專利名稱：治療血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合征的方法
本申請要求1998年12月10日申請的臨時申請序號60/111,770的優(yōu)先權(quán)。
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)科學(xué)，具體地說涉及用C蛋白治療血栓形成性血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合征。
C蛋白是一種維生素K依賴性絲氨酸蛋白酶和天然抗凝劑，其通過使凝血級聯(lián)過程中的因子Va和VIIIa失活從而在止血調(diào)節(jié)中起作用。人C蛋白以二鏈酶原的形式循環(huán)，但通過含有細胞表面膜蛋白(凝血調(diào)節(jié)蛋白)復(fù)合物中的凝血酶的限制性蛋白水解作用將其轉(zhuǎn)化為活化C蛋白(aPC)后，該蛋白在內(nèi)皮和血小板表面起作用。
結(jié)合其它蛋白，aPC可作為凝血過程中最重要的負調(diào)節(jié)物發(fā)揮作用從而產(chǎn)生抵抗血栓形成的防護。aPC除了抗凝作用之外，還通過抑制細胞因子(例如腫瘤壞死因子和白細胞介素-1)的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用，另外還具有纖維蛋白原溶解特性(profibrinolytic property)，例如對纖溶酶原激活物抑制劑(PAI-1)的抑制作用，這有助于溶解凝血塊。因此，C蛋白酶系統(tǒng)是抗凝、抗炎和纖維蛋白溶解的主要生理機制。
將血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒綜合征(HUS)定義為血栓形成性微血管病，其特征為微血栓堵塞小動脈和毛細血管、血小板減少、神經(jīng)功能受損以及進行性腎衰。已將TTP定義為多系統(tǒng)疾病，其特征為發(fā)熱、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常波動、腎功衰竭、微血管病溶血性貧血以及血小板減少。HUS的特征為與紅細胞碎片有關(guān)的血管內(nèi)溶血性貧血、血小板減少以及末端器官(end-organ)受損，這種末端器官受損的證據(jù)有(a)血栓形成性微血管病病變的組織學(xué)根據(jù)(最常見的是腎)或(b)無任何其它疾病或可能的發(fā)病因素下，該種損害的臨床根據(jù)[Neild，G.，Kidney Intemational 53(Suppl.64)s-45-s-49，1998]。
相信引起TTP/HUS病理生理學(xué)改變的因素是內(nèi)皮細胞受損和原發(fā)性血小板聚集[Moake，Seminars in Hematology，34(2)83-89，1997]。內(nèi)皮細胞受損導(dǎo)致大量馮·維勒布蘭德氏因子(UL vWF)多聚體異常釋放，馮·維勒布蘭德氏因子多聚體本身又引起血小板聚集。機體纖維蛋白溶解系統(tǒng)的抑制導(dǎo)致纖維蛋白性血栓在血小板性血栓上堆積。發(fā)現(xiàn)HUS和TTP患者的纖溶酶原激活物抑制劑(PAI-1)水平增高而C蛋白活性水平降低。
TTP與巴爾通氏體屬(Bartonella sp.)的細菌感染有關(guān)，也與人類免疫缺陷性病毒(HIV)和內(nèi)臟卡波氏肉瘤有關(guān)[Avery等，AmericanJournal of Hematology，58148-149，1998]。TTP還與許多藥物例如噻氯匹定、FK506、高劑量的皮質(zhì)類固醇、他莫昔芬(tamoxiphen)或環(huán)孢菌素A的應(yīng)用有關(guān)[Gordon等，Seminars in Hematology，34(2)140-147，1997]。
HUS與許多細菌感染有關(guān)，例如大腸桿菌O157H7菌株(E.coli)、志賀氏菌屬(Shigella)、肺炎球菌屬(Pneumococci)、溶血性鏈球菌(hemolytic Streptococci)或耶爾森氏菌屬(Yersinia)的感染。HUS也與病毒感染例如HIV、柯薩奇病毒(Coxsackie)或腺病毒(adenovirus)的感染有關(guān)。此外，HUS與許多藥物(與上述列于TTP的相同)的應(yīng)用有關(guān)[Gordon等，1997]。TTP和HUS兩者均與懷孕期間的并發(fā)癥有關(guān)[Egerman等，Am J Obstet Gynecol，175950-956，1996]。
血栓形成性微血管病的臨床發(fā)現(xiàn)包括微血管病溶血性貧血(MAHA)、急性腎功能衰竭、血小板減少癥和TTP的急性神經(jīng)學(xué)改變。如果不治療，TTP和HUS的預(yù)后不良，其死亡率達90％。存活患者經(jīng)常發(fā)展為晚期(end-stage)腎病。具有良好結(jié)果的唯一治療方法是用新鮮冷凍血漿進行血漿替換(PE)[Hollenbeck等，Nephrol DialTransplant 1376-81，1998]。然而，仍會發(fā)生死亡并且盡管應(yīng)用PE法治療，許多患者仍長期罹患并發(fā)癥。因此，需要更有效的治療TTP和/或HUS的方法。
本發(fā)明首次描述用C蛋白治療TTP和/或HUS。將具有抗凝和纖維蛋白原溶解活性(profibrinolytic activity)以及使PAI-1失活的能力的C蛋白用于治療TTP和HUS患者微血栓引起的小動脈和毛細血管堵塞。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療罹患血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)患者的方法，該方法包括給予所述患者藥學(xué)有效劑量的C蛋白。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療罹患溶血性尿毒綜合癥(HUS)患者的方法，該方法包括給予所述患者藥學(xué)有效劑量的C蛋白。
在另外一個實施方案中，本發(fā)明為需要這種治療的血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)患者提供了治療方法，該方法包括給予所述患者藥學(xué)有效劑量的活化C蛋白，使這種活化C蛋白的血漿水平達到約2ng/ml到約300ng/ml。
在又一個實施方案中，本發(fā)明為需要這種治療的溶血性尿毒綜合癥(HUS)患者提供了治療方法，該方法包括給予所述患者藥學(xué)有效劑量的活化C蛋白，使這種活化C蛋白的血漿水平達到約2ng/ml到約300ng/ml。
發(fā)明詳述對本文公開和要求保護的本發(fā)明來說，如下定義下述術(shù)語。
C蛋白是指具有抗凝、抗炎和纖維蛋白原溶解特性的依賴維生素K的絲氨酸蛋白酶，它包括但不限于得自血漿的C蛋白和重組產(chǎn)生的C蛋白。盡管C蛋白也包括其它類型C蛋白或具有C蛋白的蛋白水解活性、酰胺分解活性(amidolytic)、酯水解活性和生物學(xué)(抗凝、纖維蛋白原溶解及抗炎)活性的衍生物，但是C蛋白包括并優(yōu)選人類C蛋白。Gerlitz等(美國專利第5,453,373號)和Foster等(美國專利第5,516,650號)描述了C蛋白衍生物的實例，其全部內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
酶原-一種蛋白水解酶的無酶活性前體。本文使用的C蛋白酶原是指分泌的、無活性形式的C蛋白，無論是單鏈或是雙鏈。
活化的C蛋白或aPC是指通過限制性蛋白水解已將其轉(zhuǎn)化為活化形式的C蛋白酶原。盡管aPC也包括其它類型aPC或具有C蛋白的蛋白水解活性、酰胺分解活性、酯水解活性和生物學(xué)(抗凝或纖維蛋白原溶解)活性的衍生物，但是aPC包括并優(yōu)選為人類C蛋白。在上述C蛋白的描述中指出了C蛋白衍生物的實例。
HPC-人C蛋白酶原。
r-hPC-重組人C蛋白酶原。
r-aPC-通過體外活化r-hPC或由原核細胞、真核細胞和轉(zhuǎn)基因動物或植物直接分泌的活化形式C蛋白產(chǎn)生的重組人活化C蛋白，包括例如由人腎293細胞分泌酶原，然后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)純化和活化，這在Yan的美國專利第4,981,952號和Cottingham的WO97/20043中得到證實，其全部內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
血漿衍生的活化C蛋白-按照Eibl在美國專利第5,478,558號中的描述，通過活化血漿HPC產(chǎn)生的活化C蛋白，所述文獻全部內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
連續(xù)輸注-在規(guī)定的一段時間內(nèi)基本上持續(xù)不斷地向靜脈內(nèi)輸入溶液。
快速濃注(bolus injection)-在大約120分鐘時間內(nèi)注射入規(guī)定劑量(稱為一個藥團，bolus)的藥物。
給藥的合適形式-適合作為治療藥物給予的凍干劑或溶液。
單位劑型-指用于人體接受者的、適當(dāng)單位劑量的不連續(xù)物理單位，每一單位劑型含有經(jīng)計算可產(chǎn)生期望的治療效果的預(yù)定量的活性物質(zhì)以及合適的藥用賦形劑。
藥學(xué)有效量-表示能抑制人體敗血癥的本發(fā)明化合物的量。當(dāng)然，給予本發(fā)明所述化合物的具體劑量將由主治醫(yī)師根據(jù)對所述病例具體情況的評估而決定。
本發(fā)明提供用C蛋白治療血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒綜合征(HUS)。已將TTP定義為多系統(tǒng)性疾病，其特征為發(fā)熱、波動性中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、腎損害、微血管病溶血性貧血和血小板減少。HUS的特征為與紅細胞碎片有關(guān)的血管內(nèi)的溶血性貧血；血小板減少和末端器官(end-organ)受損，這種末端器官受損的證據(jù)有(a)血栓形成性微血管病病變的組織學(xué)根據(jù)(最常見的是腎)，或(b)無任何其它疾病或可能的發(fā)病因素下，該種損害的臨床根據(jù)。可將具有抗凝和纖維蛋白原溶解活性以及使PAI-1滅活的能力的C蛋白用于治療TTP和HUS患者微血栓引起的小動脈和毛細血管的閉塞。
根據(jù)本發(fā)明給予的C蛋白可通過本領(lǐng)域已知的任何方法或按照美國專利號4,981,952和美國專利號5,550,036(通過引用結(jié)合到本文)描述的方法生產(chǎn)和/或分離。例如，本發(fā)明提供由細胞產(chǎn)生并分泌全長可溶性C蛋白或C蛋白的生物學(xué)活性多肽變異體的方法，該方法包括(a)構(gòu)建含有編碼C蛋白的DNA的載體；(b)用所述載體轉(zhuǎn)染所述細胞；以及(c)在可使全長可溶性C蛋白或C蛋白的生物學(xué)活性多肽變異體分泌的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)該轉(zhuǎn)染細胞。此外，所述細胞為真核細胞，例如哺乳動物細胞如金黃倉鼠AV12細胞、人胚胎293細胞或幼倉鼠腎細胞。
可按照制備藥學(xué)上有用組合物的已知方法配制用于治療TTP/HUS的C蛋白。例如，一種需要的制劑形式往往是高純度穩(wěn)定凍干制品，該凍干品含有增量劑(如蔗糖)、鹽(如氯化鈉)、緩沖劑(如檸檬酸鈉)和C蛋白或aPC。
為保證所述C蛋白以有效形式傳送到血流中，可通過大約1小時到約240小時持續(xù)輸注注入合適的劑量，不經(jīng)腸道地給予所述C蛋白。
本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)良好的醫(yī)學(xué)實踐和患者個體的臨床狀況可容易地確定含有C蛋白的治療性組合物的最佳藥學(xué)有效劑量和給藥方案。通常，給予的C蛋白量約5.0μg/kg/小時到約250μg/kg/小時。用于治療TTP/HUS的C蛋白優(yōu)選活化的C蛋白。給予的aPC量約1.0μg/kg/小時到約96μg/kg/小時。給予的aPC量更優(yōu)選從約1.0μg/kg/小時到約50μg/kg/小時。同時給予的aPC量更優(yōu)選從約1.0μg/kg/小時到約35μg/kg/小時。甚至更優(yōu)選給予的aPC量從約5.0μg/kg/小時到約30μg/kg/小時。甚至再更優(yōu)選給予的aPC量約15μg/kg/小時-30μg/kg/小時。還可以更進一步優(yōu)選給予的aPC量從約20μg/kg/小時到30μg/kg/小時。給予的aPC量最優(yōu)選約24μg/kg/小時。給予的合適劑量aPC將減少TTP和HUS患者微血栓引起的小動脈和毛細血管閉塞。
給予所述量aPC獲得的血漿范圍為約2ng/ml到約300ng/ml。優(yōu)選血漿范圍為約2ng/ml到約200ng/ml。最優(yōu)選的血漿范圍為約30ng/ml到約150ng/ml，甚至更優(yōu)選為約100ng/ml。
另一方面，如下給予所述aPC把每小時合適劑量的1/3快速濃注，然后將每小時劑量的剩余的2/3量在一小時內(nèi)持續(xù)輸入，然后在23小時內(nèi)連續(xù)輸入合適的劑量，這樣使得在24小時內(nèi)給予合適劑量。此外，所述快速濃注將通過靜脈內(nèi)的袋式滴注泵或注射泵以正常速率的大約2倍的速度給予約10到20分鐘，隨后以正常速率的大約1.5倍的速度給予40到50分鐘。然后以正常速率連續(xù)輸入240小時，正常速率為決定給予每個時間周期的合適劑量水平的所述治療藥物的速率適于。
本發(fā)明介紹的應(yīng)用C蛋白治療TTP/HUS將為潛在的嚴(yán)重并使人衰弱的疾病提供需要的治療。C蛋白的應(yīng)用是有效的并可避免目前采用的用新鮮冷凍血漿進行的血漿置換的治療方法或其它目前采用的抗凝劑的并發(fā)癥如毒性反應(yīng)和全身性副作用。
提供的下述實施例僅為進一步說明本發(fā)明。不能把本發(fā)明的范圍解釋為僅限于下述實施例構(gòu)成的范圍。
制備1人C蛋白的制備應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)(如Yan在美國專利號4,981,952中列出的那些技術(shù)，其全部技術(shù)內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中)以人腎293細胞生產(chǎn)重組人C蛋白(r-hPC)。編碼人C蛋白的基因由Bang等在美國專利號4,775,624中公開并要求保護(其全部技術(shù)內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中)。在293細胞中用于表達人C蛋白的質(zhì)粒是pLPC質(zhì)粒，該質(zhì)粒由Bang等在美國專利號4,992,373中公開(其全部技術(shù)內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中)。歐洲專利公告第0 445 939號中以及Grinnell等在Bio/Technology 51189-1192，1987中也介紹了PLPC質(zhì)粒的構(gòu)建，所述文獻內(nèi)容亦通過引用結(jié)合到本文中。簡要地說，將所述質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293細胞中，然后鑒定穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化體，使之在無血清培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。發(fā)酵后，通過微量過濾收集無細胞的培養(yǎng)基。
應(yīng)用改進的Yan在美國專利號4,981,952中的技術(shù)，將人C蛋白從所述培養(yǎng)基中分離出來。用4mM EDTA制備澄清培養(yǎng)基，然后使其吸附到陰離子交換樹脂(Fast-Flow Q，Pharmacia)上。在用4個柱體積的20mM的Tris、200mM的氯化鈉、pH7.4和2個柱體積的20mM的Tris、150mM的氯化鈉、pH7.4洗滌后，用20mM的Tris、150mM的氯化鈉、10mM氯化鈣、pH7.4洗脫結(jié)合的重組人C蛋白酶原。洗脫后用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷，所述洗脫蛋白的純度大于95％。
所述蛋白的進一步純化如下用3M氯化鈉配制所述蛋白，然后使其吸附到用20mM Tris、3M氯化鈉、10mM氯化鈣、pH7.4平衡的疏水作用樹脂(Toyopearl Phenyl 650M，TosoHaas)上。在用2個柱體積無氯化鈣的平衡緩沖液洗滌后，用20mM的Tris、pH7.4洗脫所述重組人C蛋白。
制備所述洗脫蛋白，用以通過去除殘余鈣進行活化。將所述重組人C蛋白通過金屬親和柱(Chelex-100，Bio-Rad)以除去鈣，并使蛋白再次結(jié)合到陰離子交換柱(Fast Flow Q，Pharmacia)上。將這兩個柱串聯(lián)排列并用20mM的Tris、150mM的氯化鈉、5mM的EDTA、pH7.4平衡。在上樣所述蛋白后，用1個柱體積的相同緩沖液洗滌所述Chelex-100柱后，使其從所述串聯(lián)連接中分離開。用3個柱體積的平衡緩沖液洗滌所述陰離子交換柱后，用0.4M的氯化鈉、20mM的Tris-醋酸鹽、pH6.5洗脫所述蛋白。用UV 280nm消光(分別為E0.1％＝1.81或1.85)測定重組人C蛋白和重組活化C蛋白溶液的蛋白濃度。
制備2重組人C蛋白的活化在50mM的HEPES、pH7.5存在時，于4C將牛凝血酶偶合到Activated CH-Sepharose 4B(Pharmacia)上。在已將樹脂填充到柱上后，用大約5000單位凝血酶/ml樹脂進行所述偶合反應(yīng)。將所述凝血酶溶液在該柱中循環(huán)約3小時后，加入2-氨基-乙醇(MEA)至循環(huán)溶液的濃度為0.6ml/L。將所述含有MEA的溶液再循環(huán)10-12小時以確保樹脂上未反應(yīng)的胺被完全封閉。封閉之后，用10個柱體積的1M的氯化鈉、20mM的Tris、pH6.5洗滌所述凝血酶-偶合的樹脂，以除去所有的非特異性結(jié)合蛋白質(zhì)，并將該凝血酶樹脂用活化緩沖液平衡后用于活化反應(yīng)中。
用5mM EDTA(以螯合任何殘余鈣)制備純化的r-hPC并用20mM的Tris、pH7.4或20mM的Tris-醋酸鹽、pH6.5稀釋至濃度為2mg/ml。將該物質(zhì)通過凝血酶柱(該柱于37℃用50mM的氯化鈉和20mM的Tris、pH7.4或20mM的Tris-醋酸鹽、pH6.5平衡)。將流速調(diào)節(jié)至r-hPC和凝血酶樹脂之間的接觸時間大約為20分鐘。收集流出物并立即測定其酰胺分解活性。如果所述物質(zhì)沒有與建立的C蛋白標(biāo)準(zhǔn)品相似的比活性(酰胺分解活性)，則將其在所述凝血酶柱上重新循環(huán)以完全活化所述r-hpC為止。然后用20mM上述緩沖液(pH可為7.4或6.5)按1∶1稀釋所述物質(zhì)以使所述C蛋白在進行下一步驟處理之前保持較低的濃度。
用150mM的氯化鈉將所述C蛋白結(jié)合到用活化緩沖液(20mM的Tris、pH7.4或20mM的Tris-醋酸鹽、pH6.5)平衡的陰離子交換樹脂(Fast Flow Q，Pharmacia)上，達到從所述C蛋白物質(zhì)中除去濾去的凝血酶的目的。在這些條件下，凝血酶不與所述陰離子交換樹脂互相作用，僅僅是通過該柱子進入加樣的樣品流出物。當(dāng)將所述C蛋白加入到所述柱子上時，用2-6個柱體積的20mM的平衡緩沖液洗滌后，用溶于5mM的Tris-醋酸鹽、pH6.5或20mM的Tris、pH7.4的0.4M氯化鈉經(jīng)梯度洗脫將結(jié)合的C蛋白洗脫下來。洗滌柱子的體積越大越有利于完全除去十二肽(dodecapeptide)。從所述柱子上洗脫下來的物質(zhì)可以冷凍液(-20℃)保存或以凍干粉保存。
通過測定活化部分凝血激酶時間(APTT)凝固試驗的凝固時間的延長來測定活化的C蛋白的抗凝活性。用稀釋緩沖液(1mg/ml放射免疫測試級牛血清白蛋白[BSA]、20mM的Tris、pH7.4、150mM的氯化鈉、0.02％的疊氮鈉)配制C蛋白(濃度范圍為125-1000ng/ml)并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時將樣品在這個濃度范圍內(nèi)制備成幾個稀釋度。在每個樣品的小杯中加入50μl冷的馬血漿和50μl復(fù)制的活化部分凝血激酶時間試劑(APTT試劑，Sigma)，并將其于37℃孵育5分鐘。孵育后，在每個小杯中加入50μl適當(dāng)?shù)臉悠坊驑?biāo)準(zhǔn)品。用稀釋緩沖液替換樣品或標(biāo)準(zhǔn)品以測定基礎(chǔ)凝固時間。在每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中加入37℃的30mM的氯化鈣50μl后立即啟動纖維蛋白測定儀(fibrometer)(Coa Screener Hemostasis Ahalyzer，American Labor)的計時器。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程計算樣品的活化C蛋白濃度。本文報道的凝固時間是至少三個重復(fù)樣品的平均值，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。
上述描述可使本領(lǐng)域中有相當(dāng)技術(shù)的人員制備用于治療血栓形成性血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合征的C蛋白。
制備3活化的C蛋白的制劑通過包括將含有約2.5mg/ml活化的C蛋白、約15mg/ml的蔗糖、約20mg/ml的氯化鈉和pH大于5.5但小于6.5的檸檬酸鈉緩沖液的溶液凍干的步驟而制備活化的C蛋白的穩(wěn)定凍干制劑。此外，活化C蛋白的穩(wěn)定凍干制劑包括將含有約5mg/ml活化的C蛋白、約30mg/ml的蔗糖、約38mg/ml的氯化鈉和pH大于5.5但小于6.5的檸檬酸鈉緩沖液的溶液凍干。
C蛋白∶鹽∶增量劑(w∶w∶w)的比例是適宜凍干工藝制劑的重要因素。根據(jù)C蛋白的濃度、選擇的鹽和濃度以及選擇的增量劑和濃度，所述比例可不同。具體地說，優(yōu)選比例為約1份活化的C蛋白∶約7.6份鹽∶約6份增量劑。
通過將活化的C蛋白、氯化鈉、蔗糖和檸檬酸鈉緩沖液混合而制備適于連續(xù)輸注給藥的活化C蛋白單位劑量制劑?；旌虾螅瑢?ml所述溶液轉(zhuǎn)到單位劑量的容器內(nèi)并凍干。將含有大約5mg到約20mg活化C蛋白(適合對需要這種治療的患者給予約0.01mg/kg/小時到約0.05mg/kg/小時的劑量)的所述單位劑量容器封閉并保藏備用。
實施例1重組活化C蛋白(r-aPC)在治療血栓形成性微血管病中的安慰劑-對照的雙盲隨機試驗溶血性尿毒綜合征(HUS)和血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)是兩種類型血栓形成性微血管病，它們的主要致病原因均為內(nèi)皮受損。在這兩種疾病狀況時，內(nèi)皮細胞或者因為感染微生物如大腸桿菌(E.coli)O157H7和志賀氏菌屬(Shigella)產(chǎn)生的Vero細胞毒素、藥物如FK506和噻氯匹定或自身抗體而受損。內(nèi)皮受損導(dǎo)致大量的馮·維勒布蘭德氏因子多聚體的異常釋放，馮·維勒布蘭德氏因子多聚體本身又引起血小板聚集。對機體纖維蛋白溶解系統(tǒng)的抑制導(dǎo)致纖維蛋白性血栓在血小板性血栓上堆積。發(fā)現(xiàn)HUS和TTP的纖溶酶原激活物抑制劑(PAI-1)水平升高而C蛋白活性水平降低。血栓形成性微血管病的臨床發(fā)現(xiàn)包括微血管病溶血性貧血(MAHA)、急性腎功能衰竭、血小板減少、以及在TTP的急性神經(jīng)病學(xué)改變。
本試驗的首要目的是為了證實，與安慰劑相比，輸注r-aPC可使對所述疾病的緩解時間有統(tǒng)計學(xué)意義的顯著減低。第二個目的是為了證實，輸注r-aPC可使腎功能衰竭的天數(shù)、所需要的輸注量和抽搐發(fā)作的次數(shù)有統(tǒng)計學(xué)意義的顯著降低。本試驗的首要安全性目的是為了證實，與安慰劑比較，r-aPC確實不會引起臨床上的明顯出血次數(shù)具有統(tǒng)計學(xué)意義的明顯增加。
進行此試驗的患者準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)為存在血栓形成性微血管病，血栓形成性微血管病由存在以下情況定義1)血小板數(shù)＜80×109/L定義的血小板減少；2)外周血涂片每視野＞2個裂紅細胞、直接和間接Coomb’s試驗陰性以及血紅蛋白(Hgb)＜10g/dl定義的微血管病溶血性貧血(MAHA)；3)患者基礎(chǔ)血清肌酐增高1倍定義的急性腎功不全或由排尿量＜0.5ml/kg/小時定義的少尿；以及4)正常的凝固時間(PT、PTT和纖維蛋白原)。如果患者接受了抗凝劑或一種研究藥物，則將患者從所述試驗中剔除。本研究還剔除了有呼吸道或胃腸道活動性出血的患者。
將符合所有準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)和非剔除標(biāo)準(zhǔn)的患者隨機安排接受安慰劑或接受96小時內(nèi)輸入劑量最高為48μg/kg/小時的r-aPC，先前已證實該劑量可使aPTT比基礎(chǔ)值增高2倍。在研究期間收集下述數(shù)據(jù)血紅蛋白、血小板計數(shù)、血清肌酐、24小時排尿量、抽搐發(fā)作的次數(shù)和輸注濃集紅細胞的次數(shù)。在不輸注血小板時，持續(xù)2天血小板計數(shù)＞100×109細胞/L定義分析的初步終點，即疾病緩解的時間。
因此，用具有抗凝和纖維蛋白原溶解活性以及使PAI-1滅活能力的r-aPC的治療方法可用于治療TTP和HUS患者發(fā)生的血栓形成性微血管病。
權(quán)利要求
1.治療血栓形成性血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合征的方法，該方法包括給予所述患者藥學(xué)有效劑量的C蛋白。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述C蛋白是人C蛋白酶原。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述C蛋白是活化的人C蛋白。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述活化的人C蛋白的量為約1μg/kg/小時到約96μg/kg/小時。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述活化的人C蛋白通過約1小時到約240小時的連續(xù)輸注給予。
6.治療需要這種治療的血栓形成性血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合征患者的方法，該方法包括給予所述患者藥學(xué)有效劑量的活化C蛋白，這樣使活化C蛋白的血漿水平達到約2ng/ml到約300ng/ml。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述活化的C蛋白以快速濃注給予。
8.權(quán)利要求6的方法，其中所述活化的C蛋白通過約1到約240小時的連續(xù)輸注給予。
9.權(quán)利要求6的方法，其中所述活化的C蛋白首先以快速濃注給藥，然后再以連續(xù)輸注的方式給予。
10.權(quán)利要求9的方法，其中將活化C蛋白的血漿水平范圍達到約為2ng/ml到約300ng/ml所需要的所述活化C蛋白的1/3量快速濃注給予，隨后將所述活化C蛋白剩余的2/3量連續(xù)輸注給予。
全文摘要
本發(fā)明提供用C蛋白治療血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒綜合征(HUS)的方法。要求保護的本發(fā)明為潛在的嚴(yán)重衰弱性疾病提供需要的治療方法,同時避免了血漿置換或目前采用的抗凝劑的并發(fā)癥如出血傾向、毒性反應(yīng)和全身性副作用。
文檔編號A61P7/08GK1329503SQ99814123
公開日2002年1月2日 申請日期1999年12月1日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月10日
發(fā)明者C·J·菲舍爾, 殷秀慈 申請人:伊萊利利公司