專利名稱：皮膚增白劑的制作方法
背景技術(shù)：
(a)發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及5，15-二乙?；?3-苯甲酰基續(xù)隨子醇(EL-1)化合物和包含該化合物的皮膚增白組合物，更具體地涉及包含5，15-二乙酰基-3-苯甲?；m(xù)隨子醇(EL-1)化合物的藥用組合物和化妝用組合物，其不僅可以使雀斑和斑點褪色，而且還可以用作皮膚增白劑。
(b)相關(guān)技術(shù)描述具有潔白細(xì)嫩的皮膚是多數(shù)人的愿望。一般來說，人類皮膚的顏色是根據(jù)皮膚中黑素的濃度和分布由遺傳決定的，但是也可以通過環(huán)境或生理因素，如太陽紫外線、疲勞和緊張而改變。黑素是在酪氨酸酶作用于酪氨酸并將其轉(zhuǎn)化成多巴和多巴醌之后，通過非酶氧化反應(yīng)而產(chǎn)生的。盡管黑素的形成過程是已知的，但是誘導(dǎo)黑素合成的機(jī)理，或酪氨酸起作用之前的步驟還不十分清楚。
因此，具有抑制酪氨酸酶活性的常規(guī)材料(如氫醌、抗壞血酸、曲酸和谷胱甘肽)已被混入軟膏或化妝品中，用于皮膚的增白和雀斑與斑點的褪色。然而，氫醌的問題在于其用量的特別限制，因為它引起嚴(yán)重的皮膚刺激，盡管其皮膚增白效果是公認(rèn)的；抗壞血酸很容易被氧化，所以混有抗壞血酸的化妝品存在顏色和氣味變化的問題；硫醇化合物如谷胱甘肽、半胱氨酸等具有獨(dú)特的令人不愉快的氣味，還存在透皮吸收問題；而配糖體及其衍生物的問題在于因其高極性而不適于用作化妝品的混合成分。
此外，雖然胎盤提取物等可以用于皮膚增白組合物，但是它們的問題在于臨床試驗的增白效果不充分。因此，現(xiàn)有皮膚增白劑的應(yīng)用因其毒性和穩(wěn)定性問題而受到限制。
發(fā)明概述本發(fā)明是為了解決上述問題而作出的。本發(fā)明的一個目的是提供一種皮膚增白組合物，該組合物對活體是安全的，并且具有高的黑素形成抑制效果和皮膚增白效果。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種包含化學(xué)式1的5，15-二乙酰基-3-苯甲?；m(xù)隨子醇(EL-1)化合物的皮膚增白組合物，該組合物具有高的黑素形成抑制效果和皮膚增白效果[化學(xué)式1] 附圖簡述參照下列詳述并結(jié)合附圖，可以更好地理解本發(fā)明，由此，對本發(fā)明的更完整的理解以及伴隨本發(fā)明的很多優(yōu)點將是顯而易見的。在附圖中

圖1是5，15-二乙?；?3-苯甲酰基續(xù)隨子醇(EL-1)的質(zhì)譜；圖2是5，15-二乙酰基-3-苯甲?；m(xù)隨子醇(EL-1)的質(zhì)子磁共振譜；圖3是5，1 5-二乙?；?3-苯甲酰基續(xù)隨子醇(EL-1)的碳磁共振譜。
優(yōu)選實施方案詳述在下列詳述中，簡單地通過解釋發(fā)明人實施本發(fā)明的最佳方式，僅對本發(fā)明的優(yōu)選實施方案進(jìn)行說明?？梢砸庾R到，本發(fā)明可以在多個顯而易見的方面進(jìn)行修改而不脫離其范圍。因此，附圖和說明書實際上是對本發(fā)明的解釋而不是對本發(fā)明的限制。
下面對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。
本發(fā)明人是通過發(fā)現(xiàn)5，15-二乙?；?3-苯甲酰基續(xù)隨子醇(EL-1)具有非常強(qiáng)烈的黑素形成抑制效果和皮膚增白效果而完成本發(fā)明的。這種效果的確立是通過對動物和自然界中自然生長的植物的反復(fù)研究的結(jié)果而實現(xiàn)的，其目的是開發(fā)一種新的皮膚增白劑，所述的動物和植物經(jīng)B16小鼠黑素瘤細(xì)胞處理，所述的黑素瘤細(xì)胞恰好能夠屏蔽抑制自身誘導(dǎo)黑素合成的材料。
續(xù)隨子L(Euphorbia lathyris L.)為兩年生植物樣品，其種子用于本發(fā)明。在Dong-ui-bo-gam中公開續(xù)隨子的提取物對積水、浮腫等癥狀有效。此外，雖然在日本專利08175954中公開了續(xù)隨子L提取物的增白效果，但是難于將該提取物直接用作外用的皮膚產(chǎn)品，這是因為其導(dǎo)致急性反應(yīng)的毒性(Handbook of medicinal herbs，James A，Duke.，CRC Press，p189，1985)。
本發(fā)明的皮膚增白組合物包含5，15-二乙?；?3-苯甲?；m(xù)隨子醇(EL-1)化合物，盡管公開的有關(guān)5，15-二乙酰基-3-苯甲?；m(xù)隨子醇(EL-1)結(jié)構(gòu)異構(gòu)體的一篇論文，其中乙?；B接于3位而苯甲酰基連接于5位(Japanesepharmacy Magazine 95(6)，760-763，1975)，以及一篇其中結(jié)構(gòu)沒有明確地鑒定的論文，即3位和5位的衍生物沒有精確鑒定的論文(Phytochemistry，29(6)，2025-2026，1990)，關(guān)于本發(fā)明化合物的組成，出版于普通雜志的化合物與本發(fā)明的明顯不同在于，本發(fā)明的5，15-二乙?；?3-苯甲酰基續(xù)隨子醇具有連接于3位的苯甲?；瓦B接于5位的乙?；?。
因此，本發(fā)明的5，15-二乙?；?3-苯甲?；m(xù)隨子醇，作為一種分子式為C31H38O7的lathyrane雙萜，從未分離出來過。存在于植物中的EL-1和通過化學(xué)方法合成的EL-1均可用于本發(fā)明。本發(fā)明的EL-1包含于續(xù)隨子L植物中，由于它還以不同的數(shù)量存在于其它植物中，所以本發(fā)明不限于該種植物。
在本發(fā)明中，EL-1是從續(xù)隨子L提取物中純化而來的，與其它植物相比，續(xù)隨子提取物中包含大量的EL-1。在該純化過程中，EL-1是在液-液萃取之后通過使用合成樹脂如硅膠、活性氧化鋁等的柱色譜、高效液相色譜等純化的，液-液萃取所使用的溶劑有甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、丙酮、乙醚、苯、氯仿、己烷、環(huán)己烷和石油醚，但是所述的純化方法不限于此。
本發(fā)明的EL-1的萃取和純化方法詳述如下。
續(xù)隨子L是一種可以從市場上買到的藥材，買來并破碎之后，將碎片以每干重破碎的碎片放置于5-20體積％的水中，并加入具有1-4個碳原子的無水或含水的低級醇，或者加入乙酸乙酯、己烷或氯仿，在帶有回流冷凝器的提取器中于50-100℃下煮沸和萃取1-5小時。用200-400目的濾布過濾提取物，之后用與上面方法相同的方法再萃取剩余物一次。合并萃取液并在減壓下濃縮，將濃縮物冷凍干燥或噴霧干燥，得到干燥的提取物。然后將干燥的續(xù)隨子L提取物懸浮于水中，加入相同體積的己烷，由此得到油相的己烷餾分。
用另一種方法，續(xù)隨子L破碎之后，碎片于室溫至250℃下壓縮和過濾，由此得到一定數(shù)量的續(xù)隨子L油。
將溶劑以0.2-10倍于油的數(shù)量，加到所得到的油相己烷餾分或所得到的壓縮和過濾油中。所述的溶劑可以是乙醇、甲醇、乙腈、純水或它們的混合物，它們可以按不同的比例加入，然后進(jìn)行液-液萃取，由此得到溶劑可溶餾分。用柱色譜從該餾分中分離出EL-1，分離出的EL-1再用高效液相色譜純化。分離出的純物質(zhì)的結(jié)構(gòu)用質(zhì)譜和核磁共振譜分析，確認(rèn)該純物質(zhì)為EL-1。
從圖1質(zhì)譜圖中的523[分子量+H]+峰和545.3[分子量+Na]+峰，確認(rèn)所述純物質(zhì)的分子量為522。
圖2表示上述化學(xué)式1的質(zhì)子磁共振譜，其中確認(rèn)5.28(dd)ppm的峰和6.21(d)ppm的峰分別為3位氫和5位氫的峰，而且確認(rèn)圖2的峰為1-H3.52(m)，2-H2.35(m)，3-H5.82(dd)，4-H2.90(dd)，5-H6.21(d)，7-H2.10(m)，2.06(m)，8-H1.94(m)，1.75(m)，9-H1.26(m)，11-H1.41(dd)，12-H6.54(d)，16-H0.94(d)，17-H5.01(s)，4.78(s)，18-H1.17(s)，19-H1.17(s)，20-H1.72(s)，21-H2.21(s)，22-H1.83(s)，27-H8.03(d)，28-H7.45(t)，29-H7.57(t)，30-H7.45(t)和31-H8.03(d)。
圖3表示碳磁共振譜，其中確認(rèn)80.9ppm和65.4ppm的峰分別為3位碳和5位碳的峰，而且確認(rèn)圖3的峰為C48.5，2-C37.9，3-C80.8，4-C52.2，5-C65.4，6-C144.5，7-C34.9，8-C21.6，9-C35.4，10-C25.3，11-C28.5，12-C146.5，13-C134.2，14-C196.7，15-C92.5，16-C14.2，17-C115.4，18-C29.0，19-C16.8，20-C12.4，21-C22.0，22-C20.9，23-C169.7，24-C170.1，25-C166.1，26-C130.1，27-C129.6，28-C128.3，29-C133.1，30-C128.3和31-C129.6。
當(dāng)以該方法中所制備的續(xù)隨子L萃取物即EL-1處理小鼠B-16黑素瘤細(xì)胞時，其顯示出非常強(qiáng)烈的黑素合成抑制作用。另外，當(dāng)將該化合物放入各種化妝材料如外用皮膚軟膏或乳劑中并施用于人的皮膚時，皮膚的增白效果是優(yōu)異的。而且沒有顯示出其它副作用，所以EL-1看起來是一種改進(jìn)的、安全的并且非常有效的雀斑和斑點褪色劑和皮膚增白劑。
在外用皮膚軟膏或化妝品中，EL-1的干含量為0.00001-10重量％，優(yōu)選0.001-1重量％。當(dāng)含量低于0.00001重量％時，沒有觀察到明顯的皮膚增白效果，當(dāng)含量高于10重量％時，沒有觀察到效果的顯著提高。
下面描述實施例和對比例，以幫助理解本發(fā)明。但是，下面的實施例只是用來更容易地理解本發(fā)明，本發(fā)明不受下列實施例的限制。
實施例 1將100克續(xù)隨子L破碎后的碎片加到500毫升80％的甲醇溶液中，并在帶有回流冷凝器的萃取器中煮沸3小時，之后萃取，然后用300目的濾布過濾。剩余物用與上述方法相同的方法再處理一次。合并萃取液，用Whatman 2號濾紙過濾，并于室溫下除去不溶物。然后在60℃和減壓下，于帶有冷凝器的蒸餾裝置中濃縮濾液，并將濃縮物懸浮于300毫升的純水中。加入300毫升己烷，充分搖動該混合物，得到己烷可溶物。該己烷可溶物通過硅膠柱色譜分離，得到450毫克含有效成分的餾分。該餾分再通過高效液相色譜純化，分離出350毫克的EL-1。
實施例2購得續(xù)隨子L并破碎之后，將100克續(xù)隨子L破碎的碎片在室溫下壓縮并過濾，得到35毫升續(xù)隨子L油。將35毫升乙醇加到上面所得到油中，對該混合物進(jìn)行液-液萃取，得到乙醇餾分。該乙醇餾分經(jīng)硅膠柱色譜分離，得到300毫克含有效成分的餾分。該餾分再經(jīng)高效液相色譜提純，分離出200毫克的EL-1。
實施例3除了用500毫升100％的乙醇溶液作萃取溶劑之外，用與實施例1相同的方法進(jìn)行萃取，得到340毫克的EL-1。
實施例4除了用500毫升99.9％的氯仿溶液作萃取溶劑之外，用與實施例1相同的方法進(jìn)行萃取，得到300毫克的EL-1。
實施例5除了用500毫升99.9％的正己烷溶液作萃取溶劑之外，用與實施例1相同的方法進(jìn)行萃取，得到310毫克的EL-1。
實施例6購得續(xù)隨子L之后，將100毫升80％的乙醇溶液加到按與實施例2相同的方法得到的35毫升續(xù)隨子L油中，通過液-液萃取得到的乙醇餾分經(jīng)硅膠柱色譜分離，得到230毫克含有效成分的餾分。該餾分再經(jīng)高效液相色譜分離，分離出170毫克的EL-1。
實施例7購得續(xù)隨子并破碎之后，將100克續(xù)隨子L破碎的碎片在150℃下壓縮并過濾，得到40毫升續(xù)隨子L油。將200毫升90％的乙腈加到上面所得到油中，對該混合物進(jìn)行液-液萃取，得到乙腈餾分。該乙腈餾分經(jīng)硅膠柱色譜分離，得到470毫克含有效成分的餾分。該餾分再經(jīng)高效液相色譜分離，分離出340毫克的EL-1。
試驗實例1細(xì)胞水平下EL-1的黑素形成抑制效果試驗增白效果是在細(xì)胞水平下測試的，辦法是將由實施例1-7得到的EL-1加到B-16小鼠黑素瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中(Lotan R.，Lotan D.Cancer Res.403345-3350，1980)。
將由實施例1-7得到的EL-1加到B-16小鼠黑素瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中，并使EL-1的最終濃度分別為1微克/毫升、5微克/毫升和50微克/毫升，并將它們培養(yǎng)3天。待將胰蛋白酶加到細(xì)胞中并把培養(yǎng)液從培養(yǎng)容器中取出進(jìn)行離心分離之后，提取黑素。將1毫升的氫氧化鈉溶液(濃度為1N)加到提取出的黑素中并煮沸約10分鐘，以使黑素溶解。試驗是按這樣的方式進(jìn)行的，在此方式中，通過測量在400鈉米的吸光度，以每單位細(xì)胞數(shù)目的吸光度來表示所形成的黑素量，即表示成A400/106細(xì)胞。重復(fù)該試驗3次之后，計算相對于對照樣的黑素形成量，并用平均值作為抑制比率(％)。
注重復(fù)次數(shù)＝3如上面表1所示，可以看出，根據(jù)實施例得到的EL-1與通常熟知的增白物質(zhì)氫醌相比，對培養(yǎng)的小鼠黑素瘤細(xì)胞具有相同的黑素形成抑制能力。而且，氫醌在低濃度時具有強(qiáng)的黑素形成抑制能力，但因其高細(xì)胞毒性而不能進(jìn)行超過10微克/毫升濃度的試驗。另一方面，EL-1即使在50微克/毫升的濃度下也未顯示出細(xì)胞毒性，并且具有高于氫醌的黑素形成抑制效果。因此，本發(fā)明特別適用于雀斑和斑點的褪色以及皮膚的增白作用。
制劑例1和對比例1制備外用皮膚軟膏，辦法是將下表2中所示的各種成分按表2中所示的比例混合，其中EL-1分別得自實施例1-7。
注*加至100重量％的量制備例2和對比例2制備化妝用的乳劑，辦法是將下表3中所示的各種組分按表3中所示的的比例混合，其中EL-1分別得自實施例1-7。
注*加至100重量％的量制劑例3和對比例3制備化妝用的柔和香水(洗液)，辦法是將下表4中所示的各個組分按表4中所示的比例混合，其中EL-1分別得自實施例1-7。
注*加至100重量％的量制劑例4知對比例4制備化妝用的香料，辦法是將下表5中所示的各個組分按表5中所示的比例混合，其中EL-1分別得自實施例1-7。
注*加至100重量％的量制劑例5和對比例5制備化妝用的潤面膏，辦法是將下表6中所示的各個組分按表6中所示的比例混合，其中EL-1分別得自實施例1-7。
注*加至100重量％的量制劑例6和對比例6制備化妝用的營養(yǎng)香水(洗液)，辦法是將下表7中所示的各個組分按表7中所示的比例混合，其中EL-1分別得自實施例1-7。
注*加至100重量％的量試驗實例2選擇一組包含20名健康男女的受試者，接受1000瓦ORIEL日光模擬器的照射。照射前，將帶有兩排孔、每排6孔且孔徑為7毫米的鋁箔護(hù)罩遮蓋住兩只手臂的下部。手臂距離(光源)10厘米以每平方厘米60毫焦的強(qiáng)度接受照射。將根據(jù)制劑例1-6和對比例1-6制備的含EL-1和不含EL-1的樣品，一對一對地涂敷于受試者位于各自指定的開孔處的皮膚上。這種涂敷每天進(jìn)行兩次，從開始照射前3天開始，持續(xù)至照射后3周。(注意制劑例5和對比例5的潤面膏制劑施用15分鐘后脫離)制劑例和對比例孔處的色素沉積程度是通過肉眼觀察來測定的。測定結(jié)果見下面的表8。
注受試者的平均數(shù)如上面表8所示，根據(jù)制劑例1-6制備的含EL-1的增白軟膏和化妝材料，對20名受試者中的至少10名顯示出增白效果。特別是在施用大量EL-1的制劑例1與對比例1的對比試驗中，35％顯示出明顯的色素沉積抑制效果，而且沒有檢出對皮膚的任何負(fù)面作用。因此，可以看出EL-1是安全的，而且是一種特別有效的使雀斑和斑點褪色和皮膚增白的改進(jìn)劑。
本發(fā)明的包含EL-1的皮膚增白組合物的優(yōu)點在于，因其高溶解性貯存穩(wěn)定性而可以以高濃度混合，而且容易混合，同時它還具有優(yōu)異的黑素形成抑制作用和優(yōu)異的色素沉積抑制作用，因此具有使雀斑和斑點褪色的作用。不僅如此，本發(fā)明的組合物還是安全的，而且對皮膚無負(fù)作用。
盡管已經(jīng)通過優(yōu)選的實施方案詳細(xì)地描述了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠理解，對本發(fā)明可以作出各種修改和替換，而不脫離所附權(quán)利要求書中所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.下面化學(xué)式1所表示的5，15-二乙酰基-3-苯甲?；m(xù)隨子醇化合物[化學(xué)式1]
2.皮膚增白組合物，其中包含0.00001-10.0重量％的下面化學(xué)式1的5，15-二乙?；?3-苯甲?；m(xù)隨子醇化合物[化學(xué)式I]
3.權(quán)利要求2的皮膚增白組合物，其中的5，15-二乙?；?3-苯甲酰基續(xù)隨子醇是這樣得到的用一種或多種選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、丙酮、乙醚、苯、氯仿、己烷、環(huán)己烷和石油醚的溶劑對續(xù)隨子L進(jìn)行液-液萃取，然后用選自硅膠和活性氧化鋁的填料進(jìn)行色譜分離。
全文摘要
本發(fā)明涉及5,15－二乙酰基－3－苯甲?；m(xù)隨子醇化合物和包含該續(xù)隨子醇化合物的皮膚增白組合物。由于包含作為黑素產(chǎn)生抑制劑的5,15－二乙?；?－苯甲酰基續(xù)隨子醇,所以本發(fā)明的組合物在抑制色素淤積和增強(qiáng)皮膚或斑點變色方面是優(yōu)良的。此外,由于本發(fā)明的組合物不引發(fā)副作用,所以其具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。
文檔編號A61P17/00GK1356974SQ99816101
公開日2002年7月3日 申請日期1999年12月14日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月31日
發(fā)明者金清澤, 金鎬正, 陳戊鉉, 鄭珉渙, 元貞美 申請人:Lg生活健康株式會社