專利名稱：肽的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生理活性肽的用途。更具體地說，本發(fā)明涉及催產素分泌調節(jié)劑，該調節(jié)劑含有針對G蛋白偶聯型受體蛋白(又稱之為受體)的配體肽。
背景技術：
很多激素或神經遞質等通過細胞膜上特異性受體蛋白調節(jié)著生物機體的功能。很多這類受體蛋白通過活化它們所偶聯的鳥嘌呤核苷酸結合蛋白(以下簡稱G蛋白)而介導細胞內的信號傳遞。另外，這些受體具有一種共同結構，即一個7次跨膜區(qū)，并因此總稱為G蛋白偶聯型受體蛋白或7跨膜型受體蛋白(7TMR)。
這類G蛋白偶聯型受體蛋白有眾所周知的、由phGR3(或稱為GPR10)基因編碼的人型受體蛋白[Genomics，29，335(1995)]以及相應的大鼠型受體蛋白UHR-1[生物化學和生物物理學研究通訊，209，606(1995)]。
另外，眾所周知，PrRP[自然，393，272-276(1998)]作為生理活性肽以所述phGR3及UHR-1的配體發(fā)揮作用。
在體外垂體細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，PrRP有特異性針對垂體前葉激素的泌乳素釋放作用[自然，393，272-276(1998)]，但是其它的生理作用，尤其是對垂體后葉激素的影響還不清楚。調節(jié)垂體后葉激素即催產素的內源性調節(jié)激素至今還不明了。
發(fā)明公開本發(fā)明人為了解決上述問題，經過反復鉆研，所得結果如下首先制備了2種針對PrRP不同識別部位的特異性單克隆抗體，同時制備了PrRP的高敏感測定系統(tǒng)(夾心酶免疫分析系統(tǒng))(平成10年專利申請140293號、WO99/60112號)。用此測定系統(tǒng)研究了大鼠PrRP的組織分布，結果證明，除了曾報導的[自然，393，272(1998)]在下丘腦等處PrRP有高濃度分布，在垂體后葉中也存在著高濃度的PrRP。我們因此認為PrRP對垂體后葉激素的分泌具有一定的影響。同時又發(fā)現當將PrRP注入大鼠腦室內時血液中的催產素濃度增高，表明PrRP具有調節(jié)催產素釋放的作用。
具體地，本發(fā)明涉及，(1)一種催產素分泌調節(jié)劑，其含有針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽。
(2)(1)中所述催產素分泌調節(jié)劑，其中針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽為多肽、或其酰胺或其酯或其鹽，它們包括與SEQ ID NO44所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列。
(3)(2)中所述催產素分泌調節(jié)劑，其中SEQ ID NO44所示氨基酸序列為SEQ ID NO3、18或32。
(4)(1)中所述催產素分泌調節(jié)劑，其中針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽為多肽、或其酰胺或其酯或其鹽，它們包括與SEQ ID NO45所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列。
(5)(4)中所述催產素分泌調節(jié)劑，其中SEQ ID NO45所示氨基酸序列為SEQ ID NO6、21或35。
(6)(1)中所述催產素分泌調節(jié)劑，其含有一種促進催產素分泌的藥物。
(7)(6)中所述促進催產素分泌的藥物，其含有改善、預防或治療下列病癥的藥物，所述病癥有微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產或乳汁淤積。
(8)G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽的應用，其目的是調節(jié)催產素的分泌。
(9)G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽的應用，其目的是生產催產素分泌調節(jié)劑。
(10)一種調節(jié)催產素分泌的方法，其特征為，將針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽投藥于具有與催產素分泌不足相關的疾病的哺乳動物。


圖1為PrRP(19P2-L31)在大鼠組織中的含量圖2為將10nmol PrRP(19P2-L31)注入大鼠腦室內時血液中催產素濃度的變化。
實施發(fā)明的最佳方案在說明書和附圖中，堿基和氨基酸的代碼使用IUPAC-IUB生化命名委員會規(guī)定的或本領域通用的代碼，如下例所示。對于有光學異構體的氨基酸，除非特別說明，均指L形式。
DNA 脫氧核糖核酸cDNA 互補的脫氧核糖核酸A 腺嘌呤T 胸腺嘧啶G 鳥嘌呤C 胞嘧啶RNA 核糖核酸mRNA 信使核糖核酸ATP 腺苷三磷酸EDTA 乙二胺四乙酸SDS 十二烷基硫酸鈉EIA 酶免疫測定Gly或G甘氨酸Ala或A丙氨酸Val或V纈氨酸Leu或L亮氨酸Ile或I異亮氨酸Ser或S絲氨酸Thr或T蘇氨酸Cys或C半胱氨酸Met或M蛋氨酸
Glu或E 谷氨酸Asp或D 天冬氨酸Lys或K 賴氨酸Arg或R 精氨酸His或H 組氨酸Phe或F 苯丙氨酸Tyr或Y 酪氨酸Trp或W 色氨酸Pro或P 脯氨酸Asn或N 天冬酰胺Gln或Q 谷氨酰胺pGlu 焦谷氨酸Me 甲基Et 乙基Bu 丁基Ph 苯基用下列符號表示本說明書中多次使用的取代基、保護基以及試劑BHA二苯甲基胺pMBHA 對甲基二苯甲基胺Tos對甲苯磺酰基CHO甲?；鵋ONB N-羥基-5-降冰片烯基-2，3-二羧基亞胺OcHex 環(huán)己酯Bzl芐基Cl2-Bzl二氯芐基Bom芐氧甲基Z 芐氧羰基Br-Z 2-溴芐氧羰基Boc叔丁氧基羰基DCM二氯甲烷HOBt 1-羥基苯并三唑
DCC N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺TFA 三氟乙酸DIEA 二異丙基乙胺Fmoc N-9-芴基甲氧基羰基DNP 二硝基苯基Bum 叔丁氧甲基Trt 三苯甲基在本發(fā)明書中所說[基本相同]是指，多肽的活性(例如，配體與受體的結合活性等)或者多肽的催產素分泌調節(jié)作用(例如，促進催產素分泌作用、抑制催產素分泌作用等)等基本一致。因此，所說[基本相同]的氨基酸序列是指氨基酸序列突變后，多肽活性(如配體和受體的結合活性)或多肽的催產素分泌調節(jié)作用(例如，促進催產素分泌作用、抑制催產素分泌作用等)等基本一致(沒有顯著變化)。
眾所周知，像多肽序列中氨基酸的置換、缺失或插入(添加)等的變異常常對其多肽生理特性或化學特性不會帶來很大(顯著)影響。這類置換的例子有，一種氨基酸被性質(特性)相似的另一種氨基酸所置換，通常認為，互相置換氨基酸之間相似性越大，置換對原來多肽特性的影響越小。
氨基酸根據其特性的相似性可如下分類(i)非極性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸等。(ii)極性(中性)氨基酸包括甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺等。(iii)帶正電荷(堿性)氨基酸包括精氨酸、賴氨酸、組氨酸等。(iv)帶負電荷(酸性)氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸等。
在本說明書中，與靶氨基酸序[基本相同]的置換者大多是從氨基酸所屬分類中特性類似的其他氨基酸中選出的。
在本發(fā)明中，氨基酸序列中置換、缺失或插入等變異沒有對原來(未變異)多肽的生理活性或化學特性帶來重大(顯著)變化時，所得多肽(變異型多肽)被看作與原來(無變異)的多肽基本相同，而且變異型多肽的氨基酸序列被看作與原來(無變異)的多肽基本相同。
構成本發(fā)明多肽的氨基酸可為D構型或L構型，若沒有特別說明優(yōu)選L構型。
本發(fā)明多肽是一種針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其酰胺或其酯或其鹽，具體地，是一種能夠與G蛋白偶聯型受體蛋白結合的配體多肽或其酰胺或其酯或其鹽，具體實例為，含有與SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列的多肽或其酰胺或其酯或其鹽(以下，通常簡稱為配體多肽或多肽)。
其中，所說G蛋白偶聯型受體蛋白是一種具有共同的7跨膜區(qū)結構的受體蛋白，大多數受體蛋白通過活化它們所偶聯的鳥嘌呤核苷酸結合蛋白而介導細胞內的信號傳遞。
SEQ ID NO44所示氨基酸序列優(yōu)選包括SEQ ID NO3、18或32所示氨基酸序列，尤其優(yōu)選SEQ ID NO32所示的氨基酸序列。
SEQ ID NO45所示氨基酸序列優(yōu)選包括SEQ ID NO6、21或35所示氨基酸序列，尤其優(yōu)選SEQ ID NO35所示的氨基酸序列。
本發(fā)明的多肽來自于人或溫血動物(例如，豚鼠、大鼠、小鼠、豬、山羊、牛、猴子等)的所有組織(例如，垂體、胰腺、腦、腎臟、肝臟、生殖腺、甲狀腺、膽囊、骨髓、副腎、皮膚、肌肉、肺、消化道、血管、心臟等)或細胞等，具體地說，其多肽可以是含有與SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列、優(yōu)選與SEQ ID NO3、18或32或者與SEQ IDNO6、21或35所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列的多肽。
例如，本發(fā)明所述配體多肽的實例包括含有SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列、優(yōu)選含有SEQ ID NO3、18或32或者SEQ ID NO6、21或35所示氨基酸序列的多肽等，另外，還包括與SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列、優(yōu)選與SEQ ID NO3、18或32或者與SEQ ID NO6、21或35所示氨基酸序列的同源性約為50-99.9％(優(yōu)選70-99.9％、更優(yōu)選80-99.9％、最優(yōu)選90-99.9％)的多肽，更優(yōu)選包括與SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列、優(yōu)選與SEQ ID NO3、18或32或者與SEQID NO6、21或35所示氨基酸序列的活性基本相同的多肽。所述活性有，受體結合活性、信號傳導活性等配體多肽所具有的活性。[基本相同]活性是指，諸如受體結合活性等特性相同。因此，該受體結合活性可略大或略小，配體多肽分子量的不同不影響其結合活性。來自人或溫血動物同屬的基本相同肽可能會有差異，這些差異源于此肽的非固有氨基酸，它們在指定種內有差異(如個體差異)，這些具有非固有氨基酸序列差異的肽也包括在本發(fā)明的多肽中。
下面詳細說明本發(fā)明配體多肽的制造方法和用途。
作為本發(fā)明配體多肽，其具體實例有，來自大鼠、牛、人或小鼠的多肽，其含有SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列(在SEQ ID NO44中第3位的Xaa為Thr或Ala，第5位的Xaa為Arg或Gln，第10位的Xaa為Ile或Thr，第21位的Xaa為Thr或Ala，第22位的Xaa為Gly或Ser，在SEQ ID NO45中，第10位的Xaa為Thr或Ala，第11位的Xaa為Gly或Ser)。
本發(fā)明的配體多肽還包括含下列氨基酸序列的多肽或其酰胺或其酯或其鹽(i)SEQ ID NO44所示氨基酸序列中1-15個，優(yōu)選1-10個，更優(yōu)選1-5個氨基酸被其他氨基酸所置換的氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO44所示氨基酸序列中缺失1-23個氨基酸，優(yōu)選1-16個，更優(yōu)選1-11個的氨基酸序列；(iii)SEQ ID NO44所示氨基酸序列中添加(插入)1-15個氨基酸，優(yōu)選1-10個，更優(yōu)選1-5個的氨基酸序列；和(iv)(i)、(ii)或(iii)中所述組成多肽(尤其是其側鏈)的氨基酸被修飾的氨基酸序列。
本發(fā)明的配體多肽還包括含下列氨基酸序列的多肽或其酰胺或其酯或其鹽(v)SEQ ID NO45所示氨基酸序列中1-10個，優(yōu)選1-5個氨基酸被其他氨基酸所置換形成的氨基酸序列；(vi)SEQ ID NO45所示氨基酸序列中缺失1-10個，優(yōu)選1-5個氨基酸形成的氨基酸序列；(vii)SEQ ID NO45所示氨基酸序列中添加(插入)1-10個氨基酸，優(yōu)選1-5個所形成的氨基酸序列；(viii)(v)、(vi)或(vii)中所述組成多肽(尤其是其側鏈)的氨基酸被修飾而形成的氨基酸序列。
本發(fā)明的配體多肽，通過在其氨基酸序列中實施或使之偶發(fā)(i)至(viii)所述的置換、缺失、添加、修飾等可以導致該配體多肽發(fā)生變異(改變)，使之成為對熱或蛋白水解酶處理能保持穩(wěn)定的穩(wěn)定型配體多肽，或成為高活性的高活性型配體多肽，其中配體多肽的固有生理活性增強。本發(fā)明的配體多肽或其酰胺或其酯或其鹽也包含這些變異型配體多肽。
在本說明中，按照對肽的通常描述，左端為N末端(氨基端)，右端為C末端(羧基端)。
本發(fā)明多肽中氨基酸的修飾包括，例如，Gln的N端在生物機體內被切割，該Gln成為焦谷氨酸。
本發(fā)明的多肽，如SEQ ID NO44或45所示多肽其C末端氨基酸殘基的α-羧基通常為羧基(-COOH)或羧酸根(-COO-)，但是C末端氨基酸殘基的該羧基也可以為酰胺(-CONH2)或酯(-COOR)。其中-COOR所示酯中的R有，例如，C1-6烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、或正丁基；C3-8環(huán)烷基包括環(huán)戊基和環(huán)己基等；C6-12芳基包括苯基和α-萘基等；苯基-C1-2烷基如苯甲基、苯乙基等；C7-14芳烷基如a-萘基C1-2烷基，其又如α-萘甲基，或二苯基C1-2烷基，其又如二苯甲基，此外還有通常適用于口服給藥的酯如三甲基乙酰氧甲基。
本發(fā)明的多肽，如SEQ ID NO44或45所示多肽，還包括具有除C末端以外的羧基或羧酸根但這些基團己酰胺化或酯化的多肽。此時的酯基與所述C末端氨基酸殘基的酯基相同。
作為本發(fā)明配體多肽最優(yōu)選C末端氨基酸殘基的羧基為酰胺。其中優(yōu)選含有SEQ ID NO3、6、18、21、32或35所示氨基酸序列且C末端氨基酸殘基的羧基為酰胺的多肽。
本發(fā)明多肽可以與生理上可接受的堿(如堿金屬)或酸(如無機酸或有機酸)形成鹽，優(yōu)選生理上可接受的酸加成鹽。這類鹽有，與無機酸(例如，鹽酸、磷酸、氫溴酸、硫酸)形成的鹽，或與有機酸(例如，乙酸、甲酸、丙酸、延胡索酸、馬來酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸)形成的鹽等。
本發(fā)明配體多肽可通過(i)從人或其它溫血動物細胞或組織純化多肽的方法，(ii)公知的多肽合成方法，(iii)培養(yǎng)含所述多肽之編碼DNA的轉化體來制備。
(i)當從人或溫血動物組織或細胞中制備該配體多肽時，首先將人或溫血動物組織或細胞勻漿，然后用酸等抽提，通過反向層析、離子交換層析、親和層析法等多種層析技術的聯用來分離純化該抽提物。
(ii)該配體多肽又可用公知的多肽合成方法制備。例如可以用固相合成法或液相合成法。即，能夠構成配體多肽的部分肽或氨基酸與剩余部分縮合，當其產物有保護基時，除去保護基團，由此可以制備目的肽。此時的公知縮合方法或除去保護基團的方法見下列1)-5)1)M.Bodanszky和MA.Ondetti肽的合成，Interscience Publishers，紐約(1966)2)Schroeder和Luebke肽，Academic Press，紐約(1965)3)泉屋信夫等多肽合成的基礎與實驗，丸善公司(1975)4)矢島治明和原俊平生物化學實驗教材1，蛋白質化學IV，205(1977)5)矢島治明主編藥物開發(fā)續(xù)篇，卷14，肽合成，廣川書店其中(ii)中所述配體多肽合成法的具體實例如下。
為了合成本發(fā)明配體多肽的酰胺物，可以使用可用于肽合成的樹脂，它適合酰胺形式。這類樹脂的實例包括氯甲基樹脂、羥甲基樹脂、二苯甲胺樹脂、氨甲基樹脂、4-芐氧基苯甲醇樹脂，4-甲基二苯甲胺樹脂，PAM樹脂，4-羥甲基甲苯乙酰胺甲基樹脂，聚丙烯酰胺樹脂，4-(2′，4′-二甲氧基苯羥甲基)苯氧基樹脂以及4-(2′，4′二甲氧苯基-Fmoc-氨乙基)苯氧基樹脂。這些樹脂可用于與α-氨基及氨基酸側鏈上受到相應保護的功能基團，在樹脂上按目標多肽的序列順序，用本領域公知的各種縮合方法縮合。反應結束時，將多肽從樹脂上切除下來，同時除去各種保護基團，以獲得目標多肽。進行上述受保護氨基酸的縮合反應時，可使用多肽合成的多種活化試劑，但優(yōu)選使用碳二亞胺。碳二亞胺實例有DCC、N，N′-二異丙基碳二亞胺以及N-乙基-N′-(3-二甲基氨基脯氨?；?碳二亞胺。
用這些試劑活化時，直接在樹脂上添加受保護的氨基酸及外消旋抑制劑(例如，HOBt)，或先將受保護的氨基酸活化為相應酸酐、HOBt酯或HOOBt酯，然后添加到樹脂上。適用于受保護氨基酸的活化反應或適用于與樹脂的縮合反應的溶劑選自已知可用于肽縮合反應的溶劑。這樣的溶劑有酰胺類如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺以及N-甲基吡咯烷酮等；鹵化烴類如二氯甲烷和氯仿等；醇類如三氟乙醇等；亞砜類如二甲亞砜等；叔胺類如吡啶等、醚類如二烷和四氫呋喃等；腈類如乙腈和丙腈等；酯類如乙酸甲酯和乙酸乙酯等；以及這些溶劑的適當混合物。反應溫度從已知適用于肽成鍵反應的范圍中選取，通常選約-20℃-50℃?；罨陌被嵫苌锿ǔＲ赃^量1.5～4倍的量使用。用茚三酮反應檢驗所述縮合反應程度；當所述縮合不充分時，可通過不除去保護基團而重復縮合反應來完成。當即使重復反應后仍未充分縮合時，用乙酸酐或乙酰咪唑將未反應的氨基酸乙?；韵龑罄m(xù)反應的可能負影響。
用于該肽合成時保護初始氨基的保護基團有，例如Z、Boc、叔戊氧基羰基、異冰片基氧羰基、4-甲氧芐氧羰基、Cl-Z、Br-Z、金剛烷(adamantyl)氧基羰基，三氟乙?；?、鄰苯二甲?；?、甲酰基、2-硝基苯基亞硫?；?、二苯硫膦基，以及Fmoc。其羧基的保護基團有，例如所述的C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C7-14芳烷基、2-金剛烷基、4-硝基芐基、4-甲氧芐基、4-氯芐基、苯甲酰甲基，芐氧羰基酰肼基、叔丁氧羰基酰肼基以及三苯甲基酰肼基。
絲氨酸以及蘇氨酸的羥基可以通過例如酯化作用或醚化作用來保護。適于酯化作用的基團有低級C1～6烷?；缫阴；?，芳?；绫郊柞；约皝碜蕴妓岬幕鶊F如芐氧羰基和乙氧羰基。適于醚化的基團有苯甲基、四氫吡喃基和叔丁基。
適于保護酪氨酸中酚羥基的基團有，例如Bzl、Cl2-Bzl、2-硝基芐基、Br-Z和叔丁基。
適于保護組氨酸中咪唑基的基團有，Tos、4-甲氧-2，3，6-三甲基苯磺酰基、DNP、芐氧甲基、Bum、Boc、Trt和Fmoc。
本發(fā)明配體多肽包括任何含有突變氨基酸序列的多肽，只要其催產素分泌調節(jié)作用與SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列的多肽作用相同。這類肽可為，例如在具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列的肽中，缺失了1-20個氨基酸的肽。具體地優(yōu)選下列肽，例如，(a)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第2位至第31位氨基酸序列的多肽；(b)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第3位至第31位氨基酸序列的多肽；(c)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第4位至第31位氨基酸序列的多肽；(d)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第5位至第31位氨基酸序列的多肽；(e)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第6位至第31位氨基酸序列的多肽；(f)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第7位至第31位氨基酸序列的多肽；(g)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第8位至第31位氨基酸序列的多肽；(h)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第9位至第31位氨基酸序列的多肽；(i)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第10位至第31位氨基酸序列的多肽；(j)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第11位至第31位氨基酸序列的多肽；(k)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第12位至第31位氨基酸序列的多肽；(l)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第13位至第31位氨基酸序列的多肽；(m)具有SEQ IDNO44所示氨基酸序列中第14位至第31位氨基酸序列的多肽；(n)具有SEQID NO44所示氨基酸序列中第15位至第31位氨基酸序列的多肽；(o)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第16位至第31位氨基酸序列的多肽；(p)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第17位至第31位氨基酸序列的多肽；(q)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第18位至第31位氨基酸序列的多肽；(r)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第19位至第31位氨基酸序列的多肽；(s)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第20位至第31位氨基酸序列的多肽；(t)具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列中第21位至第31位氨基酸序列的多肽。
SEQ ID NO44所示氨基酸序列的優(yōu)選實例為SEQ ID NO3、18或32，它們具有SEQ ID NO44所示氨基酸序列。
實例還包括在SEQ ID NO45所示氨基酸序列中缺失了1-10個氨基酸的氨基酸序列的肽。具體優(yōu)選下列肽例如，(a)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第2位至第20位氨基酸序列的多肽；(b)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第3位至第20位氨基酸序列的多肽；(c)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第4位至第20位氨基酸序列的多肽；(d)具有SEQ IDNO45所示氨基酸序列中第5位至第20位氨基酸序列的多肽；(e)具有SEQID NO45所示氨基酸序列中第6位至第20位氨基酸序列的多肽；(f)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第7位至第20位氨基酸序列的多肽；(g)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第8位至第20位氨基酸序列的多肽；(h)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第9位至第20位氨基酸序列的多肽；(i)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第10位至第20位氨基酸序列的多肽；(ii)具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列中第11位至第20位氨基酸序列的多肽。
作為SEQ ID NO45所示氨基酸序列的優(yōu)選例的SEQ ID NO6、21或35包括具有SEQ ID NO45所示氨基酸序列的那些。
本發(fā)明的配體多肽可以和其他蛋白質(如功能或性質為眾所周知的蛋白質)形成融合蛋白。
編碼本發(fā)明配體多肽的DNA可為任意一種DNA，只要它們編碼的多肽有與本發(fā)明SEQ ID NO44或45所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列。所述DNA可以是基因組DNA、基因組DNA文庫、細胞或組織的cDNA、細胞或組織的cDNA文庫、或合成DNA。用于上述文庫的載體可以為噬菌體、質粒、粘粒以及噬菌粒中的任意一種。從細胞或組織中制備的RNA級分可通過反轉錄聚合酶鏈反應(以下簡稱為RT-RCR)直接擴增。
更具體地說，編碼來自大鼠腦部或牛下丘腦的含有SEQ ID NO1或15氨基酸序列的多肽的DNA，一般使用具有SEQ ID NO2所示堿基序列的DNA等。
此時，在SEQ ID NO2中第129位的R為G或A，第179位及240位的Y為C或T。當第179位的Y為C時，編碼SEQ ID NO1所示的氨基酸序列，當第179位的Y為T時，編碼SEQ ID NO15所示的氨基酸序列。
編碼含有SEQ ID NO3、4、5、6、7或8所示氨基酸序列并來自牛的多肽的DNA，使用具有SEQ ID NO9、10、11、12、13或14所示堿基序列的DNA等。
此時，在SEQ ID NO9、10、11中第63位的R及SEQ ID NO12、13、14中第29位的R為G或A。
編碼含有SEQ ID NO8、18、19、20、21、22或23所示氨基酸序列并來自大鼠的多肽的DNA，使用具有SEQ ID NO17、24、25、26、17、28或29所示堿基序列的DNA等。
編碼含有SEQ ID NO30、32、33、34、35、36或37所示氨基酸序列并來自人的多肽的DNA，使用具有SEQ ID NO31、38、39、40、41、42或43所示堿基序列的DNA等。
又，在編碼本發(fā)明含有SEQ ID NO1或SEQ ID NO15所示氨基酸序列的牛型多肽、SEQ ID NO16所示氨基酸序列的大鼠型多肽或SEQ ID NO30所示氨基酸序列的人型多肽的DNA中，優(yōu)選使用含有其部分堿基序列的DNA片段例如6-90個堿基(優(yōu)選6-60個，更優(yōu)選9-30個，最優(yōu)選12-30個)作DNA檢測探針。
(iii)使用下列遺傳工程方法可以制造編碼本發(fā)明多肽的DNA完全編碼本發(fā)明多肽的DNA按照下列方法進行克隆。即，(1)首先合成含有針對本發(fā)明多肽部分堿基序列的DNA，用該DNA作為引物，再根據公知的PCR擴增完全編碼該多肽的DNA，或者(2)將所述DNA片段插入適當載體獲得的cDNA、基因組DNA、或DNA文庫可通過與標記物雜交來進行篩選，所述標記物用具有所述配體多肽的部分或全部區(qū)域的DNA片段或合成DNA標記。雜交反應可以根據分子克隆第二版(J.Sambrook等，冷泉港實驗室出版社，1989)描述的方法進行。也可用商品化的DNA文庫根據所附說明書進行雜交。
已經克隆的編碼該多肽的DNA，既可直接使用，也可根據需要，在用限制酶消化后或連接一接頭DNA之后使用。該DNA可能在5′端包含ATG作為翻譯起始密碼子，而在3′端有TAA、TGA或TAG作為翻譯終止密碼子。這些翻譯起始和終止密碼子也可加上合適的合成DNA接頭。
含有編碼所述多肽之堿基序列的DNA的表達載體可通過以下方法生產，例如，(a)從編碼本發(fā)明多肽的DNA上切下所需DNA片段，并且(b)將該DNA片段連接到一合適公知載體上的啟動子下游。
可以使用的載體包括大腸桿菌質粒(例如，pBR322、pBR325、pUC12、pUC13)、枯草芽孢桿菌質粒(例如，pUB110、pTP5、pC194)、酵母質粒(例如，pSH19、pSH15)、噬菌體如λ噬菌體等、動物病毒如反轉錄病毒、痘苗病毒、桿狀病毒等。本發(fā)明所使用的啟動子可以是任意啟動子，只要它能在用于表達靶多肽的宿主中發(fā)揮功能。
如果轉化宿主為大腸桿菌屬的細菌，優(yōu)選的啟動子有trp啟動子、lac啟動子、recA啟動子、λPL啟動子、lpp啟動子等。在使用枯草芽孢桿菌屬的細菌作宿主時，優(yōu)選的啟動子有SPO1啟動子、SPO2啟動子和penP啟動子等。在用酵母作宿主時，優(yōu)選的啟動子有PHO5啟動子、PGK啟動子、GAP啟動子和ADH啟動子等。在使用動物細胞作為宿主時，分別優(yōu)選SV40啟動子、反轉錄病毒啟動子、金屬硫蛋白啟動子、熱休克啟動子、巨細胞病毒啟動子、SRα啟動子。另外，為了更有效地表達編碼目標多肽的基因優(yōu)選使用增強子。
必要時，可在多肽或其部分肽的N-端加上同宿主匹配的信號序列。在用大腸桿菌屬細菌作宿主時，可以使用的信號序列為堿性磷酸酶信號序列、OmpA信號序列等；當用枯草芽孢桿菌屬的細菌作宿主時，可以使用的信號序列為α-淀粉酶信號序列、枯草芽孢桿菌蛋白酶信號序列等；在用酵母作宿主時，可以使用的信號序列為交配因子α信號序列、轉化酶信號序列等；在用動物細胞作宿主時，可以使用的信號序列為胰島素信號序列、α干擾素信號序列、抗體分子信號序列等。使用如此構建的含有編碼所述多肽或其部分肽的DNA序列的載體可獲得轉化體。
可用于轉化的宿主有，公知的大腸桿菌屬的細菌、枯草芽孢桿菌屬的細菌、酵母、昆蟲細胞以及動物細胞等。
大腸桿菌屬的細菌有，大腸桿菌(Escherichia coli)K12 DH1(美國國家科學院院刊，60，160(1968))、JM103(核酸研究，9，309(1981))、JA221(分子生物學雜志，120，517(1978))、HB101(分子生物學雜志，41，459(1969))、C600(遺傳學，39，440(1954))等。
枯草芽孢桿菌屬的細菌有，枯草芽孢桿菌MI114(基因，24，255(1983))、207-21(生物化學雜志，95，87(1984))等。
酵母有，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AH22、AH22R-、NA87-11A、DKD-5D、20B-12等。
昆蟲的例子有家蠶的幼蟲(前田等，自然，315，592(1985))。
動物細胞有猴COS-7細胞、Vero細胞、中華倉鼠細胞CHO、dhfr基因缺陷的中華倉鼠細胞CHO(以下，簡稱dhfr-CHO細胞)、小鼠L細胞、小鼠骨髓瘤細胞、人FL細胞等。
大腸桿菌屬的細菌可以根據[美國國家科學院院刊，69，2110(1972)或基因，17，107(1982)]中描述的方法進行轉化。
枯草芽孢桿菌屬的細菌可以根據[分子及普通遺傳學，168，111(1979)]中描述的方法進行轉化。
酵母可以根據[美國國家科學院院刊.，75，1929(1978)]中描述的方法進行轉化。
昆蟲細胞可以根據[生物/技術，6，47-55(1988)]中描述的方法進行轉化。
動物細胞的轉化可以根據[病毒學，52，456(1973)]中描述的方法進行。
由此，可以獲得用含有多肽之編碼DNA的表達載體轉化的轉化體。
當培養(yǎng)大腸桿菌或枯草芽孢桿菌的轉化體時，用于培養(yǎng)的培養(yǎng)基優(yōu)選液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有轉化體生長所必需的物質例如碳源、氮源、無機物等。碳源包括葡萄糖、糊精、可溶性淀粉、蔗糖等。氮源包括無機或有機物質如銨鹽、硝酸鹽、玉米漿、蛋白胨、酪蛋白、肉汁、黃豆餅粉、馬鈴薯提取物等。無機物又包括氯化鈣、磷酸二氫鈉、氯化鎂等。需要時可在培養(yǎng)基中也可加入酵母提取液、維生素、促生長因子等。培養(yǎng)基的pH值優(yōu)選約5-8。
用于培養(yǎng)大腸桿菌屬細菌的培養(yǎng)基優(yōu)選為，加有葡萄糖和酪蛋白氨基酸的M9培養(yǎng)基(Miller，分子遺傳學實驗雜志，431-433，冷泉港實驗室，紐約，1972)。必要時，可以在培養(yǎng)基中加入化學試劑如3β-吲哚基丙烯酸，來有效激活啟動子。當用大腸桿菌屬的細菌作為轉化宿主時，轉化體通常在大約15-43℃培養(yǎng)約3-24小時。必要時，培養(yǎng)物可以進行充氣或攪拌。
當用枯草芽孢桿菌屬的細菌作為轉化宿主時，轉化體通常在大約30-40℃培養(yǎng)約6-24小時。必要時，培養(yǎng)物可以進行充氣或攪拌。
當用酵母作為宿主時，轉化體培養(yǎng)在，例如Burkholder氏基本培養(yǎng)基(Bostian，K.L.等，美國國家科學院院刊，77，4505(1980))上或加了0.5％酪蛋白氨基酸的SD培養(yǎng)基(Bitter，G.A.等，美國國家科學院院刊，81，5330(1984))上。
優(yōu)選培養(yǎng)基pH值調節(jié)到大約5-8。轉化體通常在大約20-35℃培養(yǎng)約24-72小時。必要時，培養(yǎng)物可以進行充氣或攪拌。
當用昆蟲作為宿主時，轉化體培養(yǎng)在，例如Grace’s昆蟲培養(yǎng)基(Grace，T.C.C.，自然，195，788(1962))上，其中添加有10％滅活型胎牛血清等適當添加劑。優(yōu)選培養(yǎng)基pH值調節(jié)到大約6.2-6.4。轉化體通常在大約27℃培養(yǎng)大約3-5天。必要時，培養(yǎng)物可以進行充氣或攪拌。
當用動物細胞作為宿主時，轉化體培養(yǎng)在，例如含有大約5-20％胎牛血清的MEM培養(yǎng)基(科學，122，501(1952))、DMEM培養(yǎng)基(病毒學，8，396(1959))、RPMI 1640培養(yǎng)基(美國醫(yī)學會雜志，199，519(1967))、199培養(yǎng)基(Proceeding ofthe Society f或the Biological Medicine，73，1(1950))等上。優(yōu)選培養(yǎng)基pH值調節(jié)到大約6-8。轉化體通常在大約30-40℃培養(yǎng)大約15-60小時。必要時，培養(yǎng)物可以進行充氣或攪拌。
可以根據下述方法從上述培養(yǎng)物(培養(yǎng)液以及培養(yǎng)的細菌細胞或培養(yǎng)細胞)中分離純化多肽。
在培養(yǎng)后，用眾所周知的方法收集轉化體或細胞，懸浮在一合適的緩沖液中，從中抽提本發(fā)明的多肽。然后用眾所周知的方法破碎轉化體或細胞，如超聲處理、溶菌酶處理和/或反復凍溶等，然后離心、過濾，獲得本發(fā)明多肽或其部分肽的粗提物。此過程的緩沖液還可包含蛋白變性劑如尿素或鹽酸胍、或表面活性劑如Triton X-100(和光純藥(株)注冊商標下文簡化為TM)等。
當多肽分泌在培養(yǎng)液中時，在培養(yǎng)結束后，用眾所周知的方法使轉化體或細胞與上清分離，收集上清即為多肽。
包含在所獲抽提物中的上清或多肽可通過將已知的分離和純化方法適當組合來進行純化。這些眾所周知的分離純化方法包括，(1)利用溶解性差異的方法如鹽析、溶劑沉淀等；(2)主要利用分子量差異的方法如透析、超濾、凝膠過濾、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳等；(3)利用電荷差異的方法如離子交換層析等；(4)利用特異性親和力差異的方法如親和層析等；(5)利用疏水性差異的方法例如反相高效液相色譜等；(6)利用等電點差異的方法如等電聚焦電泳或層析聚焦等。
當如此獲得的多肽為游離形式時，可用眾所周知的方法或其改良法將其轉換為鹽。相反，當獲得的多肽為鹽時，可用眾所周知的方法或改良法將其轉換為游離形式或另一種鹽形式。
多肽在純化前或純化后可根據需要用相應蛋白修飾酶處理，或者將所述多肽的序列部分去除。這種蛋白修飾酶的例子包括胰酶、胰凝乳蛋白酶、精氨酰內肽酶、蛋白激酶、糖苷酶等。所得變異多肽的活性，可通過對受體的結合試驗和利用特異性抗體的酶免疫分析法測定。
本發(fā)明配體多肽具有調節(jié)催產素分泌的作用，即，它具有促進和抑制催產素分泌的作用。如后文實施例所述，本發(fā)明配體多肽具有促進催產素分泌的作用，并因此可作為與催產素分泌不足相關的各種疾病的預防與治療藥物。另一方面，本發(fā)明配體多肽與其受體蛋白的親和性很強，所以若增加投藥量，將產生對催產素分泌的不敏感性，從而抑制催產素的分泌。因此它可作為與催產素分泌過多相關的各種疾病的預防與治療藥物。
因此，本發(fā)明配體多肽，作為促進催產素分泌的一種藥物，可用于緩解、預防、或治療與催產素分泌相關的各種疾病，如微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、乳汁淤積、引產、乳汁分泌不足、不孕癥、痛經、流產、外傷后緊張綜合征等，優(yōu)選微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、乳汁淤積等，最優(yōu)選微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全等。
本發(fā)明配體多肽還可作為抑制催產素分泌的一種藥物，用于改善、預防與治療與催產素分泌相關的各種疾病，如過強陣痛、強直性子宮收縮、胎兒窒息、子宮破裂、頸管裂傷、早產、普-威綜合征、痛經等，優(yōu)選過強陣痛、強直性子宮收縮、胎兒窒息、子宮破裂、頸管裂傷、早產、普-威綜合征等。
本發(fā)明配體多肽還可作為檢測試劑用于研究催產素分泌功能，以及用作促進乳汁分泌等的動物藥物用于牛、山羊、豬等牲畜類哺乳動物。還可用于有用物質的生產，所述物質由產乳動物產生并分泌到其乳汁中。
用作所述醫(yī)藥組合物或動物藥物的本發(fā)明配體多肽可以按照常規(guī)方法實施。例如，可以以糖包衣片劑、膠囊、酏劑、微膠囊等劑型口服，或以注射劑如水或其它可藥用液體中的無菌溶液或懸浮液形式經非胃腸道給藥。例如，可將配體多肽或其鹽與生理學上可接受的已知載體、調味劑、賦形劑、載色劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、粘合劑等制成藥劑常用的單位劑型?？刂浦苿┲械幕钚猿煞质沟迷诮o定范圍內獲得合適劑量。
可與片劑、膠囊等混合的添加劑包括，粘和劑如明膠、玉米淀粉、西黃耆膠和金合歡膠；賦形劑如結晶纖維素；膨脹劑如玉米淀粉、明膠和藻酸；潤滑劑如硬脂酸鎂；甜味劑如蔗糖、乳糖和糖精；調味劑如薄荷、akamono oil和櫻桃。當單位劑型為膠囊形式時，可進一步將液體載體如油或脂肪同上述添加劑一起使用。可根據常規(guī)制藥方法制備注射用無菌組合物，例如將活性成分與天然植物油如芝麻油或椰子油等溶解或懸浮在載體，如注射用的水中來制備藥物。
用于注射的液體介質的例子包括，生理鹽水、含葡萄糖或其它輔助制劑(如D-山梨醇、D-甘露醇和氯化鈉等)的等滲溶液，并可以進一步同合適的助溶劑如醇(如乙醇等)、聚醇(如丙二醇和聚乙二醇等)、非離子表面活性劑(如聚山梨酸酯(Polysorbate)80TM和HCO-50等)等結合使用。油性介質有芝麻油和豆油，它們可與助溶劑如苯甲酸芐酯和苯甲醇結合使用。此外，可進一步與緩沖液(例如磷酸鹽緩沖液和乙酸鈉緩沖液等)、鎮(zhèn)靜劑(例如苯扎氯胺和鹽酸普魯卡因等)、穩(wěn)定劑(如人血清白蛋白、聚乙二醇等)、防腐劑(例如苯甲醇、酚等)、抗氧化劑等結合使用。由此制備的注射液體一般經無菌操作裝在合適的安瓿中。
如此所獲制劑安全、低毒，因此可投藥于人或其它哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、綿羊、豬、牛、貓、狗、猴、狒狒、黑猩猩等)。
本發(fā)明多肽的劑量依賴于病癥等而異，當口服給藥時，一般對于臨產的微弱陣痛孕婦(體重60kg)來說，一次正常劑量為，大約0.1-100mg，優(yōu)選大約1.0-50mg，更優(yōu)選約1.0-20mg。當非胃腸道給藥時，其一次投藥量依賴于給藥受體、癥狀、投藥方法等而變，例如以針劑給藥時，一般對于臨產的微弱陣痛孕婦(體重60kg)來說，單次劑量為大約0.01-30mg，優(yōu)選大約0.1-20mg，更優(yōu)選大約0.1-10mg。對于其它動物種類，可以按每60kg體重換算相應給藥劑量。
本發(fā)明中所使用的G蛋白偶聯型受體蛋白(下文，通常簡稱為受體蛋白)或配體多肽可以依照，例如，WO96/05302或WO97/24436的描述來制備。
催產素分泌調節(jié)劑的制備方法及其用途闡述如下，所述調節(jié)劑包括化合物或其鹽，所述化合物或其鹽能使針對于本發(fā)明受體蛋白的本發(fā)明配體多肽和該受體蛋白之間的結合特性發(fā)生改變。
上面所述的化合物或其鹽包括促進本發(fā)明配體多肽功能(如催產素分泌作用等)的化合物或其鹽，和抑制本發(fā)明配體多肽功能(如催產素分泌作用等)的化合物或其鹽。
本發(fā)明配體多肽，由于具有調節(jié)催產素分泌(促進催產素分泌、抑制催產素分泌等)的作用，所以促進本發(fā)明配體多肽的催產素分泌作用等的化合物或其鹽，可作為促進催產素分泌的藥物，適用于改善、預防與治療各種疾病，如微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、乳汁淤積、引產、乳汁分泌不足、不孕癥、痛經、流產、外傷后緊張綜合征等，優(yōu)選微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、乳汁淤積等，最優(yōu)選微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全等。
另一方面，抑制本發(fā)明配體多肽的催產素分泌作用的化合物或其鹽可作為藥物用于改善、預防與治療各種疾病，如過強陣痛、強直性子宮收縮、胎兒窒息、子宮破裂、頸管裂傷、早產、普-威綜合征、痛經等，優(yōu)選過強陣痛、強直性子宮收縮、胎兒窒息、子宮破裂、頸管裂傷、早產、普-威綜合征等。
因此，本發(fā)明配體多肽可作為試劑用于篩選促進或抑制本發(fā)明配體多肽功能的化合物或其鹽。
促進或抑制本發(fā)明配體多肽功能的化合物或其鹽可通過篩選能改變G蛋白偶聯型受體蛋白[如phGR3、UHR-1等(WO96/05302或WO97/24436)]與本發(fā)明配體多肽之間的結合特性的化合物而獲得。
下面，闡述這些篩選方法。
構建G蛋白偶聯型受體蛋白[如phGR3、UHR-1等(WO96/05302或WO97/24436)]表達體系，通過使用該表達體系的受體蛋白結合測定系統(tǒng)，有效地篩選能使本發(fā)明配體多肽和G蛋白偶聯型受體蛋白[如phGR3、UHR-1等(WO96/05302或WO97/24436)]之間的結合特性發(fā)生變化的化合物(如，肽、蛋白質、非肽性化合物、合成化合物、發(fā)酵產物等)或其鹽。
這種化合物包括(1)具有G蛋白偶聯型受體介導的細胞刺激活性(例如，促進或抑制花生四烯酸釋放、乙酰膽堿釋放、細胞內鈣離子釋放、細胞內cAMP產生、細胞內cGMP產生、磷酸肌醇的產生、細胞膜電位變化、細胞內蛋白磷酸化、c-fos的激活和pH的降低等的活性)的化合物；(2)不具有該細胞刺激活性的化合物(所謂受體蛋白拮抗劑)；(3)增強本發(fā)明配體多肽和G蛋白偶聯型受體蛋白之間的結合能力的化合物；(4)降低本發(fā)明配體多肽和G蛋白偶聯型受體蛋白之間的結合能力的化合物等。
即，本發(fā)明提供一種篩選方法，其用于篩選使本發(fā)明配體多肽或其鹽與受體蛋白或其鹽之間的結合特性發(fā)生變化的化合物或其鹽，其特征為，(i)使受體蛋白或其鹽與本發(fā)明配體多肽或其鹽接觸，和(ii)使受體蛋白或其鹽與本發(fā)明配體多肽或其鹽及待測化合物接觸，對以上兩種情況進行比較。
本發(fā)明篩選方法的特征是，(i)與(ii)的比較涉及對結合于受體蛋白的配體量或其細胞刺激活性的測定并比較。
更具體地，本發(fā)明提供了(1)一種篩選能使本發(fā)明配體多肽或其鹽與受體蛋白等之間的結合特性發(fā)生變化的化合物或其鹽的方法，其特征為，使標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽與受體蛋白等接觸時，和使標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽及待測化合物與受體蛋白等接觸時，測定并比較同該受體蛋白結合的標記型本發(fā)明配體多肽或其鹽的量；(2)一種篩選能使本發(fā)明配體多肽或其鹽與受體蛋白等之間的結合特性發(fā)生變化的化合物或其鹽的方法，其特征為，使標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽同包含受體蛋白的細胞或所述細胞的膜級分接觸時，和使標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽及待測化合物同包含本發(fā)明受體蛋白的細胞或所述細胞的膜級分接觸時，測定并比較同該細胞或該細胞的膜級分結合的標記型本發(fā)明配體多肽或其鹽的量；(3)一種篩選能使本發(fā)明配體多肽或其鹽與受體蛋白等之間的結合特性發(fā)生變化的化合物或其鹽的方法，其特征為，使標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽與通過培養(yǎng)含所述受體蛋白編碼DNA的轉化體而表達在細胞膜上的受體蛋白接觸時，和使一標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽及待測化合物與通過培養(yǎng)含所述受體蛋白編碼DNA的轉化體而表達在細胞膜上的受體蛋白接觸時，測定并比較同所述受體蛋白結合的標記型本發(fā)明配體多肽的量。
下面進一步說明所述篩選方法。
首先作為用于本發(fā)明篩選方法的受體蛋白，只要其含有所述受體蛋白均可，但是優(yōu)選含有受體蛋白的哺乳動物器官的細胞膜級分。但由于獲得人的器官極其困難，因此經重組體表達而大量獲得的人的受體蛋白適用于本發(fā)明的篩選。
在生產本發(fā)明受體蛋白時，優(yōu)選在哺乳動物細胞或昆蟲細胞中表達受體蛋白的DNA。編碼目的蛋白部分的DNA片段包括，但不限于互補DNA。例如，可使用基因片段或合成DNA。為了將編碼所述受體蛋白等的DNA片段導入宿主動物細胞以高效表達，優(yōu)選將DNA片段插入啟動子下游，所述啟動子如與昆蟲宿主一起使用的桿狀病毒屬核型多角體病毒(NPV)的多角體蛋白啟動子、SV40來源的啟動子、反轉錄病毒啟動子、金屬硫蛋白啟動子、人熱休克啟動子、巨細胞病毒啟動子、SRα啟動子等。所表達受體的量和質的檢測用眾所周知的方法進行，例如，Nambi，P.等，生物化學雜質，267，19555-19559(1992)中描述的方法。
因此，上述篩選方法中的受體蛋白可以是用眾所周知的方法純化的受體蛋白、含有所述受體蛋白的細胞或這些細胞的膜級分。
使用含有本發(fā)明受體蛋白的細胞進行上述篩選時，這些細胞可用戊二醛、福爾馬林等固定。固定可用眾所周知的方法進行。
含有受體蛋白的細胞是指表達這些受體蛋白的宿主細胞。這類細胞的例子優(yōu)選大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、昆蟲細胞和動物細胞。
細胞膜級分是指，用眾所周知的方法破裂細胞并進行分級分離而制備的含有大量細胞膜的級分。細胞破裂的有效方法包括用Potter-Elvehjem勻漿器擠壓、用Waring blender或Polytron(Kinematica公司生產)破裂、超聲破裂、用French press加壓使細胞通過細嘴噴射而破裂。細胞膜組分分離主要通過離心力來實現，如分級離心和密度梯度離心。例如，細胞破碎液在低速(500-3000rpm)離心一小段時間(正常為1-10分鐘)，得到的上清高速(15000-30000rpm)通常離心0.5-2小時。由此獲得的沉淀部分用作細胞膜級分。細胞膜級分富含表達的受體蛋白以及膜成分如細胞來源的磷脂和膜蛋白。
在含有所述受體蛋白等的細胞和細胞膜級分中，受體蛋白含量優(yōu)選103-108分子/細胞，更優(yōu)選105-107分子/細胞。表達量越大，單位細胞膜級分的配體結合活性(比活)越強，可以構建的篩選體系敏感性越高，在同一批可分析的樣品量越大。
為了篩選使本發(fā)明配體多肽或其鹽與受體蛋白等之間的結合特性發(fā)生變化的化合物，需要合適的受體蛋白級分和標記的本發(fā)明配體多肽或其鹽。
受體蛋白級分優(yōu)選天然的受體蛋白級分，或與其具有同等活性的重組受體蛋白級分。此處術語“同等活性”是指在配體結合活性和信號傳導作用方面與天然受體蛋白所擁有的活性等同。
作為標記的配體，有標記的配體、標記的配體類似物化合物等。例如它們用[3H]、[125I]、[14C]或[35S]等標記。
具體地說，為了篩選使本發(fā)明配體多肽與受體蛋白等之間的結合特性發(fā)生變化的化合物，首先，將含有受體蛋白等的細胞或其膜級分懸浮于適合篩選的緩沖液中，制備受體標樣。可以使用任何緩沖液，只要它不干擾配體-受體結合。此類緩沖液有pH值約4-10(優(yōu)選6-8)的磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液。為了降低非特異結合，可在緩沖液中加入表面活性劑如CHAPS、吐溫-80TM(Kao-Atlas)、毛地黃皂甘或脫氧膽酸。為了抑制蛋白酶對受體或配體的降解，可加入蛋白酶抑制劑如PMSF、亮抑蛋白酶肽、E-64(Peptide Institute公司生產)或胃蛋白酶抑制劑。將一定量(5000-500000cpm)的標記的配體加入到0.01-10ml的受體溶液中，同時還存在有10-4M-10-10M的待測化合物。為了測定非特異性結合(NSB)，需提供一個含有過量未標記的配體的反應管。在約0-50℃(優(yōu)選約4-37℃)反應20分鐘-24小時(優(yōu)選30分鐘-3小時)。在反應完成后，反應混合物用玻璃纖維濾紙等過濾，用適量的相同緩沖液洗滌。然后用液閃儀或λ-計數儀測定在玻璃纖維濾紙中的殘留放射活性。缺乏任何競爭物時的值(B0)減去非特異結合值(NSB)，得到(B0-NSB)，以此為100％，當待測化合物的特異性結合量(B-NSB)在50％以下時可將其選為具有強效競爭抑制備用的化合物。
上述用于篩選使本發(fā)明配體多肽和受體蛋白等之間的結合特性發(fā)生變化的化合物的方法可按照下述進行。用眾所周知的方法或商品化的分析試劑盒來測定受體蛋白介導的細胞刺激活性(例如，促進或抑制花生四烯酸釋放、乙酰膽堿釋放、細胞內鈣離子釋放、細胞內cAMP產生、細胞內cGMP產生、磷酸肌醇的產生、細胞膜電位變化、細胞內蛋白的磷酸化、c-fos的激活和pH的降低的活性)。
詳細地說，首先，將包含受體蛋白的細胞在多孔平板上培養(yǎng)。在篩選之前，先置換新鮮培養(yǎng)基或對細胞無毒的緩沖液，加入待測化合物并保溫一定時間，然后提取細胞或回收上清將反應產物用各種方法進行定量。當由于細胞內存在降解酶使細胞刺激活性(例如花生四烯酸)的產生難以檢測時，可加入所述降解酶的抑制劑進行測定。可將對cAMP產生的抑制活性等活性測定為細胞受毛喉素等刺激而導致基本生產量增加后，對這種生產的抑制活性。
分析并篩選細胞刺激活性時，需要表達相應受體蛋白的細胞。這些細胞優(yōu)選具有天然型本發(fā)明受體蛋白等的細胞系、能夠表達所述重組型受體蛋白等的細胞系等。
其中待測化合物包括，例如肽、蛋白質、非肽性化合物、合成化合物、發(fā)酵產物、細胞提取液、植物提取液、動物組織提取液等，這些化合物為新的或已知的化合物。
用于篩選使本發(fā)明配體多肽和受體蛋白之間的結合特性發(fā)生變化的化合物的試劑盒中包含，本發(fā)明的受體蛋白等、含有本發(fā)明受體蛋白的細胞，或含有本發(fā)明受體蛋白的細胞膜級分。
本發(fā)明篩選試劑盒包括如1.用于篩選的試劑(1)用于分析和洗滌的緩沖液加有0.05％牛血清白蛋白(Sigma)的Hanks’平衡鹽溶液(Gibco)。
該溶液用0.45μm孔徑濾膜過濾除菌并在4℃貯存。或可以在臨用時配制。
(2)G蛋白偶聯型受體蛋白標樣將表達受體蛋白的CHO細胞在12孔板上傳代培養(yǎng)，每孔5×105細胞，37℃，5％CO2和95％空氣保溫培養(yǎng)兩天。
(3)標記的配體市售的本發(fā)明配體多肽帶有[3H]、[125I]、[14C]或[35S]標記。
其以水溶液貯存在4℃或-20℃，臨用時用分析緩沖液稀釋到1μM。
(4)配體標準液將本發(fā)明配體溶解于含有0.1％牛血清白蛋白(Sigma公司)的PBS使之濃度為1mM，-20℃保存。
2.分析方法(1)用于表達本發(fā)明受體蛋白的CHO細胞在12孔板上進行培養(yǎng)。在用1ml分析緩沖液洗滌2次后，每孔加入490μl該緩沖液。
(2)加5μl 10-4M-10-10M待測化合物，加5μl標記配體，所得混合液在室溫保溫1小時。為了測定非特異結合，在所述系統(tǒng)中加5μl的10-3M的配體而不是待測化合物。
(3)去除孔中的反應混合液，將培養(yǎng)孔洗滌3遍，每次均用1ml的洗滌液。與細胞結合的標記配體用0.2N NaOH-1％SDS溶解，然后與4ml的液閃劑A(和光純藥生產)混合。
(4)用液閃計數器(Beckman)測定放射性。其最大結合率如下測定PMB＝[(B－NSB)/(B0－NSB)]×100PMB最大結合百分率B 加樣時的值NSB非特異結合量B0最大結合量使本發(fā)明配體多肽和其相應受體蛋白之間結合特性發(fā)生改變的化合物或其鹽可按常規(guī)方式作為催產素分泌調節(jié)劑使用。例如，可以以糖包衣片劑、膠囊、酏劑、微膠囊等劑型口服，或以滴鼻劑形式使用，或以注射劑如在水中或其它可藥用液體中的無菌溶液或懸浮液形式經非胃腸道給藥。例如，可將所述化合物或其鹽與生理學上可接受的已知載體、調味劑、賦形劑、載色劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、粘合劑等混合而制成藥劑常用的單位劑型。控制制劑中的活性成分使得在給定范圍內獲得合適劑量。
可與片劑、膠囊等混合的添加劑包括，粘和劑如明膠、玉米淀粉、西黃耆膠和金合歡膠；賦形劑如結晶纖維素；膨脹劑如玉米淀粉、明膠和藻酸；潤滑劑如硬脂酸鎂；甜味劑如蔗糖、乳糖和糖精；調味劑如薄荷、akamono oil和櫻桃。當單位劑型為膠囊形式時，可進一步將液體載體如油或脂肪同上述添加劑一起使用?？筛鶕Ｒ?guī)制藥方法制備注射用無菌組合物，例如將活性成分與天然植物油如芝麻油或椰子油等溶解或懸浮在載體，如注射用的水來制備藥物。
用于注射的液體介質的例子包括，生理鹽水、含有葡萄糖和其它輔助制劑(如D-山梨醇、D-甘露醇和氯化鈉等)的等滲溶液，并可以進一步同合適的助溶劑如醇(如乙醇等)、聚醇(如丙二醇和聚乙二醇等)、非離子表面活性劑(如聚山梨酸酯80(TM)和HCO-50等)等結合使用。油性介質有芝麻油和豆油，它們可與助溶劑如苯甲酸芐酯和苯甲醇結合使用。此外，可進一步與緩沖液(例如磷酸鹽緩沖液和乙酸鈉緩沖液等)、鎮(zhèn)靜劑(例如苯扎氯胺和鹽酸普魯卡因等)、穩(wěn)定劑(如人血清白蛋白、聚乙二醇等)、防腐劑(例如苯甲醇、酚等)、抗氧化劑等結合使用。由此制備的注射液一般經無菌操作裝在合適的安瓿中。
如此所獲制劑安全、低毒，因此可投藥于人或其它哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、綿羊、豬、牛、貓、狗、猴、黑猩猩等)。
含有上述化合物或其鹽的催產素分泌調節(jié)劑的投藥劑量依賴于病癥等而異，當口服給藥時，對于一般臨產的微弱陣痛孕婦(體重60kg)來說，具有促進催產素分泌作用的化合物或其鹽一次正常劑量通常約為0.1-100mg，優(yōu)選約1.0-50mg，更優(yōu)選約1.0-20mg。當非胃腸道給藥時，其一次投藥量依賴于給藥受體、癥狀、投藥方法等而變，例如以靜脈注射方式給藥時，對于一般臨產時的微弱陣痛孕婦(體重60kg)來說，具有促進催產素分泌作用的化合物或其鹽的劑量為大約0.01-30mg，優(yōu)選大約0.1-20mg，更優(yōu)選大約0.1-10mg。對于其它動物種類，可以按每60kg體重換算相應給藥劑量。
本說明書的序列表中的序列編號(SEQ ID NO)分別表示下列序列。
表示pBOV3中所含源于牛下丘腦的配體多肽的全長氨基酸序列。
表示源于牛下丘腦的配體多肽cDNA的全部堿基序列。
表示源于牛下丘腦的配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO1中第23-53位的氨基酸序列相對應。
表示源于牛下丘腦的配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO1中第23-54位的氨基酸序列相對應。
表示源于牛下丘腦的配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO1中第23-55位的氨基酸序列相對應。
表示源于牛下丘腦的配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO1中第34-53位的氨基酸序列相對應。
表示源于牛下丘腦的配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO1中第34-54位的氨基酸序列相對應。
表示源于牛下丘腦的配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO1中第34-55位的氨基酸序列相對應。
表示編碼源于牛下丘腦的配體多肽(SEQ ID NO3)的DNA序列。
表示編碼源于牛下丘腦的配體多肽(SEQ ID NO4)的DNA序列。
表示編碼源于牛下丘腦的配體多肽(SEQ ID NO5)的DNA序列。
表示編碼源于牛下丘腦的配體多肽(SEQ ID NO6)的DNA序列。
表示編碼源于牛下丘腦的配體多肽(SEQ ID NO7)的DNA序列。
表示編碼源于牛下丘腦的配體多肽(SEQ ID NO8)的DNA序列。

表示源于?；蚪M的配體多肽的全長氨基酸序列。
表示大鼠型配體多肽的全長氨基酸序列。
表示大鼠型配體多肽cDNA的全部堿基序列。
表示大鼠型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO16中第22-52位的氨基酸序列相對應。
表示大鼠型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO16中第22-53位的氨基酸序列相對應。
表示大鼠型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO16中第22-54位的氨基酸序列相對應。
表示大鼠型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO16中第33-52位的氨基酸序列相對應。
表示大鼠型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO16中第33-53位的氨基酸序列相對應。
表示大鼠型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO16中第33-54位的氨基酸序列相對應。
表示編碼大鼠型配體多肽(SEQ ID NO18)的DNA序列。
表示編碼大鼠型配體多肽(SEQ ID NO19)的DNA序列。
表示編碼大鼠型配體多肽(SEQ ID NO20)的DNA序列。
表示編碼大鼠型配體多肽(SEQ ID NO21)的DNA序列。
表示編碼大鼠型配體多肽(SEQ ID NO22)的DNA序列。
表示編碼大鼠型配體多肽(SEQ ID NO23)的DNA序列。
表示人型配體多肽的全長氨基酸序列。
表示人型配體多肽cDNA的全部堿基序列。
表示人型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO30中第23-53位的氨基酸序列相對應。
表示人型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO30中第23-54位的氨基酸序列相對應。
表示人型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO30中第23-55位的氨基酸序列相對應。
表示人型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO30中第34-53位的氨基酸序列相對應。
表示人型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO30中第34-54位的氨基酸序列相對應。
表示人型配體多肽的氨基酸序列。它與SEQ ID NO30中第34-55位的氨基酸序列相對應。
表示編碼人型配體多肽(SEQ ID NO32)的DNA序列。
表示編碼人型配體多肽(SEQ ID NO33)的DNA序列。

表示編碼人型配體多肽(SEQ ID NO34)的DNA序列。
表示編碼人型配體多肽(SEQ ID NO35)的DNA序列。
表示編碼人型配體多肽(SEQ ID NO36)的DNA序列。
表示編碼人型配體多肽(SEQ ID NO37)的DNA序列。
表示本發(fā)明配體多肽的氨基酸序列。其中，第10位的Xaa為Ala或Thr，第11位的Xaa為Gly或Ser，第21位的Xaa為H、Gly、或G1yArg。
表示本發(fā)明配體多肽的氨基酸序列。序列中第10位的Xaa為Thr或Ala，第11位的Xaa為Gly或Ser。
用以下實施例和參考例詳細舉例說明本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明范圍。
實施例1大鼠器官中PrRP(19P2-L31)的分布的測定將去頭的雄性Wistar大鼠的各種器官取出，測定其組織重量，然后直接用液氮冷凍。器官中PrRP(19P2-L31)的提取方法如下首先對各器官添加10倍的蒸餾水，在沸騰的水中加熱10分鐘，使蛋白酶失活，于冰中冷卻。加入冰醋酸(終濃度為1N)，胃蛋白酶抑制素(終濃度為1μg/ml)以及磷酰胺(phosphoramidone)(終濃度為100μg/ml)，用Polytron勻漿器(Kinematica公司生產)勻漿1分鐘后，再進行17000xg、30分鐘離心。將得到的器官提取液用裝有265mg的Sep-Pak的C18筒(Waters生產)進行濃縮，再將<自然>第393卷272-276(1998)及WO97/24436中描述的PrRP(19P2-L31)用(特愿平10-140293號，WO99/60112號)的夾心EIA系統(tǒng)進行定量。器官提取液的濃縮如下，首先在Sep-Pak C18筒中依次加入含86％乙醇的4％醋酸4ml→甲醇4ml→蒸餾水4ml→4％醋酸4ml使之活化，再加入器官提取液，再用10ml蒸餾水沖洗，然后用含有86％乙醇的4％醋酸4ml、甲醇4ml洗脫，用37℃氮氣流濃縮。將濃縮級分溶于0.25ml的緩沖液C
]中，通過夾心EIA系統(tǒng)進行定量。其結果如圖1所示。在大鼠垂體后葉中檢測出0.53±0.06pmol/g組織(平均值±SEM，n＝5)的PrRP(19P2-L31)免疫活性。
實施例2PrRP(19P2-L31)的第三腦室內投藥對血漿中催產素分泌量的影響成熟Wistar系雄性大鼠(手術時體重350-380g)腹腔內注射戊巴比妥50mg/kg進行麻醉，并固定于大鼠腦功能區(qū)定位儀。將brace bar自口內線降低3.3mm。露出顱骨，使用牙科鉆在骨頭上鉆孔以便將引導管AG-12(內徑0.4mm，外徑0.5mm，Eicom)埋入第3腦室。在所述孔的周圍埋入4個錨著螺絲。將不銹鋼引導管AG-12的前端插入第3腦室上部。按照Paxinos和Watson(1986)的圖譜坐標定位從口內線起為AP+7.1mm，L0.0mm，H+2.0mm。將引導管用快速粘著劑和牙科膠接劑以及錨著螺絲固定于顱骨上。將不銹鋼假插管AD-12(外徑0.35mm，Eicom)插入引導管內，用鎖緊螺帽(Eicom)固定。術后，分籠飼養(yǎng)大鼠。
引導管埋入后約飼養(yǎng)1周以待術后恢復，當大鼠能自由活動后采血。對實施所述手術的大鼠腹腔內注射戊巴比妥50mg/kg進行麻醉。在解剖墊上將其背部固定，使左側頸靜脈露出。將聚乙烯管SP35(內徑0.5mm，外徑0.9mm，夏目制造廠)切成約30cm長，內裝滿含有200單位/ml肝素的生理鹽水，將其插入頸靜脈約4.5cm并固定。管的另一端通過背側皮下從頸部(背側)露出。
術后過夜，在投藥PrRP(19P2-L31)前30分鐘，用1ml容量的結核菌素注射器和25號針頭(均來自Terumo公司)采集400μl血液。為了防止血液凝固，在注射器里事先裝入20μl的含有200單位/ml肝素的生理鹽水。取下裝在大鼠顱骨上的鎖緊螺帽和假插管，在它們的位置上插入已連接至Teflon管(長50cm，內徑0.1mm，外徑0.35mm，Eicom公司)的不銹鋼顯微注射插管(內徑0.17mm，外徑0.35mm，Eicom公司)。將顯微注射插管的長度事先調節(jié)成從引導管露出于其前端1mm。將Teflon管的另一端連接于顯微注射器泵，將共計10μl的含0.5％牛血清白蛋白(BSA)之磷酸緩沖生理鹽水或溶有10nmolPrRP(19P2-L31)的0.5％BSA磷酸緩沖生理鹽水，以流速為5μl/min注射到第3腦室。注射結束之15分鐘后，取出顯微注射插管，再用鎖緊螺帽將假插管固定。腦室內投藥前，及腦室內投藥后5、15、30、45和60min時分別頸靜脈采血400μl。采出的血液用高速冷卻的微離心機(MR-150，Tomy Seiko)離心(5000rpm，10分鐘)，回收上清液(血漿)。用放射免疫分析儀(Peninsula公司)測定血漿中所含的催產素。如圖2所示，將10nmol PrRP(19P2-L31)投藥于第3腦室5分鐘后，血中催產素濃度比對照組提高約為2倍。
試劑例1將實施例21中所得的50mg化合物溶解于日本藥典注射用蒸餾水50ml之后，加日本藥典注射用蒸餾水至100ml。本溶液在無菌條件下過濾，再取每份1ml的本溶液在無菌條件下注入到注射用小藥瓶中冷凍干燥密封。
試劑例2將實施例21中所得的100mg化合物溶解于日本藥典注射用蒸餾水50ml之后，加日本藥典注射用蒸餾水至100ml。本溶液在無菌條件下過濾，再取每份1ml的本溶液在無菌條件下注入到注射用小藥瓶中冷凍干燥密封。
工業(yè)實用性本發(fā)明配體多肽具有調節(jié)催產素分泌(促進和抑制催產素分泌)的作用。即本發(fā)明配體多肽，首先因為具有促進催產素分泌的作用，所以它可用作與催產素分泌功能不足相關的各種疾病的預防與治療藥物。另一方面，本發(fā)明配體多肽對其受體蛋白的親和性很強，所以若增加投藥量將產生對催產素分泌的不敏感性，結果使其具有抑制催產素分泌的作用。這時，所述配體多肽可用作與催產素分泌過多相關的各種疾病的預防與治療藥物。
因此，本發(fā)明配體多肽可作為促進催產素分泌的一種藥物用于改善、預防和治療與催產素分泌相關的各種疾病，如微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、乳汁淤積、引產、乳汁分泌不全、不孕癥、痛經、流產、外傷后緊張綜合征等，優(yōu)選微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、乳汁淤積等，最優(yōu)選微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全等。
另外，本發(fā)明配體多肽可作為抑制催產素分泌的一種藥物用于改善、預防和治療與催產素分泌相關的各種疾病，如過強陣痛、強直性子宮收縮、胎兒窒息、子宮破裂、頸管裂傷、早產、普-威綜合征、痛經等，優(yōu)選過強陣痛、強直性子宮收縮、胎兒窒息、子宮破裂、頸管裂傷、早產、普-威(Prader-Willi)綜合征等。
本發(fā)明配體多肽還可作為檢測試劑用于研究催產素分泌功能，以及作為動物藥物如促進牛、山羊、豬等牲畜類哺乳動物之乳汁分泌的藥物。還可用于有用物質的生產，所述物質由產乳動物產生并分泌到其乳汁中。
權利要求
1.一種催產素分泌調節(jié)劑，其含有針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽。
2.權利要求1所述催產素分泌調節(jié)劑，其中針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽為多肽、或其酰胺或其酯或其鹽，它們包括與SEQ IDNO44所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列。
3.權利要求2所述催產素分泌調節(jié)劑，其中SEQ ID NO44所示氨基酸序列為SEQ ID NO3、18或32。
4.權利要求1所述催產素分泌調節(jié)劑，其中針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽為多肽、或其酰胺或其酯或其鹽，它們包括與SEQ IDNO45所示氨基酸序列相同或基本相同的氨基酸序列。
5.權利要求4所述催產素分泌調節(jié)劑，其中SEQ ID NO45所示氨基酸序列為SEQ ID NO6、21或35。
6.權利要求1所述催產素分泌調節(jié)劑，其含有一種促進催產素分泌的藥物。
7.權利要求6所述促進催產素分泌的藥物，其含有一種改善、預防或治療下列病癥的藥物，所述病癥有微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全、剖腹產、人工流產、或乳汁淤積。
8. G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽的應用，其目的是調節(jié)催產素的分泌。
9. G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽的應用，其目的是生產催產素分泌調節(jié)劑。
10.一種調節(jié)催產素分泌的方法，其特征為，將針對G蛋白偶聯型受體蛋白的配體肽或其鹽投藥于具有與催產素分泌不足相關的疾病的哺乳動物。
全文摘要
本發(fā)明涉及多肽的用途,該多肽為G蛋白偶聯型受體蛋白識別的配體,所述配體多肽具有促進催產素分泌的作用,因此它可作為藥物用于改善、預防與治療與催產素分泌相關的各種疾病如微弱陣痛、弛緩性出血、胎盤娩出前后、子宮復舊不全等。
文檔編號A61K31/00GK1334741SQ9981606
公開日2002年2月6日 申請日期1999年12月22日 優(yōu)先權日1998年12月25日
發(fā)明者松本寬和, 北田千惠子, 日沼州司 申請人:武田藥品工業(yè)株式會社