專利名稱：皮膚增白組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及涂于人皮膚而使皮膚變淺的組合物。
背景和現(xiàn)有技術(shù)許多人對其皮膚的色素沉著程度很為關(guān)注。例如，有老年斑或雀斑的人希望該色斑不太顯眼，還有些人希望減弱因日照引起的皮膚變黑，或者使其天生的皮膚顏色變淺。為滿足這些愿望，人們作出過許多努力為研制減少黑素細(xì)胞色素產(chǎn)生的產(chǎn)品。但是迄今為止經(jīng)鑒定，這些物質(zhì)均有不希望的副作用，例如對皮膚的刺激作用。這樣這些物質(zhì)便不適宜于作化妝品使用，或者只能以一定濃度涂用，而該濃度下皮膚的變淺效果不能令人滿意?？煽紤]以不同皮膚增白物質(zhì)結(jié)合使用來減少副作用，但由于競爭效應(yīng)使用這些結(jié)合物也同樣會減弱皮膚變淺作用。因此需要對增白皮膚化妝品的效果加以改善。
GB2287405公開了一種皮膚增白化妝品制劑，含有甘草提取物或相關(guān)物種，和α-羥基、β-羥基、或酮基-酸，或酰胺，或其鹽或酯等相結(jié)合。據(jù)稱該組合物具有協(xié)同增效作用、可抑制酪氨酸酶，從而抑制黑色素生成。
WO94/07462公開了一種含維生素A或其衍生物和二酸的增白皮膚的組合物。
WO94/09756提議使用維生素A或其衍生物與選擇的增白皮膚試劑相結(jié)合，用于包括使皮膚變淺在內(nèi)的幾種目的。優(yōu)選的增白皮膚試劑是氫醌，但也可以是其它的試劑，包括甘草提取物。
US4990330介紹了含曲酸與其它從壬二酸等中挑選的物質(zhì)相結(jié)合的增白皮膚產(chǎn)品。該組合物據(jù)載對黑色素合成有增效抑制作用。
JP63284119據(jù)德溫特文摘介紹了一種有防紫外線作用及增白效果的皮膚外用試劑，其含有異阿魏酸或其鹽，并含有有機(jī)酸或其鹽。
據(jù)德溫特文摘介紹J06199646描述了含植物提取物、脲和脲穩(wěn)定劑的增白皮膚的化妝品。所述植物提取物選自各種各樣植物，包括甘草屬(甘草根)。脲穩(wěn)定劑可同樣從很寬范圍內(nèi)挑選，包括脂族二羧酸。
上述產(chǎn)品至今為止未被廣泛接受，因此該領(lǐng)域仍需繼續(xù)有所改善。
我們現(xiàn)發(fā)現(xiàn)若將含有共軛亞油酸或其衍生物的特定異構(gòu)體的化妝組合物涂于皮膚，會獲得很強(qiáng)的抑制黑色素生成作用。
本發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明第一要點(diǎn)，提供含如下成分的外用組合物(a)共軛亞油酸和/或其含共軛亞油酸部分的衍生物，其中有至少1％重量共軛亞油酸和/或共軛亞油酸部分以反10，順12式異構(gòu)體存在；以及(b)適宜于皮膚用的載體。
該組合物特別適于外用，涂于人皮膚上提高抑制黑色素生成作用，由此在所涂之處使皮膚變淺。
根據(jù)本發(fā)明第二要點(diǎn)，提供增白人皮膚的化妝方法，該方法包括將上述外用組合物涂于皮膚上。
根據(jù)另一要點(diǎn)，本發(fā)明提供含共軛亞油酸和/或其含共軛亞油酸部分的衍生物，在增白皮膚的外用組合物中的應(yīng)用，其中有至少1％重量所述共軛亞油酸和/或共軛亞油酸部分是以反10，順12式異構(gòu)體存在。
本發(fā)明另一要點(diǎn)，通過在本發(fā)明第一要點(diǎn)所述組合物中加入吸收紫外線的防曬劑，可避免上述共軛亞油酸和/或其衍生物增白皮膚作用的逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象。所謂“防曬劑”指可以屏蔽皮膚免受波長范圍290-400nm紫外線作用的任何有機(jī)或無機(jī)材料。
本發(fā)明詳述含反10，順12異構(gòu)體的共軛亞油酸共軛亞油酸(以下稱為CLA)包括亞油酸的一組位置和幾何異構(gòu)體，其中在(6，8)、(7、9)、(8、10)、(9，11)、(10，12)，或(11，13)位置處的順、反雙鍵，各種構(gòu)型都有可能。因此該CLA存在24個不同異構(gòu)體。
根據(jù)本發(fā)明，該組合物的主要活性物是反10，順12(下文稱為t10，c12)異構(gòu)體。游離酸的該特定異構(gòu)體如下述結(jié)構(gòu)(1)所示 本發(fā)明也包括含有共軛亞油酸部分的該游離酸的衍生物。優(yōu)選的衍生物包括該酸羧基取代后的衍生物，例如酯(例如視黃醇酯、甘油三酯、甘油一酯、甘油二酯、磷酸酯)、酰胺(如神經(jīng)酰胺衍生物)、鹽(如堿金屬和堿土金屬鹽、銨鹽)；和/或其C18碳鏈取代后的衍生物，例如α羥基和/或β羥基衍生物。
對于甘油三酯衍生物來說，甘油主鏈中的CLA取代基的所有位置異構(gòu)體均包括在內(nèi)。甘油三酯必需含有至少一個CLA部分。例如甘油主鏈上三個可酯化位置中的第1和第2位可以由CLA酯化，而第3位可以是另一種脂類，或者其第1和第3位由CLA酯化，而第2位是另一種脂類。
本說明書中無論是用“共軛亞油酸”還是用“CLA”，都應(yīng)理解為也包括含CLA部分的共軛亞油酸衍生物。
“CLA部分”指CLA衍生物的CLA脂肪?；糠?。
所謂“含t10，c12異構(gòu)體的CLA”意指組合物中存在的全部CLA和/或CLA部分中，有至少1％重量屬反10，順12構(gòu)形的異構(gòu)體，優(yōu)選其占組合物中CLA和/或CLA部分總重的至少20％，最優(yōu)選至少50％，在一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中至少占70％。
本發(fā)明的CLA和/或其含CLA部分的衍生物可按WO97/18320公開的方法制備。優(yōu)選方法于下面例1中介紹。
本發(fā)明所用含t10，c12活性物的CLA，以其有效量加入外用組合物中。一般活性物總量占組合物重量0.00001％-50％，更優(yōu)選占0.01％-10％，最優(yōu)選占0.1％-5％，以最低成本而取得最大效果。適宜于皮膚的載體本發(fā)明組合物還含有適宜于皮膚/化妝品的載體，用作稀釋劑、分散劑或活性物(富含t10，c12異構(gòu)體的CLA)的載體，該載體包括皮膚保養(yǎng)產(chǎn)品中常采用的物質(zhì)，例如水、液體或固體潤膚劑、硅油、乳化劑、溶劑、潤濕劑、增稠劑、粉劑、推進(jìn)劑等。
所述載體一般占組合物重量的5％-99.9％，優(yōu)選35％-80％，在不存在其它化妝品添加劑的情況下，以該載體補(bǔ)足組合物的余量。視需要加入的有益皮膚物質(zhì)和化妝品添加劑除含t10，c12異構(gòu)體活性物的CLA之外，其它特定有益皮膚的活性物質(zhì)，例如防曬劑、和/或其它增白皮膚試劑，均可包括在內(nèi)。當(dāng)防曬劑是有機(jī)物時(shí)，通常包括至少一種吸收290-400nm波長范圍紫外線的生色劑。生色有機(jī)防曬劑可以分成下面幾類(并舉出特定例子)對氨基苯甲酸、其鹽及其衍生物(乙基、異丁基、甘油酯，對二甲基氨基苯甲酸)；氨茴酸酯(鄰氨基苯甲酸酯；甲基、苯基、芐基、苯乙基、里那基、萜品基、及環(huán)己烯基酯)；水楊酸酯(辛基、戊基、苯基、芐基、基、甘油基、及二亞丙基二醇酯)；肉桂酸衍生物(基和芐基酯、α-苯基肉桂腈、丁基肉桂酰基丙酮酸酯)；二羥基肉桂酸衍生物(7-羥基香豆素、甲基-7-羥基香豆素、甲基乙?；?7-羥基香豆素)；三羥基肉桂酸衍生物(七葉亭、甲基七葉亭、瑞香素和葡糖苷、七葉苷和瑞香苷)；烴類(二苯基丁二烯、茋)；二亞芐基丙酮和亞芐基乙酰苯；萘酚磺酸鹽(2-萘酚-3，6-二磺酸和2-萘酚-6，8-二磺酸的鈉鹽；二羥基萘甲酸及其鹽；鄰和對羥基聯(lián)苯二磺酸鹽；香豆素衍生物(7-羥基、7-甲基、3-苯基)；二唑類(2-乙基-3-溴代吲唑、苯基苯并噁唑、甲基萘并噁唑、各種芳基苯并噻唑)；奎寧鹽(硫酸氫鹽、硫酸鹽、油酸和單寧酸氯化物)；喹啉衍生物(8-羥基喹啉鹽、2-苯基喹啉)；羥基-或甲氧基-取代的二苯酮；尿酸和維諾(Vilouric)酸；單寧酸及其衍生物(如六乙基醚)；(丁基卡必基)(6-丙基胡椒基)醚；氫醌；二苯酮類(羥苯酮、磺異苯酮、二羥苯酮、苯并間苯二酚、2，2’，4，4-四羥基二苯酮、2，2’-二羥基-4，4’-二甲氧基二苯酮、辛苯酮、4-異丙基二苯甲?；淄?、丁基甲氧基二苯甲?；淄?、氰雙苯丙烯酸乙酯、和4-異丙基-二苯甲酰基甲烷)。
特別適宜的是2-乙基己基對甲氧基肉桂酸酯、4，4’-叔丁基甲氧基二苯甲?；淄?、2-羥基-4-甲氧基二苯酮、辛基二甲基對氨基苯甲酸、二棓酰二油酸酯、2，2-二羥基-4-甲氧基二苯酮、乙基-4-[二(羥丙基)]氨基苯甲酸、2-乙基己基-2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸酯、2-在己基水楊酸酯、甘油基對氨基苯甲酸酯、3，3，5-三甲基環(huán)己基水楊酸酯、甲基氨茴酸酯、對二甲基氨基苯甲酸、或氨基苯甲酸酯、2-乙基己基對二甲基氨基苯甲酸酯、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、2-(對二甲基氨基苯基)-5-磺基苯并噁唑酸及其混合物。
表I
也可采用微粒二氧化鈦、氧化鋅等無機(jī)防曬活性物及聚乙烯、聚酰胺(如尼龍)以及其它聚合物。防曬劑的含量(無論有機(jī)或無機(jī)物)一般占0.1-30％，優(yōu)選2-20％，最好4-10％重量。
載體還可以包括香精、抗氧化劑、遮光劑、防腐劑、著色劑及緩沖劑等添加劑。產(chǎn)品的配制、形式、應(yīng)用和包裝為配制本發(fā)明外用組合物，可以采用配制護(hù)膚產(chǎn)品的常用方式。即按常規(guī)方式將活性成分摻入適宜于皮膚的載體中。該活性成分可以首先溶解或分散在部分水或另一種溶劑或液體中，再摻入組合物中。優(yōu)選的組合物是水包油或油包水乳液。
該組合物可以是常規(guī)護(hù)膚產(chǎn)品的形式，例如霜劑、凝膠或洗液等。該組合物也可以是所謂“洗除型”產(chǎn)品，例如浴膠或淋浴膠，可含有沖洗時(shí)改善活性物與皮膚粘附性的輸送系統(tǒng)。最優(yōu)選的產(chǎn)品是“滯留型”產(chǎn)品，即涂于皮膚之后無需特意洗去的涂膚產(chǎn)品。
該組合物可以包裝成任何適宜形式，例如小罐、瓶子、管筒、滾球等常規(guī)形式。
該產(chǎn)品可如常規(guī)護(hù)膚產(chǎn)品一樣涂抹于皮膚上，例如可以每日1-3次涂于面部和/或手、臂等處。如果處理色斑，則使用者可以只將其有選擇性地涂于要處理的區(qū)域。根據(jù)皮膚的狀況、產(chǎn)品中活性成分的濃度、所涂產(chǎn)品量以及涂抹頻度，其皮膚增白作用通常在2-3個月后可明顯看出。本發(fā)明產(chǎn)品特別適宜于一般皮膚增白用，尤其是如果其中還含有防曬劑時(shí)，該產(chǎn)品擬用于日常使用。
為更易理解本發(fā)明，給出下面的實(shí)施例，但這些例子只為詳細(xì)說明之用。
實(shí)施例高溫堿處理紅花油，產(chǎn)生含有等量c9，t11和t10，c12 CLA異構(gòu)體的CLA異構(gòu)體混合物。采用白曲地絲菌作催化劑，以月桂醇進(jìn)行有擇性酯化反應(yīng)，從混合物中分離出富c9，t11 CLA的CLA化合物。酯化及分離之后，剩下的CLA游離酸是富t10，c12 CLA產(chǎn)物，將其分離出。CLA混合異構(gòu)體的制備“Analar試劑”(AR)氫氧化鈉(0.6kg)溶解于藥用級丙二醇(6kg)中，混合并加熱至80-85℃。將該樣品冷卻并加入2kg紅花油。使用標(biāo)準(zhǔn)中試規(guī)模裝置、170℃快速攪拌下將該混合物回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷至約95℃，減至中速攪拌，用1.280升35.5％鹽酸中和混合物(鹽酸系溶解于去離子水8升中)，保持90℃。使反應(yīng)物靜置分出水相。用2×1升5％AR鹽溶液和2×1升去離子水于90℃洗滌油相，棄去所有皂化物質(zhì)。將富含CLA的油狀物于100℃真空干燥，然后降至50℃，以包括Whatman濾器和薄層硅藻土-白色硅藻土助濾劑的瓷濾斗系統(tǒng)過濾。該CLA油狀混合異構(gòu)體于-25℃氮?dú)庵匈A存至需要時(shí)。富CLA c9.t11的制備(I)制備月桂酯將紅花油(2.0kg)加入2倍摩爾當(dāng)量月桂醇(1-十二醇；98％，來自Aldrich Chemicals)與5.96kg去離子水中。將溫度調(diào)至25℃，加入1％(w/w)預(yù)混有少量水的白曲地絲菌(購自日本Amano藥物公司)，激烈攪拌混合物。于44小時(shí)停止反應(yīng)。將反應(yīng)器加熱至80-90℃，分出水層，用去離子水洗滌油層，并于100℃下真空干燥30分鐘。將油狀物冷至50℃，用包括Whatman濾器及薄層硅薄土-白硅藻土助濾劑的瓷濾斗系統(tǒng)過濾。
(II)分離富t10，c12 CLA用分子蒸餾法，于135℃，以每分鐘25-35ml除去殘留的月桂醇。殘留物粗分成月桂酯(富含c9，t11 CLA)和游離酸(富含t10，c12CLA)，即以每分鐘25-35ml流速，于158℃蒸餾而分離。富t10，c12 CLA的析出于160-165℃，以20-30ml/min再次蒸餾步驟(II)的CLA游離酸，再除去酯成分。于131℃及25-30ml/min流速下再次除去殘留的月桂醇。為了除去所有殘留的月桂醇，使用SP392 Mucor miehei脂酶(5％，購自Novo Nordisk的批號Lux 0110產(chǎn)品)將游離醇與存在于反應(yīng)混合物中的脂肪酸酯化。采用分子蒸餾去，于155℃，15-20ml/min，將含脂肪酸的富t10，c12 CLA與月桂酯分離開。由該方法生成的富t10，c12 CLA的組成列于下表1中
表1
實(shí)施例2t10，c12 CLA甘油三酯的制備將實(shí)施例1制備的富t10，c12 CLA(10g)與1.01g(10.1％)甘油(購自Ellis和Everards的Pricerine 9083甘油CP)混合，加入0.5g(約5％)SP392 Mucor Meihie非特異性脂酶(購自Novo Nordisk，批號Lux0110)。真空下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，于60℃充少量氮?dú)庀聦⒒旌衔飻嚢琛?br> 96小時(shí)后停止反應(yīng)，在瓷濾斗上以硅藻土超濾助劑薄層將混合物過濾，收集CLA甘油三酯油相，其組成列于下表2
表2
實(shí)施例3測試方法*細(xì)胞保存B16-F1鼠黑素瘤細(xì)胞(美國典型培養(yǎng)物保存中心，馬里蘭州，USA)保留于75cm2培養(yǎng)燒瓶中，瓶中有RPMI培養(yǎng)基(ICN-Flow，cat.no.12-60-54)，補(bǔ)充有L-葡糖胺(4mM)和10％胎牛血清(FBS)，于37℃，飽含水，5％CO2大氣中。細(xì)胞每周傳代二次。*色素沉著測試將亞融合B16細(xì)胞以5000個細(xì)胞/孔密度接種于96孔微滴平板上，在含10％胎牛血清和1％青霉素/鏈霉素(不含酚紅)的DMEM(購自Life Tech.，NY)中，于37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)過夜。24小時(shí)后，以含試驗(yàn)化合物或載體(對照樣)的新鮮培養(yǎng)基置換原培養(yǎng)基。將細(xì)胞保溫72小時(shí)，此時(shí)對照樣孔中可看見黑色素。接著，將含黑色素的各孔中的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至清潔的96孔板中，以微板分光光度計(jì)(Dynatech MR5000)讀取530nm處的吸光度進(jìn)行定量分析，并針對新鮮培養(yǎng)基的基線吸光度進(jìn)行校正。因?yàn)樾?zhǔn)過的吸光度與黑色素濃度成正比，因此皮膚增白試驗(yàn)物質(zhì)的色素沉著百分比可計(jì)算如下％色素沉著＝(OD530試驗(yàn)物/OD530參照物)×100％其中OD530試驗(yàn)物和OD530參照物，分別表示來自試驗(yàn)樣品各孔中的培養(yǎng)基的經(jīng)校準(zhǔn)的平均吸光度，和來自沒有試驗(yàn)樣品各孔中的培養(yǎng)基的該吸光度。由試驗(yàn)化合物產(chǎn)生的色素沉著百分抑制作用為100-％色素沉著。*細(xì)胞存活率測試黑色素的生成可以通過抑制黑素產(chǎn)生而減少，但這也可能受細(xì)胞毒性或細(xì)胞增生影響。為試驗(yàn)是否出現(xiàn)這種情況，采用中性紅染料吸收作用來試驗(yàn)細(xì)胞存活率。中性紅是水溶性染料，它能穿過完整血漿膜，并在完整細(xì)胞的溶酶體中濃縮。中性紅染料的總吸收與培養(yǎng)物中的存活細(xì)胞數(shù)成正比。
從微滴平板上除去黑色素分析用的培養(yǎng)基之后，立即將200μl新鮮預(yù)溫?zé)岬闹行约t染料(購自Sigma，UK，Cat.Nr2889)(按25μg/ml摻有培養(yǎng)基)施加于細(xì)胞中，保溫3小時(shí)，使細(xì)胞保存。將平板倒置并以吸收紙輕拍，除去未被細(xì)胞吸收的染料。用200μl PBS洗滌細(xì)胞，再次除去。加入100μl溶劑(50％H2O、49％乙醇、1％乙酸)。20分鐘以后，于室溫下在微板振蕩器上將各板振蕩5秒種。按上述方法測定吸收度。試驗(yàn)下表3表明對皮膚增白試驗(yàn)物質(zhì)的評估和它們的用量。如上所述由試驗(yàn)物產(chǎn)生的對黑色素生成的抑制作用也反映在該表中。
小于對照樣品100％黑色素的值表示黑素生成抑制作用。表3結(jié)果表明含t10，c12 CAL異構(gòu)體的CLA能抑制黑色素的生成。
該試驗(yàn)中，試驗(yàn)物以DMEM按下表3所示量進(jìn)行稀釋。
該表中“CLA t10，c12”指CLA，其中總量的80.5％為其t10，c12異構(gòu)體，即本發(fā)明范圍內(nèi)的活性試劑，由上述實(shí)施例1制備。
表3
Student′s t-試驗(yàn)樣**p＜0.01*p＜0.05(n＝4)實(shí)施例4下述制劑是本發(fā)明的乳霜。
實(shí)施例5本發(fā)明含防曬制劑的皮膚用乳霜(水包油型)如下表所示
權(quán)利要求
1.一種外用組合物，含有(a)共軛亞油酸和/或其含共軛亞油酸部分的衍生物，其中有至少1％重量共軛亞油酸和/或共軛亞油酸部分以反10，順12式異構(gòu)體存在；以及(b)適宜于皮膚用的載體。
2.權(quán)利要求1的組合物，以組合物重量計(jì)含有0.00001％-50％，優(yōu)選0.01％-10％所述共軛亞油酸和/或其衍生物。
3.權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)的組合物，還含有防曬劑。
4.為增白皮膚的美容方法，所述方法包括將權(quán)利要求1、2或3的外用組合物涂于皮膚上。
5.共軛亞油酸和/或其含共軛亞油酸部分的衍生物，在增白人皮膚的外用組合物中的應(yīng)用，其中至少1％重量的共軛亞油酸和/或共軛亞油酸部分是反10，順12異構(gòu)體。
全文摘要
一種外用組合物含有(a)共軛亞油酸和/或其含共軛亞油酸部分的衍生物,其中有至少1%重量共軛亞油酸和/或共軛亞油酸部分以反10,順12式異構(gòu)體存在;以及(b)適宜于皮膚用的載體。該產(chǎn)品宜用于皮膚增白。
文檔編號A61K8/00GK1331579SQ99814875
公開日2002年1月16日 申請日期1999年11月23日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月22日
發(fā)明者S·阿拉盧夫, M·R·格林, 巖田功一, G·P·麥內(nèi)爾, J·R·波維爾, A·V·勞林斯 申請人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司