專利名稱：用賽菊寧黃質(zhì)及其類似物抑制和治療乙型肝炎病毒和黃病毒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗病毒藥物諸如賽菊寧黃質(zhì)及其類似物化合物?？梢詫⑦@些化合物單獨或與其它藥物結(jié)合用于治療如下病毒感染乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒。此外，可以將本發(fā)明的化合物用于預(yù)防繼發(fā)于病毒感染的肝細(xì)胞癌以及繼發(fā)于病毒感染的其它感染或疾病情況。
背景技術(shù)：
乙型肝炎病毒感染是世界范圍內(nèi)的主要健康難題。HBV是急性和慢性形式的肝炎的病原體。全世界中有超過3億人是慢性HBV攜帶者。一般來說，人宿主并沒有意識到感染且HBV感染導(dǎo)致急性肝炎和肝損傷、腹痛、黃疸和某些酶的血液濃度升高。另外，HBV可形成肝細(xì)胞癌且僅次于導(dǎo)致人癌癥原因的煙草。還不了解HBV誘發(fā)癌癥的機(jī)理，不過已經(jīng)推定它可以直接引起腫瘤發(fā)展或通過慢性炎癥、肝硬變和與感染相關(guān)的細(xì)胞再生而間接引起腫瘤形成。
HBV屬于肝DNA病毒科中的肝DNA病毒屬。HBV基因組由編碼7種病毒蛋白質(zhì)的約3200個堿基對的環(huán)形、部分雙鏈DNA組成。聚合酶基因完全重疊病毒包膜基因PreS1、PreS2和S且部分重疊X和核心基因。HBV的包膜由3種蛋白質(zhì)及其糖基化衍生物組成。小(S)、中(M)和大(L)3種蛋白質(zhì)是含有S基因序列的乙型肝炎表面(HBs)蛋白質(zhì)。其它諸如MHBs這樣的蛋白質(zhì)含有PreS2序列。
核心基因含有核殼蛋白(183-185aa)和乙型肝炎核心抗原。前核心區(qū)即核心區(qū)的上游由編碼29個氨基酸的87個核苷酸組成并且與核心區(qū)同相位。前核心區(qū)的前19個氨基酸作為用于前核心基因產(chǎn)物Hbe抗原的膜轉(zhuǎn)位和最終分泌的信號。
然而，DNA病毒HBV需要通過形成(+)鏈RNA中間體的反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄酶具有極差的校正能力且這導(dǎo)致核苷酸的錯摻比例高；計算提示這種易錯復(fù)制在每1000-100,000個拷貝的核苷酸中產(chǎn)生一點取代、缺失或插入。
另外，在前核心、核心中和在PreS和S中的其它突變也使乙型肝炎病毒在獲得藥物抗性中產(chǎn)生選擇性的優(yōu)點。
迄今為止最佳的保護(hù)措施是接種疫苗。已經(jīng)通過基因工程開發(fā)了人血清衍生的疫苗。盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)疫苗是有效的，但是因限制從慢性攜帶者中提供人血清和純化過程長和昂貴而阻礙了疫苗的生產(chǎn)。此外，必須將每批疫苗在黑猩猩中進(jìn)行試驗以便確保安全性。另外，疫苗不能治療已經(jīng)感染了病毒的患者。
已經(jīng)進(jìn)行了很大的努力來開發(fā)用于乙型肝炎的臨床上有用的療法，但是它們均只是獲得了有限的成功。例如，已經(jīng)證實干擾素和幾種核苷類似物具有相對低的乙型肝炎治愈率且它們通常產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。2’，3’-雙脫氧胞苷(ddC)對中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)具有很高的毒性。發(fā)現(xiàn)另一種核苷類似物aa-AMP可短暫地抑制HBV感染，不過，已經(jīng)證實它仍然具有極高的毒性。
環(huán)戊基嘌呤衍生物也表現(xiàn)出抗病毒活性。用于制備這類組合物的方法已經(jīng)公開在美國專利4,999,428和5,015,739號中。另外，Onishi等在美國專利5,777,116號中已經(jīng)公開了一種制備含有黃嘌呤-9-基的環(huán)戊烷衍生物的方法。
Schinazi等在美國專利5,684,010號中已經(jīng)生產(chǎn)了表現(xiàn)出選擇性抗乙型肝炎活性的對映體形式的純β-二氧戊環(huán)核苷類。另外，Lin等在美國專利5,830,881號中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了含有具有L-構(gòu)型而非通常的D-構(gòu)型的呋喃核糖基部分的某些雙脫氧核苷類似物表現(xiàn)出對病毒復(fù)制的有效抑制作用。然而，不同于其它核苷類似物，這些類似物已經(jīng)顯示出對宿主細(xì)胞諸如動物或人細(xì)胞的很低的毒性。
在過去，已經(jīng)將諸如3TC、PCMEA、和PCV這樣的抗-HBV核苷類似物用于臨床試驗。然而，某些HBV感染患者通常經(jīng)歷了用3TC或PCV治療一段期限后的HBV復(fù)發(fā)；這種復(fù)發(fā)的原因是病毒耐受性的出現(xiàn)。另外，例如3TC-抗性HBV對其它抗-HBV核苷類似物也具有交叉抗性。
Hostetler在美國專利5,817,638號中已經(jīng)生產(chǎn)了諸如2’，3’-雙脫氧胞苷這樣的核苷類似物，它們通過戊糖基的5’磷酸酯與選擇的脂類諸如二油?；字Ｄ憠A連接。這種親脂特性在核苷類似物單獨應(yīng)用的范圍內(nèi)產(chǎn)生了優(yōu)點并且能夠?qū)⑺鼈円胫|(zhì)體的片層結(jié)構(gòu)。這種形式使它們被潛伏了乙型肝炎病毒的肝細(xì)胞吸收。
Holly等在美國專利5,142,051號、5,641,763號和5,869,467號中已經(jīng)公開了生產(chǎn)嘧啶和嘌呤堿的N-(2-膦酰基甲氧基乙基)和N-(3-羥基-2-膦酰甲氧基丙基)衍生物的方法。這些化合物還可以包括黃嘌呤-9-基。將這些化合物看作核苷類的無環(huán)類似物，其中核苷的糖部分被帶有羥基的取代碳鏈所取代。
盡管并沒有檢測出Holly和其他人開發(fā)的化合物可特別地抗乙型肝炎病毒，但是它們已經(jīng)在體外表現(xiàn)出對其它DNA病毒諸如皰疹病毒的抗病毒活性。表現(xiàn)出抗乙型肝炎病毒活性的其它類似物包括如Kim等在美國專利5,726,174號和5,837,871號中所述的膦?；籽趸谆堰屎袜奏ぱ苌?。
另一方面，Chang等在美國專利5,929,038號中已經(jīng)開發(fā)了一種是由屬于單萜(monoteropenoid)化合物的母體環(huán)烯醚萜苷類生產(chǎn)的環(huán)烯醚萜糖苷配基化合物和由藥用植物衍生的抗-HBV化合物。除抑制HBV DNA合成外，這些化合物還可防止肝臟受到諸如四氯化碳中毒誘發(fā)的肝損傷。
在過去，已經(jīng)將諸如3TC(L(-)SddC)、PCMEA、和PCV這樣的抗-HBV核苷類似物用于臨床試驗。然而，某些HBV感染患者通常經(jīng)歷了用3TC或PCV治療一段期限后的HBV復(fù)發(fā)；這種復(fù)發(fā)的原因是病毒耐受性的出現(xiàn)。另外，例如3TC-抗性HBV對其它抗-HBV核苷類似物也具有交叉抗性。
黃病毒屬于披膜病毒科的黃病毒屬。根據(jù)病毒分類學(xué)，約有50種病毒，包括丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒。將屬于黃病毒屬的病毒簡稱為黃病毒。將屬于黃病毒屬的病毒簡稱為黃病毒。
黃病毒是感染性疾病的致病因素并且主要出現(xiàn)在東亞、東南亞和南亞以及非洲，不過也在世界其它地方發(fā)現(xiàn)了它們。日本腦炎病毒是日本腦炎(JE)的病原體。JE的死亡率相當(dāng)高且這種疾病可帶來嚴(yán)重的后遺癥。盡管在日本發(fā)現(xiàn)，但是這種疾病已經(jīng)蔓延至亞洲的其它地方且目前發(fā)現(xiàn)主要出現(xiàn)在日本以外、主要在南亞和東南亞。
登革病毒是登革熱/登革出血熱的病原體。登革病毒感染是熱帶國家、尤其是東南亞和西太平洋國家中的主要社會健康難題，不過在美洲也發(fā)現(xiàn)了登革病毒。正如登革病毒通過埃及伊蚊的蚊子傳播給人那樣，那么并不令人意外的是熱帶和亞熱帶國家、特別是東南亞的那些國家非常流行登革病毒。
對于公共衛(wèi)生官員來說主要關(guān)心和正在增加的難題是由登革病毒感染所產(chǎn)生的嚴(yán)重并發(fā)癥的出現(xiàn)。登革出血熱(DHF)和休克綜合征(DSS)是與預(yù)先存在對異源登革病毒血清型的免疫性存在相關(guān)的臨床結(jié)果。登革出血熱的最初特征在于持續(xù)約3-5天的不嚴(yán)重的發(fā)熱病。患者在退熱期可以惡化成下一步的帶有出血紊亂的綜合征和通常伴有內(nèi)部出血和休克的血管通透性增加。自從50年代首先在泰國確認(rèn)以來，據(jù)報導(dǎo)在150萬之多的住院兒童中有33,000人死于這種綜合征。DHF/DSS由此在南亞持續(xù)發(fā)生。在許多熱帶或接近熱帶的國家包括古巴、緬甸、印度尼西亞、印度、馬爾代夫、斯里蘭卡和南太平洋島國中也發(fā)現(xiàn)了DHF/DSS。登革熱暴發(fā)通常與蚊子載體、特別是埃及伊蚊的密度有關(guān)。
可以將登革病毒分成4中血清型，它們在抗原上彼此很相似，但是區(qū)別在于被一種血清型感染后足以引起僅部分交叉保護(hù)性。這類由一種血清型導(dǎo)致的感染由此不會對其它血清型產(chǎn)生長期免疫。迄今為止用于預(yù)防登革病毒感染的疫苗方法仍然不成功。
急性病毒性肝炎是一種許多導(dǎo)致慢性肝損傷的疾病。它通過定義充分的一套患者癥狀來進(jìn)行臨床診斷，包括黃疸、肝觸病(tendrness)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的血清濃度升高。許多年以來，非甲非乙型肝炎(NANBH)的致病因素仍然難以理解。目前已經(jīng)確定許多NANBH的病例是由稱作丙型肝炎病毒(HCV)的不同病毒所引起的。
Colacino等在美國專利5,821,242號和5,891,874號中已經(jīng)開發(fā)了一系列苯并咪唑化合物，它們可通過干擾病毒復(fù)制復(fù)合體的結(jié)構(gòu)和功能來抑制諸如丙型肝炎病毒這樣的其它黃病毒中的復(fù)制。
到目前為止，還沒有涉及到從賽菊寧黃質(zhì)類中開發(fā)抗-HBV化合物的這類研究。已經(jīng)從植物臺灣杉中分離了序號為145的賽菊寧黃質(zhì)。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供治療和/或預(yù)防患者來自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的感染以及相關(guān)疾病和/或患者疾病情況的化合物、包括藥物組合物在內(nèi)的藥劑和方法。
本發(fā)明的另一個目的是在某些實施方案中提供預(yù)防與HBV或HCV接觸或帶有HBV或HCV感染的患者體內(nèi)涉及HBV或HCV的肝細(xì)胞癌形成的方法。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供一種治療3TC(L(-)SddC)抗性HBV感染的方法。
附圖簡述

圖1A、1B和1C表示本發(fā)明賽菊寧黃質(zhì)及相關(guān)類似物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖2A和2B表示用于合成本發(fā)明化合物的化學(xué)圖解。
圖3A和B以及4A、B和C表示了存在于涉及本發(fā)明某些化合物的HBV抑制作用的實施例部分中的生物數(shù)據(jù)。
發(fā)明簡述本發(fā)明涉及這樣一種發(fā)現(xiàn)圖1A、B及C中所述賽菊寧黃質(zhì)及其類似物表現(xiàn)出對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的活性。這些化合物表現(xiàn)出對這些病毒的活性是意料之外的，因為現(xiàn)有技術(shù)中對這些活性劑活性的研究極少。這些化合物還令人意外地表現(xiàn)出對3TC(L(-)SddC)抗性HBV的異常的抗-HBV活性。
本發(fā)明涉及下列結(jié)構(gòu)式的化合物 其中
A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20?；瑑?yōu)選C1-C7?；籇和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-基(亞甲基)，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E彼此通過-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
本發(fā)明還涉及下列結(jié)構(gòu)式的化合物 本發(fā)明涉及這樣一種發(fā)現(xiàn)賽菊寧黃質(zhì)及其類似物表現(xiàn)出作為抑制乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的生長、復(fù)制和/或加工的活性劑的活性。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出作為抑制黃病毒生長或復(fù)制的活性劑的主要用途。還將這些活性劑中的某些用于抑制其它病毒的生長或復(fù)制(例如包括用賽菊寧黃質(zhì)抑制HSV)或用于治療其它病毒感染和/或相關(guān)疾病狀況?？梢詫⑵渌钚詣┯米鳈z測目的的生物探針或作為合成具有藥理活性或用于治療癌癥和其它疾病狀況的相關(guān)核苷酸化合物的中間產(chǎn)物。
本發(fā)明的化合物特別應(yīng)用于抵抗折磨受乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的病毒感染，尤其是屬于陷入HBV或HCV感染的繼發(fā)性疾病情況的肝細(xì)胞癌的動物且特別是人的病毒感染及其并發(fā)癥。本發(fā)明的化合物提供了作為抗某些疾病情況的治療劑的巨大潛能，目前對這些疾病幾乎還沒有有效的療法可以選擇，即使有也很少。可以將本發(fā)明的化合物單獨或與其它抗-HBV或抗黃病毒藥或其它療法合并使用。
本發(fā)明的化合物基于可以分離自植物臺灣杉的天然產(chǎn)物賽菊寧黃質(zhì)和相關(guān)的系列類似物。在細(xì)胞培養(yǎng)模型中，確定賽菊寧黃質(zhì)可選擇性地抑制HBV復(fù)制并降低RNA水平。將系列類似物進(jìn)行設(shè)計和合成并使之出現(xiàn)在本說明書的實施例部分。將該化合物的抗病毒活性、細(xì)胞毒性和溶解度概括在表1中。令人關(guān)注的是，盡管對HBV和黃熱病毒(YFV)具有明顯活性，但是這些化合物卻表現(xiàn)出相對低的毒性。這是一個令人意外的結(jié)果。
本發(fā)明還涉及用于抑制乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的生長或復(fù)制的方法，該方法包括使病毒與抑制有效量或濃度的所公開的賽菊寧黃質(zhì)類似物中的至少一種進(jìn)行接觸?？梢詫⒃摲椒ㄓ糜诒容^試驗諸如用于測定相關(guān)抗病毒化合物的活性以及用于測定患者感染對本發(fā)明化合物之一的敏感性的檢測?？梢詫⒈净衔镉糜谥委熑缟纤龅脑S多病毒，但這些化合物特別適合于治療屬于3TC抗性的HBV感染。
本發(fā)明的治療方面涉及用于治療或預(yù)防患者，特別是人患者體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的方法，該方法包括給予抗病毒有效量的一種或多種本發(fā)明化合物以抑制所治療動物或人患者體內(nèi)病毒生長或復(fù)制。在本發(fā)明的優(yōu)選方法的中，將這些化合物(composition)用于預(yù)防或延緩患者體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染或相關(guān)疾病或病毒并發(fā)癥、特別是可以成為繼發(fā)于HBV或HCV感染的疾病情況的肝細(xì)胞癌的發(fā)作。
以這些新型化學(xué)品化合物為基礎(chǔ)的藥物組合物包括用于治療病毒感染、特別是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的治療有效量的一種或多種上述化合物。本發(fā)明的藥物組合物任選包括一種或多種藥物上可接受的添加劑、載體或賦形劑。
本發(fā)明制成藥物劑型的化合物還可以用作用于抑制諸如HBV這樣的病毒或諸如乙型肝炎病毒(HBV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒這樣的病毒生長或復(fù)制的預(yù)防藥劑。在某些藥物劑型中，可以優(yōu)選前體藥物形式，例如酰化形式的一種或多種含有羥基側(cè)鏈的類似物。
盡管不受理論的限制，但是認(rèn)為本發(fā)明的化合物可以通過其減少或抑制病毒RNA合成的能力來誘導(dǎo)其對病毒生長或復(fù)制的抑制作用，這會導(dǎo)致病毒RNA和病毒基因的表達(dá)減少、抗原表達(dá)和病毒復(fù)制減少。
通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知且包括下文具體描述的各種化學(xué)合成方法的合成方法來生產(chǎn)本發(fā)明的化合物。
發(fā)明詳述將下列定義在本說明書的上下文中使用以描述本發(fā)明。
將術(shù)語“患者”在本說明書的上下文中用于描述動物，優(yōu)選人，對他們提供了使用本發(fā)明組合物的治療方法包括預(yù)防療法。為治療對具體動物諸如人患者來說是特定的那些感染、疾病或疾病情況，術(shù)語患者指的是具體動物。
將術(shù)語“乙型肝炎病毒”(HBV)用于描述在人體內(nèi)產(chǎn)生病毒性乙型肝炎的病毒(血清肝炎病毒)。與具有短潛伏期的甲型肝炎病毒(傳染性肝炎病毒)相反，這是一種具有長潛伏期(約50-160天)的病毒性疾病。這種病毒通常通過注射受感染的血液或血液衍生物或僅通過使用受污染的針頭、柳葉刀或其它儀器來傳染。這種疾病在臨床上和病理學(xué)上類似于病毒性甲型肝炎；然而，不存在交叉保護(hù)性免疫。在感染后的血清中發(fā)現(xiàn)了病毒抗原(HBAg)。
將術(shù)語“丙型肝炎病毒”或(HCV)在本說明書的上下文中用來描述屬于非甲非乙型肝炎病原體的肝炎病毒。一般來說，處于急性期的這種疾病較乙型肝炎緩和，而較大比例的這類感染將轉(zhuǎn)變成慢性。
將術(shù)語“黃病毒”在本說明書的上下文中用來描述屬于披膜病毒科黃病毒屬的病毒。根據(jù)病毒分類學(xué)，包括丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒在內(nèi)的約50種病毒屬于該屬。將屬于黃病毒屬的病毒簡稱為黃病毒。以前將這些病毒分類為B族蟲媒病毒。黃病毒是感染性疾病的致病因素并且主要出現(xiàn)在東亞、東南亞和南非以及非洲中，不過在世界的其它處也發(fā)現(xiàn)了它們。
將術(shù)語“黃熱病毒”用于描述屬于黃熱病病原體的黃病毒。黃熱病是一種熱帶蚊子帶有的因黃熱病毒(TFV)所導(dǎo)致的病毒性肝炎，有埃及伊蚊傳播的城市型以及來自居于樹的帶有由各種趨血蚊屬種類復(fù)合體的各種蚊子的哺乳動物傳播的農(nóng)村、叢林或森林型。黃熱病的臨床特征在于發(fā)熱、脈緩、蛋白尿、黃疸、面部充血和出血、特別是嘔血(“黑色嘔吐物”)。它在大約5-10％的病例中是致死性的。
將術(shù)語“日本腦炎病毒”(“JEV”)用于描述屬于日本腦炎(JE)病原體的黃病毒。JE是日本、俄羅斯(西伯利亞)和亞洲其它地區(qū)的流行性腦炎或腦脊髓炎。由JE導(dǎo)致的死亡率相當(dāng)高且這種疾病可帶來嚴(yán)重的后遺癥。盡管在日本發(fā)現(xiàn)，但是這種疾病已經(jīng)蔓延至亞洲的其它地方且目前發(fā)現(xiàn)在日本以外，主要在南亞和東南亞出現(xiàn)。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“登革病毒”用于描述屬于登革熱/登革出血熱的病原體的黃病毒。登革熱是一種在熱帶和亞熱帶地區(qū)流行發(fā)生并由登革病毒導(dǎo)致的疾病，所述的登革病毒是導(dǎo)致出血熱綜合征的蟲媒病毒族中的一種。將嚴(yán)重程度確定為4級I級發(fā)熱和全身癥狀；II級I級+自發(fā)性出血(皮膚、牙齦或胃腸道出血)；III級II級+焦慮和循環(huán)衰竭；和IV級深度休克。這種疾病由伊蚊屬的蚊子(一般是埃及伊蚊，不過通常是白紋伊蚊)傳播。也稱登革熱、花束熱(bouquet)、breakbone、dandy、date、登革熱(出血)或polka、僵頸熱、風(fēng)濕性猩紅熱(scarlatina rheumatica)或關(guān)節(jié)疹(exanthesis arthorosia)。“出血性登革熱”是近年來在太平洋地區(qū)大量爆發(fā)出疹的登革熱的更為流行的病理形式。
將術(shù)語“西尼羅病毒”用于描述屬于西尼羅熱病原體的黃病毒，這種疾病的特征在于頭痛、發(fā)熱、男性化丘疹(masculopapular rash)、肌病、淋巴結(jié)病和白細(xì)胞減少。這種病毒由來自鳥巢中的庫蚊屬的蚊子傳播。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“藥物上可接受的鹽”用于描述本文所述的賽菊寧黃質(zhì)或一種或多種其系列類似物的鹽形式，它們用來增加所述化合物在患者胃腸道的胃液中的溶解度以便促進(jìn)所述化合物的溶解和生物利用度。藥物上可接受的鹽包括那些來源于藥物上可接受的無機(jī)或有機(jī)堿和酸的鹽。合適的鹽包括那些來源于堿金屬諸如鉀和鈉的鹽、堿土金屬諸如鈣、鎂的鹽和銨鹽以及大量其它藥物領(lǐng)域中眾所周知的酸的鹽。特別優(yōu)選鈉和鉀鹽作為羧酸的中和鹽。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“藥物上可接受的衍生物”用于描述任意藥物上可接受的前體藥物形式(諸如酯或其他前體藥物組)，在對患者給藥時，它們可直接或間接提供本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的活性代謝物。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“?；庇糜诿枋龊蠧1-C20直鏈、支鏈、芳香或環(huán)狀烷基(例如環(huán)戊基、環(huán)己基)鏈的核苷類似物的5’位上(即二氧戊環(huán)基部分中的游離羥基位置上)的基團(tuán)。本發(fā)明化合物不同位置上的酰基與通常與之結(jié)合的羥基結(jié)合形成酯，在給藥后，可以將這種酯裂解產(chǎn)生游離羥基。本發(fā)明的?；上铝薪Y(jié)構(gòu)表示 其中R是C1-C20直鏈、支鏈、芳香或環(huán)狀烷基鏈、烷氧基烷基、芳氧基烷基，諸如苯氧基甲基，芳基、烷氧基。優(yōu)選的?；悄切㏑是C1-C7的?；１景l(fā)明的?；€包括例如那些來源于苯甲酸和相關(guān)酸類、3-氯苯甲酸、琥珀酸、癸酸和己酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸和油酸以及大量包括甲磺酰酸基在內(nèi)的?；?。本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到這些?；诒景l(fā)明中具有合成靶向藥物化合物或作為本發(fā)明核苷類前體藥物的用途。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“抑制有效濃度”或“抑制有效量”用于描述本發(fā)明化合物的濃度和用量，它們可基本上或明顯抑制敏感性病毒、尤其包括乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的生長或復(fù)制。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“治療有效量”或“治療上有療效量”用于描述本發(fā)明化合物的濃度和用量，它們在治療患者乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的過程中是有療效的。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“預(yù)防有效量”用于描述本發(fā)明化合物的濃度和用量，它們在預(yù)防或延緩人體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染或相關(guān)疾病(尤其是與肝炎相關(guān)的肝細(xì)胞癌)的發(fā)作過程中是有預(yù)防療效的。
術(shù)語“有效量”應(yīng)指本發(fā)明化合物在其給藥范圍內(nèi)有效的用量和濃度。
將術(shù)語“純”用于描述已經(jīng)分離且不在其天然狀態(tài)中發(fā)現(xiàn)的化合物。本發(fā)明的純化合物是那些優(yōu)選含有至少95％重量的所需化合物，更優(yōu)選至少約為97-98％重量的所需化合物、且甚至更優(yōu)選約為99+％重量的所需化合物的化合物。本發(fā)明的純化合物、特別是賽菊寧黃質(zhì)有別于可以在其天然狀態(tài)下發(fā)現(xiàn)的化合物，例如通過生物體生物合成的代謝產(chǎn)物。純化合物包括那些已經(jīng)分離自植物或其它生物體的天然產(chǎn)物的化合物且它們是用于轉(zhuǎn)運治療病毒的活性化合物的形式。
將貫穿于本說明書中的術(shù)語“以對映體形式富含的”用于描述這樣一種化合物，它包括至少約95％、優(yōu)選至少約96％、更優(yōu)選至少約97％、甚至更優(yōu)選至少約98％、且甚至更優(yōu)選至少約99％或多個單一對映體的所述化合物。如果以對映體形式富含的化合物不是所描述的，那么推定(除非化學(xué)上另有說明)該化合物是外消旋混合物。
本發(fā)明由此涉及一組下列結(jié)構(gòu)的化合物 其中A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20?；瑑?yōu)選C1-C7?；?；D和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-(亞甲基)基，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E被-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
本發(fā)明還涉及下列結(jié)構(gòu)的化合物 本化合物表現(xiàn)出令人意外的對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的高活性。特別地，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出對病毒復(fù)制(病毒生長)的有效抑制作用以及對宿主細(xì)胞(即動物和人的組織)的極低毒性。
本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出作為抑制乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的生長或復(fù)制的活性劑的主要用途。這些活性劑中的某些(特別是賽菊寧黃質(zhì))也用于抑制其它病毒(例如HSV)的生長或復(fù)制或用于治療其它病毒性感染和/或相關(guān)疾病情況?？梢詫⑵渌钚詣┯米鳈z測目的的生物探針或作為合成具有藥理活性或用于治療癌癥和其它疾病情況的相關(guān)核苷化合物的中間體。
本發(fā)明的化合物特另應(yīng)用于抵抗折磨受乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的動物且特別是人的病毒感染及其并發(fā)癥。本發(fā)明的化合物提供了作為抗許多疾病情況的治療劑的巨大潛能，目前對這些疾病幾乎還沒有有效的療法可以選擇。本發(fā)明的化合物特別應(yīng)用于治療屬于3TC(1amivudine)抗性的HBV感染。可以將本發(fā)明的化合物單獨或與其它活性劑或其它療法合并使用。
本發(fā)明還涉及用于抑制乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的生長或復(fù)制的方法，該方法包括使病毒與抑制有效量或濃度的所公開的核苷類似物中的至少一種進(jìn)行接觸?？梢詫⒃摲椒ㄓ糜诒容^試驗諸如用于測定相關(guān)抗病毒化合物的活性以及用于測定患者的病毒性感染對本發(fā)明化合物之一的敏感性。優(yōu)選將這些化合物用于治療或預(yù)防人體內(nèi)的3TC抗性HBV感染和HCV感染。
本發(fā)明的治療方面涉及用于治療或預(yù)防患者，優(yōu)選人體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的方法，該方法包括給予抗病毒有效量的一種或多種本發(fā)明化合物以抑制所治療動物或人患者體內(nèi)病毒生長或復(fù)制。在本發(fā)明的優(yōu)選方法的方面中，將這些化合物(compositions)用于預(yù)防或延緩患者體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染或相關(guān)疾病或病毒性并發(fā)癥的發(fā)作，尤其包括那些已經(jīng)感染了HBV或HCV患者體內(nèi)的肝細(xì)胞癌。
以這些新型化學(xué)品化合物為基礎(chǔ)的藥物組合物包括用于治療病毒感染、一般是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的治療有效量的一種或多種上述化合物以及任選藥物上可接受的添加劑、載體或賦形劑。
本發(fā)明藥物劑型形式的化合物還可以用作用于抑制乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的生長或復(fù)制的預(yù)防藥劑?？梢詫⑦@些化合物特別合適地用作抗病毒劑。在某些藥物劑型中，可以優(yōu)選前體藥物形式，例如一種用于促進(jìn)溶解、吸收或生物利用度的化合物的?；问?。
盡管不受理論的限制，但是認(rèn)為本發(fā)明的化合物可以通過其減少病毒RNA的能力來表現(xiàn)出其抗病毒活性，這會導(dǎo)致病毒RNA、病毒基因的表達(dá)減少、抗原表達(dá)和病毒復(fù)制減少。令人意外的是證明了本發(fā)明化合物對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒的異常的活性。本發(fā)明化合物還表現(xiàn)出對3TC抗性HBV的令人意外的活性。
在細(xì)胞培養(yǎng)物中應(yīng)用賽菊寧黃質(zhì)已經(jīng)表現(xiàn)出對已經(jīng)耐受3TC的HBV菌株的病毒復(fù)制的較強抑制作用。此外，賽菊寧黃質(zhì)化合物具有獨特的抗病毒作用機(jī)制。認(rèn)為序號為145的賽菊寧黃質(zhì)是可以同時降低HBV的RNA水平及其抗原表達(dá)并且抑制細(xì)胞培養(yǎng)物中HBV復(fù)制的唯一化合物。與僅在病毒DNA合成過程中抑制HBV的其它核苷類似物相反，本發(fā)明的賽菊寧黃質(zhì)化合物在病毒循環(huán)早期階段抑制病毒，在病毒循環(huán)過程中，HBV通過3.5kb前基因組RNA的反錄酶以及病毒DNA表達(dá)細(xì)胞中的病毒基因表達(dá)來復(fù)制。
如上所述，賽菊寧黃質(zhì)化合物可以更好地減少細(xì)胞中的病毒RNA；因此，病毒基因表達(dá)和復(fù)制也可以減少。在已經(jīng)在臨床試驗中使用或評估的藥物中從未沒有發(fā)現(xiàn)這些化合物的獨特抗病毒作用。目前已經(jīng)明確了產(chǎn)生抗病毒活性的賽菊寧黃質(zhì)結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵部分。
可以將本發(fā)明的賽菊寧黃質(zhì)化合物單獨或與其它用于治療HBV感染或包括黃熱病毒、丙型肝炎病毒、登革熱(Danque fever)病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒在內(nèi)的黃病毒感染以及預(yù)防與這些病毒相關(guān)的包括肝細(xì)胞癌在內(nèi)的疾病的藥物合并使用。
優(yōu)選以藥物劑型的形式使用本化合物。在本發(fā)明的藥物方面中，優(yōu)選將本發(fā)明的化合物與藥物上可接受的載體一起配制。一般來說，優(yōu)選以口服給藥方式給予藥物組合物，不過可以通過非腸道、靜脈、肌內(nèi)、經(jīng)皮、口含、皮下、栓劑或其它途徑來給予某些制劑。優(yōu)選以無菌鹽水的形式給予靜脈和肌內(nèi)制劑。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在本說明書的教導(dǎo)范圍內(nèi)改變這些制劑以便提供大量用于特定給藥途徑而不會使本發(fā)明的組合物不穩(wěn)定或損害其治療活性的制劑。特別地，例如使本化合物更易溶于水或其它載體的修改方案可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員的適當(dāng)?shù)男》秶薷?鹽制劑、酯化等)而方便地完成。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還可以改變給藥途徑和特定化合物的劑量方式以便維持本發(fā)明化合物的藥代動力學(xué)特性而在患者體內(nèi)達(dá)列最大的有益作用。
在某些藥物劑型中，優(yōu)選化合物的前體藥物形式，尤其包括本化合物的?；?乙?；蚱渌?和醚衍生物和各種藥物上可接受的鹽的形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到如何將本發(fā)明化合物修飾成前體藥物形式以有利于將活性化合物轉(zhuǎn)運至宿主生物體或患者中的靶向部位。如果合適，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可利用前體藥物形式的有利藥代動力學(xué)參數(shù)在將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)運至宿主生物體或患者中的靶向部位以最大程度地實現(xiàn)所述化合物指定作用。
本發(fā)明有治療活性的制劑中包括的化合物的量是用于治療感染或疾病的有效量；在優(yōu)選的實施方案中是用于治療乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的有效量。一般來說，藥物劑型中的本發(fā)明化合物的治療有效量通常在約0.1mg/kg患者體重-約100mg/kg患者體重或100mg/kg以上患者體重的范圍、更優(yōu)選稍低于約1mg/kg患者體重-約50mg/kg患者體重或遠(yuǎn)高于約50mg/kg患者體重的范圍，這取決于所用的化合物、所治療的疾病或感染和給藥途徑。就HBV或HCV感染而言，所給予的活性化合物的量的優(yōu)選范圍在約0.5mg/kg患者體重-約25mg/kg患者體重的范圍，這取決于活性劑在患者體內(nèi)的藥代動力學(xué)特性。這種劑量范圍一般在患者體內(nèi)產(chǎn)生可以在約0.05-約100微克/cc血液的活性化合物的有效血藥濃度。為了本發(fā)明的目的，本發(fā)明化合物的預(yù)防有效量與上述對治療有效量所述的濃度范圍相同且通常與治療有效量相同。
藥物組合物的中活性化合物的濃度取決于藥物的吸收、分布、失活和排泄率以及其它本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的因素。應(yīng)注意劑量值也可以根據(jù)所緩解疾病的嚴(yán)重程度來改變?？梢赃M(jìn)一步理解的是對于任何特定的受治療者來說，應(yīng)在根據(jù)個體需要的時間范圍內(nèi)和給予和監(jiān)督組合物給藥的職業(yè)人員的判斷來調(diào)整特殊的劑量方式；且本文所列的濃度范圍僅是典型的而不用來限定所要求保護(hù)的組合物的范圍和實施?？梢砸淮谓o藥活性組分或可以將活性組分分成許多小劑量在不同的時間間隔給藥。
還可以將活性化合物或其藥物上可接受的鹽與不影響所需作用的其它活性物質(zhì)混合或與補充所需作用的物質(zhì)諸如其它抗病毒藥或根據(jù)所需靶物或療法不同而選擇的抗菌素、抗真菌藥、消炎藥混合。
活性化合物的給藥可以在連續(xù)給藥(靜脈滴注)至每日幾次口服給藥(例如每日四次)的范圍并且可以包括口服、局部、非腸道、肌內(nèi)、靜脈、皮下、經(jīng)皮(可以包括透皮促進(jìn)劑)、口含和栓劑給藥以及其它給藥途徑。還可以將腸溶口服片劑用于促進(jìn)來自口服給藥途徑的化合物的生物利用度。最有效的劑型將取決于所選擇的特定活性劑的藥代動力學(xué)特性以及患者體內(nèi)疾病的嚴(yán)重程度?？诜┬鸵蚪o藥容易和預(yù)計有利的患者順應(yīng)性而是特別優(yōu)選的。
為了制備本發(fā)明的藥物組合物，優(yōu)選將治療有效量的本發(fā)明一種或多種化合物按照用于產(chǎn)生藥劑的常規(guī)藥物配制技術(shù)與藥物上可接受的載體充分混合?？梢愿鶕?jù)用于給藥例如口服和非腸道的所需制劑形式而采用各種形式的載體。在制備口服劑型的藥物組合物中，可以使用任意常用的藥物介質(zhì)。因此，對于諸如混懸劑、酏劑和溶液這樣的口服液體制劑來說，可以使用包括水、乙二醇、油、醇類、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等在內(nèi)的合適載體和添加劑。對于諸如粉劑、片劑、膠囊這樣的固體口服制劑和對于諸如栓劑這樣的固體制劑來說，可以使用包括淀粉、諸如右旋糖、甘露糖醇、乳糖這樣的糖載體和相關(guān)載體、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等在內(nèi)的合適載體和添加劑。如果需要，可以用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將片劑或膠囊配制成有腸衣的片劑或緩慢釋放劑。這些劑型的應(yīng)用可以明顯提高所述化合物在患者體內(nèi)的生物利用度。
對于非腸道制劑來說，盡管也可以包括其它組分包括那些輔助分散的物質(zhì)，但是載體通常包括無菌水或氯化鈉水溶液。當(dāng)然，如果使用無菌水并維持無菌，那么也必須將組合物和載體滅菌。也可以制備注射用混懸劑，其中可以使用合適的液體載體、懸浮劑等。
通過生產(chǎn)藥物上可接受的載體的常規(guī)方法也可以制備脂質(zhì)體混懸劑(包括耙向至病毒抗原的脂質(zhì)體)。這對于轉(zhuǎn)運游離核苷類、?；塑疹惢虮景l(fā)明核苷化合物的磷酸酯前體藥物形式來說是合適的。
在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實施方案中，將所述的化合物和組合物用于治療、預(yù)防或延緩哺乳動物病毒感染且特別是人體內(nèi)的乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的發(fā)作。在其優(yōu)選的實施方案中，將所述的化合物用于治療人體內(nèi)的HBV和HCV感染、尤其是3TC抗性HBV感染。優(yōu)選的情況是，為了治療、預(yù)防或延緩本發(fā)明所述病毒感染的發(fā)作，以口服劑型給藥約250微克-約500mg或500mg以上的量的所述組合物，每天至少給藥一次、優(yōu)選每天給給藥最高達(dá)4次。優(yōu)選以口服方式給藥本化合物，不過可以經(jīng)非腸道、局部途徑或通過栓劑形式給藥。
本發(fā)明的化合物因其對宿主細(xì)胞的低毒性而可以被有利地以預(yù)防方式使用以便預(yù)防乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染或預(yù)防與病毒感染相關(guān)的臨床癥狀、尤其是患HBV或HCV病毒感染的那些患者體內(nèi)的肝細(xì)胞癌的發(fā)生。因此，本發(fā)明還包括用于病毒感染、且特別是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的預(yù)防療法的方法。在本發(fā)明的該方面中，將本發(fā)明組合物用于預(yù)防或延緩患者體內(nèi)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染或包括諸如肝細(xì)胞癌這樣的相關(guān)疾病的發(fā)作。這種預(yù)防方法包括對需要這類治療或處于乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染或相關(guān)癥狀或疾病發(fā)展的危害中的患者給藥本發(fā)明有效緩解、預(yù)防或延緩病毒感染發(fā)作的量的化合物。在本發(fā)明的預(yù)防療法中，優(yōu)選所用的抗病毒化合物應(yīng)是低毒性的且優(yōu)選對患者是無毒性的。在本發(fā)明的該方面中，特別優(yōu)選的是所用的化合物應(yīng)最大限度地對病毒有效且應(yīng)表現(xiàn)出對患者的最低程度的毒性。就本化合物而言，可以在與預(yù)防劑相同的治療劑量范圍內(nèi)(即約250微克-約500mg或更多，對口服劑型來說更好的是每天1-4次)給藥它們以預(yù)防病毒感染的增殖或推遲表現(xiàn)出自身臨床癥狀的病毒感染的發(fā)作。
此外，可以將本發(fā)明的化合物單獨或與包括本發(fā)明其它化合物在內(nèi)的其它活性劑合并給藥。本發(fā)明的某些化合物可以通過減少其它化合物的代謝、分解代謝或失活而有效地提高本發(fā)明某些活性劑的生物活性且如此可以為這種所需作用而共同給藥。
在特別優(yōu)選的用于治療HBV、HCV或3TC-抗性HBV感染的藥物組合物和方法中，對患有這類感染的患者給予藥物劑型形式的抑制有效量的至少一種本發(fā)明化合物以便治療感染和緩解這類感染的癥狀。
如上所述，可以將本發(fā)明的化合物單獨或與其它活性劑合并給藥，其中所述的其它活性劑尤其包括本發(fā)明的其它化合物或另外公開的作為用于治療乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的化合物，諸如那些公開在下列美國專利中的相關(guān)化合物和組合物，將這些文獻(xiàn)引入本文作為參考包括美國專利號5,922,757、5,830,894、5,821,242、5,610,054、5,532,215、5,49 1,135、5,179,084、4,902,720、4,898,888、4,880,784、5,929,038、5,922,857、5,914,400、4,922,711、5,922,694、5,916,589、5,912,356、5,912,265、5,905,070、5,982,060、5,892,052、5,892,025、5,883,116、5,883,113、5,883,098、5,880,141、5,880,106、5,876,984、5,874,413、5,869,522、5,863,921、5,863,918、5,863,905、5,861,403、5,852,027、5,849,800、5,849,696、5,847,172、5,627,160、5,561,120、5,631,239、5,830,898、5,827,727、5,830,881和5,837,871?？梢詫⑸鲜鰠⒖紝＠兴_的化合物與本發(fā)明化合物合并使用以便了解抗乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的附加活性或治療方案并且在某些情況中與本發(fā)明的化合物合并使用可產(chǎn)生協(xié)同作用。優(yōu)選用于本發(fā)明的次級或另外的化合物是那些不通過與本發(fā)明化合物相同機(jī)理抑制乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒感染的化合物。
通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知且包括下文詳細(xì)描述的各種化學(xué)合成方法的合成方法來生產(chǎn)本發(fā)明的化合物。
在化學(xué)合成本發(fā)明的各種化合物(compositions)的過程中，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠不進(jìn)行過多的實驗而實施本發(fā)明。特別地，本領(lǐng)域技術(shù)人員會根據(jù)本發(fā)明的特殊教導(dǎo)和芳香化學(xué)的眾所周知的原理而認(rèn)識到應(yīng)進(jìn)行不同的步驟而將特定的取代基引入到萘基或苯環(huán)的所需位置上。這些步驟在本領(lǐng)域中是眾所周知的。此外，將采用“保護(hù)”官能基諸如包括羥基或氨基的官能基以及“脫保護(hù)”這些相同官能基的化學(xué)步驟在合成環(huán)境中認(rèn)為是合適的。可以將大量保護(hù)基用于本發(fā)明。在將任意一個或多個酰基引入到羥基上的情況中，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。通過本領(lǐng)域眾所周知的方法還可以合成本發(fā)明化合物的其它前體藥物形式。
芳基萘木酚素衍生物的合成如圖解I中所述合成化合物(10)(“Dehydrotobain的合成”，Brown，D.和Stevenson，R.《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)(1965)301759；“芳基萘木酚素類賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Che.Soc.)(C)，(1971)，2091和“賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《四面體通訊》(Tetrahedron Letter)(1970)，199)。
使胡椒醛(1)溴化易得到6-溴胡椒醛(2)，將其通過在Wadsworth和Emmons設(shè)計的用于合成丙炔酸酯的一般條件下用膦?；庖宜崛阴ヌ幚矶奖愕剞D(zhuǎn)化成2-溴-4，5-亞甲二氧基苯基丙炔酸乙基酯(3)。通過將該酯(粗品)進(jìn)行堿性水解處理而獲得相應(yīng)的2-溴-4，5-亞甲二氧基苯基丙炔酸(4)。在DMSO中用二環(huán)己基碳化二亞胺處理化合物(4)而形成酐，隨后閉環(huán)產(chǎn)生5-溴-7，8-亞甲二氧基-1-(2’-溴-4’，5’-亞甲二氧基苯基)萘-2，3-二羧酸酐(5)、1-溴-6，7-亞甲二氧基-4-(2’-溴-4’，5’-亞甲二氧基苯基)萘-2，3-二羧酸酐(6)和6，7-亞甲二氧基-1-(2’-溴-4’，5’-亞甲二氧基苯基)萘-2，3-二羧酸酐(7)。在THF中使用氫化鋁鋰和氯化鋁完成將二溴-酐5轉(zhuǎn)化成2，3-二羥甲基-5-溴-7，8-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)萘(8)和2，3-二羥甲基-5-溴-5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)萘(9)的過程。使用碳酸銀-C鹽(celite)試劑選擇性氧化化合物9而得到7，8-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-3-羥甲基萘-2-羧酸內(nèi)酯(10)和7，8-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘-3-羧酸內(nèi)酯(11)。
用溴處理化合物11而得到8，2’-二溴-5，6-亞甲二氧基-4-(4’，5’-亞甲二氧基苯基)-3-羥甲基萘-2-羧酸內(nèi)酯(20)(“芳基萘木酚素類賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Che.Soc.)(C)，(1971)，2091)。氫解化合物9而得到2，3-二甲基-6，7-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)萘(16)和3-甲基-7，8-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘(17)(“Dehydrotobain的合成”，Brown，D.和Stevenson，R.《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)(1965)301759)。
用氫氧化鈉處理化合物10和11而得到5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-3-羥甲基萘-2-羧酸鈉(18)和7，8-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-3-羥甲基萘-2-羧酸鈉(19)。
在THF中使用氫化鋁鋰和氯化鋁將化合物5還原3天(“芳基萘木酚素類賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Che.Soc.)(C)，(1971)，2091)而得到3-甲基-5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘(12)。使用碳酸銀-C鹽試劑(“芳基萘木酚素類賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Che.Soc.)(C)，(1971)，2091；和“賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《四面體通訊》(Tetrahedron Letter)(1970)，199)氧化化合物12而得到5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘-3-醛(13)，使用高錳酸鉀將其進(jìn)一步氧化(“由載于均勻聚合物上的含有手性膦配體的鉑配合物催化的不對稱加氫甲?；?，Parrine G.和Stille J.K.《美國化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Am.Chem.Soc.)(1987)，109，7122)而得到5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-甲基萘-3-羧酸(14)。在甲醇中用鈉處理化合物14而得到5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-甲基萘-3-羧酸鈉(15)。
實驗部分如圖解I中所述合成化合物(10)。3-甲基-5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘(12)的合成向氫化鋁鋰(3.0g)和氯化鋁(3.0g)在四氫呋喃(600mL)中的混合物中加入5-溴-7，8-亞甲二氧基苯基-1-(2’-溴-4’，5’-亞甲二氧基苯基)萘-2，3-二羧酸酐(5，3.0g，5.76mmol)并將混懸液回流24小時。加入另外的氫化鋁鋰(3.0g)和氯化鋁(3.0g)并將反應(yīng)溶液加熱回流48小時。將乙酸乙酯(1200mL)加入到該反應(yīng)混合物中，隨后加入飽和的碳酸氫鈉溶液(100ml)。將該混合物過濾并在減壓條件下蒸餾濾液至得到糖漿狀物，將其通過硅膠柱純化(己烷-乙酸乙酯5∶2)而得到3種化合物3-甲基-7，8-亞甲二氧基-1-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘(17)(“Dehydrotobain的合成”，Brown，D.和Stevenson，R.《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)(1965)301759)、為白色粉末(29mg，1.5％)mp 207-209℃，1HNMR(CDCL3)δ7.62(s，1H，1-H)，7.28(d，3H，7-H)，7.18(d，1H，8-H)，7.10和6.82(2s，3H，2’，3’和6’-H)，6.03(dd，2H，5，6-亞甲二氧基)，5.86(s，2H，3’，4’-亞甲二氧基)，4.50(s，2H，2-CH2OH)，2.63(s，3H，3-CH3)，1.56(s，1H，OH，D2O)可交換的)，MS m/e 336(M+)；3-甲基-5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-羥甲基萘(12)、為白色結(jié)晶(672mg，35％)mp 108-110℃，1HNMR(CDCL3)δ7.78(s，1H，1-H)，7.40(d，1H，7-H)，7.13(d，1H，8-H)，6.86(d，1H，2’-H)，6.68(dd，2H，5，6-亞甲二氧基)，6.03(s，2H，3’，4’-亞甲二氧基)，5.78(s，2H，2-CH2OH)，2.16(s，3H，3-CH3)，1.59(s，1H，OH，D2O)可交換的)，MS m/e 336(M+)；2，3-二羥甲基-5-溴-5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)萘(9)(“芳基萘木酚素類賽菊寧黃質(zhì)的合成”，Holmes，T.L.和Stevenson，R.《化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Che.Soc.)(C)，(1971)，2091)、為白色粉末(620mg.32％)。
5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-甲基萘-3-醛(13)的合成將碳酸銀-C鹽試劑(5.26g)加入到化合物12(270mg，0.80mmol)的苯(400ml)溶液中。蒸餾出溶劑，直到蒸汽溫度達(dá)到80℃為止。將該混合物加熱回流2小時。將反應(yīng)混合物過濾并冷卻。除去溶劑得到糖漿狀物，將其通過硅膠柱純化(己烷-乙酸乙酯4∶2)而得到所述的醛化合物、為淺黃色結(jié)晶(249mg，93％)mp 216-217℃，1HNMR(CDCL3)δ10.22(s，1H，CHO)，8.48(s，1H，1-H)，7.80(d，1H，7-H)，7.39(d，1H，8-H)，6.94，6.78和6.64(d，d，和dd，3H，2’，3’和6’H)，6.05(d，2H，5，6-亞甲二氧基)，2.34(s，3H，3-CH3)。
5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-甲基萘-3-羧酸(14)的合成在50℃下將化合物13(160mg，0.48mL)溶于丙酮(50mL)中。然后在攪拌的同時在30分鐘的時間內(nèi)逐滴加入高錳酸鉀(312mg，0.83mmol)的丙酮(10mL)溶液。將該反應(yīng)混合物再攪拌4小時并將該步驟重復(fù)一次以上。除去溶劑并用水(50mL×3)處理固體殘余物并過濾。將冷水溶液用CH2Cl2洗滌、然后用鹽酸酸化至pH2并用CH2CL2提取。將有機(jī)層用MgSO4干燥。在減壓條件下除去溶劑而得到糖漿狀物，將其從甲醇中結(jié)晶而得到29mg的產(chǎn)物。蒸餾母液而得到糖漿狀物，將其通過硅膠柱純化(乙酸乙酯-己烷2∶3)而得到淺黃色粉末(55mg，50％)mp 145-146℃，1HNMR(d6-DMSO)δ12.9(s，1H，COOH)，8.36(s，1H，1-H)，7.69(d，1H，7-H)，7.32(d，1H，8-H)，6.93，6.78和6.64(d，s，和dd，3H，2’，3’和6’-H)，6.04(d，2H，5，6-亞甲二氧基)，5.83(d，2H，3’，4’-亞甲二氧基)，2.22(s，3H，3-CH3)；MS m/e 350(M+)。
5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-2-甲基萘-3-羧酸鈉(15)的合成將lN氫氧化鈉(0.18ml)加入到化合物14(41mg，0.117mmol)的THF(15mL)溶液中。在室溫下將該混合物攪拌4小時，除去溶劑而得到殘余物，將其通過硅膠柱純化(CH2Cl2-CH3OH 3∶1)而得到3lmg(7l％)的產(chǎn)物mp 2l0-212℃，1HNMR(d6-DMSO)δ7.8l(s，1H，1-H)，7.40(d，1H，7-H)，7.13(d，1H，8-H)，6.87，6.67和6.57(d，s，和d，3H，2’，3’和6’-H)，6.06(d，2H，5，6-亞甲二氧基)，5.72(d，2H，3’，4’-亞甲二氧基)，2.12(s，3H，3-CH3)。
5，6-亞甲二氧基-4-(3’，4’-亞甲二氧基苯基苯基)-3-羥甲基萘-2-羧酸鈉(18)的合成將10％氫氧化鈉(1mL)加入到化合物11(20mg，0.057mmol)的甲醇(15mL)溶液中。在70℃下將該混合物攪拌30分鐘。除去溶劑而得到粗產(chǎn)物，將其通過硅膠柱純化(CH2Cl2-CH3OH 3∶1)而得到白色粉末(18mg，82％)mp128-130℃，1HNMR(d6-DMSO)δ8.26(s，lH，1-H)，7.57(d，1H，7-H)，7.28(d，1H，8-H)，7.25和6.82(2s，3H，2’，3’和6’-H)，6.14(d，2H，5，6-亞甲二氧基)，5.83(d，2H，3’，4’-亞甲二氧基)，4.30，4.04(2dd，2H，3-CH3)，1.22(s，1H，OH，D2O可交換的)。
7.8-亞甲二氧基-l-(3’，4’-亞甲二氧基苯基)-3-羥甲基萘-2-羧酸鈉(19)的合成如合成18所述的方法從10(20mg，0.057mmol)合成所述化合物，得到16mg(72％)的白色結(jié)晶mp 213-2l5℃，1HNMR(d6-DMSO)δ7.73(s，1H，1-H)，7.45(d，1H，7-H)，7.19(d，lH，8-H)，7.08和6.79(2s，3H，2’，3’和6’-H)，6.06(d，2H，5，6-亞甲二氧基)，5.79(d，2H，3’，4’-亞甲二氧基)，4.50(m，2H，3-CH3)，1.22(s，lH，OH，D2O可交換的)。
生物活性HBV活性如下檢測賽菊寧黃質(zhì)和大量類似物在下列系統(tǒng)中的抗HBV作用本發(fā)明化合物的生物活性由Doong，S-L等在《美國國家科學(xué)院學(xué)報》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)88，8495-8499(1991)中所述方法來評估。將由Dr.G.Aces提供的攜帶HBV的人肝癌細(xì)胞系(命名為2.2.15的細(xì)胞系)用于本研究。參見Price等《美國國家科學(xué)院學(xué)報》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)86，8541(1989)。簡單地說，在培養(yǎng)基(含有Earl鹽和10％胎牛血清的極限必需培養(yǎng)基)中用不同濃度的藥物處理6日令的培養(yǎng)物。使藥物在培養(yǎng)基中保持3天的期限，在此期限后抽吸所述的培養(yǎng)基并加入含有相同濃度藥物的新鮮培養(yǎng)基。在隨后3天的期限結(jié)束時，收集培養(yǎng)基。通過聚乙二醇沉淀法(Doong等，文獻(xiàn)同上)加工該培養(yǎng)基以便獲得病毒體。將由此從分泌性顆粒中回收的病毒DNA進(jìn)行Southern分析。通過將來自藥物處理的病毒DNA與不用藥物處理的對照培養(yǎng)物比較來測定病毒復(fù)制的抑制作用。此外，使用來自AbbottLaboratories Inc.[HBs(rDNA)EIA和HBe(rDNA)EIA]的酶免疫試驗試劑盒，按照標(biāo)準(zhǔn)操作測定獲自聚乙二醇沉淀的細(xì)胞培養(yǎng)基(上述)的上清液中存在的兩種HBV抗原(HBsAg和HBeAg)(圖3A)。使用Northern分析測定RNA水平，其中將細(xì)胞白蛋白RNA測定為加樣對照以使HBV RNA的測定結(jié)果的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化(圖3B)。
為了測定本發(fā)明化合物的細(xì)胞毒性，使用T-類淋巴細(xì)胞細(xì)胞系(CEM)和HEP-G2細(xì)胞系(產(chǎn)生2.2.15細(xì)胞系的親代細(xì)胞系)。使細(xì)胞接觸不同濃度的藥物并在處理后3天通過由Chen，C-H和Cheng，Y-C在《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)264，11934(1989)中所述的方法測定細(xì)胞數(shù)量。根據(jù)由代表相應(yīng)于各藥物濃度的細(xì)胞數(shù)量所產(chǎn)生的曲線來測定導(dǎo)致細(xì)胞生長抑制的藥物濃度。細(xì)胞毒性的研究結(jié)果如附圖3A中所示。
分別如附圖3A和3B中所示，145號化合物(賽菊寧黃質(zhì))選擇性地抑制HBV復(fù)制、抗原表達(dá)并降低RNA和DNA水平。已經(jīng)設(shè)計并合成了一系列類似物。附圖1A、B和C表明了這類化合物。將這些活性劑中的一些的抗病毒活性、細(xì)胞毒性和溶解度概括在下面的表1中。表2進(jìn)一步描述了這些化合物中的幾種通過測定HepA2和Hep3B細(xì)胞系中的HBV抗原表達(dá)抑制作用而產(chǎn)生的抗-HBV活性。
3TC抗性HBV為了檢測本化合物對3TC抗性HBV的活性，按照Fu和Cheng在《生化藥物學(xué)》(Biochem.Pharm.)55，1567-1572(1998)和生化藥物學(xué)》(Biochem.Pharm.)57，1351-1359(1999)中所述的方法，用含有使3TC產(chǎn)生抗性的雙重突變的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系HepG2。為了建立產(chǎn)生用于篩選抗L(-)SddC(3TC)的藥物的細(xì)胞培養(yǎng)物系統(tǒng)的穩(wěn)定的HBV，按照相同方法將HBV基因組構(gòu)建體引入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。這些載體包括不含3TC抗性的突變的野生型(WT)和證實強3TC抗性的雙重突變的L526MM550V(DM)型。將這些逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中的每一種轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞。選擇分泌HBV抗原(HbsAg和HbeAg)的可能成功的細(xì)胞培養(yǎng)物。在這些所選擇的細(xì)胞中，某些可以分泌HBV病毒體。選擇菌落WT10和DM2作為模型以便進(jìn)一步進(jìn)行特征研究。對這些細(xì)胞系研究的劑量反應(yīng)關(guān)系表明WT10產(chǎn)生的HBV DNA對3TC(L(-)SddC)敏感且DM2產(chǎn)生的HBV DNA可耐受3TC。
在檢測145號賽菊寧黃質(zhì)的活性過程中，用不同濃度的145號的賽菊寧黃質(zhì)處理上述短暫轉(zhuǎn)染的HEPG2細(xì)胞以便測定賽菊寧黃質(zhì)是否對3TC抗性HBV具有任何影響。在本研究中，當(dāng)替換了原始的磷酸鈣沉淀的培養(yǎng)基時，用合適濃度的賽菊寧黃質(zhì)處理短暫轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞(上述的WT和DM2)。每隔3天加入含有一定濃度的賽菊寧黃質(zhì)的半個體積的新鮮培養(yǎng)基(參見圖4A、4B和4C)。9天后，收集培養(yǎng)物并檢測HBV子代的DNA含量(Southem分析)。此外，使用如上所述來自AbbottLaboratories的合適的ELISA試劑盒來分析HBV抗原(HBVe抗原和HBVs抗原)。正如所附圖4A、4B和4C中所列數(shù)據(jù)證明的，賽菊寧黃質(zhì)對3TC抗性HBV(DM2)具有的作用與對3TC敏感性HBV的作用基本上相同。該數(shù)據(jù)證明賽菊寧黃質(zhì)145甚至在3TC(L(-)SddC)抗性HBV中也具有極佳的抗-HBV活性并且可以在治療上用于治療3TC抗性HBV且可以與用于治療HBV感染的3TC療法聯(lián)合使用。
對黃熱病毒的活性黃熱病噬斑減少試驗將下列方法用于測試抗黃熱病毒的本發(fā)明化合物。將幼小倉鼠腎(BHK)細(xì)胞以5×105細(xì)胞/孔接種在24孔平皿中含0.1％甲基纖維素(粘度15cps)的RPMI1640+5％FBS細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)。在37℃下和5％CO2中將該細(xì)胞培養(yǎng)過夜。在有藥物或沒有藥物存在的情況下以30PFU使所培養(yǎng)的細(xì)胞感染黃熱病(參見下面的表I)。在37℃下和5％CO2中將所感染的細(xì)胞培養(yǎng)30分鐘并在RPMI+2％FBS+1％甲基纖維素(粘度4,000cps)中用藥物覆蓋。在37℃下和5％CO2中將這種狀態(tài)下的細(xì)胞培養(yǎng)6天；此后，將各孔中的細(xì)胞用0.8％的結(jié)晶紫(Crystel Violet)染色。通過將對照百分比(在未處理細(xì)胞中的噬斑數(shù)量)對測試藥物濃度下細(xì)胞中的噬斑數(shù)量作圖來測定ED50值。將這些值列在下面的表I中。
結(jié)果本發(fā)明的賽菊寧黃質(zhì)類化合物已經(jīng)表現(xiàn)出對乙型肝炎病毒的活性、抗諸如黃熱病毒這樣的黃病毒和HSV的活性。145號賽菊寧黃質(zhì)及其類似物135-1號、122-1號和156號均可以抑制HBV復(fù)制和HbsAg的表達(dá)。然而，145號賽菊寧黃質(zhì)在試驗系列中是最具有活性的化合物。
另外，145號及其類似物157也表現(xiàn)出對黃熱病毒的活性。然而，僅145號在HSV-1、HSV-II和HSV TK負(fù)型菌株中表現(xiàn)出抗-HSV活性。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解上述描述和實例用來對實施本發(fā)明進(jìn)行說明而不以任何方式來限定本發(fā)明。可以對本文所述的具體內(nèi)容進(jìn)行改變而不會脫離作為下列權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
表1賽菊寧黃質(zhì)及其類似物的抗病毒活性和細(xì)胞毒性
附注1.對HSV-1、HSV-II和HSV-ITK菌株測試145號化合物且ED50分別為1.1、1.8和8.5μM。
2.發(fā)現(xiàn)序號為139-2、143、124-2、135-1、122-1、120-1、120-2、120-3、189和X-4對HSV-I和HSV-II無活性。
3.符號*表示室溫下飽和PBS溶液的濃度。
4.每個黑體數(shù)字指的是圖解1合成反應(yīng)中所示的化合物(例如145(ZHU-IX-139-1)是化合物(11))。
賽菊寧黃質(zhì)及其衍生物用于在不含血清條件下的HepA2和Hep3B細(xì)胞中抑制HBsAg達(dá)2天的生物測試結(jié)果
符號“*”表示HepA2、HBV DNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HBV二聚體DNA。
符號“**”表示EC50，即在人肝癌細(xì)胞中使HBsAg分泌降低50％的測試化合物濃度。
符號“***”表示對未處理的細(xì)胞沒有檢測到HBsAg分泌的抑制作用或其中濃度大于12.5μM。
權(quán)利要求
1.下列結(jié)構(gòu)式的純化合物 其中A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且通過-CH2-基橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20?；?，優(yōu)選C1-C20?；?；D和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-基(亞甲基)，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E通過-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
2.根據(jù)權(quán)利要求1結(jié)構(gòu)式I所述的化合物，其中G和F是Br。
3.根據(jù)權(quán)利要求1結(jié)構(gòu)式I所述的化合物，其中C、F、G和I是H；A和B形成1，3-二氧戊環(huán)；D是酮基；E是亞甲基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1結(jié)構(gòu)式I所述的化合物，其中C、F和I是H；G是Br；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基且D和E各自為CH2OH基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1結(jié)構(gòu)式I所述的化合物，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是CH2OH基且E是CH3基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1結(jié)構(gòu)式I所述的化合物，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是COO-Na+基且E是CH2OH基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1結(jié)構(gòu)式I所述的化合物，其中A、F、G和I是H；B和C一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是亞甲基；E是酮基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基。
8.下列結(jié)構(gòu)式的化合物
9.一種治療患者病毒感染的方法，所述的病毒選自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒，該方法包括對所述患者給予有效量的下列結(jié)構(gòu)式化合物 其中A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且通過-CH2-基橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20酰基，優(yōu)選C1-C20?；籇和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-基(亞甲基)，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E通過-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的病毒是HBV或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中G和F是Br。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B形成1，3-二氧戊環(huán)；D是酮基；E是亞甲基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F和I是H；G是Br；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基且D和E各自為CH2OH基。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是CH2OH基且E是CH3基。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是COO-Na+基且E是CH2OH基。
15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中A、F、G和I是H；B和C一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是亞甲基；E是酮基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基。
16.用于治療病毒感染的藥物組合物，它包括抗病毒有效量的至少一種下列結(jié)構(gòu)式的化合物以及任選藥物上可接受的賦形劑、載體或添加劑 其中A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且彼此通過-CH2-基橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20酰基，優(yōu)選C1-C20?；?；D和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-基(亞甲基)，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E通過-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中G和F是Br。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B形成1，3-二氧戊環(huán)；D是酮基；E是亞甲基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F和I是H；G是Br；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基且D和E各自為CH2OH基。
20.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是CH2OH基且E是CH3基。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是COO-Na+基且E是CH2OH基。
22.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中A、F、G和I是H；B和C一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是亞甲基；E是酮基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基。
23.一種預(yù)防患者病毒感染的方法，所述的病毒選自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒和西尼羅病毒；該方法包括根據(jù)需要對所述患者給予有效量的下列結(jié)構(gòu)式化合物 其中A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且通過-CH2-基橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20酰基，優(yōu)選C1-C20?；籇和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-基(亞甲基)，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E通過-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中G和F是Br。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B形成1，3-二氧戊環(huán)；D是酮基；E是亞甲基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)。
26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F和I是H；G是Br；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基且D和E各自為CH2OH基。
27.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是CH2OH基且E是CH3基。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是COO-Na+基且E是CH2OH基。
29.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中A、F、G和I是H；B和C一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是亞甲基；E是酮基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K彼此形成1，3-二氧戊環(huán)基。
30.一種預(yù)防患者繼發(fā)于乙型肝炎或丙型肝炎病毒感染的肝細(xì)胞癌的方法，所述的方法包括根據(jù)需要對所述患者給予有效量的下列結(jié)構(gòu)式化合物 其中A是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣A和B是O且通過-CH2-基橋連在一起；C是H、OH、OR或與B形成1，3-二氧戊環(huán)基，這樣B和C是O且通過-CH2-基橋連在一起；B是OH、OR或與A或C形成1，3-二氧戊環(huán)基；R是C1-C3烷基、芐基或C1-C20?；?，優(yōu)選C1-C20?；籇和E相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+、CH2COOR1或酮基(C＝O)或-CH2-基(亞甲基)，條件是當(dāng)D或E是酮基時，D或E中的另一個是酮基或亞甲基且D和E通過-O-基連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)或二羧酸酐環(huán)；R1是C1-C3烷基；F和G是H或Br；I是H、OH、OR或Br且J和K相同或不同并選自CH3、CH2OH、CH2OR、CHO、COOH、COO-Na+或一起形成1，3-二氧戊環(huán)，這樣J和K是O并通過-CH2-基(亞甲基)橋連在一起。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中G和F是Br。
32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)I，其中C、F、G和I是H；A和B形成1，3-二氧戊環(huán)；D是酮基；E是亞甲基且D和E通過-O-連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)。
33.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F和I是H；G是Br；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基且D和E各自為CH2OH基。
34.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是CH2OH基且E是CH3基。
35.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中C、F、G和I是H；A和B一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是COO-Na+基且E是CH2OH基。
36.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的病毒是乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或黃熱病毒且其中所述的化合物是結(jié)構(gòu)式I，其中A、F、G和I是H；B和C一起形成1，3-二氧戊環(huán)基；D是亞甲基；E是酮基且D和E通過-O-彼此連接在一起形成5元內(nèi)酯環(huán)；而J和K一起形成1，3-二氧戊環(huán)基。
37.權(quán)利要求1-8中任意一項所述的化合物用于制備治療黃病毒的藥劑的用途。
38.權(quán)利要求1-8中任意一項所述的化合物用于制備治療乙型肝炎病毒感染或丙型肝炎病毒感染的藥劑的用途。
39.權(quán)利要求1-8中任意一項所述的化合物用于制備治療至少具有一種病毒作為病原體的病毒感染的藥劑的用途，其中所述的病毒選自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒和西尼羅病毒。
40.根據(jù)權(quán)利要求9-15中任意一項所述的方法，其中所述的病毒感染是3TC-抗性乙型肝炎病毒感染。
41.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的病毒感染是3TC-抗性乙型肝炎病毒感染。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗病毒藥物賽菊寧黃質(zhì)及其類似物?？梢詫⑦@類化合物單獨或與其它藥物結(jié)合用于治療乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黃熱病毒、登革病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒和相關(guān)黃病毒。此外,可以將本發(fā)明的化合物用于預(yù)防繼發(fā)于病毒感染的肝細(xì)胞癌以及繼發(fā)于病毒感染的其它感染或疾病情況。
文檔編號A61K31/357GK1342156SQ99810104
公開日2002年3月27日 申請日期1999年8月23日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月25日
發(fā)明者程揚奇, 周陳光, 傅磊, 高葉新, 葉淑芳, 朱竹良, 朱永連 申請人:耶魯大學(xué), 臺灣國立大學(xué), 揚名國立大學(xué), 退伍軍人總醫(yī)院