專利名稱：1－氨基－3－(n,n－二甲基氨基)－亞丙基－1,1－雙膦酸的應(yīng)用的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸或其任一可溶性鹽或其任一水合物的新應(yīng)用。
化合物1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸或其任一可溶性鹽或其任一水合物，屬于雙膦酸鹽一族化合物，其含在一個(gè)碳原子上連接的兩個(gè)膦酸鹽基團(tuán)，還分別含有另二個(gè)基團(tuán)R1和R2，這些化合物可以與鈣晶體緊密結(jié)合、抑制它們生長(zhǎng)、妨礙骨的再吸收、并用于多種骨代謝紊亂的治療。
1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸是歐珀酸(olpadronate)(OPD)的氨基取代形式，這里有時(shí)稱為NH2-OPD。
雙膦酸鹽被認(rèn)為是骨吸收的強(qiáng)力抑制劑，并成功用于常見骨病癥的治療，尤其是骨質(zhì)疏松和腫瘤性骨病。在結(jié)構(gòu)上，雙膦酸鹽是亞甲基雙膦酸鹽的衍生物，其中孿位碳原子上的二個(gè)氫原子分別被R1和R2取代，通常R1和R2是不同的。常見的R1是羥基，因?yàn)槠淇梢耘c二個(gè)膦酸鹽基團(tuán)形成三齒結(jié)構(gòu)，與骨骼中物質(zhì)結(jié)合。
雙膦酸鹽對(duì)骨細(xì)胞的作用的研究進(jìn)行得非常深入，尤其是它們的抗再吸收能力。但是，與這些作用相關(guān)的分子機(jī)理還不清楚。例如，抗再吸收活性與其治療骨質(zhì)疏松和相關(guān)骨病癥的應(yīng)用已有報(bào)導(dǎo)，并在下列專利中有描述Frances M.et al.，WO94/00129；Gueddes A.等WO93/11786；McOskar等，WO92/14474；Gall R.et a1.，USP4,942,157,和Schmidt-Dunker M.，USP3,962,432。
盡管雙膦酸鹽中的R2部分的特性決定其抗再吸收活性，一些雙膦酸鹽(如歐珀酸和帛米酸鹽)中R1上的羥基被氨基取代仍然會(huì)明顯降低它們的抗再吸收活性。這些氨基衍生物的抗再吸收功效的降低被認(rèn)為是歸因于化合物的細(xì)胞作用上的取代依賴性的改變，因?yàn)樗鼈兣c骨礦物質(zhì)的親合力并沒有明顯改變。例如，vanBeek等發(fā)表在Journal ofBoneand Mineral Research(骨和礦物質(zhì)研究)，1996年，11卷(No.10)，1492-1497頁(yè)的文章和國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP96/02981中公開了抗再吸收活性的缺損，后者公開了使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸治療骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)炎和牙周疾病。
骨骼的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性很大程度上受成骨細(xì)胞活性和破骨細(xì)胞活性之間的平衡的影響和支配，就是說，細(xì)胞分別對(duì)骨骼的礦化和再吸收負(fù)責(zé)。因此，骨骼不斷進(jìn)行重構(gòu)，包括了合成代謝和分解代謝。當(dāng)人年齡超過30歲后，分解代謝占優(yōu)，這樣骨骼中物質(zhì)總量自然為凈損失。因而骨組織的更新速度隨年齡的增長(zhǎng)而減緩。
本發(fā)明的目的是提供一些手段預(yù)防臨床病理骨癥狀的發(fā)作。
本發(fā)明的另一目的是避免骨功能紊亂或骨病的傾向。
本發(fā)明的目的還有是優(yōu)化接受治療者生理性的骨功能。
以下描述的本發(fā)明的各個(gè)方面和實(shí)施方式解決了所有這些目的，并提供了其它優(yōu)點(diǎn)。
簡(jiǎn)而言之，本發(fā)明提供1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的新應(yīng)用、含有1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑，和涉及1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的篩選方法。
本發(fā)明的一個(gè)方面在于提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造可選擇性調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的藥劑。此外，還提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造維持正常骨結(jié)構(gòu)的藥劑。
還提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造用于健康的接受治療者預(yù)防骨病的藥劑。
還提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造對(duì)最近接受皮質(zhì)類固醇治療的接受治療者進(jìn)行治療的藥劑。
此外還提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造用于無需抗再吸收活性的骨病后治療的藥劑。
本發(fā)明還提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造藥劑，用于治療兒童的骨病。
本發(fā)明的另一方面是，提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造藥劑，用于刺激信號(hào)級(jí)聯(lián)和介導(dǎo)1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸作用的反應(yīng)歷程，其中1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的作用可以被鈣離子通道阻斷劑所阻斷。
本發(fā)明的還有一方面是，提供使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造藥劑，用于傳送來自對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器的鈣離子。
本發(fā)明的另一方面是，提供篩選鈣離子通道阻斷劑的方法，包括以下步驟-用假定的鈣離子通道阻斷劑處理含鈣離子通道的細(xì)胞；-將細(xì)胞與1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸接觸；-測(cè)量接觸步驟之后的響應(yīng)。
設(shè)想處理和接觸步驟是連續(xù)發(fā)生的，也可以是同時(shí)進(jìn)行。處理步驟可以先于接觸步驟，反之亦可。
另一方面，本發(fā)明也提供篩選1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸功能類似物的方法，包括以下步驟-用鈣離子通道阻斷劑處理含鈣離子通道的細(xì)胞；-在沒有鈣離子通道阻斷劑存在下，將細(xì)胞與假定的功能類似物接觸，這些功能類似物被認(rèn)為會(huì)引起鈣離子流入細(xì)胞；-測(cè)量接觸步驟之后的響應(yīng)。
設(shè)想處理和接觸步驟是連續(xù)發(fā)生的，也可以是同時(shí)進(jìn)行。處理步驟可以先于接觸步驟，反之亦可。
本發(fā)明也公開一種含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸和至少一種生理學(xué)可接受的載體的藥劑，用于選擇性調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞、用于維持正常的骨結(jié)構(gòu)、用于預(yù)防骨病、或用于無需抗再吸收活性的骨病的后治療。
本發(fā)明的一方面提供一種含1-氨基-3-(N，N二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑，可用于健康的接受治療者或年齡在40歲或更大的接受治療者。
本發(fā)明還公開一種方法，用于選擇性調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞、和/或維持正常的骨結(jié)構(gòu)，和/或用于健康的接受治療者預(yù)防骨病、和/或?qū)ψ罱邮芷べ|(zhì)類固醇治療的接受治療者進(jìn)行治療、和/或用于無需抗再吸收活性的骨病的后治療、和/或治療兒童的骨病、和/或刺激信號(hào)級(jí)聯(lián)和對(duì)1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸或其任一可溶性鹽或其任一水合物的作用的反應(yīng)歷程進(jìn)行介導(dǎo)，其中雙膦酸化合物的作用可以被鈣離子通道阻斷劑所阻斷；和/或傳送來自對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器的鈣離子，該方法包括對(duì)接受治療者單獨(dú)使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸或其任一可溶性鹽或其任一水合物，或與藥用載體一起使用，1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸或其任一可溶性鹽或其任一水合物的劑量為口服每次0.1-1000毫克，注射用每次0.02-200毫克。
優(yōu)選，術(shù)語(yǔ)“成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)”包括刺激成骨細(xì)胞的細(xì)胞活性，更優(yōu)選影響成骨細(xì)胞的鈣離子動(dòng)態(tài)平衡。“選擇性調(diào)節(jié)”的優(yōu)選實(shí)施方式包括成骨細(xì)胞中鈣離子含量的短暫提高。成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)還包括骨鈣蛋白和/或骨橋蛋白、骨粘連蛋白、鈣防衛(wèi)蛋白、纖連蛋白、基體Gla蛋白和/或骨涎蛋白的合成和通過其來說明。
本發(fā)明中術(shù)語(yǔ)“維持正常骨結(jié)構(gòu)”還包括預(yù)防臨床病理癥狀或疾病。
本發(fā)明的一個(gè)方面中，使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造藥劑用于維持正常骨結(jié)構(gòu)，優(yōu)選藥劑用于健康的接受治療者，更優(yōu)選沒有骨病的接受治療者。術(shù)語(yǔ)“正常骨結(jié)構(gòu)”意味包括合成代謝和分解代謝平衡穩(wěn)定的任意骨結(jié)構(gòu)，這種平衡導(dǎo)致該結(jié)構(gòu)可以承受生物體活動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的機(jī)械應(yīng)力；以及包括這樣的結(jié)構(gòu)，其可以通過上述平衡重塑自身、或通過除去衰弱的或破損的部分并塑造堅(jiān)固的部分而能修復(fù)自身、并因此避免了微縫和易于骨折的部分。
發(fā)現(xiàn)，尤其是老年人，由于骨更新速度減緩，骨的堅(jiān)固結(jié)構(gòu)較少。此外，老年人由于久坐的生活習(xí)慣、肌肉軟弱和營(yíng)養(yǎng)缺乏，骨骼變得更為不牢固、更脆弱。事實(shí)上受影響的骨包括了“不適宜”的礦化結(jié)構(gòu)，因此變得更脆和不穩(wěn)定，通常伴隨骨折的傾向。這些“不適宜”的結(jié)構(gòu)作為臨床上病理癥狀并沒有被證實(shí)，但也不是空想。除年齡為40歲或更大的人之外，在最近接受皮質(zhì)膽固醇治療的人、或最近接受抗骨質(zhì)疏松試劑治療的人中也發(fā)現(xiàn)這些“不適宜”的結(jié)構(gòu)。抗骨質(zhì)疏松試劑有氟和常見的雙膦酸，如羥乙二磷酸鹽和chlodronate。
術(shù)語(yǔ)“接受治療者”包括人和任意的脊椎動(dòng)物，例如貓、狗、牛、馬和其它家畜。
術(shù)語(yǔ)“骨病”表示任意骨的病理癥狀，會(huì)導(dǎo)致骨結(jié)構(gòu)的脆弱或不規(guī)則或異常。本發(fā)明中使用“骨疾病”作為同義詞。優(yōu)選術(shù)語(yǔ)“骨病”表示臨床病理癥狀，其選自骨質(zhì)疏松、佩吉特氏病、關(guān)節(jié)炎、牙周骨質(zhì)減少、青春期脊柱側(cè)凸、骨折、缺乏鍛煉引起的骨質(zhì)減少、移植后骨質(zhì)減少、與甲狀旁腺功能亢進(jìn)相關(guān)的骨質(zhì)減少、藥物引起的骨質(zhì)減少、營(yíng)養(yǎng)性骨質(zhì)減少、代謝性骨疾病、早熟性骨質(zhì)減少和骨化紊亂。
當(dāng)術(shù)語(yǔ)“接受治療者”指人時(shí)，一個(gè)實(shí)施方式中優(yōu)選藥劑使用于年齡為40歲或更大的人，另一實(shí)施方式中優(yōu)選藥劑使用于兒童。優(yōu)選，術(shù)語(yǔ)“兒童”包括年齡在0-16歲之間的個(gè)體。
當(dāng)使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造藥劑，用于在健康的接受治療者中預(yù)防骨病，或用于患骨病的兒童的治療時(shí)，優(yōu)選骨病選自骨質(zhì)疏松。佩吉特氏病。關(guān)節(jié)炎。牙周骨質(zhì)減少。青春期脊柱側(cè)凸。骨折。缺乏鍛煉引起的骨質(zhì)減少。移植后骨質(zhì)減少。與甲狀旁腺功能亢進(jìn)相關(guān)的骨質(zhì)減少。藥物引起的骨質(zhì)減少。營(yíng)養(yǎng)性骨質(zhì)減少。代謝性骨疾病。早熟性骨質(zhì)減少和骨化紊亂。
在一實(shí)施方式中，當(dāng)接受治療者使用藥劑之后，優(yōu)選細(xì)胞外1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的濃度在10-6和10-10M之間，更優(yōu)選在10-7和10-9M之間，最優(yōu)選細(xì)胞外的濃度在10-8M左右。
當(dāng)實(shí)施方式中使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸制造藥劑，用于刺激信號(hào)級(jí)聯(lián)和對(duì)1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的作用的反應(yīng)歷程進(jìn)行介導(dǎo)，其中雙膦酸化合物的作用可以被鈣離子通道阻斷劑所阻斷，在該實(shí)施方式中優(yōu)選的鈣離子通道阻斷劑選自硝苯吡啶和戊脈安。
一實(shí)施方式優(yōu)選使用1-氨基-3-(N，N--二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的劑量為口服每次0.01-1000毫克，更優(yōu)選口服每次12.5-75毫克。術(shù)語(yǔ)“口服”包括固體或可溶液體的藥物制劑、凝膠、軟膠囊、藥片、含固體制劑的膠囊、可溶液體或懸浮液和藥丸。本發(fā)明的另一方面設(shè)想1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸局部施用于皮膚和/或粘膜。按此目的使用的劑型包括藥膏、乳劑、噴劑、栓劑和凝膠。
本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，優(yōu)選使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的劑量為每次注射0.02-200毫克，更優(yōu)選每次注射2.5-15毫克。術(shù)語(yǔ)“注射用”指使用時(shí)避開胃-腸道，例如通過皮下、肌肉或靜脈注射或輸液。
術(shù)語(yǔ)“對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器”指鈣離子的細(xì)胞內(nèi)存儲(chǔ)器，其由于IP3(三磷酸肌醇)的存在迅速釋放鈣離子。這樣的對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，和平滑肌細(xì)胞中的肌質(zhì)網(wǎng)。
根據(jù)本發(fā)明，值得注意的是1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸對(duì)成骨細(xì)胞中的鈣離子動(dòng)態(tài)平衡的影響，尤其是提高成骨細(xì)胞中的鈣離子含量，這至少能以兩種不同的方式發(fā)生鈣離子可以從內(nèi)生的存儲(chǔ)器中流出，例如那些對(duì)IP3敏感或?qū)Χ竞}卜素敏感的存儲(chǔ)器。
其次，鈣離子可以從細(xì)胞外存儲(chǔ)器流入。例如，可以通過電壓依賴性的鈣離子通道(VDCC)，但是其它的鈣離子通道也可以，例如以配體為閘門的通道。
本發(fā)明的范圍中，使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸篩選鈣離子通道阻斷劑。術(shù)語(yǔ)“假定的鈣離子通道阻斷劑”指用于測(cè)試其對(duì)鈣離子通道的阻斷能力的化合物。
術(shù)語(yǔ)1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的“假定的功能類似物”所指的化合物被認(rèn)為當(dāng)缺乏鈣離子通道阻斷劑時(shí)會(huì)引起鈣離子流入細(xì)胞內(nèi)，因而類似1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸對(duì)細(xì)胞鈣離子動(dòng)態(tài)平衡的影響。術(shù)語(yǔ)“測(cè)試響應(yīng)”指測(cè)試或檢測(cè)響應(yīng)的存在與否。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“響應(yīng)”優(yōu)選指胞液中鈣離子含量的變化。
本發(fā)明的范圍還包括1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸在其新應(yīng)用中與至少一種其它的化合物/物質(zhì)結(jié)合使用，作為協(xié)同組合。術(shù)語(yǔ)“組合”指1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸和另一些物質(zhì)組合在同一藥劑中，和含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑與另一些物質(zhì)一起對(duì)接受治療者使用，就是說這(些)其它物質(zhì)與藥物以物理分開(即在空間或時(shí)間上分開)的形式使用。如果這(些)其它物質(zhì)與含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑分開使用，優(yōu)選含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑和其它物質(zhì)以一步(同時(shí)攝取、輸液、注射)、連續(xù)步驟(一步接另一步)或循環(huán)步驟的方式使用。一個(gè)實(shí)施方式中優(yōu)選含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑在其它氨基取代雙膦酸鹽的治療之前、中或之后使用。例如，可以將含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑和其它氨基取代雙膦酸鹽連續(xù)使用，因?yàn)槠渌被〈p膦酸鹽會(huì)有部分抗再吸收作用。因此，接受治療者可能會(huì)由于1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸對(duì)成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)作用而需要使用含1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸的藥劑；同時(shí)也可以根據(jù)他/她自身要求，為可調(diào)節(jié)對(duì)骨骼再吸收的抑制程度而使用其它氨基取代的雙膦酸鹽。
另一實(shí)施例中，通過生化、比重、X-射線或其它手段對(duì)每一個(gè)體的骨測(cè)試決定每個(gè)人不同的需要，根據(jù)個(gè)體要求，接受治療者可能首先需要極大地抑制骨骼的再吸收，隨后連續(xù)地較低地或不抑制骨骼的再吸收，然后再作其它改變。
因此，1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸是一種理想的選擇，為骨變?nèi)鹾?或脆的癥狀進(jìn)行可個(gè)體化調(diào)節(jié)的治療奠定基礎(chǔ)。
以上協(xié)同組合的這物質(zhì)/這些物質(zhì)/化合物選自鈣鹽，檸檬酸鈣和碳酸鈣，其它氨基取代雙膦酸鹽，含氟有藥理活性的鹽，D類維生素和它們的代謝物，維生素D3、骨化二醇、鈣三醇、維生素D2、PTH，合成代謝激素，如雌激素、骨骼中有雌激素活性的物質(zhì)、孕激素、男性激素、生長(zhǎng)激素、有生長(zhǎng)激素活性的肽、雌激素受體的選擇性調(diào)節(jié)物、雷洛昔芬等。術(shù)語(yǔ)“氨基取代的雙膦酸鹽”優(yōu)選指在1-位有氨基的雙膦酸鹽化合物。但也可以在其它位置取代。這里提及的1-羥基雙膦酸鹽的“氨基衍生物”，其所指的分子的結(jié)構(gòu)中羥基被氨基取代。
本發(fā)明中突出的優(yōu)點(diǎn)是1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸可以避免形成上述的“不適宜”的骨結(jié)構(gòu)，并且，因其對(duì)成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)能力，有助于當(dāng)“不適宜”的骨結(jié)構(gòu)一形成就除掉它。
因此，骨骼中的不適宜的礦化結(jié)構(gòu)可以分別預(yù)防和去除。例如，這些結(jié)構(gòu)在老年人中會(huì)增多，但是臨床病理癥狀中這些結(jié)構(gòu)還沒有被證實(shí)。另一重要的實(shí)施例中，在生長(zhǎng)中的骨骼，如兒童的骨骼中也會(huì)有這些結(jié)構(gòu)。這些兒童可以是健康的或有骨病的。本發(fā)明提供除去這些不適宜的結(jié)構(gòu)或首先進(jìn)行預(yù)防的手段，因此有助于形成正常的骨結(jié)構(gòu)以有利于承受日常生活中所承受的機(jī)械應(yīng)力。
下列實(shí)施例和


本發(fā)明這些和其它方面。此外，以下列出多種文獻(xiàn)，它們?cè)敿?xì)描述特定過程或試驗(yàn)細(xì)節(jié)，引用于此以作參考。
圖2說明在培養(yǎng)的成骨細(xì)胞中雙膦酸鹽誘導(dǎo)骨鈣蛋白(OC)的合成在不含(對(duì)照)或含標(biāo)明濃度的1α，25-二羥基維生素D3[1，25(OH)2D3]、EHDP、APD、OPD或NH2-OPD情況下，細(xì)胞生長(zhǎng)72小時(shí)。隨后釋放到培養(yǎng)基中的骨鈣蛋白(OC)按實(shí)施例4中的描述進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)為3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)結(jié)果的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。
圖3顯示雙膦酸鹽對(duì)成骨細(xì)胞中胞液鈣離子的快速作用Fura-2負(fù)載的細(xì)胞與標(biāo)明濃度的1α，25-二羥基維生素D3[1，25(OH)2D3]、EHDP或APD(A區(qū))、OPD或NH2-OPD(B區(qū))接觸，胞液中鈣離子含量按實(shí)施例3的描述進(jìn)行監(jiān)測(cè)。圖形代表至少四次獨(dú)立記錄隨時(shí)間變化的軌跡。
圖4說明OPD和NH2-OPD對(duì)成骨細(xì)胞中胞液鈣離子的快速作用的劑量依賴性Fura-2負(fù)載的細(xì)胞用媒介物(緩沖鹽溶液，基本值)、或標(biāo)明濃度的OPD或NH2-OPD處理，并按照描述測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度([Ca2+]i)。收集處于BP引發(fā)的鈣離子響應(yīng)峰值處的[Ca2+]i值。數(shù)據(jù)是四次獨(dú)立[Ca2+]i記錄的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。概率值(p值)(*p＜0.01；**p＜0.01)給出相對(duì)于基礎(chǔ)值的顯著差異。
圖5顯示雙膦酸依賴的胞液中鈣離子變化相對(duì)于1，25(OH)2D3作用的動(dòng)力學(xué)Fura-2負(fù)載的細(xì)胞與1，25(OH)2D3(10nM)，或10nM的EHDP，APD，OPD或NH2-OPD接觸，按照描述檢測(cè)胞液中的鈣。A)記錄最大峰值處的變化量和相應(yīng)時(shí)間-峰值并與類固醇的結(jié)果相對(duì)比。圖形表示四次獨(dú)立試驗(yàn)的結(jié)果。B)監(jiān)測(cè)響應(yīng)于10nM的BP或1，25(OH)2D3的Ca2+i升高的初期階段，并繪制Ca2+i相對(duì)于接觸時(shí)間的變化。
圖6顯示Fura-2負(fù)載的細(xì)胞用(Thp-處理)或不用(對(duì)照)1μM毒胡蘿卡素處理、再與OPD(10nM)或NH2-OPD(10nM)接觸之后胞液中鈣含量。按實(shí)施例3的描述監(jiān)測(cè)胞液中鈣含量。圖形代表至少3次獨(dú)立記錄隨時(shí)間變化的軌跡。
響應(yīng)于歐珀酸和NH2-OPD的作用而合成與釋放骨基質(zhì)蛋白質(zhì)骨鈣蛋白首先檢測(cè)歐珀酸(OPD)和NH2-OPD(參見圖1的化學(xué)結(jié)構(gòu))對(duì)合成與釋放骨基質(zhì)蛋白質(zhì)骨鈣蛋白(OC)的作用，并與雙膦酸鹽帛米酸鹽(APD)和羥乙二磷酸鹽(EHDP)的結(jié)果對(duì)比，二者結(jié)果都在圖1中表示。相對(duì)于未經(jīng)處理的對(duì)照細(xì)胞，在含10-8M1，25(OH)2D3的介質(zhì)中培養(yǎng)72小時(shí)的成骨細(xì)胞向培養(yǎng)介質(zhì)所釋放的OC提高100％(圖2)。在相同培養(yǎng)條件下OPD和NH2-OPD以劑量依賴的方式明顯刺激OC的合成，這與EHPD和APD一樣。APD和OPD比類固醇激素有效，然而NH2-OPD的作用低于secosteroid，與EHDP相當(dāng)。濃度為10-8M時(shí)，相對(duì)于1，25(OH)2D3的功效次序?yàn)镺PD(1.9)＞APD(1.1)＞1，25(OH)2D3(1.0)＞EHDP＝NH2-OPD(0.85)。當(dāng)濃度為10-7M時(shí)，對(duì)合成OC的誘導(dǎo)明顯減少，但是雙膦酸鹽的的功效次序仍然相同。當(dāng)細(xì)胞與濃度低于10-8M的BP相接觸時(shí)，相對(duì)于基本的OC合成沒有檢測(cè)到顯著性差異。至于其它合成代謝參數(shù)，為確定細(xì)胞內(nèi)鈣離子調(diào)節(jié)的短期變化是否有可能與這些雙膦酸鹽對(duì)OC合成的作用相關(guān)，用熒光光度計(jì)監(jiān)測(cè)成骨細(xì)胞中Ca2+i含量的變化。Secosteroid 1，25(OH)2D3作為大鼠成骨細(xì)胞中傳送鈣離子的激素，在文章(Farach-Carson等，1998，Am.J.Kidney Dis.31，729-742)中很好記錄并表征其響應(yīng)。因此，類固醇可以用作評(píng)價(jià)BP對(duì)這些細(xì)胞中Ca2+i作用的陽(yáng)性參照。在Fura-2負(fù)載的細(xì)胞中，雙相時(shí)間-過程分布圖說明了EHDP、APD和OPD類似于1，25(OH)2D3會(huì)引發(fā)Ca2+的快速(30-60秒)和持久(＞5分鐘)的[Ca2+]i升高，原因被認(rèn)為是內(nèi)生存儲(chǔ)器釋放Ca2+和陽(yáng)離子從外界流入的共同作用(圖3)。NH2-OPD產(chǎn)生快速(60秒)但是短暫的[Ca2+]i升高，并在1-2分鐘之內(nèi)迅速?gòu)姆逯迪陆档浇咏局邓?圖3B)。對(duì)于OPD和它的氨基衍生物，從10-10M開始可以檢測(cè)到[Ca2+]I的升高(1.1-1.2倍于基本水平，p＜0.05)，但是10-8M時(shí)與基本水平的差異最大(1.4-1.6倍刺激，p＜0.01；圖4)。相對(duì)于1，25(OH)2D3，胞液中Ca2+的最大變化說明只有OPD與類固醇功效相當(dāng)(圖5A)，它們達(dá)到峰值的時(shí)間明顯短于使用激素的情況(OPD 60秒對(duì)1，25(OH)2D390秒)。相對(duì)于類固醇，EHPD、APD和NH2-OPD提高細(xì)胞內(nèi)Ca2+的功效較差。但是APD和NH2-OPD達(dá)到峰值的時(shí)間與激素相當(dāng)(APD或NH2-OPD 80秒對(duì)1，25(OH)2D390秒)，然而EHPD具有明顯延遲的動(dòng)力學(xué)結(jié)果(達(dá)到峰值的時(shí)間＝120秒)。這些化合物引發(fā)的Ca2+升高的初始階段的動(dòng)力學(xué)分析說明，EHDP提高Ca2+的速度最慢(圖5B)。
在ROS 17/2.8細(xì)胞中，鈣離子對(duì)1，25(OH)2D3的快速的非基因組響應(yīng)包括初始階段從內(nèi)生的對(duì)毒胡蘿卡素敏感的存儲(chǔ)器中由固醇引發(fā)的快速Ca2+釋放，及隨后從外界流入陽(yáng)離子(參見Khoury等，1995，J.Nutr.125，1699S-1703S)。持續(xù)的Ca2+i階段可以用陽(yáng)離子進(jìn)入路徑解釋，其是L-型電壓依賴(VDCC)Ca2+通道作用的結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明，由于當(dāng)劑量維持在對(duì)骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞有細(xì)胞作用時(shí)，NH2-OPD絕對(duì)沒有抗再吸收特性(Van Beek E.等，1996，J.Bone Miner.Res.11，1492-1497)，因而NH2-OPD是成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)物。因此，注意力主要集中在OPD和其氨基取代的衍生物，并進(jìn)行試驗(yàn)用于確定類似Ca2+通道是否參與這里報(bào)導(dǎo)的這些化合物對(duì)[Ca2+]i的作用。至于類固醇，用VDCC阻斷劑硝苯吡啶(2μM)或戊脈安(5μM)對(duì)細(xì)胞預(yù)處理只能部分(70％)抑制由OPD引起的[Ca2+]i升高，但幾乎可以完全消除NH2-OPD的作用(參見實(shí)施例7)。對(duì)于OPD，VDCC阻斷劑的作用在響應(yīng)的流入階段比較明顯，而對(duì)初期的Ca2+i短暫升高沒有受影響(未顯示)。為評(píng)估BP引發(fā)的快速、初期的Ca2+響應(yīng)是否涉及對(duì)磷酸肌醇專一的磷脂酶C(PLC)路徑的激活，評(píng)價(jià)二個(gè)在結(jié)構(gòu)和機(jī)理上不相關(guān)的酶抑制劑對(duì)BP引發(fā)的初期的Ca2+i升高的作用。OPD-和NH2-OPD依賴的胞液中Ca2+的快速(1分鐘)升高可以用PLC抑制劑U73122(2μM)或新霉素(0.5mM)處理后完全阻斷(參見實(shí)施例8)，但不能被缺少對(duì)PLC的作用的U73122類似物U73343(未顯示)所阻斷(Vazquez G.等，1998，J.Biol.Chem.273，33954-33960)。
當(dāng)使用1μM的毒胡蘿卡素抑制肌質(zhì)網(wǎng)中Ca2+-ATP激酶而從藥理上消耗細(xì)胞內(nèi)的肌肉Ca2+存儲(chǔ)器時(shí)，對(duì)OPD或NH2-OPD的響應(yīng)被完全阻斷(圖6)。
表1硝苯吡啶和戊脈安對(duì)OPD和NH2-OPD引起的成骨細(xì)胞中Ca2+響應(yīng)的作用[Ca2+]i(nM) Δ[Ca2+]I％抑制基本值 135±6OPD 205±10*70NH2-OPD150±3**15硝苯吡啶預(yù)處理OPD 156±8**2170NH2-OPD 137±6 2 90戊脈安預(yù)處理OPD 146±5 1185NH2-OPD 133±7 - 100
表2磷脂酶C對(duì)OPD和NH2-OPD引起的成骨細(xì)胞中Ca2+響應(yīng)的抑制作用[Ca2+]i(nM) Δ[Ca2+]i％抑制基本值100 -OPD 164±9*64NH2-OPD137±3**37U73122(或新霉素+OPD)1分鐘 105±3(98±2) -100(100)5分鐘 100±5(100±8)-100(100)U73122(或新霉素+NH2-OPD)1分鐘 101±5(99±1) -100(99)5分鐘 100±11(100±5) -100(100)
所觀測(cè)到的OPD Ca2+i響應(yīng)圖形與1，25(OH)2D3非常相似，包括在初期BP引發(fā)快速?gòu)膶?duì)毒胡蘿卜素敏感的內(nèi)生存儲(chǔ)器流出Ca2+，以及隨后對(duì)應(yīng)于持續(xù)Ca2+i階段的從細(xì)胞外環(huán)境流入陽(yáng)離子。從對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器流出陽(yáng)離子而導(dǎo)致BP引發(fā)的快速的Ca2+i瞬時(shí)增加，類似于1，25(OH)2D3的結(jié)果。PLC抑制劑U73122和新霉素作用在不同的PLC活性位點(diǎn)而都能產(chǎn)生的阻斷效應(yīng)很好地支持這一概念。在ROS17/2.8細(xì)胞中，1，25(OH)2D3引發(fā)快速(30-60秒)且單階段生成IP3(參見Lieberherr，M.，1987，J.Biol.Chem.262，13168-13173；Civitelli等，1990，Endocrinology，127，2253-2262)。盡管這些數(shù)據(jù)說明這兩種相關(guān)BP具有類似的內(nèi)生Ca2+流動(dòng)機(jī)理，但是還需繼續(xù)探討OPD和NH2-OPD對(duì)這些細(xì)胞中磷脂代謝的作用。因?yàn)槎嗔姿峒〈嫉母轮苯踊蜷g接與控制Ca2+從細(xì)胞外流入有關(guān)(參見Irvine，RF.，1992，F(xiàn)ASEB J.6，3085-3091)，因此磷酸肌醇釋放的程度差異可以解釋這里報(bào)導(dǎo)的OPD和NH2-OPD較大地刺激Ca2+通過Ca2+通道的現(xiàn)象。
觀測(cè)到OPD和NH2-OPD引起的Ca2+響應(yīng)的Ca2+流入階段，盡管程度不同，但都可以用VDCC阻斷劑消除，這說明成骨細(xì)胞中二種BP的非基因組作用都與電壓依賴性Ca2+通道的調(diào)節(jié)相關(guān)。
生理性骨重塑過程中BP的基因組作用(如引發(fā)OC合成)與非基因組作用(如快速活化鈣信使)在時(shí)間上肯定是有間隔的，而在空間上有可能是分開的。許多研究，尤其是涉及在1，25(OH)2D3對(duì)骨的作用中膜引發(fā)路徑和核受體介導(dǎo)路徑的研究，清楚地說明誘導(dǎo)Ca2+信號(hào)對(duì)于成骨細(xì)胞中成核過程的活化并不總是必須的(參見Khoury等，1994，Endocrinology 135，2446-2453)。但是，Ca2+信號(hào)已經(jīng)與骨鈣蛋白和osteopontin的表達(dá)量的變化系統(tǒng)地關(guān)聯(lián)起來(參見Farach-Carson等，Am.J.Kidney Dis.31，729-742，以及其它文獻(xiàn))。觀測(cè)到相對(duì)于母體分子OPD，NH2-OPD引發(fā)OC合成的功效減弱，然而NH2-OPD引起的胞液中Ca2+變化的幅度要明顯小于OPD所引起的，兩者差異非常大。因此，這暗示在BP引發(fā)OC合成的效力與它們引起胞液中Ca2+快速變化的能力之間有直接的關(guān)聯(lián)。這些觀測(cè)與本研究中所有其它受測(cè)的BP都有效吻合。因此，對(duì)于secosteroid激素1，25(OH)2D3，BP對(duì)成骨細(xì)胞的Ca2+信號(hào)系統(tǒng)的快速非基因組作用有可能誘發(fā)BP的基因組作用，并因此對(duì)骨生成起作用。盡管OPD結(jié)構(gòu)的改變會(huì)影響其與目標(biāo)細(xì)胞的相互作用，但是所觀察到的OPD和NH2-OPD對(duì)Ca2+調(diào)節(jié)的作用差異可能還是歸結(jié)于不同的信號(hào)級(jí)聯(lián)和/或介導(dǎo)每一種BP作用的機(jī)理。本研究中一定劑量的NH2-OPD可用作成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)物。OPD和NH2-OPD對(duì)成骨細(xì)胞中Ca2+動(dòng)態(tài)平衡的作用的差異有可能用于解釋它們抗再吸收功效的差異。這些結(jié)果說明NH2-OPD是成骨細(xì)胞的選擇性調(diào)節(jié)物，尤其在上述的新應(yīng)用中。
以上描述、權(quán)利要求、表和附圖中所公開的發(fā)明特點(diǎn)、無論單獨(dú)還是隨機(jī)組合使用，對(duì)于本發(fā)明中各實(shí)施方式的實(shí)施都是至關(guān)重要的。
權(quán)利要求
1.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于選擇性調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的藥劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中選擇性調(diào)節(jié)包括刺激成骨細(xì)胞的細(xì)胞活性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其中選擇性調(diào)節(jié)包括影響成骨細(xì)胞中Ca2+的動(dòng)態(tài)平衡。
4.根據(jù)上述任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中選擇性調(diào)節(jié)包括成骨細(xì)胞中Ca2+含量的瞬時(shí)提高。
5.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于維持正常骨結(jié)構(gòu)的藥劑中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，其中藥劑用于健康的接受治療者。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的應(yīng)用，其中藥劑用于沒有骨病的接受治療者。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中藥劑用于人或脊椎動(dòng)物。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中藥劑用于年齡在40歲或更大的人。
10.根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中藥劑用于兒童。
11.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于健康的接受治療者預(yù)防骨病的藥劑中的應(yīng)用。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中骨病選自骨質(zhì)疏松、佩吉特氏病、關(guān)節(jié)炎、牙周骨質(zhì)減少、青春期脊柱側(cè)凸、骨折、缺乏鍛煉引起的骨質(zhì)減少、移植后骨質(zhì)減少、與甲狀旁腺功能亢進(jìn)相關(guān)的骨質(zhì)減少、藥物引起的骨質(zhì)減少、營(yíng)養(yǎng)性骨質(zhì)減少、代謝性骨疾病、早熟性骨質(zhì)減少和骨化紊亂。
13.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于對(duì)最近接受皮質(zhì)類固醇治療的接受治療者進(jìn)行治療的藥劑中的應(yīng)用。
14.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于無需抗再吸收活性的骨病后治療的藥劑中的應(yīng)用。
15.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于對(duì)患骨病的兒童進(jìn)行治療的藥劑中的應(yīng)用。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的應(yīng)用，其中骨病選自骨質(zhì)疏松、佩吉特氏病、關(guān)節(jié)炎、牙周骨質(zhì)減少、青春期脊柱側(cè)凸、骨折、缺乏鍛煉引起的骨質(zhì)減少、移植后骨質(zhì)減少、與甲狀旁腺功能亢進(jìn)相關(guān)的骨質(zhì)減少、藥物引起的骨質(zhì)減少、營(yíng)養(yǎng)性骨質(zhì)減少、代謝性骨疾病、早熟性骨質(zhì)減少和骨化病癥。
17.根據(jù)先前任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中在對(duì)接受治療者使用藥劑之后，1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在細(xì)胞外的濃度在10-6和10-10M之間。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中在對(duì)接受治療者使用藥劑之后，1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在細(xì)胞外的濃度在10-7和10-9M之間。
19.根據(jù)權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中在對(duì)接受治療者使用藥劑之后，1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在細(xì)胞外的濃度在10-8M左右。
20.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的應(yīng)用，用于制造藥劑，該藥劑刺激信號(hào)級(jí)聯(lián)和對(duì)1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的作用的反應(yīng)歷程進(jìn)行介導(dǎo)，其中雙膦酸鹽化合物的作用可以被Ca2+通道阻斷劑所阻斷。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中Ca2+通道阻斷劑選自硝苯吡啶和戊脈安。
22.根據(jù)先前任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中口服使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的劑量為0.01-1000毫克之間。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的應(yīng)用，其中口服使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的劑量為12.5-75毫克之間。
24.根據(jù)先前任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其中注射使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的劑量為0.02-200毫克之間。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的應(yīng)用，其中注射使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸或其任一可溶性鹽、其任一水合物的劑量為2.5-15毫克之間。
26.1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物在制造用于傳送來自對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器的鈣離子的藥劑中的應(yīng)用。
27.根據(jù)先前任一權(quán)利要求的1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的應(yīng)用，其中1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物和至少一種其它物質(zhì)結(jié)合使用，該物質(zhì)選自鈣鹽、檸檬酸鈣和碳酸鈣、其它氨基取代的雙膦酸、含氟有藥理活性的鹽、D類維生素和它們的代謝物、維生素D3、骨化二醇、鈣三醇、維生素D2、PTH、合成代謝激素、雌激素、骨骼中有雌激素活性的物質(zhì)、孕激素、男性激素、生長(zhǎng)激素、有生長(zhǎng)激素活性的肽、雌激素受體的選擇性調(diào)節(jié)物、雷洛昔芬。
28.根據(jù)先前任一權(quán)利要求的1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的應(yīng)用，其中藥劑在使用其它氨基取代的雙膦酸鹽治療之前、之中或之后使用。
29.一種用于篩選Ca2+通道阻斷劑的方法，包括以下步驟-用假定的鈣離子通道阻斷劑處理含鈣離子通道的細(xì)胞；-將細(xì)胞與1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物接觸；-測(cè)量接觸步驟之后的響應(yīng)。
30.一種篩選1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸功能類似物的方法，包括以下步驟-用鈣離子通道阻斷劑處理含鈣離子通道的細(xì)胞；-在沒有鈣離子通道阻斷劑存在下，將細(xì)胞與假定的功能類似物接觸，這些功能類似物被認(rèn)為會(huì)引起鈣離子流入細(xì)胞；-測(cè)量接觸步驟之后的響應(yīng)。
31.一種方法，用于選擇性調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞、和/或維持正常的骨結(jié)構(gòu)、和/或用于正常接受治療者預(yù)防骨病、和/或?qū)ψ罱邮芷べ|(zhì)類固醇治療的接受治療者進(jìn)行治療、和/或用于無需抗再吸收活性的骨病的后治療、和/或治療兒童的骨病、和/或刺激信號(hào)級(jí)聯(lián)和對(duì)1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的作用的反應(yīng)歷程進(jìn)行介導(dǎo)，其中雙膦酸鹽化合物的作用可以被鈣離子通道阻斷劑所阻斷；和/或傳送來自對(duì)IP3敏感的存儲(chǔ)器的鈣離子，該方法包括對(duì)接受治療者單獨(dú)使用1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物，或與藥用載體一起使用，1-氨基-3-(N，N-二甲基氨基)-亞丙基-1，1-雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的劑量為口服每次0.1-1000毫克，注射每次0.02-200毫克。
全文摘要
本發(fā)明涉及1－氨基－3－(N,N－二甲基氨基)－亞丙基－1,1－雙膦酸、其任一可溶性鹽或其任一水合物的新應(yīng)用,尤其是用于制造可選擇性調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的藥劑。
文檔編號(hào)A61K31/4535GK1342083SQ99812911
公開日2002年3月27日 申請(qǐng)日期1999年10月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月30日
發(fā)明者埃米利奧·J·A·羅爾丹, 阿尼瓦爾·佩雷斯－略倫特, 吉列爾莫·巴斯克斯, 里卡多·博蘭, 索克拉特斯·E·帕帕保羅斯 申請(qǐng)人:加多股份有限公司, 萊頓大學(xué)