種類阿片受體拮抗劑沒(méi)有改變阿米替林抗2期退縮(附圖16B)、1期退縮、或咬/舔時(shí)間的局部作用(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。
實(shí)施例3測(cè)試藥物是去郁敏、氟西汀、咖啡因和普萘洛爾(Sigma ChemicalCo.，St.Louis，MO)、酮舍林和托吡西隆(Research BiochemicalsInc.，Natick，NJ)、和GR113808A(Glaxo Research Group，Greenford，Middlesex，U.K.)。福爾馬林(37％甲醛)(British Drug House，Toronto，Ontario)是對(duì)照刺激劑。所有藥物都在鹽水中制備，并且當(dāng)共同施用時(shí)用福爾馬林稀釋至指定劑量。
如實(shí)施例1所述飼養(yǎng)大鼠并通過(guò)將第5和6條脊髓神經(jīng)結(jié)扎來(lái)進(jìn)行手術(shù)改變。預(yù)測(cè)試表明該脊髓結(jié)扎手術(shù)在與結(jié)扎相對(duì)應(yīng)的爪子中產(chǎn)生了2-3秒的熱痛覺(jué)過(guò)敏(未結(jié)扎一側(cè)基準(zhǔn)為10-12秒，結(jié)扎一側(cè)為710秒)，手術(shù)后該作用至少維持22天。A.福爾馬林測(cè)試如實(shí)施例2所述進(jìn)行該福爾馬林測(cè)試。注射后，將大鼠放回觀察室中，并對(duì)退縮行為(抬高、搖動(dòng)或輕晃臀部)和咬/舔時(shí)間評(píng)分。同時(shí)觀察在相鄰觀察室中的兩只大鼠，以交替的2分鐘二進(jìn)制位進(jìn)行觀察。記錄的發(fā)作沒(méi)有校正，因此獲得的值代表約一半總表現(xiàn)行為。B.去郁敏和氟西汀的局部抗感受傷害性作用當(dāng)以2.5％福爾馬林獨(dú)立注射到未手術(shù)改變大鼠的背側(cè)后爪內(nèi)時(shí)，去郁敏(10-300nmol)和氟西汀(30-300nmol)都產(chǎn)生了抗2期退縮行為(附圖17B)和2期咬/舔行為(附圖17C)的劑量依賴性抗感受傷害作用。1期退縮行為表現(xiàn)出更大的變異性，并且僅在最高劑量時(shí)有顯著下降(附圖17A)。咬/舔行為沒(méi)有任何1期表現(xiàn)(附圖18C)。在整個(gè)觀察期間內(nèi)，去郁敏以始終如一的方式抑制了這兩種疼痛反應(yīng)行為(如附圖18A-B所示)。使用氟西汀也觀察到了類似模式的行為抑制(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。然而，當(dāng)把在同側(cè)爪子中最有效力的劑量注射到對(duì)側(cè)后爪中時(shí)，沒(méi)有觀察到由于將去郁敏或氟西汀與福爾馬林一起施用所產(chǎn)生的抗感受傷害作用(附圖17A-C、18B和18C)。這些結(jié)果表明，局部注射的抗抑郁劑的抗感受傷害作用僅是局部作用。C.將去郁敏或氟西汀與咖啡因一起施用為了測(cè)試咖啡因?qū)挂钟羲幬锏目垢惺軅ψ饔玫挠绊懀褂?.5％濃度的福爾馬林，因?yàn)樵摑舛鹊母栺R林最清楚地顯示了腺苷參與阿米替林的作用(參見(jiàn)上文中實(shí)施例2)。將咖啡因(1500nmol)與去郁敏或氟西汀一起施用，結(jié)果在福爾馬林測(cè)試的任一方面都沒(méi)有對(duì)抗抑郁劑的抗感受傷害作用表現(xiàn)出顯著影響(附圖20A-C)。D.在熱痛覺(jué)過(guò)敏測(cè)試中局部施用去郁敏和氟西汀將神經(jīng)損傷大鼠(SNL)簡(jiǎn)單麻醉，以將藥物注射(以50μl體積)到手術(shù)位點(diǎn)(結(jié)扎位點(diǎn))同側(cè)的后爪背側(cè)部位來(lái)測(cè)試局部作用，或者注射到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)來(lái)測(cè)試系統(tǒng)介導(dǎo)的作用。讓不知道該特定治療的測(cè)定人員測(cè)定熱閾值。
將去郁敏(100nmol)但不是氟西汀(100nmol)局部施用到與手術(shù)位點(diǎn)一致的后爪內(nèi)，結(jié)果當(dāng)用熱爪子刺激器確定反應(yīng)閾值時(shí)，產(chǎn)生了局部抗痛覺(jué)過(guò)敏作用(附圖19A和4B)。注射到與未手術(shù)位點(diǎn)一致的對(duì)側(cè)爪子內(nèi)，沒(méi)有觀察到任何作用(附圖19B)。這些結(jié)果表明，在同側(cè)位點(diǎn)中觀察到的抗感受傷害作用是局部的。將劑量分別為100nmol的去郁敏或氟西汀局部注射到正常大鼠爪子(對(duì)照)內(nèi)，結(jié)果對(duì)熱閾值沒(méi)有任何影響(n＝4，未顯示數(shù)據(jù))。在脊髓神經(jīng)結(jié)扎模型中，將抑制阿米替林對(duì)脊髓神經(jīng)結(jié)扎后熱痛覺(jué)過(guò)敏的局部作用(實(shí)施例1)的咖啡因(1500nmol)一起施用，結(jié)果也阻斷了去郁敏的抗痛覺(jué)過(guò)敏作用(附圖21A-C)。E.去郁敏、氟西汀和阿米替林對(duì)爪子體積的影響使用市售裝置(Ugo，Basile)通過(guò)器官充滿度測(cè)量法測(cè)定爪子體積。將后爪插到溶液中至長(zhǎng)毛皮膚與無(wú)毛皮膚的接合處，通過(guò)置換確定爪子體積。在注射福爾馬林前確定基準(zhǔn)值(一式三份)，然后立即進(jìn)行持續(xù)至少60分鐘的行為觀察間隔。為了測(cè)定時(shí)間過(guò)程，在各組大鼠中(各組間是分開(kāi)的)如上所述在高達(dá)3小時(shí)期間內(nèi)以30分鐘的時(shí)間間隔測(cè)定體積。
通過(guò)將去郁敏和氟西汀(劑量為100或300nmol)與福爾馬林一起施用，來(lái)測(cè)試去郁敏和氟西汀的抗炎作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些抗抑郁劑對(duì)僅由1.5％福爾馬林引起的爪子體積增大沒(méi)有任何顯著影響，但是有這樣的趨勢(shì)，即在2.5％福爾馬林存在下氟西汀導(dǎo)致爪子體積增大(附圖22A)。在沒(méi)有炎性刺激存在的情況下，當(dāng)施用到對(duì)側(cè)后爪內(nèi)時(shí)，氟西汀還顯著地使爪子體積增加(附圖22B)。還確定了去郁敏和氟西汀作用的時(shí)間過(guò)程。在這些測(cè)試中，去郁敏對(duì)爪子體積產(chǎn)生了有限的影響(附圖23A)，但是氟西汀在整個(gè)3小時(shí)觀察期間內(nèi)使爪子體積表現(xiàn)出清楚的劑量相關(guān)性增加(附圖23B)。該爪子體積增加不伴有爪子變紅或自發(fā)性不適行為跡象(例如抬高、舔、搖動(dòng))。阿米替林還導(dǎo)致爪子體積有有限增加(附圖23C)，并且沒(méi)有顯著改變由1.5％福爾馬林引起的爪子膨脹的程度(沒(méi)有顯示數(shù)據(jù))。F.受體亞型在去郁敏和氟西汀的感受傷害性作用中的作用為了測(cè)定5-HT受體亞型涉及氟西汀(100nmol)的作用，以已知能阻斷5-HT作用的劑量測(cè)定當(dāng)注射到后爪內(nèi)時(shí)普萘洛爾(5-HT1受體拮抗劑)(300nmol)、酮舍林(5-HT2受體拮抗劑)(500nmol)、托吡西隆(5-HT3/4受體拮抗劑)(300nmol)、和GR113808A(5-HT4受體拮抗劑)(500nmol)對(duì)爪子體積的影響(G.J.Doak和J.Sawynok(1997)Neuroscience 80939-949)。這些測(cè)試結(jié)果表明，酮舍林阻斷了由于氟西汀引起的爪子體積增加，但是所有其它拮抗劑則沒(méi)有阻斷，這表明在該作用中涉及5-HT2受體亞型(附圖24A-B)。
實(shí)施例4A. 5-HT2受體拮抗作用在阿米替林外周止痛中的作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)解決本領(lǐng)域內(nèi)關(guān)于本發(fā)明阿米替林和其它三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑的止痛機(jī)制的明顯的前后矛盾。H.Hall等人首先提出有多種抗抑郁劑可阻斷5-HT2受體((1984)Acta PharmacolToxicol，54379-384)。最近，F(xiàn).V.Abott等人證實(shí)外周5-HT2受體阻斷劑可阻斷福爾馬林引起的行為(如上所述使用福爾馬林測(cè)試，只是使用的是1％福爾馬林)，并且根據(jù)該低劑量實(shí)驗(yàn)結(jié)果提出5-HT2受體拮抗劑可用作止痛劑((1996)Neuropharmacology 3599-110)。然而，當(dāng)上文中Doak和Sawynok(1997)采用2.5％福爾馬林測(cè)試詳細(xì)研究5-HT受體亞型參與福爾馬林引起的行為時(shí)，獲得的證據(jù)表明是5-HT1、5-HT3和5-HT4而不是5-HT2受體參與這種行為。附圖25總結(jié)了Doak和Sawynok在1997年的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
在福爾馬林實(shí)驗(yàn)中，已知有多種藥物作用是強(qiáng)度依賴性的(在其表現(xiàn)中)(例如Sawynok J.，Reid AR(1996)Eur J Pharmacol，298105-111)。由于在使用1％福爾馬林的Abott實(shí)驗(yàn)和使用2.5％福爾馬林的Doak和Sawynok實(shí)驗(yàn)中獲得的結(jié)果有明顯矛盾，因此進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)重新評(píng)價(jià)在這兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中使用的酮舍林—選擇性5-HT2受體拮抗劑的作用。
因?yàn)樵贏bbott實(shí)驗(yàn)中使用的是1％福爾馬林而不是在Doak和Sawynok實(shí)驗(yàn)中所用的2.5％福爾馬林，因此采用該較低劑量的福爾馬林、使用雄性Spague Dawley大鼠(n＝6/組)、如上述實(shí)施例2A所述進(jìn)行1％福爾馬林實(shí)驗(yàn)。附圖26所示的該重新評(píng)價(jià)結(jié)果表明，甚至在1％福爾馬林存在下，劑量為50nmol和500nmol(該劑量等于或大于在Abott實(shí)驗(yàn)中使用的9.5-50μg或0.92-92nmol)的酮舍林也不能阻斷福爾馬林在Spague Dawley大鼠中引起的退縮行為。與之相反，將劑量為3nmol和30nmol的酮舍林共施用來(lái)阻斷由于把5-HT注射到Spague Dawley大鼠后爪內(nèi)而引起的爪子體積改變。將藥物以50μl的體積注射，通過(guò)器官充滿度測(cè)量法(體積置換法)測(cè)定爪子水腫。在附圖27A和B中顯示的這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果清楚地表明，不能阻止1％福爾馬林誘導(dǎo)的退縮行為的該劑量酮舍林能足以阻斷由于局部注射5-HT所致的爪子水腫。
Abbott實(shí)驗(yàn)與Doak和Sawynok實(shí)驗(yàn)之間的唯一其它不同是所用大鼠的種類，Abbott實(shí)驗(yàn)使用的是Long Evans大鼠，而Doak和Sawynok實(shí)驗(yàn)使用的是Spague Dawley大鼠?？赡?-HT受體在這兩種大鼠中的感覺(jué)傳入神經(jīng)末梢上有不同表達(dá)。然而，需要指出的是，在使用其中觀察到阿米替林顯著止痛作用的大鼠和條件所進(jìn)行的試驗(yàn)中(2.5％福爾馬林，Spague Dawley大鼠)，不能證明5-HT2拮抗作用是在本說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)中觀察到的阿米替林和其它三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑的止痛作用的原因。B.膽堿能毒蕈堿和煙堿受體在阿米替林的外周止痛作用中的阻斷作用已知阿米替林能結(jié)合中樞毒蕈堿膽堿能受體(Hall H，Ogren SO.(1981)Eur.J.Pharmacol，70393-407；Choi A，Mitchelson F.(1994)Pharmacology，48293-300)，并且有人提出其對(duì)這類受體的親和力涉及臨床上觀察到的阿米替林的一些副作用(Baldessarini R.J.(1990)The Pharmacological Basis of Therapeutics，383-435)。阿米替林還阻斷煙堿受體介導(dǎo)的反應(yīng)(Schofiled G.G.等人(1981)Proc Natl Acad Sci USA，785420-5244Fryer J.D.，Lukas R.J.(1999)J Neurochem，721117-1124)，只是在這種情況下阻斷作用似乎是由于抑制其自身離子通道所致而不是在受體結(jié)合位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)性抑制所致。乙酰膽堿可刺激感覺(jué)神經(jīng)末梢而產(chǎn)生疼痛(Steen K.H.，ReehP.W.(1993)J Neurophysiol，70397-405；Bauer M.B.等人(1994)Neuroscience，62351-359)，并且煙堿和毒蕈堿受體是位于脊神經(jīng)后根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元和感覺(jué)神經(jīng)末梢上(Ninkovic M.，Hunt S.P.(1983)Brain Research，27257-69；Wamsley J.K.等人(1981)BrainResearch，217155-161)。由于這些發(fā)現(xiàn)，我們進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)確定毒蕈堿和煙堿膽堿能受體拮抗劑是否能模擬阿米替林的作用。
在這些實(shí)驗(yàn)中，在2.5％福爾馬林測(cè)試中使雄性Sprague Dawley大鼠(n＝5-8/組)接受與福爾馬林一起施用的劑量為10-1000nmol的阿托品(毒蕈堿受體拮抗劑)、美加明(神經(jīng)節(jié)煙堿受體拮抗劑)和d-筒箭毒堿(神經(jīng)肌肉煙堿受體拮抗劑)。附圖28A-C表示了如上所述測(cè)定的、藥物對(duì)1期(附圖28A)和2期退縮(附圖28B)以及2期咬/舔行為(附圖28C)的影響。
在這些測(cè)試中，阿托品只有在最高測(cè)試劑量(1000nmol)時(shí)才使退縮行為減輕。該作用是局部外周作用，這是因?yàn)榘寻⑼衅肥┯玫綄?duì)側(cè)后爪內(nèi)之后沒(méi)有觀察到作用。阿托品還使咬/舔行為產(chǎn)生劑量依賴性減輕，并且該作用看上去似乎是外周和中樞作用的復(fù)合作用，因?yàn)閷⑼衅肥┯玫綄?duì)側(cè)后爪內(nèi)在最高劑量也使該行為減輕(附圖28C)。美加明在最高劑量下對(duì)這兩種行為都沒(méi)有顯著影響。d-筒箭毒堿在10nmol的劑量下對(duì)福爾馬林引起的行為沒(méi)有任何影響，在100nmol劑量下d-筒箭毒堿是致死的，這可能是因?yàn)樵撍幬飳?duì)呼吸系統(tǒng)肌肉的系統(tǒng)活性引起呼吸停止所致。
這些結(jié)果表明，當(dāng)外周施用時(shí)，既定的膽堿能受體拮抗劑在抑制福爾馬林引起的行為方面僅有很弱的活性(阿托品)或沒(méi)有活性(美加明和d-筒箭毒堿)。根據(jù)這些結(jié)果可以推斷，阿米替林對(duì)福爾馬林行為的影響是由于阻斷感覺(jué)神經(jīng)末梢上的外周膽堿能受體所致。C.結(jié)論在大鼠福爾馬林測(cè)試中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有提供任何證據(jù)來(lái)支持阿米替林的止痛作用中涉及阻斷外周5-HT2、毒蕈堿膽堿能或煙堿膽堿能受體。迄今為止，盡管認(rèn)為在阿米替林的作用中可能涉及抗組胺、抗腎上腺素能、抗血清素激活和抗膽堿能作用，但是唯一清楚地涉及阿米替林作用的機(jī)制是與腺苷受體的一些形式的相互作用，因?yàn)橄佘帐荏w拮抗劑咖啡因部分阻斷了外周止痛作用。
對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，在不背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的情況下可對(duì)本發(fā)明作出各種改變，因此本發(fā)明還包括除在說(shuō)明書(shū)中具體公開(kāi)的實(shí)施方案之外的其它方案，并且本發(fā)明范圍僅由權(quán)利要求書(shū)限定。
權(quán)利要求
1.一種在具有局部不適位點(diǎn)的個(gè)體中產(chǎn)生局部止痛作用的方法，所述方法包括將有效量的三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑施用到所述位點(diǎn)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗抑郁劑是三環(huán)類抗抑郁劑。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑具有下述結(jié)構(gòu)Ar1-Z(R)-Ar2其中Z是任選包含1個(gè)或2個(gè)生物可相容雜原子的7元環(huán)、或8元二環(huán)，Ar1和Ar2是稠合到Z上的任選被取代的芳香環(huán)，且R是烷基氨基或芳基氨基取代基或它們的N-氧化物衍生物。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述雜原子是氧或氮。
5.權(quán)利要求3的方法，其中Ar1和Ar2獨(dú)立地任選被生物可相容鹵素取代。
6.權(quán)利要求3的方法，其中所述烷基氨基或芳基氨基取代基是它們的N-氧化物衍生物。
7.權(quán)利要求3的方法，其中所述烷基氨基取代基包含4-5個(gè)碳原子。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述烷基氨基是叔氨基或仲氨基。
9.權(quán)利要求3的方法，其中R選自-(CH2)3N(CH3)2、-(CH2)3NHCH3、-(CH2)3N(CH3)2、-CH2CH(CH3)CH2N(CH3)2、＝CH(CH2)2N(CH3)2、-(CH2)3NHCH3、和＝CH(CH2)2NHCH3。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑選自氯丙咪嗪、丙咪嗪、阿米替林、多塞平、去郁敏、去甲替林、阿莫沙平、馬普替林、曲米帕明、和它們當(dāng)中任意兩種或多種的合適組合。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是阿米替林或去郁敏。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述第二代或第三代抗抑郁劑選自米爾塔扎平、文拉法辛、曲唑酮、安非他酮、fefazodone、和它們當(dāng)中任意兩種或多種的合適組合。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述第二代或第三代抗抑郁劑具有下述結(jié)構(gòu)Ar3(Y)-X-Ar4(Q)其中Ar3是含氮雜環(huán)，Y是稠合到雜環(huán)上的芳基，或選自下述基團(tuán)的1個(gè)或2個(gè)取代基包含總共約4-8個(gè)碳原子的連接在Ar3上的烷基、芳基烷基、芳基烷氧基、芳基和雜芳基取代基，并且Q連接在Ar4上的另一個(gè)氮原子上。
14.權(quán)利要求13的方法，其中X是包含3個(gè)碳原子的烷基。
15.權(quán)利要求13的方法，其中Ar3是1，2，4-三嗪酮、Q是包含6-8個(gè)碳原子的雜芳基烷基取代基，并且在Q的4位被取代。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述烷基取代基包含3個(gè)碳原子。
17.權(quán)利要求13的方法，其中苯環(huán)被選自氯、溴和氟的鹵素取代。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是去郁敏。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是阿米替林。
20.權(quán)利要求1的方法，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是局部施用。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗抑郁劑是作為選自霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠劑、軟膏劑、噴霧劑、聚合物穩(wěn)定的晶體、粉劑、和氣霧劑的制劑施用的。
22.權(quán)利要求17的方法，其中所述抗抑郁劑是通過(guò)選自注射、超聲粉末注射、和透皮電穿孔的方法施用的。
23.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗抑郁劑是通過(guò)包封在選自微球、聚合物穩(wěn)定的晶體和脂質(zhì)體的遞送系統(tǒng)中施用的。
24.權(quán)利要求1的方法，其中所述止痛作用是抑制由炎癥引起的疼痛。
25.權(quán)利要求1的方法，其中所述止痛作用是抑制神經(jīng)病性疼痛。
26.一種局部施用組合物，包含不是多塞平的三環(huán)或雜環(huán)類抗抑郁劑、和適于局部施用的載體。
27.權(quán)利要求26的組合物，其中所述抗抑郁劑是三環(huán)類抗抑郁劑。
28.權(quán)利要求26的組合物，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑具有下述結(jié)構(gòu)Ar1-Z(R)-Ar2其中Z是任選包含1個(gè)或2個(gè)生物可相容雜原子的7元環(huán)、或8元二環(huán)，Ar1和Ar2是稠合到Z上的任選被取代的芳香環(huán)，且R是烷基氨基或芳基氨基取代基和它們的N-氧化物衍生物。
29.權(quán)利要求28的組合物，其中所述雜原子是氧或氮。
30.權(quán)利要求28的組合物，其中Ar1和Ar2獨(dú)立地任選被生物可相容鹵素取代。
31.權(quán)利要求28的組合物，其中所述烷基氨基或芳基氨基取代基是它們的N-氧化物衍生物。
32.權(quán)利要求28的組合物，其中所述烷基氨基取代基包含4-5個(gè)碳原子。
33.權(quán)利要求32的組合物，其中所述烷基氨基是叔氨基或仲氨基。
34.權(quán)利要求28的組合物，其中R選自-(CH2)3N(CH3)2、-(CH2)3NHCH3、-(CH2)3N(CH3)2、-CH2CH(CH3)CH2N(CH3)2、＝CH(CH2)2N(CH3)2、-(CH2)3NHCH3、和＝CH(CH2)2NHCH3。
35.權(quán)利要求26的組合物，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑選自氯丙咪嗪、丙咪嗪、阿米替林、去郁敏、去甲替林、阿莫沙平、馬普替林、曲米帕明、和它們當(dāng)中任意兩種或多種的合適組合。
36.權(quán)利要求26的組合物，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是阿米替林或去郁敏。
37.權(quán)利要求26的組合物，其中所述第二代或第三代抗抑郁劑具有下述結(jié)構(gòu)Ar3(Y)-X-Ar4(Q)其中Ar3是含氮取代雜環(huán)，Y是稠合到雜環(huán)上的芳基，或選自下述基團(tuán)的1個(gè)或2個(gè)取代基包含總共約4-8個(gè)碳原子的連接在Ar3上的烷基、烷氧基、芳基烷基、芳基烷氧基、芳基、雜芳基取代基、和它們的組合，X是連接Ar3和Ar4的包含2-5個(gè)碳原子的烷基，Ar4是通過(guò)Ar4上的第一個(gè)氮原子連接在X上的哌嗪，且Q是任選被生物可相容鹵素取代、并且連接在Ar4上的第一個(gè)氮原子的苯環(huán)。
38.權(quán)利要求37的組合物，其中X是包含3個(gè)碳原子的烷基。
39.權(quán)利要求37的組合物，其中Ar3是在4位被包含6-8個(gè)碳原子的芳基烷氧基取代基取代的1，2，4-三嗪酮。
40.權(quán)利要求39的組合物，其中所述雜芳基烷基取代基包含氧原子。
41.權(quán)利要求37的組合物，其中所述苯環(huán)被選自氯、溴和氟的鹵素取代。
42.權(quán)利要求23的組合物，其中所述組合物還包含惰性載體。
43.權(quán)利要求42的組合物，其中所述惰性載體選自水、異丙醇、氣態(tài)碳氟化合物、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮、丙二醇、香料、凝膠生成材料、硬脂醇、硬脂酸、鯨蠟、脫水山梨醇一油酸酯、甲基纖維素、以及它們的合適組合。
44.權(quán)利要求26的組合物，其中所述組合物還包含滲透促進(jìn)劑。
45.權(quán)利要求26的組合物，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑選自去郁敏、阿米替林和它們的合適組合。
46.權(quán)利要求26的組合物，其中所述組合物還包含滲透促進(jìn)劑。
47.權(quán)利要求26的組合物，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是去郁敏。
48.權(quán)利要求26的組合物，其中所述三環(huán)類抗抑郁劑是阿米替林。
49.權(quán)利要求26的組合物，其中所述組合物是在選自霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠劑、軟膏劑、噴霧劑、粉劑、聚合物穩(wěn)定的晶體、和氣霧劑的制劑中。
50.權(quán)利要求26的組合物，其中所述組合物還包含中和劑。
51.權(quán)利要求26的組合物，其中所述組合物是配制成局部注射制劑。
52.權(quán)利要求26的組合物，其中所述抗抑郁劑包封在緩釋遞送載體中。
53.權(quán)利要求52的組合物，其中所述遞送載體選自脂質(zhì)體、微膠囊、聚合物穩(wěn)定的晶體。
全文摘要
已經(jīng)證明,當(dāng)局部施用時(shí),三環(huán)類、第二代或第三代抗抑郁劑能在具有局部不適位點(diǎn)的個(gè)體中產(chǎn)生止痛作用。當(dāng)局部施用時(shí),這類抗抑郁劑的止痛作用與通過(guò)系統(tǒng)施用所達(dá)到的止痛作用相當(dāng),并且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。本發(fā)明提供了含有三環(huán)類、第二代和第三代抗抑郁劑的局部施用組合物,例如在緩釋遞送載體中配制成用于局部涂敷或注射的制劑,和使用它們產(chǎn)生局部止痛作用的方法。
文檔編號(hào)A61P29/02GK1308530SQ99808408
公開(kāi)日2001年8月15日 申請(qǐng)日期1999年5月19日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月19日
發(fā)明者J·索伊諾克, M·埃瑟, A·雷德 申請(qǐng)人:達(dá)爾豪榭大學(xué)