專利名稱：哌嗪酮衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的作為血纖維蛋白原與GpⅡb/Ⅲa血小板受體結(jié)合的抑制劑并且可以作為抗凝血劑用于治療的化合物。
在導致血栓(血凝塊)形成及增長的病理學過程中，血小板聚集代表一個關(guān)鍵步驟，其原因在于它是這一現(xiàn)象加劇的根源。特別地，從開始形成血栓，尤其在動脈血液循環(huán)中，一些相互依賴的生物化學反應(yīng)的作用導致可溶性血纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成不溶性血纖維蛋白絲，這種血纖維蛋白絲增加了血小板團塊的體積，從而使愈來愈多的血小板首先在動脈血管損害的所在部位、然后逐漸發(fā)展到管腔中聚集。
在血小板聚集的機制中，GpⅡb/Ⅲa受體活化是血小板聚集增長的根源。血纖維蛋白原，可以通過其兩個二聚物結(jié)合到這些受體上，擴大血小板之間的這種結(jié)合，從而導致形成血小板團塊，在動脈粥樣化斑塊破裂的位置形成血栓。
無論血小板聚集出現(xiàn)在進行介入心臟病學(經(jīng)腔經(jīng)皮血管成形術(shù)；插入移植片固定模)、心臟手術(shù)(主動脈冠狀動脈搭橋術(shù)；瓣膜手術(shù))實踐中，在急性心臟病(心肌梗塞，不穩(wěn)定的心絞痛、急性冠脈綜合征，等)過程中或某些腦局部出血過程中，或在會使隨后的抗血栓形成的治療復雜化的心肌局部出血過程中的哪個階段，這種血小板聚集機制在所有動脈血栓中都特別活躍。
降低或抑止血小板與破裂的動脈粥樣硬化斑塊接觸的活性，代表一種獨特的和有效的治療血栓-尤其是動脈血栓-的方法，和一種有效的預(yù)防包括不穩(wěn)定心絞痛和心肌梗塞在內(nèi)的急性冠脈綜合征的方法。
本發(fā)明的目的在于提供可以用作抗血栓形成藥品的新的競爭性地抑制血纖維蛋白原結(jié)合到GpⅡb/Ⅲa受體上的抑制劑。
本發(fā)明的目的還在于提供可以口服的因而能得到延長的作用時間并可以最大限度地減小或避免出血危險的化合物。
本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)化合物 其中.R1選自氫、C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)；.R2選自氫、羥基和脒基的保護基團；.R3選自-氫，-C1-C5烷基、C3-C12單或二環(huán)環(huán)烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4炔基，任選地，這些基團可以被鹵素和羥基取代，-單-、二-或三環(huán)C6-C14芳基，-選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、苯并二噁烷基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基和吡嗪基的雜芳基，-任選地芳核取代的苯基(C1-C4)烷基和萘基(C1-C4)烷基和3,4-亞甲二氧芐基，R4和R5分別獨立地選自氫、C1-C5烷基，或共同與氮原子形成選自哌啶基或嗎啉基的基團，芳基或雜芳基可以用一或多個獨立地選自鹵素、C1-C4烷基、三氟甲基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基磺?；?、C1-C4烷氧基、硝基和其中R是C1-C4烷基的-COOR、-CH2COOR或-O-CH2-COOR，橋氧基在哌嗪的2或3位；和其與藥學可接受的酸形成的加成鹽。芳香基的例子可以是苯基、α-萘基、β-萘基和芴基。
C1-C5烷基可以是直鏈或支鏈。作為實例可以列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和戊基。
炔基可以是例如乙炔基、炔丙基或丁炔基。
烯基可以是例如乙烯基和烯丙基。
C1-C4烷氧基類似地是可以呈直鏈或支鏈。作為實例可以列舉甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基和異丁氧基。
鹵素可以選自氟、氯、溴和碘。
作為脒基的保護基團，可以提及乙氧羰基，芐氧基羰基，對硝基芐氧基羰基和叔丁氧基羰基。
“與藥學上可接受的酸形成的加成鹽”表示具有自由堿基的生物學性質(zhì)而沒有不良作用的鹽。這些鹽尤其可以是與無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸形成的鹽；酸性金屬鹽如正磷酸二鈉和硫酸氫鉀，以及與有機酸形成的鹽。
化合物可以通過以下方法制備a)下式的酸 其中Z是以下基團的前體基團 與下式的胺反應(yīng) 其中R1’是C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)，產(chǎn)生下式的化合物 b)將基團Z轉(zhuǎn)化成下式的基團
c)任選地將基團R’1轉(zhuǎn)化成氫原子式Ⅱ的酸可以與式Ⅲ的胺在偶合劑(DCC/HOBT,BOP或氯甲酸異丁酯)存在下在極性溶劑如DMF、THF或乙酸乙酯中在15℃-50℃反應(yīng)。
在其中Z是基團N≡C-的情況下，基團Z可以通過在適宜的堿(K2CO3、Et3N或NaOC2H5)存在下在醇溶劑中在腈基處加成胲轉(zhuǎn)化成偕胺肟。在鈀炭存在下，在乙酸酐和乙酸的混合物中，由所得化合物氫解得到其中R2是氫的化合物(直接形成其中當R’1是芐基時，R1=H的化合物)。
當Z是N≡C-基團時，也可以通過在鹽酸存在下在乙酸乙酯中加入乙醇將Z轉(zhuǎn)化成亞氨酸酯。然后可以通過在乙醇/乙酸乙酯的介質(zhì)中與相應(yīng)的胺反應(yīng)，將得到的亞氨酸酯轉(zhuǎn)化成其中R2是氫、-NR4R5是哌啶基或嗎啉基的式(Ⅰ)化合物。
當Z是腈基時，可以按以下流程得到含有2-哌嗪酮基團的式Ⅱ
流程1在質(zhì)子惰性溶劑中，4-氟芐腈與過量乙二胺反應(yīng)，產(chǎn)生4-(2-氨基乙基)芐腈，然后在有無機堿或叔胺存在下在極性溶劑如乙醇或乙腈中，用溴乙酸乙酯將其單烷基化。用氯乙酰氯將其酰化，隨后環(huán)化并水解，得到酸(1)。
當Z是腈基時，可以按以下流程得到含有3-哌嗪酮基團的式Ⅱ 流程2用溴乙酸乙酯對4-(2-氨基乙基)芐腈二烷基化；在叔胺、無機堿或其混合物存在下進行環(huán)化；水解后，得到酸(2)。
通常通過將式Ⅰ化合物與藥學可接受的酸在適宜的溶劑中反應(yīng)得到加成鹽。相反地，通過用強堿處理可從加成鹽得到堿。
以下實施例說明式Ⅰ化合物的制備。
A-式Ⅱ化合物的制備1合成2-[4-(4-氰基苯基)-2-氧代哌嗪基]乙酸(1)a)4-(2-氨基乙基氨基)芐腈將4-氟芐腈(167g,1.38mol)、乙二胺(330g,5.5mol)和碳酸鉀(300g,2.17mol)在21甲苯中形成的混懸液加熱回流6小時。冷卻到室溫后，將混合物過濾，用甲苯清洗，蒸發(fā)濾液得到黃色的油，將其在甲苯中結(jié)晶。將產(chǎn)品過濾，用甲苯清洗，在50℃真空干燥，得到200g淡黃色固體。
產(chǎn)率=90％。
熔點=85℃1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ1,2(bs,2H),2,9(t,2H),3,12(q,2H),4,7(bs,1H),6,5(d,2H),7,3(d,2H).
b)2-{2-(氯乙?；?-2-(4-氰基苯胺基)乙氨基}乙酸乙酯將溴乙酸乙酯(84g,0.5mol)加入4-(2-氨基乙氨基)芐腈(80.5g,0.5mol)和二異丙基乙胺(65g,0.5mol)在800ml乙腈中形成的混懸液中。室溫下持續(xù)攪拌18小時。蒸除大部分乙腈，將殘余物溶于二氯甲烷。水洗，并用硫酸鈉干燥；使粗產(chǎn)品通過硅膠短柱[洗脫液二氯甲烷，然后是20/1二氯甲烷/甲醇]得到油狀物。
將以上得到的產(chǎn)品溶于1L四氫呋喃。加入二異丙基乙胺(51g,0.4mol)，在約5℃緩慢添加氯乙酰氯(45g,0.4mol)。在室溫攪拌18小時后，加入1L乙酸乙酯，用水洗滌3次，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)溶劑。得到一種固體，將其與二氯甲烷/乙醚(1/3)混合物攪拌。將混懸液過濾，用二氯甲烷/乙醚(1/3)清洗，并真空干燥，得到100g晶狀淡棕色固體。
產(chǎn)率=62％1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ1,2(q,6H),3,3(m,4H),3,65(m,4H),3,8(s,2H),3,9(d,4H),4,1(s,4H),4,15(q,4H),4,9(t,1H),5,3(t,1H),6,5(dd,4H),7,3(dd,4H).
c)2-[4-(4-氰基苯基)-2-氧代哌嗪基]乙酸乙酯將由2-{2-(氯乙酰基)-2-(4-氰基苯胺基)乙基氨基}乙酸乙酯(152g,0.47mol)、二異丙基乙胺(73g,0.57mol)和碘化鈉(85g,0.57mol)在1.2L乙腈中形成的混懸液加熱回流2小時。蒸除溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷并用水洗，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)溶劑，得到棕色油狀物，其在環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物中結(jié)晶，得到125g棕色晶狀固體。
產(chǎn)率=93％熔點=108℃1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ1,3(t,3H),3,65(m,4H),4,05(s,2H),4,2(m,4H),6,8(d,2H),7,5(d,2H).
d)2-[4-(4-氰基苯基)-2-氧代哌嗪基]乙酸將2-[4-(4-氰基苯基)-2-氧代哌嗪基]乙酸乙酯(20.7g,72mmol)溶于80ml甲醇、80ml四氫呋喃和100ml水，然后加入氫氧化鋰一水合物(4g,98mmol)。持續(xù)攪拌20分鐘，然后在真空下除去有機溶劑。在得到的混懸液中加入約100ml水，酸化。過濾并且水洗，在50℃真空干燥，得到18.5g淡棕色粉末。
產(chǎn)率=100％熔點=215℃(分解)1H-RMN(200MHz,DMSO-d6):δ3,5(t,2H),3,65(t,2H),4,0(s,2H),4,1(s,2H),7,0(d,2H),7,6(d,2H).2合成2-[4-(4-氰基苯基)-3-氧代哌嗪基]乙酸(2)a)2-[2-(4-氰基苯氨基)乙基(2-乙氧基-2-氧乙基)氨基]乙酸乙酯將4-(2-氨基乙氨基)芐腈(1a)(32g,0.2mol)，碳酸鉀(55g,0.4mol)和溴乙酸乙酯(67g,0.4mol)在400ml乙腈中形成的混懸液加熱回流18小時。過濾并將粗產(chǎn)品通過短硅膠柱(洗脫劑二氯甲烷)，得到58g棕色油。
產(chǎn)率=87％1H-RMN(200MHz,CDCl3):δ1,3(t,3H),3,05(t,2H),3,4(s,2H),3,55(s,2H),3,8(t,2H),4,2(q,2H),7,45(d,2H),7,6(d,2H).
MS-Clm/z:287(M+H)+b)2-[4-(4-氰基苯基)-3-氧哌嗪基]乙酸2-[2-(4-氰基苯氨基)乙基(2-乙氧基-2-氧乙基)氨基]乙酸乙酯(58g,0.174mol)、二異丙基乙胺(4g,0.03mol)和碳酸鉀(24g,0.174mol)在400ml乙腈中形成的混懸液加熱回流2天。將混合物過濾并用二氯甲烷清洗。蒸發(fā)濾液得到棕色固體，將它溶于150ml甲醇和50ml水，然后加入氫氧化鋰一水合物(8.4g,0.2mol)。在室溫攪拌30分鐘，真空除去一半甲醇，得到一混懸液。加入約100ml水并在5℃將混合物酸化。將產(chǎn)物過濾，用水清洗，在50℃真空干燥得到27.2g淡棕色粉末。
產(chǎn)率=55％熔點=120℃1H-RMN(200MHz,DMSO-d6):δ2,95(t,2H),3,3(s,2H),3,4(s,2H),3,7(t,2H),7,65(d,2H),7,85(d,2H).
B-制備式Ⅳ的中間體產(chǎn)品1合成3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙酰基]氨基}丙酸乙酯(中間體B1)在5-10℃向2-[4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基]乙酸(2.59g,10mmol)和N-甲基嗎啉(2.1g,20.8mmol)在30ml四氫呋喃中形成的混懸液中加入氯甲酸異丁酯(1.39g,10mmol)，此后將混合物在室溫攪拌10分鐘；然后加入3-氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(1.55g,10mmol)。持續(xù)攪拌1小時，蒸除溶劑，用快速色譜純化殘余物(15/1二氯甲烷/甲醇)，得到2g白色固體。
產(chǎn)率=56％1H-RMN(200MHz,CDCl3):δ1,25(t,3H),2,5(t,2H),3,5(dd,2H),3,65(m,4H),4,05(s,2H),4,08(s,2H),4,1(q,2H),6,75(bs,1H),6,8(d,2H),7,55(d,2H).用1所述方法制備以下中間產(chǎn)物2:3-([2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}丙酸芐酯(中間體B2)原料3-氨基丙酸芐酯甲苯磺酸鹽產(chǎn)率=71％1H-RMN(200MHz,CDCl3):δ2,55(t,2H),3,5(q,2H),3,6(s,4H),4,0(s,2H),4,05(s,2H),5,1(s,2H),6,8(m,3H),7,3(m,5H),7,5(d,2H).3:3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}丙酸乙酯(中間體B3)原料乙基3-氨基-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)丙酸乙酯鹽酸鹽產(chǎn)率=59％1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ1,15(t,3H),2,8(m,2H),3,65(m,4H),4,1(m,6H),5,3(q,1H),5,9(d,2H),6,85(m,5H),6,9(d,1H),7,5(d,2H).4:3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}丙酸芐酯(中間體B4)原料3-氨基-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)丙酸芐酯甲苯磺酸鹽產(chǎn)率=49％1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ2,8(m,2H),3,55(s,4H),4,0(s,2H),4,1(q,2H),5,0(d,2H),5,3(q,1H),5,9(d,2H),6,7(m,6H),7,25(m,6H),7,5(d,2H).5:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(吡啶基)丙酸乙酯(中間體B5)原料3-氨基-3-(吡啶基)丙酸乙酯二鹽酸鹽產(chǎn)率=54％1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ1,05(t,3H),2,85(m,2H),3,65(m,4H),4,1(m,6H),5,4(q,1H),6,75(d,2H),7,25(q,1H),7,5(d,2H),7,65(d,1H),7,75(bs,1H),8,45(d,1H),8,55(s,1H).6:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(吡啶基)丙酸芐酯(中間體B6)原料3-氨基-3-(吡啶基)丙酸芐酯二甲苯磺酸鹽產(chǎn)率=48％1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ2,95(dd,2H),3,6(s,4H),4,0(s,2H),4,1(q,2H),5,0(s,2H),5,45(q,1H),6,75(d,2H),7,25(m,6H),7,5(d,2H),7,65(d,1H),7,75(d,1H),8,5(d,1H),8,6(s,1H).7:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-5-苯基戊酸乙酯(中間體B7)原料3-氨基-5-苯基戊酸乙酯鹽酸鹽產(chǎn)率=63％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ1,2(t,3H),1,8(m,2H),2,5(dq,2H),2,6(t,2H),3,6(dd,4H),4,1(m,6H),4,2(m,1H),6,65(d,1H),6,75(d,2H),7,1(m,3H),7,2(m,3H),7,5(d,2H).8:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-環(huán)己基丙酸乙酯(中間體B8)原料3-氨基-3-環(huán)己基丙酸乙酯鹽酸鹽產(chǎn)率=59％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ0,9(m,2H),1,1(m,3H),1,15(t,3H),1,35,(m,1H),1,6(m,5H),2,3(dd,1H),2,5(dd,1H),3,5(m,2H),3,6(m,2H),4,0(m,7H),6,95(d,2H),7,6(d,2H),7,8(d,1H).9:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}5-甲基己酸乙酯(中間體B9)原料3-氨基-5-甲基己酸乙酯鹽酸鹽直接將粗產(chǎn)品用于實施例910:3-([2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-4,4-二甲基戊酸乙酯(中間體B10)原料3-氨基-4,4-二甲基戊酸乙酯鹽酸鹽直接將產(chǎn)品用于實施例1011:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-4-甲基戊酸乙酯(中間體B11)原料3-氨基-4-甲基戊酸乙酯鹽酸鹽直接將產(chǎn)品用于實施例1112:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-3-氧哌嗪基)乙酰基]氨基}丙酸乙酯(中間體B12)向2-[4-(4-氰基苯基)-3-氧哌嗪基]乙酸(實施例2b)(2.59g,10mmol)和N-甲基嗎啉(2.1g,20mmol)在30ml四氫呋喃中的混懸液中加入氯甲酸并丁酯(1.39g,10mmol),隨后將此混合物在40℃水浴中加熱5分鐘；然后加入3-氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(1.55g,10mmol)。在室溫持續(xù)攪拌18小時；蒸除溶劑,用快速色譜純化殘余物(15/1二氯甲烷/甲醇)得到1.7g白色固體。
產(chǎn)率=48％1H-RMN(200MHz,CDCl3):δ1,25(t,3H),2,6(t,2H),2,95(t,2H),3,15(s,1H),3,4(s,2H),3,55(dd,2H),3,8(dd,2H),4,1(q,2H),7,45(bs,1H),7,5(d,2H),7,7(d,2H).用12所述方法制備以下中間產(chǎn)物13:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-3-氧哌嗪基)乙酰基]氨基}丙酸芐酯(中間體B13)原料3-氨基丙酸芐酯甲苯磺酸鹽產(chǎn)率=69％1H-RMN(200MHz,CDCl3):δ2,6(t,2H),2,8(t,2H),3,1(s,2H),3,4(s,2H),3,55(q,2H),3,65(dd,2H),5,1(s,2H),7,3(s,5H),7,4(bs,1H),7,45(d,2H),7,6(d,2H).14:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-3-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基-5-基)丙酸乙酯(中間體B14)原料3-氨基-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基-5-基)丙酸乙酯鹽酸鹽產(chǎn)率=48％15:3-{[2-(4-(4-氰基苯基)-3-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基-5-基)丙酸乙酯(中間體B15)原料3-氨基-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基-5-基)丙酸芐酯甲苯磺酸鹽產(chǎn)率=48％
產(chǎn)率=77％1H-RMN(200MHz,CD3OD):δ1,25(t,3H),2,55(t,2H),3,45(t,2H),3,58(dd,2H),3,72(dd,2H),4,0(s,2H),4,1(m,4H),7,0(d,2H),7,6(d,2H).
MS-Cl m/z:392(M+H)+.
用實施例1所述方法制備以下產(chǎn)品實施例23-{[2-(4-{4-[氨基(羥基亞氨基)甲基]苯基}-2-氧哌嗪基)乙酰基]氨基}丙酸芐酯起始物質(zhì)中間體B2產(chǎn)率=71％1H-RMN(200MHz,DMSO-d6):δ2,55(t,2H),3,4(m,6H),3,85(s,2H),4,0(s,2H),5,1(s,2H),5,6(s,2H),6,9(d,2H),7,34(m,4H),7,55(d,2H),8,05(t,1H),9,35(s,1H).
實施例33-{[2-(4-{4-[氨基(羥基亞氨基)甲基]苯基}2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)丙酸乙酯(CRL42789)起始物質(zhì)中間體B3產(chǎn)率=77％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ1,1(t,3H),2,75(dd,2H),3,4(bs,2H),3,5(bs,2H),3,9(s,2H),4,0(s,4H),5,15(q,1H),5,65(s,2H),6,0(s,2H),6,85(m,5H),7,55(d,2H),8,4(d,1H),9,4(s,1H).
MS-ES m/z:534(M+Na)+.
實施例4
3-{[2-(4-{4-[氨基(羥基亞氨基)甲基]苯基}-2-氧哌嗪基)乙酰基]氨基}3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)丙酸芐酯起始物質(zhì)中間體B41H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ2,8(dd,2H),3,45(m,2H),3,5(m,2H),3,8(s,2H),4,0(s,2H),5,0(s,2H),5,1(q,1H),5,6(s,2H),6,0(s,2H),6,8(dd,2H),6,9(m,3H),7,3(m,5H),7,55(d,2H),8,5(d,1H),9,4(s,1H).
MS-ESm/z:469(M+H)+.
產(chǎn)率=73％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ1,2(t,3H),1,75(m,2H),2,45-2,7(m,4H),3,5(dd,4H),3,85(s,2H),4,1(m,5H),5,7(s,2H),6,9(d,2H),7,2(m,3H),7,25(t,2H),7,6(d,2H),7,95(d,1H),9,2(s,1H).
MS-ES m/z:518(M+Na)+.
MS-ESm/z:496(M+Na)+.
MS-ESm/z:470(M+Na)+.
產(chǎn)率=39％(兩步)1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ0,85(s,9H),1,20(t,3H),2,25(dd,1H),2,6(dd,1H),3,45(m,2H),3,5(m,2H),3,85(s,2H),4,05(m,5H),5,7(s,2H),6,95(d,2H), 7,6(d,2H),7,85(d,1H),9,4(s,1H).
MS-ESm/z:470(M+Na)+.
MS-ES m/z:456(M+Na)+.
產(chǎn)率=55％1H-RMN(200MHz,DMSO-d6):δ1,10(t,3H),2,75(t,2H),3,0(s,2H),3,2(s,2H),3,25(m,4H),3,65(t,2H),4,0(q,2H),5,75(bs,2H),7,25(d,2H),7,6(d,2H),7,95(bs,1H),9,5(s,1H).
MS-ESm/z:392(M+H)+.用實施例12所述方法合成下述產(chǎn)物
3-{[2-(4-{4-[氨基(羥基亞氨基)甲基]苯基}-3-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}丙酸芐酯起始物質(zhì)中間體B13產(chǎn)率=86％
MS-ES m/z:534(M+Na)+.
產(chǎn)率=78％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ1,3(t,3H),1,8(s 3H),3,4(dd,2H),3,6(t,2H),3,8(t,2H),4,0(d,4H),4,05(q,2H),7,2(d,2H),7,85(d,2H),8,25(bs,1H).
MS-ESm/z:376(M+H)+.
用實施例16所述方法制備以下產(chǎn)品(對于實施例17,19,28和30的化合物，要將乙酸鹽轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽)。
MS-ESm/z:348(M+H)+.
MS-ES m/z:496(M+H)+.
起始物質(zhì)實施例4產(chǎn)率=47％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ2,65(t,2H),3,5(bs,2H),3,7(bs,2H),4,05(d,4H),5,2(q,1H),6,0(s,2H),6,75(d,1H),6,8(d,1H),6,9(s,1H),7,05(d,2H),7,8(d,2H),8,7(d,1H),9,0(bs,2H),9,1(bs,2H),12,3(bs,1H).
MS-Cl m/z:468(M+H)+.
MS-ES m/z:453(M+H)+.
MS-Cl m/z:425(M+H)+.
產(chǎn)率=70％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ1,15(t,3H),1,73(s,3H),1,74(m,2H),2,45(m,2H),2,6(m,2H),3,5(m,2H),3,7(m,2H),4,0(m,7H),7,05(d,2H),7,2(m,3H),7,26(t,2H),7,75(d,2H),8,0(d,1H).
MS-ESm/z:480(M+H)+
MS-ESm/z:458(M+H)+.
MS-ESm/z:432(M+H)+
2,85(dd,1H),3,7(m,2H),3,85(m,2H),4,2(m,7H),7,1 5(d,2H),7,8(d,2H).
MS-ESm/z:432(M+H)+
MS-ESm/z:418(M+H)+
MS-ESm/z:370(M+Na)+.
2H),3,3(s,2H),3,75(bs,2H),4,0(q,2H),5,2(q,1H),6,0(s,2H),6,75(m,2H),6,9(s,1H),7,55(d,2H),7,8(d,2H),8,45(d,1H).
MS-ESm/z:496(M+H)+
MS-ESm/z:468(M+H)+
在5℃，依次向如此得到的鹽酸鹽(2.2g,4.1mmol)在50ml DMF中的溶液中加入三乙胺(1.1g,11mmol)和氯甲酸乙酯(0.54g,5mmol)。在室溫持續(xù)攪拌18小時。加入水和乙酸乙酯，用水洗滌有機相，然后用硫酸鈉干燥。經(jīng)過硅膠色譜后得到1.3g淡黃色固體(10/1乙酸乙酯/甲醇)。
產(chǎn)率=55％1H-RMN(400MHz,CDCl3):δ1,3(t,3H),1,5(t,3H),2,9(dq,2H),3,75(bs,4H),4,2(m,6H),4,4(q,2H),5,45(m,1H),6,05(d,2H),6,9(m,5H),7,55(d,1H),8,0(d,2H),9,75(bs,1H).
MS-ESm/z:590(M+Na)+
在以上所得亞氨酸鹽(2.1g,3.8mmol)在10ml乙醇和50ml乙酸乙酯的懸浮液中，加入哌啶(2.6g,30.6mmol)。室溫攪拌24小時后，將混合物過濾。將粗產(chǎn)品在乙酸乙酯和乙醇的混合物中重結(jié)晶，得到0.7g淡棕色固體。
產(chǎn)率=65％1H-RMN(400MHz,DMSO-d6):δ1,15(t,3H),1,7(m,8H),2,5(m,3H),2,6(m,1H),3,45(m,1H),3,50(bs,4H),3,70(bs,4H),4,05(m,6H),7,1(d,2H),7,2(m,3H),7,25(d,2H),7,45(d,2H),8,15(d,1H),9,2(bs,2H).
MS-ESm/z:548(M+H)+用實施例32所述方法制備以下產(chǎn)品
MS-ESm/z:550(M+H)+
MS-ES m/z:564(M+H)+
MS-ESm/z:566(M+H)+在體外研究式Ⅰ化合物對血小板聚集的抑制活性，即在標準條件下，通過將各種濃度化合物的溶液與從全血樣品中分離出的新鮮血小板直接接觸，全血樣品取自未接受任何會干擾血液凝固的物質(zhì)或藥物的實驗室動物(豚鼠)和健康人受試者。也從體內(nèi)/體外進行了抗血小板凝固活性的研究，即在給豚鼠施用本申請要求保護的物質(zhì)后，測定被吸收并進入血液循環(huán)的試驗產(chǎn)品的抗凝聚作用的強度和持續(xù)時間。
1．體外藥理學研究1.1對豚鼠的血小板進行研究通過心內(nèi)穿刺從雄性Dunkin-Hartley豚鼠(體重約330g)取得血液，以每0.5ml檸檬酸三鈉(水溶液的濃度1.55％)對4.5ml血液的比率以免發(fā)生任何凝結(jié)。通過在150g將全血的試管離心15分鐘得到富血小板血漿(PRP)。
收集PRP在池中。用Coulter ZM血液研究自動裝置對這些池中所含的血小板計數(shù)如果需要，進行稀釋以使血漿中血小板的濃度在200000和400000血小板/mm3之間。同時，通過在1500g離心15分鐘用這些池中其他樣品制備貧血小板血漿(PPP)。
通過向1體積PRP中加入膠原溶液(1μg/ml)進行血小板聚集的動力學研究，使用Chrono-log公司的聚集計數(shù)器(490-D1或560VS)，其使用血栓形成光學檢測器。
通過向PRP池中的樣品中加入一定體積溶劑(對照參比)和增加的濃度1.5×10-8M、7×10-8M、1.5×10-7M、3×10-7M、7×10-7M、1.5×10-6M和7×10-5M的化合物測定50％抑制濃度(IC50)。在攪拌條件下在37℃經(jīng)過3分鐘的接觸后測定聚集抑制作用。
1.2對人血小板的研究通過穿刺肘彎靜脈，從10個同年齡健康人受試者組取得靜脈血，將其收集在含有0.129M檸檬酸鈉水溶液的玻璃試管中(每1體積檸檬酸鹽溶液對應(yīng)9體積血液)。首先在20℃和100g離心15分鐘以得到富血小板血漿(PRP)；移出此PRP后，將此試管在2000g再次離心15分鐘，以便取得貧血小板血漿(PPP)。
對于每個確定的PRP樣品，用Coulter ZM計數(shù)器對血小板計數(shù)。然后采用每個樣品以下列方式研究對血小板聚集的抑制作用的變化隨著在10-8M～10-5M范圍內(nèi)被加入化合物的濃度升高(化合物的濃度例如為10-8M,5×10-7M,3×10-7M,10-7M,8×10-6M,4×10-6M,2×10-6M,10-6M,5×10-5M,10-5M)，加入來自Coultronics的Chromo-par Reagent膠原葡萄糖溶液(在5μg/ml濃度使用)引發(fā)血小板聚集。預(yù)先制備每個化合物的10-3M水溶液。用一對照實驗檢驗在每個測定系列中溶劑對血小板聚集可能產(chǎn)生的作用(參比值)，在攪拌下，在37℃接觸3分鐘后測定血小板聚集。
從測定的每個化合物的各個濃度的血小板聚集抑制百分率，計算50％抑制濃度(IC50)。
2．對豚鼠進行的體內(nèi)/體外藥理學研究用與上述同樣的豚鼠(Dunkin-Hartley種系)評價化合物的抗血小板聚集活性。在禁食一天的豚鼠取血前1h,2h,4h,6h,8h或12h，通過胃的途徑(g.r.)以150mg/kg-10mg/kg劑量范圍內(nèi)給藥各種產(chǎn)品和各種賦形劑(5ml/kg)。對動物進行隨機治療。
在與上述進行體外研究的同樣條件下取血并處理血液。
從每個實驗濃度測得的抑制血小板聚集的結(jié)果，能夠計算每個試驗產(chǎn)品的IC50濃度、抑制作用的動力學及其作用的持續(xù)時間。
抑制膠原引起的血小板聚集的研究結(jié)果收集于下表
UD不能測得(產(chǎn)品不溶)-不能得到的數(shù)據(jù)某些化合物在明顯地更低劑量下呈現(xiàn)抑制血小板聚集的活性。例如在聚集試驗前1和2小時通過口服劑量(經(jīng)胃途徑)10mg/kg給藥CRL42789、CRL42788和CRL42903治療的豚鼠體內(nèi)實驗得到的抗聚集作用分別是69％和72％(CRL42789)、57％和24％(CRL42788)或72％(CRL42903給藥1小時)。
因此本發(fā)明還涉及含有有效量式(Ⅰ)化合物或它與藥學可接受的酸形成的鹽的藥物組合物。
本發(fā)明尤其涉及用于抑制血小板聚集的含有有效量這些化合物的組合物。
本發(fā)明還涉及-用于抑制哺乳動物體內(nèi)血纖維蛋白原結(jié)合到血小板上的方法，其中包括向哺乳動物給藥有效量一種此類化合物，-用于抑制患者體內(nèi)血小板聚集的方法，其中包括向病人給藥有效量一種此類化合物，-用于治療患者體內(nèi)血栓的方法，其中包括向患者給藥有效量一種此類化合物，-防止患者體內(nèi)血栓形成可能性的方法，其中包括向患者給藥有效量一種此類化合物，尤其可以在以下領(lǐng)域使用式(Ⅰ)化合物ⅰ)在心臟手術(shù)(冠脈搭橋)或介入心臟病學(經(jīng)腔經(jīng)皮血管成形術(shù)，動脈內(nèi)膜切除術(shù)，插入移植片固定模)過程中快速抑制動脈形成血栓的危險在這些情況下，將這些化合物加入到已知的動脈形成血栓的危險的預(yù)防治療中；在介入之前開始口服乙酰水楊酸(150-500mg/天口服)，然后連續(xù)給藥；在介入過程中靜脈內(nèi)輸入非分餾的(non-fractionate)肝素，然后持續(xù)48-96小時?？梢栽诮o藥阿司匹林時口服式Ⅰ化合物(0.5-1.5mg/kg)，或在與或不與快速濃注結(jié)合的條件下進行靜脈輸入(0.25-1mg/kg/24小時)。48小時后，如果治療是靜脈給藥，將代之以口服給藥(0.25-10mg/kg，分成兩次間隔12小時給藥)以便于醫(yī)院護理，然后進行非臥床治療。
ⅱ)第二，對于顯示出不穩(wěn)定心絞痛或心肌梗塞發(fā)作的患者體內(nèi)動脈血栓危險的預(yù)防在這些情況下，本申請要求保護的化合物呈現(xiàn)出優(yōu)良的生物利用率，即迅速地獲得有效的循環(huán)濃度的可能性，其原因在于在病人出現(xiàn)動脈血栓的期間口服使用本申請要求保護的藥品能夠抑制血纖維蛋白原與血小板結(jié)合。在這些情況下，可以按每天1-3次口服的頻率有益地給藥這些化合物，由于其高的生物利用率和長的作用持續(xù)時間，其劑量選擇在0.5-10mg/kg范圍內(nèi)。
含有一種本申請所述的活性成分的藥物組合物含有呈堿或藥用鹽或含有一種或多種在口服給藥后在體內(nèi)被釋出的保護官能團的前藥形式的活性物質(zhì)。這些藥物組合物結(jié)合本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的制備輔劑或載體。后者選自藥典確定的制藥輔劑。用于制備口服藥劑的輔劑的例子有淀粉、硬脂酸鎂、滑石、明膠、瓊脂、乳糖、果膠、聚乙二醇等。可以使用的劑型選自以下可能的劑型分層或不分層的片劑、膠囊、錠劑、顆粒劑、粉劑。根據(jù)所治療的病理學特點和每個病人的形態(tài)，日口服劑量為0.02-50mg/kg/日，有規(guī)律地間隔1～3次以保證占領(lǐng)血小板GpⅡb/Ⅲa受體的有效水平。通過靜脈內(nèi)途徑，設(shè)計用于急性期治療的藥物劑型以便根據(jù)后續(xù)治療的即時安排為了最有效地抑制血小板聚集采用獨立的劑量。在此情況下，冷凍干燥產(chǎn)品和即用輸入液能夠在0.01mg/kg/天-20mg/kg/天范圍內(nèi)獨立地變更劑量。
權(quán)利要求
1．通式(Ⅰ)的化合物 其中R1選自氫、C1-C4烷基和苯基(C1-C4烷基)；R2選自氫、羥基和脒基的保護基團；R3選自-氫，-C1-C5烷基、C3-C12單或二環(huán)環(huán)烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4炔基，任選地，這些基團可以被選自鹵素和羥基的基團取代，-單-、二-或三環(huán)C6-C14芳基，-選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、苯并二噁烷基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基和吡嗪基的雜芳基，-任選地在芳核處取代的苯基(C1-C4)烷基和萘基(C1-C4)烷基，和3,4-亞甲二氧芐基，R4和R5分別獨立地選自氫、C1-C5烷基，或共同與氮原子形成選自哌啶基或嗎啉基的基團，芳基或雜芳基可以用一或多個分別獨立地選自鹵素、C1-C4烷基、三氟甲基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基、硝基、其中R是C1-C4烷基的基團-COOR、-CH2COOR和-O-CH2-COOR，橋氧基處在哌嗪的2或3位；和以上化合物與藥學可接受的酸形成的加成鹽。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中它們選自3-{[2-(4-{4-[氨基(羥基亞氨基)甲基]苯基}-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)丙酸乙酯，3-{[2-(4-{4-[氨基(羥基亞氨基)甲基]苯基}-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-5-苯基)戊酸乙酯，3-{[2-(4-{4-[氨基(亞氨基)甲基]苯基}-2-氧哌嗪基)乙?；鵠氨基}-3-(1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)丙酸及其與藥學可接受的酸形成的加成鹽。
3．權(quán)利要求1的通式Ⅰ化合物的制備方法，其特征在于 其中Z是以下基團的前體基團 與以下通式的胺反應(yīng) 其中R1’是C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)，產(chǎn)生下式的化合物 b)將基團Z轉(zhuǎn)化成下式的基團 c)任選地，將基團R’1轉(zhuǎn)化成氫原子。
4．具有治療作用的組合物，其中含有權(quán)利要求1或2的化合物作為活性成分。
5．權(quán)利要求1或2的化合物在制備抗血栓形成的藥物中的用途。
6．用于抑制哺乳動物體內(nèi)血纖維蛋白原連接到血小板上的方法，其中包括向此哺乳動物給藥有效量權(quán)利要求1或2的化合物。
7．用于抑制患者體內(nèi)血小板聚集的方法，其中包括向此患者給藥有效量權(quán)利要求1或2的化合物。
8．用于治療患者體內(nèi)血栓的方法，其中包括向此患者給藥有效量權(quán)利要求1或2的化合物。
9．用于預(yù)防患者體內(nèi)血栓形成危險的方法，其中包括向此患者給藥有效量權(quán)利要求1或2的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)的化合物,其中:R
文檔編號A61K31/496GK1309648SQ9980870
公開日2001年8月22日 申請日期1999年7月16日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月17日
發(fā)明者C·約, M·亨利, T·吉鮑洛特, B·萊瑟 申請人:L·拉峰試驗公司