專(zhuān)利名稱(chēng)：含有卡尼汀和類(lèi)胡蘿卜素的抗氧劑、抗增殖組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用于預(yù)防和/或治療由環(huán)境污染和動(dòng)脈粥樣硬化、血管、心臟或大腦的脂過(guò)氧化現(xiàn)象導(dǎo)致游離基存在所產(chǎn)生的疾?。话ㄇ傲邢?、子宮、乳房或結(jié)腸組織的組織增殖；包括白內(nèi)障和視網(wǎng)膜的斑退化的視覺(jué)和視網(wǎng)膜的組合物。
因此，根據(jù)組合物在使用的特定個(gè)體身上欲起到的供給或預(yù)防作用或嚴(yán)格的治療作用，組合物可以采取食物補(bǔ)充物或藥物的形式并起到食物補(bǔ)充物或藥物的作用。
更具體地，本發(fā)明涉及可以經(jīng)口服、非腸道、直腸、皮透或眼部滴注進(jìn)行給藥的組合物，其包含下列組合(a)丙酰基L-卡尼汀或其藥用鹽，可與其它“卡尼汀”組合，在這里的“卡尼汀”是指L-卡尼汀或選自乙?；鵏-卡尼汀，戊酰基L-卡尼汀和異戊?；鵏-卡尼汀或它們藥用鹽的烷?；鵏-卡尼??；以及(b)類(lèi)胡蘿卜素，優(yōu)選地是選自番茄紅素，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，玉米黃質(zhì)，隱黃質(zhì)，黃體素或它們的混合物或含有類(lèi)胡蘿卜素的天然蔬菜產(chǎn)品的提取物，典型的是番茄提取物(Lycopersiconesculentum)。
類(lèi)胡蘿卜素是一組含有最多至40個(gè)碳原子、帶有雙鍵共軛體系、具萜烯類(lèi)性質(zhì)(四萜烯)的長(zhǎng)鏈植物色素。類(lèi)胡蘿卜素存在于高級(jí)植物、葉綠體和位于缺乏葉綠素的植物區(qū)域(某些根部和許多花和果實(shí)，例如番茄，其中的類(lèi)胡蘿卜素在成熟期有所增加)的那些質(zhì)體中；還在蘭藻、某些光合成細(xì)菌以及某些真菌中發(fā)現(xiàn)了類(lèi)胡蘿卜素。在光合成中，類(lèi)胡蘿卜素扮演了一個(gè)葉綠素的補(bǔ)充角色，其吸收某些光線并將能量傳導(dǎo)給葉綠素本身。
盡管在植物世界里存在600多種類(lèi)胡蘿卜素，人類(lèi)飲食中僅存在40種，能被內(nèi)臟吸收的僅有14種，其余的由不吸收的環(huán)氧化物構(gòu)成。這14種中最普通的是番茄紅素、α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，黃體素、玉米黃質(zhì)和β-隱黃質(zhì)。
番茄紅素存在11(個(gè))線性共軛雙鍵(其中的β-胡蘿卜素存在9個(gè))，并且是線性共軛雙鍵中帶有最長(zhǎng)鏈的類(lèi)胡蘿卜素。
人們已經(jīng)對(duì)此特定結(jié)構(gòu)和其作為抗氧化劑的較大能力之間的關(guān)系進(jìn)行過(guò)要求。
盡管在番茄紅素和β-胡蘿卜素之間存在代謝的相互作用，在體內(nèi)番茄紅素?zé)o法將其自身轉(zhuǎn)化為β-胡蘿卜素，后者以碳鏈兩側(cè)上的三甲基環(huán)己烷基環(huán)為特征。
另一方面，β-胡蘿卜素可以通過(guò)鏈還原將其本身轉(zhuǎn)化為反式視黃醇和視黃酸，并具有前維生素A樣的作用。
這些化合物具有實(shí)質(zhì)性的抗氧化能力，但其中番茄紅素對(duì)單線態(tài)氧具有最大的阻斷能力，其作用為例如β-胡蘿卜素作用的兩倍多。
番茄紅素可被人體吸收，特別是在脂肪的存在下，并且可在血液和脂肪中發(fā)現(xiàn)它以兩種形式存在，順式-和反式-番茄紅素。
象所有的類(lèi)胡蘿卜素一樣，番茄紅素不能靠身體合成，必須通過(guò)飲食攝取。
有許多食物含有類(lèi)胡蘿卜素，包括番木瓜、粉葡萄柚、菠菜、杏、牛奶和雞蛋，但是它們均比不過(guò)番茄，番茄中含有最大量的番茄紅素。
除了其實(shí)質(zhì)性的抗氧化能力外，人們對(duì)番茄紅素感興趣還因?yàn)橐恍┝餍胁⊙芯康慕Y(jié)果，這些結(jié)果顯示帶有前維生素A樣作用的類(lèi)胡蘿卜素，例如β-胡蘿卜素本身即可對(duì)某些形式的腫瘤起到保護(hù)作用，而不需要轉(zhuǎn)化為視黃醇的形式。一些預(yù)期和回顧性的調(diào)查結(jié)果表明在富含胡蘿卜素的蔬菜和水果消耗量或高血漿濃度的胡蘿卜素與腫瘤危險(xiǎn)率(尤其是肺部腫瘤)之間存在反相關(guān)關(guān)系。這些結(jié)果均歸因于類(lèi)胡蘿卜素，僅僅因?yàn)樗蔷S生素A的前體。然而，最近的臨床實(shí)驗(yàn)又顯示，與飲食中缺乏這種維生素的大量人群比較，在飲食中單獨(dú)使用β-胡蘿卜素對(duì)腫瘤的危險(xiǎn)率無(wú)有益作用。
在吸煙者組或具有患石棉肺危險(xiǎn)的個(gè)體組中也獲得了同樣的陰性結(jié)果。對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行處理之后，又發(fā)現(xiàn)除了β-胡蘿卜素之外的類(lèi)胡蘿卜素對(duì)于獲得用其它實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)的保護(hù)作用有所貢獻(xiàn)。
能夠特征化地描述番茄紅素并使人相信它在體內(nèi)能起到有益生物作用的基礎(chǔ)是它具有強(qiáng)的抗氧化作用，最值得注意的是抗單線態(tài)氧的作用，后者是游離基生產(chǎn)過(guò)程中最具活性的氧產(chǎn)物之一。除了其抗單線態(tài)氧的作用之外，番茄紅素在保護(hù)細(xì)胞和組織免受其它活性種類(lèi)氧(例如過(guò)氧化氫和一氧化二氮)的損傷時(shí)極具活性。
隨飲食攝入的番茄紅素可起到有益的健康促進(jìn)作用的部分原因是番茄紅素的這些具體活性，正是這些特殊活性使其在所有其它天然抗氧劑之中處于突出地位。
實(shí)際上現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，患有心肌梗塞的患者以及那些膽固醇或甘油三酯的血濃度較高的潛在危險(xiǎn)的人群所顯示出的β-胡蘿卜素、特別是番茄紅素的血濃度非常低。上述現(xiàn)象與番茄紅素的抗脂過(guò)氧化作用有關(guān)這種觀點(diǎn)也可從證明番茄紅素存在于LDLs中并可以防止其氧化的研究中顯現(xiàn)出來(lái)。
現(xiàn)已證實(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)物(C3H/10T1/2細(xì)胞)中進(jìn)行測(cè)定時(shí)，番茄紅素的抗脂過(guò)氧化作用也優(yōu)于β-和α-胡蘿卜素，在細(xì)胞培養(yǎng)物中番茄紅素可以防止它們的腫瘤形成轉(zhuǎn)化。番茄紅素的抗脂過(guò)氧化作用也解釋了其防止動(dòng)脈粥樣硬化和動(dòng)脈粥樣硬化血管損傷的能力，同時(shí)也與其免疫球蛋白抑制及結(jié)合的細(xì)胞內(nèi)交流增強(qiáng)活性及腫瘤細(xì)胞增生有關(guān)。
在抑制大鼠體內(nèi)乳腺腫瘤的自發(fā)發(fā)展和白血病細(xì)胞(H1-60前髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系)及大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C-6細(xì)胞的體外生長(zhǎng)或由化學(xué)制劑誘導(dǎo)的腫瘤形成轉(zhuǎn)化方面，番茄紅素是最強(qiáng)有效的類(lèi)胡蘿卜素。
流行學(xué)病研究已證明在隨飲食攝入的番茄紅素與發(fā)展中的前列腺腫瘤的危險(xiǎn)率之間存在反相關(guān)關(guān)系，因此在這種特殊的疾病中番茄紅素可被作為一種預(yù)防手段。乳腺和肺部腫瘤的危險(xiǎn)率也具有同樣的情況。
番茄紅素，如黃體素、玉米黃質(zhì)可以產(chǎn)生保護(hù)作用的另一個(gè)疾病是與年齡有關(guān)的視網(wǎng)膜斑退化(AMD)。
人們對(duì)L-卡尼汀及其烷?；苌锏闹匾巧呀?jīng)熟知，它們可以在代謝水平上發(fā)揮作用，尤其是對(duì)于氧化作用和通過(guò)β-氧化的脂肪酸利用。
實(shí)際上，無(wú)論是從飲食中攝取的還是通過(guò)身體合成得到的L-卡尼汀均在器官中被血液濃縮，它們?cè)谥舅崂玫拇x方面非?；钴S，例如在骨骼肌和心臟中。
L-卡尼汀缺乏可以導(dǎo)致肌病，而口服L-卡尼汀可以改善這類(lèi)肌病的臨床狀況。在葡萄糖的線粒體氧化中，L-卡尼汀在能量的產(chǎn)生方面也同樣起著重要的作用，其結(jié)果是在心肌和肌肉水平上的正常能量代謝需要足夠水平的L-卡尼汀。
L-卡尼汀的給予可以改善冠狀機(jī)能不全患者對(duì)緊張的耐受、冠狀血流本身以及心臟代償失調(diào)的臨床癥狀。
L-卡尼汀及其衍生物，尤其是丙?；房嵬〉钠渌飳W(xué)性質(zhì)是其具有穩(wěn)定細(xì)胞膜的能力以及可以保護(hù)細(xì)胞免受由于氧化過(guò)程引起的損傷。
令人驚奇的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的含有下列特征性組合的組合物(a)丙?；鵏-卡尼汀或其藥用鹽，以及(b)選自番茄紅素，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，玉米黃質(zhì)，隱黃質(zhì)，黃體素或它們的混合物的類(lèi)胡蘿卜素。在預(yù)防和/或治療下列疾病方面極其有效由環(huán)境污染和動(dòng)脈粥樣硬化、血管、心臟或大腦的脂過(guò)氧化現(xiàn)象導(dǎo)致游離基存在所產(chǎn)生的疾??；組織的增殖異常包括前列腺、子宮、乳房或結(jié)腸組織；包括白內(nèi)障和視網(wǎng)膜的斑退化在內(nèi)的視覺(jué)和視網(wǎng)膜失調(diào)，這是因?yàn)檫@些組分具有有力的協(xié)同作用。
現(xiàn)還發(fā)現(xiàn)組分(a)還可以進(jìn)一步優(yōu)選包選自下列的“卡尼汀”L-卡尼汀，乙?；鵏-卡尼汀，戊?；鵏-卡尼汀和異戊酰基L-卡尼汀或它們藥用鹽類(lèi)或它們的的混合物，并且組分(b)可由含有它的植物產(chǎn)品提取物組成，例如番茄(Lycopersicon esculentum,Solanaceae家族)提取物。
(a)∶(b)的重量比為1∶0.1至1∶10。
毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)無(wú)論是卡尼汀還是其衍生物和番茄紅素以及其它類(lèi)胡蘿卜素(例如黃體質(zhì)、玉米黃質(zhì)、隱黃質(zhì)以及β-胡蘿卜素)的毒性均較低，并且動(dòng)物對(duì)其具有較好的耐受性，尤其是當(dāng)口服給藥時(shí)。
通過(guò)實(shí)施口服給予大鼠高劑量的L-卡尼汀(1g/Kg)，或丙酰基L-卡尼汀(1g/Kg)，或L-卡尼汀(250mg/Kg)加丙酰基L-卡尼汀(250mg/Kg)加乙?；鵏-卡尼汀(250mg/Kg)加異戊酰基L-卡尼汀(250mg/Kg)可以證實(shí)上述優(yōu)點(diǎn)，也可以通過(guò)給予50mg/Kg番茄紅素或1g/Kg含有5％番茄紅素的天然番茄提取物來(lái)證實(shí)上述優(yōu)點(diǎn)。
口服給予大鼠1g/Kg丙?；鵏-卡尼汀和50mg/Kg番茄紅素的組合物也可以證明其具有較好的耐受性，并且不引起接受處理動(dòng)物的死亡。
給予卡尼汀混合物(L-卡尼汀250mg/Kg加乙?；鵏-卡尼汀250mg/Kg加丙?；鵏-卡尼汀250mg/Kg加異戊?；鵏-卡尼汀250mg/Kg)和50mg/Kg番茄紅素的組合物也得到了同樣的結(jié)果。
在一段較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)(30天)每日口服給予大鼠丙?；鵏-卡尼汀(500mg/Kg)，或各種卡尼汀的混合物(L-卡尼汀150mg/Kg加乙?；鵏-卡尼汀150mg/Kg加丙?；鵏-卡尼汀150mg/Kg加異戊?；鵏-卡尼汀150mg/Kg)與25mg/Kg番茄紅素的組合物也得到了同樣理想的結(jié)果。
在30天結(jié)束時(shí)，接受處理的大鼠沒(méi)有出現(xiàn)死亡和中毒指征。理化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，接受處理動(dòng)物的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞計(jì)數(shù)均表現(xiàn)正常，就象處理結(jié)束后對(duì)主要器官進(jìn)行組織學(xué)檢查得到的結(jié)果一樣。
用四氯化碳致毒的離體肝細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)為了評(píng)價(jià)本發(fā)明組合物對(duì)游離基的抗氧化和保護(hù)活性，對(duì)它們對(duì)于用四氯化碳致毒的離體肝細(xì)胞培養(yǎng)物的作用進(jìn)行了分析。
已知四氯化碳(CCl4)可以誘導(dǎo)細(xì)胞膜的脂過(guò)氧化作用，其可導(dǎo)致細(xì)胞壞死。
在大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)物中進(jìn)行的這些實(shí)驗(yàn)證明與游離基釋放有關(guān)的CCl4的脂過(guò)氧化和毒性作用可因培養(yǎng)物中存在卡尼汀混合物而降低，上述卡尼汀混合物由L-卡尼汀，乙酰基L-卡尼汀，丙酰基L-卡尼汀和異戊?；鵏-卡尼汀組成，它們之間的重量比為1∶1，過(guò)氧化和毒性作用也可因培養(yǎng)物中存在丙?；鵏-卡尼汀(100mg/L)(尤其是當(dāng)與番茄紅素(20mg/L)或含有5％番茄紅素的番茄提取物組合使用時(shí))而降低。
為了進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)，利用Seglen(Seglen F.O.Meth.Cell.Biol.Chem.,264,4747)所描述的方法，從大鼠的肝臟上分離出肝細(xì)胞。
通過(guò)對(duì)處于細(xì)胞培養(yǎng)物上清流質(zhì)中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AlaAT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspaAT)的分析，可以測(cè)定得到CCl4誘導(dǎo)的細(xì)胞膜的損傷以及卡尼汀混合物或丙?；鵏-卡尼汀或番茄紅素以及它們的組合物所起到的保護(hù)作用(Beckman 700-Encore 2自動(dòng)生化分析系統(tǒng))。
采用巴比妥酸方法(Ohkawa H.Anal.Biochem.,95,351,1979)對(duì)本發(fā)明化合物對(duì)于CCl4、丙二?；┑闹^(guò)氧化的保護(hù)作用進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
處理結(jié)束后，將肝細(xì)胞在光學(xué)和電子顯微鏡下固定于福爾馬林或戊二醛中，對(duì)其細(xì)胞學(xué)進(jìn)行測(cè)定。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在保護(hù)肝細(xì)胞抵御膜損傷和抵抗CCl4誘導(dǎo)的脂過(guò)氧化方面，卡尼汀混合物和番茄紅素之間以及丙?；鵏-卡尼汀和番茄紅素之間存在著出人意料的協(xié)同作用。
在卡尼汀、尤其是丙?；鵏-卡尼汀和番茄紅素之間存在的協(xié)同作用在對(duì)丙二?；?一項(xiàng)脂過(guò)氧化作用的指標(biāo))的測(cè)定中也很明顯。
肝細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)測(cè)定證實(shí)在用丙酰基L-卡尼汀和番茄紅素處理后壞死細(xì)胞有所降低，然而，在超結(jié)構(gòu)測(cè)定中，當(dāng)對(duì)照組(CCl4)中的細(xì)胞顯現(xiàn)出血色素異常、核膜不規(guī)則、線粒體中的線粒體嵴消失以及核糖體數(shù)量降低時(shí)，那些不僅暴露于CCl4而且暴露于卡尼汀和番茄紅素的細(xì)胞出人意料地呈現(xiàn)出未受損的細(xì)胞膜和核、規(guī)則的異染色體以及規(guī)則的血色素和核糖體數(shù)量。
暴露于卡尼汀混合物和番茄紅素組合活性中的肝細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)外觀的正常化令人驚奇地顯著，而單個(gè)化合物(不合用)的作用卻不顯著，因此證明在卡尼汀和番茄紅素之間存在顯著的協(xié)同作用。
表1懸浮于肝細(xì)胞培養(yǎng)液中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的濃度(AlaAT nmol/min)，上述肝細(xì)胞培養(yǎng)液暴露于四氯化碳(對(duì)照)以及單獨(dú)的卡尼汀混合物或丙?；鵏-卡尼汀或天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物或番茄紅素或它們的各種組合物下(C=卡尼汀混合物；P=丙?；鵏-卡尼??；TE=天然番茄提取物；L=番茄紅素)。
時(shí)間(小時(shí)) 4 8 16對(duì)照 24.6±2.126.8±2.330.5±4.5C20.6±3.221.9±3.326.4±2.8P19.4±2.122.3±3.125.7±3.7TE 22.3±1.824.3±2.724.7±2.9L22.1±2.120.6±2.423.6±2.1C+TE 11.9±1.9 8.6±1.1 5.1±1.7C+L 12.2±1.810.5±1.5 5.4±1.9P+L 11.5±2.1 9.9±2.4 6.2±1.5表2懸浮于肝細(xì)胞培養(yǎng)液中的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的濃度(AspaAT nmol/min)，上述肝細(xì)胞培養(yǎng)液暴露于四氯化碳(對(duì)照)以及單獨(dú)的卡尼汀混合物或丙?；鵏-卡尼汀或天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物或番茄紅素或它們的各種組合物下(C=卡尼汀混合物；P=丙?；鵏-卡尼?。籘E=天然番茄提取物；L=番茄紅素)。
時(shí)間(小時(shí)) 4 8 16對(duì)照 8.5±0.6 10.9±1.1 12.1±1.5C8.1±0.99.9±0.89.8±1.1P8.9±0.99.2±1.29.1±1.7TE 8.2±0.89.1±0.99.0±1.2L8.8±1.88.9±0.99.0±1.2C+TE 5.4±0.73.2±0.93.0±0.5C+L 5.6±1.13.1±0.83.5±1.2P+L 5.5±0.93.5±1.23.2±0.8
實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的白內(nèi)障實(shí)驗(yàn)在與眼部白內(nèi)障有關(guān)的因素中，基于它們的致病重要性以及對(duì)視網(wǎng)膜供血的功能失調(diào)，不僅對(duì)葡萄糖代謝損傷作出了參考，而且對(duì)游離基和脂質(zhì)脂過(guò)氧化作用也作出了參考，因此我們用Gabbay(Gabbay K.H.,N.Engl.J.Med.,288,831,1973)所述的富含半乳糖飲食的方法，在大鼠身上實(shí)驗(yàn)性地誘導(dǎo)了眼部白內(nèi)障的發(fā)生。
8天處理后，在大鼠身上獲得了晶狀體渾濁化，按照Sippel(SippelT.O.,Invest.Ophthamol.,5,568,1966)所述的方法，就其嚴(yán)重程度以遞增的順序分類(lèi)為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級(jí)。所獲得的這些結(jié)果證明，連同半乳糖一起給予卡尼汀混合物(口服，400mg/Kg,L-卡尼汀，乙?；鵏-卡尼汀，丙?；鵏-卡尼汀和異戊酰基L-卡尼汀的組合物，它們彼此的給藥劑量按體重計(jì)算是一致的)或丙?；鵏-卡尼汀(400mg/Kg)或番茄紅素(5mg/Kg)或含有5％番茄紅素的天然番茄提取物(100mg/Kg)或這些產(chǎn)品的組合物可以降低由半乳糖引起的眼部損傷的嚴(yán)重程度。但是在8天半乳糖處理期間，同時(shí)給予實(shí)驗(yàn)處理大鼠卡尼汀混合物和番茄紅素的組合物或丙?；鵏-卡尼汀與番茄紅素的組合物，幾乎可以完全抑制晶狀體渾濁化的發(fā)生。
表3在半乳糖血癥的大鼠體內(nèi)，單獨(dú)或以各種組合使用卡尼汀混合物、丙?；鵏卡尼汀、天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物以及番茄紅素對(duì)晶狀體渾濁化的抑制實(shí)驗(yàn)(20只大鼠為一組)。
處理 眼球晶狀體的渾濁化程度mg/kg (所測(cè)試的晶狀體數(shù)目)Ⅰ Ⅱ Ⅲ對(duì)照0 10 10卡尼汀混合物(400mg/kg) 0 155丙?；鵏卡尼汀(400mg/kg) 0 128天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物(100mg/kg) 884番茄紅素(5mg/kg)64 10卡尼汀混合物(400mg/kg)+天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物(100mg/kg) 12 80卡尼汀混合物(400mg/kg)+番茄紅素(5mg/kg) 12 62丙酰基L卡尼汀(400mg/kg)+天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物(100mg/kg) 14 60丙?；鵏卡尼汀(400mg/kg)+番茄紅素(5mg/kg)15 60兔子體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)在這些實(shí)驗(yàn)中，對(duì)單獨(dú)或以各種組合使用的卡尼汀混合物、丙?；鵏卡尼汀、番茄紅素以及含有5％番茄紅素的天然番茄提取物在兔子體內(nèi)用實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化的作用進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
采用一組平均體重為2.9kg的New Zealand兔子進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，在連續(xù)的30天內(nèi)，在其標(biāo)準(zhǔn)飲食中加入0.5％(重量比)的膽固醇。同一個(gè)動(dòng)物每天接受富含膽固醇的飲食，劑量相應(yīng)為400mg/Kg卡尼汀混合物(L-卡尼汀，乙?；鵏-卡尼汀，戊?；鵏-卡尼汀和異戊?；鵏-卡尼汀的組合物，它們彼此的給藥劑量按體重量計(jì)算是一致的)，或?yàn)?00mg/Kg丙?；鵏-卡尼汀，或?yàn)?mg/Kg番茄紅素，或?yàn)?00mg/Kg含有5％番茄紅素的天然番茄提取物，或同樣產(chǎn)品的各種組合。在30天處理結(jié)束時(shí)，從每個(gè)動(dòng)物耳朵的中心動(dòng)脈提取血樣，按照Hatch提供的方法進(jìn)行脂蛋白分析(Hatch F.T.Adv.Lipid Res.,6,1,1968)。
處死動(dòng)物，從中取出肝臟，相應(yīng)地按照Dehoff和Levy的方法用于總膽固醇和甘油三酯的分析[Dehoff J.L.,Clin.Chem.,24,433,1978；Levy A.,Advances in Automated Analysis(Technicon Corp.)497,Thurman,Miami 1972]。分離出主動(dòng)脈和心臟，按照Klurfeld(Klurfeld D.M.,J.Med.,10,35,1979)來(lái)評(píng)價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化損傷的存在情況，根據(jù)嚴(yán)重程度將損傷按Ⅰ-Ⅳ進(jìn)行定級(jí)。
這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論是卡尼汀還是番茄紅素(程度稍差一些)對(duì)兔子體內(nèi)由高脂飲食引起的膽固醇和甘油三酯的增加均有保護(hù)作用，但是僅當(dāng)它們聯(lián)合使用時(shí)，才能獲得完全的保護(hù)結(jié)果。
實(shí)際上用卡尼汀和番茄紅素組合物處理過(guò)的動(dòng)物可以顯示出一定程度的保護(hù)作用，這種保護(hù)作用是分別使用單個(gè)產(chǎn)品所產(chǎn)生作用的加和無(wú)法達(dá)到的。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果還證明了本發(fā)明所述的組合所起到的顯著的協(xié)同作用。
表4在高膽固醇血兔子身上進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)血漿脂蛋白濃度VLDL(mg/dl) LDL(mg/dl) HDL(mg/dl)HC1,119±295 485±19.923.1±6.5CM 755±10.9 306±15.528.5±5.5TE 880±105 295±20.730.1±4.2p 805±95 280±22.529.5±6.2L 715±80 260±28.529.3±5.5CM+TE 290±45 155±16.535.5±3.9CM+L240±2596±9.4 31.2±29P+TE250±30 105±15.536.9±3.5P+L 220±20 90±10.5 32.1±3.1HC=高膽固醇血對(duì)照CM=卡尼汀混合物TE=天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物P=丙?；鵏-卡尼汀L=番茄紅素表5在高膽固醇血兔子肝上進(jìn)行檢測(cè)總膽固醇和甘油三酯的濃度總膽固醇 甘油三酯(mg/dl) (mg/g)HC1,885±315180±15.5CM1,420±205155±12.7TE1,475±195139±11.5P 1,250±145142±12.8L 1,200±180135±13.8CM+TE 985±85 115±11.6CM+L780±98 105±11.6P+TE750±64 110±10.7P+L 655±90 90±8.5HC=高膽固醇血對(duì)照CM=卡尼汀混合物TE=天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物P=丙?；鵏-卡尼汀L=番茄紅素用鳥(niǎo)氨酸脫羧酶評(píng)價(jià)的抗增殖活性實(shí)驗(yàn)正如已知的，經(jīng)皮下給予大鼠佛波醇、殺魚(yú)菌素可以引起接受處理的動(dòng)物皮膚增殖異常，其甚至可以導(dǎo)致腫瘤型的角膜(keratotic)過(guò)程。增殖異常伴隨有鳥(niǎo)氨酸脫羧酶的增加，通常在所有的病理性增殖活化的情況下，鳥(niǎo)氨酸脫羧酶活性的增加與引起損傷的嚴(yán)重程度成比例。在這些實(shí)驗(yàn)中，將0.2cc的殺魚(yú)菌素水溶液經(jīng)皮下注射到小鼠拔過(guò)毛的背部，劑量為5μg/只小鼠。在處理前7天的時(shí)間里，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口服單獨(dú)接受由L-卡尼汀、乙?；鵏-卡尼汀、丙?；鵏-卡尼汀、異戊?；鵏-卡尼汀組成的卡尼汀混合物(400mg/kg)，它們彼此的給藥劑量按體重量計(jì)算是一致的，或單獨(dú)接受丙酰基L-卡尼汀(400mg/kg)，或單獨(dú)接受天然番茄類(lèi)胡蘿卜素提取物(100mg/kg，其中含有5％番茄紅素)，或單獨(dú)接受番茄紅素(5mg/kg)，或接受卡尼汀混合物與番茄紅素或含有番茄紅素提取物的組合物，或接受丙?；鵏-卡尼汀與番茄紅素或含有番茄紅素提取物的組合物。在另一組實(shí)驗(yàn)中，首先將產(chǎn)品分散于二甲亞砜中，然后再分散在羊毛脂中，直到獲得濃度為200mg/cc的卡尼汀混合物，或獲得含有5％番茄紅素濃度為200mg/cc的類(lèi)胡蘿卜素提取物，或獲得濃度為5mg/cc的番茄紅素后，于注射殺魚(yú)菌素半個(gè)小時(shí)前將這些產(chǎn)品應(yīng)用于小鼠的皮膚。
將各種制劑以0.3cc的劑量應(yīng)用于注射過(guò)殺魚(yú)菌素的皮膚處，用閉合繃帶保護(hù)注射部位。
為了進(jìn)行注射過(guò)殺魚(yú)菌素的皮膚區(qū)域的鳥(niǎo)氨酸脫羧酶分析，在注射后5小時(shí)實(shí)施上述分析，該方法見(jiàn)O’Brien和Nakadate(O’Brien T.G.，癌癥研究，35,1662,1975；Nakadate T.，癌癥研究，42,2841,1982)的描述。采用Lowry方法(Lowry O.H.,JBiol.Chem.,193,265,1951)測(cè)定表皮提取物中的蛋白質(zhì)濃度。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論是內(nèi)堿還是天然番茄提取物中的類(lèi)胡蘿卜素以及單獨(dú)的丙?；鵏-卡尼汀和單獨(dú)的番茄紅素對(duì)抵抗增殖現(xiàn)象和抵抗鳥(niǎo)氨酸脫羧酶活性增加僅有很微小的保護(hù)作用，與之相反的是，當(dāng)將這些產(chǎn)品組合使用時(shí)，卻出人意料地出現(xiàn)了有效的保護(hù)作用，因此證明其有不曾預(yù)料并出人意料的協(xié)同作用。
表6鳥(niǎo)氨酸脫羧酶活性處理 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶活性(CO2nmol/60分鐘/mg蛋白)口服給藥 皮膚給藥對(duì)照 0.05±0.002 0.03±0.001殺魚(yú)菌素 2.4±0.3 2.6±0.2卡尼汀混合物 1.92±0.41.75±0.3丙?；鵏-卡尼汀 1.90±0.21.60±0.1番茄天然提取物 1.85±0.31.80±0.2番茄紅素 1.70±0.11.65±0.1卡尼汀混合物+番茄天然提取物 0.35±0.005 0.40±0.06卡尼汀混合物+番茄紅素0.30±0.03 0.45±0.05丙酰基L-卡尼汀+番茄天然提取物0.36±0.06 0.30±0.04丙?；鵏-卡尼汀+番茄紅素 0.33±0.05 0.31±0.03下面給出了本發(fā)明說(shuō)明性非限定性實(shí)例。1)卡尼汀混合物 mg500(L-卡尼汀125mg，乙?；鵏-卡尼汀125mg，丙酰基L-卡尼汀125mg，異戊酰基L-卡尼汀125mg)番茄天然提取物(含5％番茄紅素) mg1002)卡尼汀混合物 mg300(L-卡尼汀75mg，乙酰基L-卡尼汀75mg，丙?；鵏-卡尼汀75mg，異戊?；鵏-卡尼汀75mg)番茄天然提取物(含5％番茄紅素) mg503)丙酰基L-卡尼汀 mg500番茄天然提取物(含5％番茄紅素)mg1004)丙?；鵏-卡尼汀 mg250番茄天然提取物(含5％番茄紅素)mg505)丙?；鵏-卡尼汀 mg500番茄紅素 mg56)丙?；鵏-卡尼汀 mg250番茄紅素 mg2.57)卡尼汀混合物 mg300(L-卡尼汀75mg，乙?；鵏-卡尼汀75mg，丙?；鵏-卡尼汀75mg，異戊酰基L-卡尼汀75mg)番茄紅素 mg58)卡尼汀混合物 mg300(L-卡尼汀75mg，乙酰基L-卡尼汀75mg，丙?；鵏-卡尼汀75mg，異戊?；鵏-卡尼汀75mg)番茄紅素 mg2.59)卡尼汀混合物 mg300(L-卡尼汀75mg，乙?；鵏-卡尼汀75mg，丙酰基L-卡尼汀75mg，異戊酰基L-卡尼汀75mg)
類(lèi)胡蘿卜素復(fù)合物(番茄、葡萄柚、胡蘿卜、香橙花天然提取物)mg30010)丙?；鵏-卡尼汀 mg400番茄紅素mg2.5β-胡蘿卜素 mg5α-胡蘿卜素 mg2黃體素 mg5玉米黃質(zhì)mg111)丙酰基L-卡尼汀 mg350番茄紅素mg5鋸齒棕(serenoa repens) mg50非洲臀果木提取物mg5012)卡尼汀混合物 mg300(L-卡尼汀75mg，乙酰基L-卡尼汀75mg，丙酰基L-卡尼汀75mg，異戊?；鵏-卡尼汀75mg)番茄天然提取物(含5％番茄紅素) mg100鋸齒棕提取物mg50非洲臀果木提取物mg50仙桃(Opuntis ficus indica)提取物mg50氨基乙酸鋅 mg50硒(1-甲硫氨酸硒) μg50維生素E mg10C0Q10mg1013)卡尼汀混合物 mg400(L-卡尼汀100mg，乙?；鵏-卡尼汀100mg，丙?；鵏-卡尼汀100mg，異戊酰基L-卡尼汀100mg)番茄天然提取物(含5％番茄紅素) mg100提取自紅莓的花色素苷mg50提取自葡萄的多酚mg10維生素E mg10甲硫氨酸硒 μg5014)丙?；鵏-卡尼汀 mg300β-胡蘿卜素 mg5番茄紅素mg5黃體素 mg3兒茶素 mg5硫辛酸 mg5C0Q10mg10維生素C mg100維生素PPmg25維生素B6mg25維生素B12μg250?；撬? mg100L-卡尼汀或烷?；鵏-卡尼汀的藥用的鹽的含義是指這些活性成分與酸形成的任何鹽，所述的酸不會(huì)產(chǎn)生不期望有的毒性或副作用。這些酸對(duì)于藥物專(zhuān)家來(lái)說(shuō)是熟知的。
合適鹽類(lèi)非限定的實(shí)例如下氯化物；溴化物；碘化物；天冬氨酸鹽，酸性天冬氨酸鹽；檸檬酸鹽，酸性檸檬酸鹽；酒石酸鹽；磷酸鹽，酸性磷酸鹽；富馬酸鹽，酸性富馬酸鹽；磷酸甘油；磷酸葡萄糖；乳酸鹽；馬來(lái)酸鹽；酸性馬來(lái)酸鹽；乳清酸鹽；酸性草酸鹽；硫酸鹽，酸性硫酸鹽；三氯乙酸鹽；三氟乙酸鹽以及甲磺酸鹽。
Int.J.of Pharm.38,(1986),201-217中給出了FDA許可的藥用鹽類(lèi)一覽表；這一最近的出版物被作為參考文獻(xiàn)引入。
本發(fā)明的組合物還包含維生素，同功酶，礦物質(zhì)和抗氧化劑。用來(lái)制備用于特定途徑給藥的組合物的合適的賦形劑對(duì)于藥品和食品工業(yè)的專(zhuān)家來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。
權(quán)利要求
1．一種組合物，其包含(a)丙酰基L-卡尼汀或其藥理學(xué)上可接受的鹽；以及(b)類(lèi)胡蘿卜素。
2．權(quán)利要求1中所述的組合物，其中成分(a)進(jìn)一步包含選自下下面的“卡尼汀”L-卡尼汀，乙酰基L-卡尼汀，戊?；鵏-卡尼汀，異戊?；鵏-卡尼汀或它們藥用鹽類(lèi)或它們的混合物。
3．權(quán)利要求1或2中所述的組合物，其中的類(lèi)胡蘿卜素選自番茄紅素，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，玉米黃質(zhì)，隱黃質(zhì)，黃體素或它們的混合物。
4．權(quán)利要求1-3中所述的組合物，其中(a)∶(b)的比例為1∶0.1至1∶10。。
5．任意前述權(quán)利要求中所述的組合物，其中成分(b)是以蔬菜提取物的形式存在的，該提取物含有成分本身。
6．權(quán)利要求5中所述的組合物，其中所述的蔬菜提取物為番茄提取物。
7．權(quán)利要求6中所述的組合物，其中所述的番茄提取物含有約2-20％的番茄紅素。
8．任意前述權(quán)利要求中所述的組合物，其中L-卡尼汀或烷?；鵏-卡尼汀藥用鹽選自下列化合物氯化物；溴化物；碘化物；天冬氨酸鹽，酸性天冬氨酸鹽；檸檬酸鹽，酸性檸檬酸鹽；酒石酸鹽；磷酸鹽，酸性磷酸鹽；富馬酸鹽，酸性富馬酸鹽；磷酸甘油；磷酸葡萄糖；乳酸鹽；馬來(lái)酸鹽；酸性馬來(lái)酸鹽；乳清酸鹽；酸性草酸鹽；硫酸鹽，酸性硫酸鹽；三氯乙酸鹽；三氟乙酸鹽以及甲磺酸鹽。
9．任意前述權(quán)利要求中所述的組合物，其進(jìn)一步包含維生素，同功酶，礦物質(zhì)和抗氧化劑。
10．任意前述權(quán)利要求中所述的組合物，其以飲食補(bǔ)充物的形式進(jìn)行口服給藥。
11．任意前述權(quán)利要求中所述的組合物，其可以藥物的形式，經(jīng)口服、非腸道、直腸、皮透或眼部滴注進(jìn)行給藥。
12．權(quán)利要求10中所述的飲食補(bǔ)充物，其可用于預(yù)防由環(huán)境污染和動(dòng)脈粥樣硬化、血管、心臟或大腦的脂過(guò)氧化現(xiàn)象導(dǎo)致游離基存在所產(chǎn)生的疾病；組織的增殖改變包含前列腺、子宮、乳房或結(jié)腸組織；視覺(jué)和視網(wǎng)膜改變包含白內(nèi)障和視網(wǎng)膜的斑退化。
13．權(quán)利要求11中所述的藥物，其可用于治療由環(huán)境污染和動(dòng)脈粥樣硬化、血管、心臟或大腦的脂過(guò)氧化現(xiàn)象導(dǎo)致游離基存在所產(chǎn)生的疾??；組織的增殖改變包含前列腺、子宮、乳房或結(jié)腸組織；視覺(jué)和視網(wǎng)膜改變包含白內(nèi)障和視網(wǎng)膜的斑退化。
14．權(quán)利要求12中所述的飲食補(bǔ)充物，其以固體、半固體或液體形式存在。
15．權(quán)利要求13中所述的藥物，其以固體、半固體或液體形式存在。
16．權(quán)利要求14中所述的飲食補(bǔ)充物，其以片劑、錠劑、藥丸、膠囊、顆粒劑或糖漿劑等形式存在。
17．權(quán)利要求13中所述的藥物，其以片劑、錠劑、藥丸、膠囊、顆粒劑、糖漿劑、小瓶、洗眼液和眼部清洗劑或滴劑等形式存在。
全文摘要
本文公開(kāi)了一種組合物,其含有作為特征性活性成分的丙?；鵏－卡尼汀以及至少一種類(lèi)胡蘿卜素,典型的是提取自番茄的番茄紅素,其可用于預(yù)防和/或治療各種由游離基和脂氧化現(xiàn)象導(dǎo)致的改變和病理學(xué)狀態(tài)。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1311674SQ99809268
公開(kāi)日2001年9月5日 申請(qǐng)日期1999年7月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月3日
發(fā)明者C·卡瓦扎 申請(qǐng)人:希格馬托保健科學(xué)股份公司