專利名稱：用于抗血管生成和/或抗腫瘤生成的酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
總的來(lái)說(shuō)，本發(fā)明涉及將各種化合物的羧基部分轉(zhuǎn)化成該化合物的酰胺衍生物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及非甾體抗炎藥(NSAID)，特別是吲哚美辛(一種NSAID)的仲酰胺衍生物，它們顯示遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)環(huán)氧合酶-1(COX-1)抑制作用的對(duì)環(huán)氧合酶-2(COX-2)的抑制作用，另外它們?nèi)燥@示該化合物，即NSAID的止痛、抗炎和/或退熱作用，而且還顯示對(duì)包括人類在內(nèi)的溫血脊椎動(dòng)物的癌癥抑制作用，即抗血管生成和/或抗腫瘤生成作用。
縮略語(yǔ)表縮略語(yǔ)定義NSAID 非甾體抗炎藥COOH 羧酸部分COX 環(huán)氧合酶PGH2前列腺素H2PGD2前列腺素D2PGHS 前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶PER 過(guò)氧化物酶SAR 構(gòu)效關(guān)系GI胃腸道IC50COX活性被抑制50％時(shí)吲哚美辛(或吲哚美辛衍生物)的微摩爾濃度—IC50值越低，則藥物效力越強(qiáng)DMSO 二甲亞砜14C-AA[1-14C]花生四烯酸HPLC 高效液相色譜TLC 薄層色譜mg毫克kg千克μM 微摩爾/升mL毫升uL微升N 當(dāng)量(與酸濃度相關(guān)時(shí)使用)NMR 核磁共振Et2O 乙醚EtOAc 乙酸乙酯Et3N 三乙胺AcOH 乙酸CDCl3氚代氯仿rt室溫(約72°F，22℃)BOP-Cl(2-氧-3-噁唑烷基)膦酰氯(購(gòu)自威斯康星州的Aldrich公司)，參見(jiàn)期刊文章Diago-Meseguer，Palomo-Coll，F(xiàn)emandez-Lizarbe和Zugaza-Bilbao，活化羧基的新試劑N，N-二(2-氧-3-噁唑烷基)-氯化偶磷二酰胺(phosphorodiamidic chloride)的制備和反應(yīng)，Synthesis(1980)，第547-551頁(yè)mp熔點(diǎn)FBS 胎牛血清
DMEM 達(dá)爾伯克氏改良基本培養(yǎng)基LPS 脂多糖PBS 磷酸鹽緩沖鹽水IFN-gγ干擾素發(fā)明背景如下所詳細(xì)討論，實(shí)際上，環(huán)氧合酶是兩種酶COX-1和COX-2，它們具有不同的生理學(xué)和病理生理學(xué)功能。眾所周知，在抗炎和/或止痛劑量，吲哚美辛、阿司匹林、和其他NSAID對(duì)COX-1有很大的抑制作用，這保護(hù)了胃壁免受酸的損害；同時(shí)這些藥物對(duì)COX-2有相對(duì)弱的抑制作用，COX-2因關(guān)節(jié)受傷或疾病如關(guān)節(jié)炎而引起炎癥。同樣，某些NSAID對(duì)COX-1和COX-2具有基本上相同的抑制活性。因此，為了降低或消除由COX-1抑制而引起的胃腸道刺激，近些年對(duì)COX-2單獨(dú)的抑制作用已成為藥物開發(fā)者們的目標(biāo)。
更具體地說(shuō)，如同在Smith，Garavito和DeWitt，“D，L-前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物H合成酶(環(huán)氧合酶)-1和-2”，J.Biol.Chem.，(1996)，第271卷，第33157-33160頁(yè)中所述，前列腺素和血栓烷生物合成中的相關(guān)步驟涉及花生四烯酸到PGH2的轉(zhuǎn)化，該轉(zhuǎn)化被COX活性和PGHS的PER活性的順續(xù)作用催化。如下圖所示 COX活性源于兩種稱之為COX-1和COX-2的不同的且獨(dú)立調(diào)節(jié)的酶，在以下文獻(xiàn)中有述DeWitt和Smith“從互補(bǔ)的DNA序列中確定的來(lái)自綿羊囊狀腺的前列腺素G/H合成酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)”，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)，第85卷，第1412-1416頁(yè)；Yokoyama和Tanabe，“編碼前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶的人類基因的克隆及該酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)”，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1989)，第165卷，第888-894頁(yè)；以及Hla和Neilson，“人類環(huán)氧合酶-2-cDNA”，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1992)，第89卷，第7384-7388頁(yè)。
COX-1是基本同工型，主要負(fù)責(zé)合成在胃腸道中起細(xì)胞保護(hù)作用的前列腺素和引發(fā)血小板中血小板凝集的血栓烷。參見(jiàn)，Allison，Howatson，Torrence，Lee和Russell，“與使用非甾體抗炎藥有關(guān)的胃腸損傷”，N.Engl.J.Med.(1992)，第327卷，第749-754頁(yè)。
另一方面，COX-2是可誘導(dǎo)的而且存活時(shí)間短，其表達(dá)被內(nèi)毒素、細(xì)胞因子和促有絲分裂劑所激發(fā)。參見(jiàn)，Kujubu，F(xiàn)letcher，Varnum，Lim和Herschman，“TIS10，來(lái)自Swiss 3T3細(xì)胞的佛波酯助致癌劑誘導(dǎo)的mRNA，編碼新的前列腺素合成酶/環(huán)氧合酶同系物”，J.Biol.Chem.(1991)，第266卷，第12866-12872頁(yè)；Lee，Soyoola，Chanmugam，Hart，Sun，Zhong，Liou，Simmons和Hwang，“脂多糖激發(fā)的巨噬細(xì)胞中促有絲分裂劑誘導(dǎo)的環(huán)氧合酶的選擇性表達(dá)”，J.Biol.Chem.(1992)，第267卷，第25934-25938頁(yè)；以及O′Sullivan，Huggins，Jr.和Mccall，“肺泡巨噬細(xì)胞中脂多糖誘導(dǎo)的前列腺素H合成酶-2的表達(dá)被地塞米松而不是被阿司匹林抑制”，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1993)，第191卷，第1294-1300頁(yè)。
重要的是，COX-2在炎癥細(xì)胞(單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中在前列腺素的生物合成中起主要作用。參見(jiàn)，Masferrer，Zweifel，Manning，Hauser，Leahy，Smith，Isakson和Seibert，“體內(nèi)可誘導(dǎo)的環(huán)氧合酶-2的選擇性抑制是抗炎和非致潰瘍的”，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1994)，第91卷，第3228-3232頁(yè)；Vane，Mitchell，Appleton，Tomlinson，Bishop-Bailey，Croxtall和Willoughby，“炎癥中環(huán)氧合酶和一氧化氮合成酶的可誘導(dǎo)的同工型”，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1994)，第91頁(yè)，第2046-2050頁(yè)；Harada，Hatanaka，Saito，Majima，Ogino，Kawamura，Ohno，Yang，Katori和Yamamoto，“大鼠角叉菜膠誘導(dǎo)的胸膜炎滲出液中的細(xì)胞中的可誘導(dǎo)的前列腺素H合成酶的檢測(cè)”，Biomed.Res.(1994)，第15卷，第127-130頁(yè)；Katori，Harada，Hatanaka，Kawamura，Ohno，Aizawa和Yamamoto，“大鼠角叉菜膠誘導(dǎo)的胸膜炎中前列腺素H合成酶的誘導(dǎo)及選擇性COX-2抑制劑的作用”，前列腺素、血栓烷及白三烯的研究進(jìn)展(1995)，第23卷，第345-347頁(yè)；以及Kennedy，Chan，Culp和Cromlish，“大鼠前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶(環(huán)氧合酶-2)cDNA的克隆和表達(dá)”，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1994)，第197卷，第494-500頁(yè)。
因此，COX-1和COX-2不同的組織分布給選擇性COX-2抑制劑(即對(duì)COX-2的抑制特異性遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)COX-1的抑制)藥物的開發(fā)提供了基礎(chǔ)，這些藥物作為抗炎、止痛和/或退熱藥，具有很少或沒(méi)有來(lái)自COX-1抑制的胃腸和血液易感性，而幾乎所有的目前市場(chǎng)化的NSAID都有這種胃腸和血液易感性，盡管有些NSAID對(duì)COX-1和COX-2有著基本上相似的抑制活性，但大多數(shù)NSAID同時(shí)抑制COX-1和COX-2，而且對(duì)COX-1抑制特異性遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)COX-2抑制。參見(jiàn)例如，Meade，Smith和DeWitt，“阿司匹林和其他非甾體抗炎藥對(duì)前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶(環(huán)氧合酶)同工酶的不同的抑制作用”，J.Biol.Chem.(1993)，第268卷，第6610-6614頁(yè)。
關(guān)于選擇性COX-2抑制劑(對(duì)COX-2的抑制特異性遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)COX-1的)，包括某種酸性磺胺類和二芳基雜環(huán)類的兩類一般結(jié)構(gòu)，詳細(xì)的SAR研究已經(jīng)報(bào)道。這些選擇性COX-2抑制劑的體內(nèi)活性證實(shí)了選擇性COX-2抑制是抗炎的和非致潰瘍的這一概念，如在下列期刊文章所討論Gans，Galbraith，Roman，Haber，Kerr，Schmidt，Smith，Hewes和Ackerman，“一種新的口服有效的前列腺素合成抑制劑DuP 697的抗炎和安全性概述”，J.Pharmacol.Exp.Ther.(1990)，第254卷，第180-187頁(yè)；Talley，Bertenshaw，Carter，Collins，Docter，Granero，Lee，Malecha，Miyashiro，Rogers，Rogier，Yu，Anderson，Burton，Cogburn，Gregory，Koboldt，Perkins，Seibert，Veenhuizen，Zhang和Isakson，“1，5-二芳基吡唑類環(huán)氧合酶-2抑制劑的合成與生物學(xué)評(píng)價(jià)4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺(SC-58635，塞來(lái)昔布(Celecoxib))的識(shí)別”，J.Med. Chem.(1997)，第40卷，第1347-1365頁(yè)；Khanna，Weier，Yu，Xu，Koszyk，Collins，Koboldt，Veenhuizen，Perkins，Casler，Masferrer，Zhang，Gregory，Seibert和Isakson，“1，2-二芳基咪唑作為有效的環(huán)氧合酶-2選擇性口服活性抗炎藥”，J.Med.Chem.(1997)，第40卷，第1643-1647頁(yè)；Khanna，Weier，Yu，Collins，Miyashirp，Koboldt，Veenhuizen，Curie，Siebert和Isakson，“1，2-二芳基吡咯作為有效的環(huán)氧合酶-2選擇性抑制劑”，J.Med Chem.(1997)，第40卷，第1619-1633頁(yè)；Tsuji，Nakamura，Konishi，Tojo，Ochi，Senoh和Matsuo，“1，5-二芳基吡唑和相關(guān)衍生物的合成和藥理學(xué)性質(zhì)”，Chem.Pharm.Bull(1997)，第45卷，第987-995頁(yè)；Riendeau，Percival，Boyce，Brideau，Charleson，Cromlish，Ethier，Evans，F(xiàn)algueyret，F(xiàn)ord-Hutchinson，Gordon，Greig，Gresser，Guay，Kargman，Leger，Marncini，O′Neill，Quellet，Rodger，Therien，Wang，Webb，Wong，Xu，Young，Zamboni，Prasit和Chan，“四取代呋喃酮作為高選擇性COX-2抑制劑的生物化學(xué)和藥理學(xué)概述”，Br.J. Pharmacol.(1997)，第121卷，第105-117頁(yè)；Roy，Leblanc，Ball，Brideau，Chan，Chauret，Cromlish，Ethier，Gauthier，Gordon，Greig，Guay，Kargman，Lau，O′Neill，Silva，Therien，Van Staden，Wong，Xu和Prasit，“選擇性COX-2抑制劑的新系列5，6-二芳基噻唑[3，2-b][1，2，4]-三唑”，Bioorg.Med.Chem.Lett.(1997)，第7卷，第57-62頁(yè)；Therien，Brideau，Chan，Cromlish，Gauthier，Gordon，Greig，Kargman，Lau，Leblanc，Li，O′Neill，Riendeau，Roy，Wang，Xu和Prasit，“5，6-二芳基咪唑[2，1-b]噻唑作為選擇性COX-2抑制劑的合成和生物學(xué)評(píng)價(jià)”，Bioorg.Med.Chem.Lett.(1997)，第7卷，第47-52頁(yè)；Li，Norton，Reinhard，Anderson，Gregory，Isakson，Koboldt，Masferrer，Perkins，Seibert，Zhang，Zweifel和Reitz，“新的三聯(lián)苯作為選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑和口服活性抗炎藥”，J.Med.Chem.(1996)，第39卷，第1846-1856頁(yè)；Li，Anderson，Burton，Cogburn，Collins，Garland，Gregory，Huang，Isakson，Koboldt，Logusch，Norton，Perkins，Reinhard，Seibert，Veenhuizen，Zhang和Reitz，“1，2-二芳基環(huán)戊烯作為選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑和口服活性抗炎藥”，J.Med.Chem.(1995)，第38卷，第4570-4578頁(yè)；Reitz，Li，Norton，Reinhard，Huang，Penick，Collins和Garland，“新的1，2-二芳基環(huán)戊烯是有效的選擇性口服活性的環(huán)氧合酶抑制劑”，Med.Chem.Res.(1995)，第5卷，第351-363頁(yè)；Futaki，Yoshikawa，Hamasaka，Arai，Higuchi，Lizuka和Otomo，“NS-398，引起較小胃損害的且具有有效止痛和退熱作用的非甾體抗炎藥”，Gen.Pharmacol.(1993)，第24卷，第105-110頁(yè)；Wiesenberg-Boetcher，Schweizer，Green，Muller，Maerki和Pfeilschifter，“新的高度有效的抗炎化合物CGP28238的藥理學(xué)概述”，Drugs Exptl Clin Res.(1989)，第XV卷，第501-509頁(yè)；Futaki，Takahashi，Yokoyama，Arai，Higuchi和Otomo，“NS-398，新的體外選擇性抑制前列腺素G/H合成酶/環(huán)氧合酶(COX-2)活性的抗炎藥”，前列腺素(1994)，第47卷，第55-59頁(yè)；Klein，Nusing，Pfeilschifter，和Ullrich，“環(huán)氧合酶-2的選擇性抑制”，Biochem.Pharmacol.(1994)，第48卷，第1605-1610頁(yè)；Li，Black，Chan，F(xiàn)ord-Hutchinson，Gauthier，Gordon，Guay，Kargman，Lau，Mancini，Quimet，Roy，Vickers，Wong，Young，Zamboni，和Prasit，“環(huán)氧合酶-2抑制劑，5-甲磺酰氨基-1-茚酮衍生物的合成及藥理學(xué)活性”，J. Med.Chem.(1995)，第38卷，第4897-8905頁(yè)；Prasit，Black，Chan，F(xiàn)ord-Hutchinson，Gauthier，Gordon，Guay，Kargman，Lau，Li，Mancini，Quimet，Roy，Tagari，Vickers，Wong，Young，和Zamboni，“L-745337選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑”，Med.Chem.Res.(1995)，第5卷，第364-374頁(yè)；Tanaka，Shimotori，Makino，Aikawa，Inaba，Yoshida，和Takano，“新的抗炎藥3-甲酰氨基-7-甲磺酰氨基-6-苯氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮的藥理學(xué)研究。通訊I抗炎、止痛及其他相關(guān)性質(zhì)”，Arzniem.-Forsch./Drug Res.(1992)，第42卷，第935-944頁(yè)；Nakamura，Tsuji，Konishi，Okumura和Matsuo，“抗炎藥研究I2′-(苯硫基)-甲磺酰胺及相關(guān)衍生物的合成和藥理學(xué)性質(zhì)”，Chem.Pharm.Bull.(1993)，第41卷，第894-906頁(yè)；Chan，Boyce，Brideau，F(xiàn)ord-Hutchinson，Gordon，Guay，Hill，Li，Mancini，Penneton，Prasit，Rascori，Riendeau，Roy，Tagari，Vickers，Wong，和Rodger，“選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑，L-745337的藥理學(xué)在大鼠及非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中具有防止?jié)冏饔玫男碌姆晴摅w抗炎藥”，J. Pharmacol.Exp.Ther.(1995)，第274卷，第1531-1537頁(yè)；以及Graedon和Graedon，“Pills Promise Relief without Ulcers”，The Raleigh，North CarolinaNews and Observer，p，8D(1998年9月13日)，最后這篇文章以一般術(shù)語(yǔ)報(bào)道了用作選擇性COX-2抑制劑的塞來(lái)昔布、美洛昔康和維奧克斯(vioxx)的開發(fā)。
在上段提及的期刊文章中已報(bào)道作為選擇性COX-2抑制劑的代表性酸性磺胺類和二芳基雜環(huán)類如下酸性磺胺類 NS-398 R＝O(Flosulldo)R＝S(L-745,337) FR115068 2-甲基-4-苯基-5-亞磺酰氨基苯基噁唑二芳基雜環(huán)類 盡管酸性磺胺類和二芳基雜環(huán)類已被作為選擇性COX-2抑制劑廣泛研究，但關(guān)于將作為選擇性COX-1抑制劑的NSAID轉(zhuǎn)化成選擇性COX-2抑制劑的報(bào)道極少。參見(jiàn)，Black，Bayly，Belley，Chan，Charleson，Denis，Gauthier，Gordon，Guay，Kargman，Lau，Leblanc，Mancini，Quellet，Percival，Roy，Skorey，Tagari，Vickers，Wong，Xu，和Prasit，“從吲哚美辛到選擇性COX-2抑制劑作為有效的選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑的吲哚鏈烷酸的開發(fā)”，Bioorg.Med.Chem.Lett.(1996)，第6卷，第725-730頁(yè)；Luong，Miller，Barnett，Chow，Ramesha和Browner，“人類環(huán)氧合酶-2結(jié)構(gòu)中的NSAID結(jié)合位點(diǎn)的柔性”，Nature Structural Bio.(1996)，第3卷，第927-933頁(yè)；以及Kalgutkar，Crews，Rowlinson，Garner，Seibert和Marnett.“使環(huán)氧合酶-2共價(jià)失活的阿司匹林類分子”，Science，(1998)，第280卷，第1268-1270頁(yè)。
同樣，讓人感興趣的是轉(zhuǎn)讓給Kentucky大學(xué)研究基金會(huì)的，授予Ashton等的美國(guó)專利第5681964號(hào)(1997年公開)，該專利披露了將吲哚美辛(一種NSAID)轉(zhuǎn)化成某種酯衍生物同時(shí)伴隨著對(duì)GI刺激的降低。(參見(jiàn)，美國(guó)專利第5681964號(hào)

圖1，酯衍生物的結(jié)構(gòu))。另外，轉(zhuǎn)讓給Alcon實(shí)驗(yàn)室的，授予Hellberg等人的美國(guó)專利第5607966號(hào)(母專利)(1997年公開)和第5811438號(hào)(CIP)(1998公開)披露了各種NSAID(如吲哚美辛)到某種酯衍生物和酰胺衍生物(用作抗氧化劑和5-脂氧合酶的抑制劑)的轉(zhuǎn)化，但未提到COX-2的選擇性抑制。
另外，轉(zhuǎn)讓給Merck公司的，授予Shen的美國(guó)專利第3285908號(hào)(1966年公開)和第3336194號(hào)(1967年公開)描述了吲哚美辛的各種二級(jí)和三級(jí)酰胺衍生物，但是可能因?yàn)槎兰o(jì)六十年代還未發(fā)現(xiàn)COX抑制(COX-1和COX-2)，這兩個(gè)專利未提及COX抑制，因而也未認(rèn)識(shí)到三級(jí)酰胺衍生物既不能抑制COX-1也不能抑制COX-2(參見(jiàn)下面實(shí)例中的對(duì)比化合物9和10)。然而，轉(zhuǎn)讓給加拿大MerckFrosst公司的，授予Black等人的美國(guó)專利第5436265號(hào)(1995年公開)和授予Lau等人的美國(guó)專利第5510368號(hào)(1996年公開)分別描述了作為COX-2選擇性抑制劑的1-芳?；?3-吲哚基鏈烷酸和N-芐基-3-吲哚乙酸。
在本研究中，探索了用各種化合物做模板設(shè)計(jì)選擇性COX-2抑制劑的可能性，這些化合物如NSAID，它們(1)是選擇性COX-1抑制劑或(2)對(duì)COX-1和COX-2有基本相同的抑制活性。這兩類化合物被總稱為不是選擇性COX-2抑制劑的化合物。
更特別地，與衍生自左美酸的選擇性COX-2抑制劑復(fù)合的人類COX-2的晶體結(jié)構(gòu)分析表明衍生自左美酸的化合物的選擇性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)與二芳基雜環(huán)類的不同。參見(jiàn)上述Luong等的文獻(xiàn)。與二芳基雜環(huán)類不同，左美酸類似物不使用側(cè)袋(side pocket)，而是給Arg106和Tyr341占據(jù)的COX活性位點(diǎn)口加上限制再投影于(project down)廊區(qū)(lobby region)。COX-2活性位點(diǎn)投影于的該空間上不擁擠的區(qū)提供了制備多種含COOH基團(tuán)的NSAID類似物的可能性，它們各自帶有不同的取代基以取代COOH中的OH，這將使許多與藥物發(fā)現(xiàn)、開發(fā)有關(guān)的目的得以實(shí)現(xiàn)。舉例來(lái)說(shuō)，某些取代基可以改善水溶性、生物利用度或者藥代動(dòng)力學(xué)。另一種可能性是接上藥效基團(tuán)以靶向于完全不同的蛋白，從而使藥物具有雙重藥理作用。
Abbott實(shí)驗(yàn)室和Parke-Davis已經(jīng)嘗試了藥效基團(tuán)途徑。分別參見(jiàn)Kolasa，Brooks，Rodriques，Summers，Dellaria，Hulkower，Bouska，Bell和Carter，“作為5-脂氧合酶抑制劑設(shè)計(jì)支架(scaffold)的非甾體抗炎藥”，J.Med.Chem.(1997)，第40卷，第819-824頁(yè)；以及Flynn，Capiris，Centeko，Connor，Dyer，Kostlan，Niese，Schrier和Sircar，“非甾體抗炎藥異羥肟酸，環(huán)氧合酶和5-脂氧合酶的雙重抑制劑”，J.Med.Chem.(1990)，第33卷，第2070-2072頁(yè)。Kolasa等和Flynn等都報(bào)道了用異羥肟酸部分或羥基脲部分取代NSAID中的羧酸基團(tuán)提供COX與5-脂氧合酶的雙重抑制劑。然而，沒(méi)有哪種類似物顯示任何顯著的選擇性COX-2抑制，而且異羥肟酸鹽容易水解。
但是，上面的文獻(xiàn)中均未表明把對(duì)COX-2抑制作用無(wú)選擇性的含COOH的藥物，如含COOH的NSAID轉(zhuǎn)化成對(duì)COX-2抑制作用有選擇性的衍生物將也導(dǎo)致這種衍生物成為癌癥的抑制劑。然而，讓人感興趣地注意，舒林酸硫化物(sulindac sulfide)(既含COOH部分又含二甲硫部分的NSAID)是對(duì)COX-1的抑制作用比對(duì)COX-2的強(qiáng)40多倍的抑制劑，但也表現(xiàn)出對(duì)腫瘤的抑制。另一方面，一種衍生物，即舒林酸砜(sulindac sulfone)(既含COOH部分又含甲基砜部分)，對(duì)COX-1和COX-2都沒(méi)有抑制作用，但仍對(duì)腫瘤有抑制作用。
因此，希望找到某種含COOH的藥物，如含COOH的NSAID，它不是選擇性COX-2抑制劑(表現(xiàn)出對(duì)COX-1的抑制遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)COX-2的抑制或基本上對(duì)COX-1和COX-2的抑制相同)，在轉(zhuǎn)化成某種衍生物時(shí)，它將變?yōu)檫x擇性COX-2抑制劑(表現(xiàn)出對(duì)COX-2的抑制遠(yuǎn)超過(guò)對(duì)COX-1的抑制)，同時(shí)保留藥物的止痛、抗炎和/或退熱作用，而且還表現(xiàn)出衍生化之前藥物所未表現(xiàn)的其他作用，如對(duì)腫瘤的抑制作用。
發(fā)明的概述和目的本發(fā)明令人驚奇地發(fā)現(xiàn)將某些化合物，如像吲哚美辛這種不是選擇性COX-2抑制劑的NSAID的羧酸部分衍生化成仲酰胺類似物，產(chǎn)生了對(duì)COX-2的同工酶特異性。而且，生成的仲酰胺衍生物不僅是選擇性COX-2抑制劑，也是癌癥的抑制劑，即表現(xiàn)出抗血管生成和/或抗腫瘤生成的活性，以及優(yōu)選地，也保留了該化合物的止痛、抗炎和/或退熱作用。
因此，本發(fā)明提供了治療溫血脊椎動(dòng)物癌癥的方法。該方法包含給予動(dòng)物足以抑制癌癥的治療有效量的某化合物的羧酸仲酰胺衍生物。該衍生物對(duì)環(huán)氧合酶-2的抑制是選擇性的。該化合物(a)是環(huán)氧合酶抑制劑而對(duì)環(huán)氧合酶-2的抑制無(wú)選擇性，且(b)含有羧酸部分或其藥學(xué)可接受的鹽。優(yōu)選地，該化合物是非甾體抗炎藥或其藥學(xué)可接受的鹽。
因而，本發(fā)明的目的是提供最小化或消除GI刺激的癌癥治療。
另外，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，該癌癥治療兼有止痛、抗炎和/或退熱作用，而不用同時(shí)給予止痛、抗炎和/或退熱藥，如NSAID或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明的一些目的已如上所述，當(dāng)與下面描述的實(shí)驗(yàn)室實(shí)施例結(jié)合起來(lái)時(shí)，本發(fā)明的其他目的將隨本說(shuō)明書的進(jìn)行而變得清晰。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明涉及治療溫血脊椎動(dòng)物的癌癥的方法，因此本發(fā)明關(guān)系到哺乳動(dòng)物類和鳥類。
本發(fā)明所涵蓋的是以下動(dòng)物的治療哺乳動(dòng)物如人，以及因?yàn)l危而重要的哺乳動(dòng)物(如西伯利亞虎)、有經(jīng)濟(jì)學(xué)重要性的哺乳動(dòng)物(由人類在農(nóng)場(chǎng)中飼養(yǎng)的用來(lái)消費(fèi)的動(dòng)物)和/或?qū)θ祟愑猩鐣?huì)學(xué)重要性的動(dòng)物(寵物或動(dòng)物園中的動(dòng)物)，舉例來(lái)說(shuō)，如非人食肉動(dòng)物(如貓和狗)、豬(如豬、肉豬和野豬)、反芻動(dòng)物(如牛、綿羊、長(zhǎng)頸鹿、鹿、山羊、野牛和駱駝)以及馬。本發(fā)明也涵蓋以下動(dòng)物的治療，鳥類，包括那些瀕危的和動(dòng)物園內(nèi)飼養(yǎng)的鳥類及禽，更特別的是家禽如火雞、雞、鴨、鵝、珍珠雞等，因?yàn)樗鼈円矊?duì)人類有經(jīng)濟(jì)學(xué)重要性。
因此，本發(fā)明涵蓋了家畜，包括但不局限于，家養(yǎng)豬(豬和肉豬)、反芻動(dòng)物、馬、家禽等的治療。
更特別地，將治療有效量的含羧酸的化合物的仲酰胺衍生物給予溫血脊椎動(dòng)物。這樣，本發(fā)明包含以一定濃度給予仲酰胺衍生物，所述的藥物濃度是計(jì)算以給被治療的動(dòng)物提供適當(dāng)?shù)沫h(huán)境以阻止、控制或消除癌癥。另外，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，仲酰胺衍生物具有止痛、抗炎和/或退熱的性質(zhì)，如含羧酸的化合物被衍生化之前所具有的一樣，因此，該癌癥治療在動(dòng)物中提供止痛、抗炎和/或退熱作用，而免于同時(shí)給予提供這種作用的其他藥物。
在本文中使用的與本發(fā)明相關(guān)的含羧酸的化合物或含COOH的藥物包括該化合物的藥學(xué)可接受的鹽。因此，舉例而言，COOH部分包括COOM，其中M為Na等。
本發(fā)明方法中有用的衍生物是具有羧酸部分的藥物的仲酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽，例如，具有羧酸部分的非甾體抗炎藥的仲酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽。如在《廿烷類CRC手冊(cè)前列腺素和相關(guān)的脂類，卷II，通過(guò)廿烷類的藥物作用，第59-133頁(yè)，CRC出版社，Boca Raton，F(xiàn)la.(1989)中描述的一樣，非甾體抗炎藥的許多化學(xué)組已被鑒定。
因此，NSAID可以選自各種化學(xué)組，包括但不局限于芬那酸類，如氟芬那酸、尼氟酸和甲芬那酸；吲哚類，如吲哚美辛、舒林酸和托美??；苯基鏈烷酸類，如舒洛芬、酮咯酸、氟比洛芬和布洛芬；苯乙酸類，如雙氯芬酸。NSAID的其他實(shí)例如下所列醋芬酸(aceloferac)乙哚乙酸洛索洛芬阿芬酸(alcofenac) 芬布芬 甲氯芬那酸鹽(meclofenamate)氨芬酸芬氯酸 萘普生苯噁洛芬 苯克洛酸奧帕諾辛溴芬酸非諾洛芬吡洛芬卡洛芬 氟克洛酸(fleclozic acid) 普拉洛芬環(huán)氯茚酸吲哚洛芬(indoprofen) 托芬那酸二氟尼柳三苯唑酸 扎托洛芬乙芬那酸酮洛芬苯酰吡酸(efenamic acid) (zomopirac)更具體地說(shuō)，本發(fā)明中有用的優(yōu)選的仲酰胺衍生物包括但不限于下列含COOH的NSAID的仲酰胺衍生物6-甲氧基-α-甲基-2-萘乙酸(和它的鈉鹽形式，即萘普生)、甲氯芬那酸和雙氯芬酸，優(yōu)選的是吲哚美辛的仲酰胺衍生物，特別優(yōu)選的是以下描述為化合物11的吲哚美辛衍生物。同樣，那些苯甲?；糠值?位氯被溴或氟取代的吲哚美辛仲酰胺衍生物也應(yīng)在本發(fā)明中起作用。
更優(yōu)選的吲哚美辛仲酰胺衍生物包括但不限于吲哚美辛-N-甲基酰胺、吲哚美辛-N-乙烷-2-醇酰胺、吲哚美辛-N-辛基酰胺、吲哚美辛-N-壬基酰胺、吲哚美辛-N-(2-甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-((R)，-4-二甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-((S)-，4-二甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-(2-苯乙基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-氟苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-氯苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-乙酰氨基苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲基巰基)苯基酰胺、吲哚美辛-N-(3-甲巰基苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲氧苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(3-乙氧苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(3，4，5-三甲氧苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(3-吡啶基)酰胺、吲哚美辛-N-5-((2-氯)吡啶基)酰胺、吲哚美辛-N-5-((1-乙基)吡唑啉酮(pyrazolo))酰胺、吲哚美辛-N-(3-氯丙基)酰胺、吲哚美辛-N-甲氧羰基甲基酰胺、吲哚美辛-N-2-(2-L-甲氧羰基乙基)酰胺、吲哚美辛-N-2-(2-D-甲氧羰基乙基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲氧羰基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲氧羰基甲基苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(2-吡嗪基)酰胺、吲哚美辛-N-2-(4-甲基噻唑基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-聯(lián)苯基)酰胺，以及它們的組合。
仲酰胺衍生物可以以栓劑，或者內(nèi)服或非胃腸給予的流體補(bǔ)充劑，例如像靜脈間蔗糖溶液的營(yíng)養(yǎng)流體給予動(dòng)物。另外，本發(fā)明也涵蓋了口內(nèi)(如口腔或舌下)給予或經(jīng)皮(如用皮膚藥貼)給予動(dòng)物?？趦?nèi)給藥的較好討論可參見(jiàn)1980年10月21日公開的授予Porter的美國(guó)專利第4229447號(hào)和1996年4月2日公開的授予Ellinwood和Gupta的美國(guó)專利第5504086號(hào)。經(jīng)皮給藥的較好討論可參見(jiàn)1991年5月21日公開的授予Rose和Jarvik的美國(guó)專利第5016652號(hào)。
另外，可以通過(guò)各種口服方法給予動(dòng)物，例如以吞服的片劑、膠囊劑或散劑(晶體形式)給予。同樣，口服給藥可以包括將仲酰胺衍生物摻入合適的載體流體中以被飲用的流體(溶液或混懸液)給藥。當(dāng)仲酰胺摻入載體流體中時(shí)，流體包括但不限于水、再水合溶液(即含有電解質(zhì)如檸檬酸鉀和氯化鈉的水，如可從Wyeth實(shí)驗(yàn)室獲得的商品名為RESOL_的溶液)、營(yíng)養(yǎng)流體(即牛奶、果汁)和它們的組合。因此，口服給藥可以作為飲食的一部分，如人類的食物、動(dòng)物飼料，以及它們的組合。
除通過(guò)口途徑的口服給藥之外，本發(fā)明還涵蓋食道、胃和/或十二指腸的溶液或混懸液給藥，如管飼法，即通過(guò)喂食導(dǎo)管的方法。當(dāng)癌癥已經(jīng)發(fā)展，動(dòng)物不能再通過(guò)口來(lái)吞咽食物、藥品等時(shí)，管飼型給藥是有用的。
因此，本發(fā)明也涵蓋了添加組份，如各種賦形劑、載體、表面活性劑、營(yíng)養(yǎng)品等以及各種非仲酰胺衍生物的藥品，或它們的組合，可以與該仲酰胺衍生物一起存在，不論該衍生物是何種形式。非仲酰胺衍生物的藥品可以包括但不限于滲透多元醇和滲透氨基酸(即肌醇、山犁糖醇、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸鹽、天冬氨酸鹽、脯氨酸和?；撬?、強(qiáng)心藥(即胍乙酸)、止痛劑、抗生素、電解質(zhì)(即有機(jī)或無(wú)機(jī)電解質(zhì)，如鹽)和它們的組合。
給予動(dòng)物的仲酰胺衍生物的合適的劑量應(yīng)為每天每千克動(dòng)物體重約0.5mg到約7.0mg，更優(yōu)選為從每天每千克動(dòng)物體重約1.5mg到約6.0mg，更為優(yōu)選的是從每天每千克動(dòng)物體重約2.0mg到約5.0mg。給藥可以是一天一次或多次以達(dá)到每天總的期望劑量。當(dāng)然，取決于癌癥的嚴(yán)重程度和/或動(dòng)物年齡，該劑量可以變化。
本發(fā)明對(duì)動(dòng)物癌癥的治療應(yīng)是有用的，其中癌癥是由下列因素引起病原體(即寄生蟲、細(xì)菌、原生動(dòng)物和病毒，包括食物中的毒性劑)、營(yíng)養(yǎng)因素(即食物中過(guò)量無(wú)機(jī)鹽、過(guò)量蛋白、過(guò)敏性物質(zhì)，不可消化的食物組份或食物中的不良組份)、以應(yīng)激物或污染物作用的環(huán)境因素(即熱、冷、動(dòng)物船運(yùn)和來(lái)自空氣和/或水污染的毒素)和/或生理紊亂，如那些消化道、肺/循環(huán)系統(tǒng)、肝、腎、結(jié)腸和/或胰腺的。
本發(fā)明表明不是COX-2選擇性抑制劑的含COOH的藥物，如以吲哚美辛為代表的NSAID，在轉(zhuǎn)化成仲酰胺時(shí)對(duì)COX-2產(chǎn)生同工酶特異性，這樣就給出了生產(chǎn)有效的選擇性COX-2抑制劑的有效方案。下面討論的用吲哚美辛進(jìn)行的的廣泛的SAR研究表明容許用各種仲酰胺衍生物取代基取代吲哚美辛COOH部分中的OH，這些得到的衍生物與上面討論的二芳基雜環(huán)類作為COX-2抑制劑是同樣有效的和有選擇性的。因此，該方案在開發(fā)非致潰瘍的抗炎藥方面有著很大的潛力。而且如下面的實(shí)施例所述，本發(fā)明的仲酰胺衍生物還顯示抗癌作用。
實(shí)驗(yàn)室實(shí)施例下面是與以下材料和過(guò)程有關(guān)的注解。
制備的酰胺和它們的選擇性COX-2抑制性質(zhì)列于下表?？偣仓苽淞?1個(gè)吲哚美辛的類似物(酰胺衍生物)。為生成酰胺，取代COOH的OH的各種含氮取代基(即胺)包括氨基烷基、氨基芳烷基、氨基醚或氨基吡啶基部分，它們作為含氮取代基的一部分。吲哚美辛衍生物系列中最有效的酰胺類似物表現(xiàn)出在低的納摩爾范圍內(nèi)的對(duì)純化的人類COX-2抑制的IC50值，COX-2選擇性比為從大于1000到4000。
用沿用已久的方法進(jìn)行吲哚美辛酰胺衍生物的合成，通過(guò)用BOP-Cl作羧酸活化劑，用合適的胺(以R表示)處理吲哚美辛，使R取代COOH中的OH，而得到酰胺。如果R為伯胺，得到的衍生物為仲酰胺，若R為仲胺，則得到的衍生物為三級(jí)酰胺。
更具體地說(shuō)，含吲哚美辛(300mg，0.84毫摩爾)和BOP-Cl(218mg，0.84毫摩爾)的反應(yīng)混合物在5mL無(wú)水CH2Cl2中，用Et3N(167mg，0.84毫摩爾)處理，并在室溫下攪拌10分鐘。然后，混合物用合適的以R表示的胺(0.94毫摩爾)處理，并在室溫下攪拌過(guò)夜。用CH2Cl2(30mL)稀釋后，得到的溶液用水(2×25mL)、3N NaOH(2×25mL)、水(2×30mL)洗滌，而后干燥(在MgSO4存在下)、過(guò)濾，并在真空中濃縮溶劑。粗酰胺用硅膠色譜純化或在合適的溶劑中重結(jié)晶而被純化。反應(yīng)示意圖如下 測(cè)試化合物對(duì)純化的人COX-2或羊COX-1的抑制的IC50值由下面討論的TLC法測(cè)定。使用羊的COX-1是因?yàn)閺木d羊的精囊中很容易分離并純化這種酶，而人的COX-1一般是通過(guò)在昆蟲細(xì)胞系中的過(guò)度表達(dá)獲得，處理尤其是純化很難。另外，綿羊的COX-1與人類的COX-1大于90％相似。最后，NSAID對(duì)這兩種來(lái)源的COX-1抑制在發(fā)表的文獻(xiàn)中已報(bào)道，其IC50值相似，這表明沒(méi)有大的活性位點(diǎn)差異。從Oxford Biomedical Research，Inc.(Oxford，Michigan)獲得的公羊精囊中純化COX-1。蛋白的比活性為20(μMO2/分鐘)/mg，全蛋白質(zhì)的百分比為13.5％。人類COX-2樣品(1.62μg/mL)通過(guò)被桿狀病毒載體攜帶的昆蟲細(xì)胞克隆的人類COX-2的表達(dá)獲得，接著被純化。
純化后得到的酶是脫脯基的(即它們?nèi)鄙傺o基(hemprostheticgroup))。在測(cè)定中，將它們用購(gòu)自Sigma化學(xué)公司(密蘇里州，圣路易斯)的高鐵血紅素重構(gòu)，使之返還到完全天然狀態(tài)(即，天然COX-1和天然COX-2含有血輔基)，從而使測(cè)試化合物的抑制作用具有生理學(xué)相關(guān)性。
全COX-2(66nM)或全COX-1(44nM)在100mM pH為8.0的含有500μM苯酚的Tris-HCl中，用幾種濃度的吲哚美辛或吲哚美辛的酰胺衍生物在25℃處理20分鐘。因?yàn)橹亟MCOX-2具有低于羊的COX-1的比活性，所以調(diào)節(jié)蛋白濃度以使在通過(guò)兩種同工型進(jìn)行的花生四烯酸(購(gòu)自Nu Chek Prep，Elysian，Minnesota)的催化后所得的總產(chǎn)物百分比具有可比性。
更具體地說(shuō)，對(duì)于羊COX-1(44nM)和人COX-2(66nM)的環(huán)氧合酶活性時(shí)間和濃度依賴性抑制用TLC分析如下。200μL反應(yīng)混合物中含有存在于100mM pH為8.0的Tris-HCl中的高鐵血紅素重構(gòu)蛋白、500μM苯酚和[1-14C]-花生四烯酸(50μM，約55-57mCi/毫摩爾)。對(duì)于時(shí)間依賴性抑制分析中，高鐵血紅素重構(gòu)的COX-1(44nM)或COX-2(66nM)在DMSO中在不同抑制劑濃度下在室溫下預(yù)保溫20分鐘，接著于37℃在30秒內(nèi)加入[1-14C]-花生四烯酸(50μM)。[1-14C]-花生四烯酸(約55-57mCi/毫摩爾)從New Ecgland Nuclear，Dupont或American Radiolabeled Chemicals(密蘇里州，圣路易斯)購(gòu)買。
通過(guò)在Et2O/CH3OH/1M檸檬酸鹽(pH 4.0)(30∶4∶1)中的溶劑萃取終止反應(yīng)。在2000克力下離心分離相2分鐘，并將有機(jī)相在TLC板(從新澤西Phillipsburg的J.T.Baker處獲得)上點(diǎn)樣。板在EtOAc/CH2Cl2/冰醋酸(75∶25∶1)中于4℃下展開。放射性標(biāo)記的前列腺素類產(chǎn)物用放射性掃描儀(獲自華盛頓特區(qū)Bioscan公司)定量測(cè)定。用在不同抑制劑濃度下觀測(cè)到的總產(chǎn)物百分比除以在與DMSO一起預(yù)保溫相同時(shí)間的蛋白樣品中觀測(cè)到的產(chǎn)物百分比。
無(wú)吲哚美辛的對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明約25-30％的脂肪酸底物轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物，這足以評(píng)價(jià)所有測(cè)試化合物的抑制性質(zhì)。在這些條件下，吲哚美辛表現(xiàn)出對(duì)COX-1的選擇性的時(shí)間和濃度依賴性抑制(即IC50(COX-1)約0.050μM；IC50(COX-2)約0.75μM)，而仲酰胺衍生物表現(xiàn)出選擇性COX-2抑制，三級(jí)酰胺衍生物則不抑制COX-1也不抑制COX-2(即COX-2的測(cè)量在極高的IC50處被停止，而且COX-2活性仍保持80％)。同樣，下面是對(duì)NS-398和2-甲基-4-苯基-5-磺酰胺苯基噁唑的注解，它們是上述酸性磺胺類中的兩個(gè)即，NS-398IC50(COX-2)約0.12μM，IC50(COX-1)＞66μM；以及2-甲基-4-苯基-5-磺酰胺苯基噁唑IC50(COX-2)約0.06μM，IC50(COX-1)＞66μM。
為了某種對(duì)比實(shí)驗(yàn)，在活化的鼠RAW264.7細(xì)胞中COX-2活性的抑制被如下測(cè)定。低通量鼠RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)在含10％熱失活的FBS的DMEM中。細(xì)胞(6.2×106個(gè)細(xì)胞/T25瓶)用500ng/mL LPS和10個(gè)單位/mL IFN-g于無(wú)血清的DMEM中活化7小時(shí)。在37℃下，30分鐘內(nèi)加入載體(DMSO)或DMSO中的抑制劑(0-1μM)。外源花生四烯酸代謝的抑制或PGD2合成的抑制通過(guò)在25℃下與20μM14C-AA一起保溫細(xì)胞15分鐘而測(cè)定。將等分試樣(200μL)移入終溶液，總產(chǎn)物用前述TLC分析定量測(cè)定。
熔點(diǎn)用Gallenkamp熔點(diǎn)儀測(cè)定并校正?；瘜W(xué)收率是一次制備的未優(yōu)化的特定實(shí)例的收率。NSAID(即吲哚美辛)從Sigma(密蘇里州，圣路易斯)公司購(gòu)買。所有其他化學(xué)試劑均從Aldrich(威斯康星州，米爾瓦基)公司購(gòu)買。無(wú)水二氯甲烷購(gòu)自Aldrich并被直接使用。所有其他溶劑是HPLC級(jí)的。分析TLC(Analtech uniplatesTM)被用于跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。硅膠(Fisher，60-100目)用于柱色譜。1H NMR和13CNMR譜在CDCl3中用Bruker WP-360光譜儀或AM-400光譜儀記錄?；瘜W(xué)位移以相對(duì)于內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷的百萬(wàn)分之幾(ppm)表示。自旋多重性以s(單峰)、d(雙重峰)、dd(雙重峰中的雙重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)和m(多重峰)報(bào)告。偶合常數(shù)(J)以赫茲(Hz)報(bào)告。
吲哚美辛-N-甲基酰胺(化合物1)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；10∶90而后50∶50)獲得，其為亮黃色固體(271mg，79％)。mp＝187-189℃；1H NMR(CDCl3)δ7.64-7.67(dd，2H，J＝6.6Hz和1.9Hz，ArH)，7.47-7.50(dd，2H，J＝6.7Hz和1.9Hz，ArH)，6.88-6.89(dd，1H，J＝9.1Hz和2.5Hz，ArH)，6.84-6.87(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.68-6.72(dd，1H，J＝9.1Hz和2.5Hz，ArH)，5.22(bs，1H，NH)，3.83(s，3H，CH3)，3.65(s，2H，CH2)，2.75-2.76(d，3H，J＝4.8Hz，CH3)，2.39(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-乙烷-2-醇酰胺(化合物2)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc)獲得，其為淡黃色固體(143mg，39％)。mp＝162-164℃；1H NMR(CDCl3)δ7.66-7.68(dd，2H，J＝6.7Hz和1.7Hz，ArH)，7.47-7.50(dd，2H，J＝6.9Hz和1.9Hz，ArH)，6.85-6.89(d和s，2H，J＝9.2Hz，ArH)，6.68-6.72(dd，1H，J＝9.0Hz和2.5Hz，ArH)，6.03(bs，1H，NH)，3.82(s，3H，CH3)，3.67(bs，4H，2CH2)，3.35-3.40(q，2H，J＝4.8Hz，CH2)，2.44(bs，1H，OH)，2.39(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-辛基酰胺(化合物3)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70)獲得，其為黃色固體(164mg，42％)。mp＝109-111℃；1HNMR(CDCl3)δ7.62-7.65(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.46-7.49(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，6.85-6.89(m，2H，ArH)，6.68-6.71(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，5.67(s，1H，NH)，3.82(s，3H，CH3)，3.64(s，2H，CH2)，3.16-3.22(m，2H，CH2)，2.38(s，3H，CH3)，1.39(m，2H，CH2)，1.19(m，10H，5CH2)，0.83-0.88(t，J＝6.2Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-壬基酰胺(化合物4)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70)獲得，其為黃色固體(191mg，47％)。mp＝128-130℃；1HNMR(CDCl3)δ7.64-7.67(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.47-7.50(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，6.89(s，1H，ArH)，6.85-6.88(d，J＝8.9Hz，ArH)，6.68-6.72(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，5.60-5.63(bt，J＝5.3Hz，NH)，3.82(s，3H，CH3)，3.64(s，2H，CH2)，3.16-3.22(m，2H，CH2)，2.38(s，3H，CH3)，1.36-1.41(m，2H，CH2)，1.19-1.28(m，12H，6CH2)，0.84-0.89(t，J＝6.5Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-(2-甲基芐基)酰胺(化合物5)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；50∶50)獲得，其為黃色固體(218mg，56％)。mp＝177-179℃；1HNMR(CDCl3)δ7.60-7.61(d，2H，J＝8.1Hz，ArH)，7.44-7.46(d，2H，J＝8.1Hz，ArH)，7.06-7.15(m，4H，ArH)，6.83-6.89(m，2H，ArH)，6.67-6.70(d，1H，J＝8.1Hz，ArH)，5.84(s，1H，NH)，4.40-4.41(d，2H，J＝5.3Hz，CH2)，3.79(s，3H，CH3)，3.70(s，2H，CH2)，2.37(s，3H，CH3)，2.19(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-甲基芐基)酰胺(化合物6)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為黃色固體(142mg，37％)。mp＝191-192℃；1H NMR(CDCl3)δ7.63-7.60(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.46-7.44(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.08-7.01(m，4H，ArH)，6.88(s，1H，ArH)，6.87-6.85(d，1H，J＝6.3Hz，ArH)，6.71-6.67(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，5.89(bt，1H，NH)，4.38-4.36(d，2H，J＝5.9Hz，CH2)，3.78(s，3H，CH3)，3.69(s，2H，CH2)，2.35(s，3H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-((R)-4-二甲基芐基)酰胺(化合物7)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為淡黃色固體(124mg，31％)。mp＝201-202℃；1HNMR(CDCl3)δ7.62-7.64(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.45-7.48(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.01-7.08(m，4H，ArH)，6.87-6.90(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.83-6.84(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，6.68-6.72(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，5.76-5.78(bd，1H，J＝8.0Hz，NH)，5.09-5.14(m，1H，CH)，3.76(s，3H，CH3)，3.63-3.64(d，2H，J＝2.8Hz，CH2)，2.34(s，3H，CH3)，2.30(s，3H，CH3)，1.35-1.38(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-((S)-4-二甲基芐基)酰胺(化合物8)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為淡黃色固體(163mg，41％)。mp＝200-201℃；1HNMR(CDCl3)δ7.53-7.55(d，2H，J＝8.3Hz，ArH)，7.37-7.40(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，6.94-7.01(m，4H，ArH)，6.76-6.82(m，2H，ArH)，6.61-6.64(dd，1H，J＝9.0Hz和2.5Hz，ArH)，5.77-5.79(bd，1H，J＝7.8Hz，NH)，5.02-5.07(m，1H，CH)，3.69(s，3H，CH3)，3.58-3.59(d，2H，J＝2.9Hz，CH2)，2.27(s，3H，CH3)，2.23(s，3H，CH3)，1.28-1.30(d，3H，J＝6.9Hz，CH3)。
對(duì)比，吲哚美辛-N-甲基苯乙基酰胺(化合物9)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；50∶50)獲得，其為黃色固體(288mg，72％)。mp＝61-63℃；1H NMR(CDCl3)δ7.64-7.67(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.45-7.48(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.02(d，1H，J＝2.4Hz，ArH)，6.81-6.84(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.63-6.66(dd，1H，J＝9.0Hz和2.5Hz，ArH)，3.82(s，3H，CH3)，3.71(s，2H，CH2)，3.57-3.60(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，3.43-3.46(t，2H，J＝5.3Hz，CH2)，2.38(s，3H，CH3)，1.59-1.61(m，2H，CH2)，1.52-1.53(m，2H，CH2)，1.42-1.43(m，2H，CH2)。
對(duì)比，吲哚美辛-N-哌啶基酰胺(化合物10)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；40∶60)獲得，其為淡黃色固體(146mg，41％)。mp＝161-163℃；1HNMR(CDCl3)δ7.64-7.67(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.45-7.48(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.02(d，1H，J＝2.4Hz，ArH)，6.81-6.84(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.63-6.66(dd，1H，J＝9.0Hz和2.5Hz，ArH)，3.82(s，3H，CH3)，3.71(s，2H，CH2)，3.57-3.60(t，2H，J＝5.4Hz，CH2)，3.43-3.46(t，2H，J＝5.3Hz，CH2)，2.38(s，3H，CH3)，1.59-1.61(m，2H，CH2)，1.52-1.53(m，2H，CH2)，1.42-1.43(m，2H，CH2)。
吲哚美辛-N-(2-苯乙基)酰胺(化合物11)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70)獲得，其為亮黃色固體(169mg，44％)。mp＝148-150℃；1HNMR(CDCl3)δ7.58-7.60(d，J＝8.4Hz，ArH)，7.46-7.48(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.12-7.14(m，3H，ArH)，6.85-6.95(m，4H，ArH)，6.69-6.73(dd，1H，J＝8.9Hz和2.4Hz，ArH)，5.61(s，1H，NH)，3.81(s，3H，CH3)，3.59(s，2H，CH2)，3.43-3.49(m，2H，CH2)，2.68-2.72(t，2H，J＝6.7Hz，CH2)，2.04(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-氟苯基)酰胺(化合物12)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；5∶95到20∶80)獲得，其為桔黃色固體(217mg，57％)。mp＝200-202℃；1H NMR(CDCl3)δ7.65-7.67(d，2H，J＝8.3Hz，ArH)，7.47-7.50(d，2H，J＝8.3Hz，ArH)，7.32-7.35(m，3H，ArH)，6.94-6.96(m，3H，ArH，NH)，6.85-6.88(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.70-6.73(dd，1H，J＝9.0Hz和2.0Hz，ArH)，3.81(s，3H，CH3)，3.79(s，2H，CH2)，2.45(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-氯苯基)酰胺(化合物13)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為淡黃色固體(234mg，56％)。mp＝209-210℃；1H NMR(CDCl3)δ7.58-7.61(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.40-7.42(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.13-7.27(m，5H，ArH)，6.84(s，1H，NH)，6.77-6.80(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.62-6.65(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，3.72(s，2H，CH2)，3.72(s，3H，CH3)，2.37(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-乙酰氨基苯基)酰胺(化合物14)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為淡黃色固體(221mg，54％)。mp＝256-257℃；1HNMR(DMSO-d6)δ10.14(s，1H，NH)，9.86(s，1H，NH)，7.62-7.70(m，4H，ArH)，7.48(s，4H，ArH)，7.18(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，6.90-6.93(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.68-6.72(dd，1H，J＝9.1Hz和2.5Hz，ArH)，3.73(s，3H，CH3)，3.71(s，2H，CH2)，2.27(s，3H，CH3)，1.99(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-甲基巰基)苯基酰胺(化合物15)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；50∶50)獲得，其為亮黃色固體(162mg，40％)。mp＝195-196℃；1H NMR(CDCl3)δ7.67-7.70(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.48-7.50(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.30-7.33(d，2H，J＝8.6Hz，ArH)，7.17-7.22(m，3H，2ArH和NH)，6.92-6.93(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，6.85-6.88(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.69-6.73(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，3.80(s，3H，CH3)，3.79(s，2H，CH2)，2.45(s，3H，CH3)，2.44(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(3-甲巰基苯基)酰胺(化合物16)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；15∶85)獲得，其為黃色固體(218mg，54％)。mp＝129-131℃；1H NMR(CDCl3)δ7.62-7.64(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.45-7.48(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.39(s，1H，NH)，7.09-7.18(m，2H，ArH)，6.94-6.96(m，3H，ArH)，6.86-6.89(d，1H，J＝9.0Hz)，6.69-6.72(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，3.80(s，3H，CH3)，3.78(s，2H，CH2)，2.42(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-甲氧苯基)酰胺(化合物17)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；10∶90到25∶75)獲得，其為桔黃色固體(239mg，61％)。mp＝201-202℃；1H NMR(CDCl3)δ7.67-7.70(dd，2H，J＝6.8Hz和1.8Hz，ArH)，7.48-7.51(d，2H，J＝7.1Hz，ArH)，7.28-7.29(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，7.20(s，1H，NH)，6.94-6.95(d，1H，J＝2.4Hz，ArH)，6.86-6.89(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.78-6.84(m，2H，ArH)，6.69-6.73(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，3.81(s，3H，CH3)，3.79(s，2H，CH2)，3.76(s，3H，CH3)，2.45(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(3-乙氧苯基)酰胺(化合物18)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為亮黃色固體(297mg，74％)。mp＝152-154℃；1H NMR(CDCl3)δ7.68-7.70(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.48-7.51(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.24(s，1H，NH)，7.13-7.18(m，2H，ArH)，6.94-6.82(m，3H，ArH)，6.70-6.73(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz)，6.61-6.65(dd，1H，J＝8.2Hz和1.7Hz，ArH)，3.96-4.03(q，2H，J＝7.0Hz，CH2)，3.81(s，3H，CH3)，3.80(s，2H，CH2)，2.45(s，3H，CH3)，1.36-1.40(t，3H，J＝7.0Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-(3，4，5-三甲氧苯基)酰胺(化合物19)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；10∶90到30∶70)獲得，其為淡桔黃色固體(191mg，44％)。mp＝239-241℃；1H NMR(CDCl3)δ7.67-7.69(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.48-7.51(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.20(s，1H，NH)，6.94(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，6.70-6.74(m，3H，ArH)，3.78-3.81(m，14H，3CH3和CH2)，2.45(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(3-吡啶基)酰胺(化合物20)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；50∶50到75∶25)獲得，其為黃色固體(190mg，52％)。mp＝204-205℃；1H NMR(CDCl3)δ8.39-8.40(d，1H，J＝2.1Hz，ArH)，8.32-8.34(d，1H，J＝4.4Hz，ArH)，8.04-8.08(m，1H，ArH)，7.66-7.70(m，2H，ArH)，7.48-7.52(m，2H，ArH)，7.38(s，1H，NH)，7.22-7.25(m，1H，ArH)，6.93-6.94(d，1H，J＝2.4Hz，ArH)，6.85-6.88(d，1H，J＝9.1Hz，ArH)，6.70-6.74(dd，1H，J＝9.1Hz和2.5Hz，ArH)，3.84(s，2H，CH2)，3.81(s，3H，CH3)，2.47(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-5-((2-氯)吡啶基)酰胺(化合物21)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；5∶95到50∶50)獲得，其為淡黃色固體(221mg，54％)。mp＝196-198℃；1H NMR(CDCl3)δ8.19-8.20(d，1H，J＝2.8Hz，ArH)，8.03-8.06(dd，1H，J＝8.7Hz和2.9Hz，ArH)，7.59-7.63(m，2H，ArH)，7.46-7.51(m，3H，ArH)，7.24(s，1H，NH)，6.92-6.93(d，1H，J＝2.4Hz，ArH)，6.84-6.87(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.70-6.74(dd，1H，J＝9.1Hz和2.5Hz，ArH)，3.84(s，2H，CH2)，3.82(s，3H，CH3)，2.46(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-5-((1-乙基)吡唑啉酮)酰胺(化合物22)通過(guò)在甲醇中重結(jié)晶獲得，其為淡黃色固體(153mg，40％)。mp＝193-194℃；1HNMR(CDCl3)δ7.99(bs，1H，NH)，7.66-7.68(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)，7.47-7.50(m，3H，ArH)，7.00(s，1H，ArH)，6.83-6.86(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.69-6.72(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，6.35(s，1H，ArH)，4.01-4.04(bd，2H，J＝6.8Hz，CH2)，3.90(s，2H，CH2)，3.82(s，3H，CH3)，2.47(s，3H，CH3)，1.24-1.29(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-(3-氯丙基)酰胺(化合物23)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70)獲得，其為灰白色固體(153mg，40％)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.11(bs，1H，NH)，7.62-7.69(m，4H，ArH)，7.09(s，1H，ArH)，6.92-6.95(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，6.68-6.71(d，1H，J＝8.8Hz，ArH)，3.80(s，3H，CH3)，3.58-3.67(t，2H，J＝6.3Hz，CH2)，3.52(s，2H，CH2)，3.15-3.17(m，2H，CH2)，2.20(s，3H，CH3)，1.81-1.85(t，2H，J＝6.5Hz，CH2)。
吲哚美辛-N-甲氧羰基甲基酰胺(化合物24)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70)獲得，其為黃色固體(265mg，76％)。1HNMR(CDCl3)δ7.66-7.68(dd，2H，J＝6.7Hz和1.7Hz，ArH)，7.47-7.50(dd，2H，J＝6.9Hz和1.9Hz，ArH)，6.92-6.95(m，2H，ArH)，6.70-6.73(m，1H，ArH)，6.03(bs，1H，NH)，3.98-4.00(d，2H，J＝5.5Hz，CH2)，3.84(s，3H，CH3)，3.71(s，3H，CH3)，3.69(s，2H，CH2)，2.38(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-2-(2-L-甲氧羰基乙基)酰胺(化合物25)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70而后50∶50)獲得，其為黃色固體(300mg，84％)。1H NMR(CDCl3)δ7.67-7.70(dd，2H，J＝8.5Hz和1.85Hz，ArH)，7.47-7.50(dd，2H，J＝8.4Hz和1.9Hz，ArH)，6.91-6.96(m，2H，ArH)，6.69-6.73(m，1H，ArH)，6.16-6.18(d，1H，J＝7.4Hz，NH)，4.57-4.62(m，1H，CH)，3.83(s，3H，CH3)，3.70(s，3H，CH3)，3.65(s，2H，CH2)，2.37(s，3H，CH3)，1.32-1.34(d，3H，J＝7.2Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-2-(2-D-甲氧羰基乙基)酰胺(化合物26)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；40∶60)獲得，其為黃色固體(803mg，67％)。1HNMR(CDCl3)δ7.67-7.70(dd，2H，J＝8.5Hz和1.85Hz，ArH)，7.47-7.50(dd，2H，J＝8.4Hz和1.9Hz，ArH)，6.91-6.96(m，2H，ArH)，6.69-6.73(dd，1H，ArH)，6.16-6.18(d，1H，J＝7.4Hz，NH)，4.57-4.62(m，1H，CH)，3.83(s，3H，CH3)，3.70(s，3H，CH3)，3.65(s，2H，CH2)，2.36(s，3H，CH3)，1.32-1.34(d，3H，J＝7.2Hz，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-甲氧羰基芐基)酰胺(化合物27)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；40∶60)獲得，其為黃色固體(198mg，47％)。1HNMR(CDCl3)δ7.91-7.94(d，2H，J＝6.8Hz，ArH)，7.61-7.65(d，2H，J＝8.7Hz，ArH)，7.45-7.48(d，2H，J＝9.0Hz，ArH)，7.19-7.21(d，2H，J＝8.3Hz，ArH)，6.83-6.88(m，2H，ArH)，6.68-6.72(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，5.97-5.99(bt，1H，J＝5.9Hz，NH)，4.45-4.47(d，2H，J＝6.1Hz，CH2)，3.90(s，3H，CH3)，3.83(s，3H，CH3)，3.72(s，2H，CH2)，2.38(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-甲氧羰基甲苯基)酰胺(化合物28)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；20∶80)獲得，其為黃色固體(100mg，23％)。1HNMR(CDCl3)δ7.67-7.70(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.48-7.51(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.33-7.36(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.18-7.23(d和bs，3H，ArH和NH)，6.92-6.93(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，6.85-6.88(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.70-6.73(dd，1H，J＝9.0Hz和2.0Hz，ArH)，3.81(s，5H，CH2和CH3)，3.67(s，3H，CH3)，3.56(s，3H，CH2)，2.45(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(2-吡嗪基)酰胺(化合物29)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70到50∶50)獲得，其為亮黃色固體(251mg，69％)，1HNMR(CDCl3)δ9.58(d，1H，J＝1.4Hz，ArH)，8.33-8.34(d，1H，J＝2.5Hz，ArH)，8.16-8.17(m，1H，ArH)，7.86(bs，1H，NH)，7.69-7.71(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.49-7.51(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，6.92-6.93(d，1H，J＝2.4Hz，ArH)，6.84-6.87(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，6.70-6.72(dd，1H，J＝9.0Hz和2.5Hz，ArH)，3.86(s，2H，CH2)，3.81(s，3H，CH3)，2.47(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-2-(4-甲基噻唑基)酰胺(化合物30)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70而后70∶30)獲得，用乙醚重結(jié)晶后純產(chǎn)物為淡黃色固體(241mg，63％)。1H NMR(CDCl3)δ8.68(bs，1H，NH)，7.70-7.74(d，2H，J＝9.0Hz，ArH)，7.48-7.52(d，2H，J＝9.0Hz，ArH)，6.79-6.85(m，2H，ArH)，6.67-6.71(dd，1H，J＝9.0Hz和2.4Hz，ArH)，6.52(s，1H，噻唑H)，3.88(s，2H，CH2)，3.79(s，3H，CH3)，2.45(s，3H，CH3)，2.27(s，3H，CH3)。
吲哚美辛-N-(4-聯(lián)苯基)酰胺(化合物31)通過(guò)硅膠色譜(EtOAc∶己烷；30∶70)獲得純產(chǎn)物，其為為淡黃色固體(421mg，59％)，1HNMR(CDCl3)δ7.68-7.71(d，2H，J＝8.4Hz，ArH)，7.32-7.55(m，11H，ArH)，6.95-6.96(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，6.86-6.89(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.73-6.74(dd，1H，J＝1.7Hz，ArH)，3.83(s，2H，CH2)，3.81(s，3H，CH3)，2.47(s，3H，CH3)。
吲哚美辛和化合物1-31的結(jié)構(gòu)與IC50值列于下表。
表 吲哚美辛酰胺衍生物的選擇性COX-2抑制 化合物R IC50(μM)a選擇性bCOX-2COX-1吲哚美辛 OH0.75 0.05 0.0661 NHCH30.70 ＞66c＞942 0.25 ＞6628730.0375 66 17604 0.04 16.5412.55 0.15 ＞66c＞4406 0.06 8.0 1337 0.06254.0 648 0.20 4.0 209(對(duì)比)＞33c＞66 ---10(對(duì)比)＞33c＞66 ---11 0.06 ＞66 ＞1100aIC50值通過(guò)將在DMSO中的幾種濃度的抑制劑與人COX-2(66nM)或羊COX-1(nM)一起保溫，接著在37℃下用14C-AA(50μM)處理30秒而確定，分析平行進(jìn)行二份。
bIC50(COX-1)∶IC50(COX-2)的比。
c在該濃度下大于80％保留COX-1活性。
表(續(xù)) 吲哚美辛酰胺衍生物的選擇性COX-2抑制 化合物RIC50(μM)a選擇性bCOX-2 COX-112 0.06＞66c＞110013 0.062 ＞66c＞106414 0.12＞66c＞55015 0.12＞66c＞55016 0.22＞66c＞3001.7 0.056 ＞66c＞117818 0.6552.5 8119 ＞1.0＞66 ＞6620 0.052＞66 ＞126921 0.047＞66c＞1404220.70 ＞66c＞94
表(續(xù)) 吲哚美辛酰胺衍生物的選擇性COX-2抑制 化合物R IC50(μM)a選擇性bCOX-2COX-1230.05045 90024 4.0 ＞66＞16.525 0.4 ＞66＞16526 0.19 ＞66＞34727 0.080 ＞66＞82528 0.058＞66＞113829 4.0 ＞66＞16.5304.0 ＞66＞16.531 0.5 ＞66 ＞132aIC50值通過(guò)將在DMsO中的幾種濃度的抑制劑與人COX-2(66nM)或羊COX-1(nM)一起保溫，接著在37℃下用14C-AA(50μM)處理30秒而確定，分析平行進(jìn)行二份。
bIC50(COX-1)∶IC50(COX-2)的比。
c在該濃度下大于80％保留COX-1活性。
吲哚美辛仲酰胺衍生物的討論吲哚美辛羧酸脂族仲酰胺衍生物N-甲基酰胺衍生物(化合物1)顯示選擇性COX-2抑制(IC50(COX-2)約0.70μM；IC50(COX-1)＞66μM)。在更長(zhǎng)鏈的辛基同系物(化合物3)中觀測(cè)到COX-2抑制能力和選擇性的增加，但鏈的長(zhǎng)度進(jìn)一步增加到壬基衍生物(化合物4)時(shí)則導(dǎo)致COX-2選擇性的部分損失(化合物3IC50(COX-2)約37.5nM，IC50(COX-1)66μM；化合物4IC50(COX-2)約40nM，IC50(COX-1)約16.5μM)。吲哚美辛羧酸芳族仲酰胺衍生物在酰胺氮和苯環(huán)間引入亞甲基間隔單元(化合物11)也產(chǎn)生有效的且具備選擇性的COX-2抑制劑。
舉例來(lái)說(shuō)，4-甲基芐基酰胺衍生物(化合物6)對(duì)COX-2的選擇性是133倍，而相應(yīng)的2-甲基芐基異構(gòu)體(化合物5)作為COX-2抑制劑的選擇性為大于440倍。另外，R-甲基-(4-甲基芐基)對(duì)映體(化合物7)是比相應(yīng)的S-甲基對(duì)映體(化合物8)更好的COX-2抑制劑。
另外，含4-氟(化合物12)、4-甲基巰基(化合物15)或3-吡啶基(化合物20)取代基的芳族酰胺表現(xiàn)出有效而且具有選擇性的COX-2抑制，如下所示 化合物12IC50(COX-2)～0.060μMIC50(COX-1)＞66μM 化合物15IC50(COX-2)～0.12μMIC50(COX-1)＞66μM 化合物20IC50(COX-2)～0.052μMIC50(COX-1)＞66μM三級(jí)酰胺衍生物(對(duì)比化合物9和10)吲哚美辛酰胺的SAR研究中另一個(gè)有趣的方面是N，N-甲基-2-苯乙基(化合物9)和哌啶基(化合物10)酰胺衍生物都是三級(jí)酰胺，它們對(duì)COX-2無(wú)活性。換句話說(shuō)，僅仲酰胺是選擇性COX-2抑制劑，而三級(jí)酰胺對(duì)任何同工酶都無(wú)抑制作用，即對(duì)三級(jí)酰胺COX-2抑制作用的測(cè)量終止在極高的IC50值處(見(jiàn)對(duì)化合物9和10值為33)并且仍保留了大于80％的COX-1活性。
這種行為可被最近解析的與NS-398復(fù)合的鼠COX-2的晶體結(jié)構(gòu)解釋。參見(jiàn)，Kurumbail等，摘要197，癌癥、炎癥和相關(guān)疾病中的廿烷類和其他生物活性脂類，第五屆國(guó)際會(huì)議，La，Jolla，California(1997年9月17-20日)。與二芳基雜環(huán)類不同，盡管NS-398含有磺酰胺基團(tuán)，它也沒(méi)有使用側(cè)袋。取而代之，磺酰胺以與含羧酸NSAID相似的方式與Arg106結(jié)合。
盡管本發(fā)明中吲哚美辛羧酸仲酰胺衍生物并沒(méi)有包含任何拉電子取代基，但上述SAR觀測(cè)到羧酸三級(jí)酰胺衍生物缺乏抑制作用，表明-CONH-R1基團(tuán)可能與酶中某基團(tuán)結(jié)合(見(jiàn)下)。通過(guò)比較下面本發(fā)明的仲酰胺衍生物(化合物11)和對(duì)比三級(jí)酰胺衍生物(化合物9和10)以及先前文獻(xiàn)中的化合物NS-398的對(duì)比衍生物的數(shù)據(jù)，可以立即發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，其中，NS-398是NHSO2CH3部分的N-H質(zhì)子被甲基取代。 化合物11IC50(COX-2)～0.060μMIC50(COX-1)＞66μM 化合物9IC50(COX-2)＞33μMIC50(COX-1)＞66μM 化合物10IC50(COX-2)＞33μMIC50(COX-1)＞66μM
化合物17，化合物17對(duì)完整鼠細(xì)胞中COX-2活性的抑制在鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞中分析，在這種巨噬細(xì)胞中COX-2活性是被病理刺激物誘導(dǎo)的。巨噬細(xì)胞用LPS(500ng/mL)和干擾素-g(10U/mL)處理7.5小時(shí)以誘導(dǎo)COX-2，然后用幾種濃度的吲哚美辛4-甲氧苯基酰胺衍生物(化合物17)在37℃處理30分鐘?；衔?7對(duì)PGD2的IC50值為62.5nM。在這些條件下，吲哚美辛是比化合物17更好的完整鼠細(xì)胞中的COX-2活性抑制劑(IC50約10nM)。
事實(shí)上，吲哚美辛作為純化的小鼠COX-2抑制劑與作為純化的人COX-2抑制劑的能力比較揭示吲哚美辛表現(xiàn)出對(duì)小鼠的酶比對(duì)人的同工型具有更強(qiáng)的抑制作用(IC50(鼠COX-2)約350nM；IC50(人COX-2)約1μM)。另一方面，吲哚美辛酰胺衍生物(化合物11)作為人COX-2抑制劑比作為鼠COX-2抑制劑更好。(化合物11IC50(鼠COX-2)約120nM；IC50(人COX-2)約75nM)。
這些結(jié)果也加強(qiáng)了其他研究者以前的觀測(cè)結(jié)果，他們的結(jié)果表明大鼠COX酶在藥理學(xué)上與人類的這些酶不同，如在Ramesha，“人和大鼠環(huán)氧合酶在藥理學(xué)上不同”，Adv.Exp.Med.Biol.(1997)，第407卷，第67-71頁(yè)。
在這些實(shí)驗(yàn)中，注射的角叉菜聚糖溶于0.1mL鹽水中，這樣0.1mL體積增加是僅因?yàn)樽⑸?。考慮這一點(diǎn)后，發(fā)現(xiàn)化合物14處理后炎癥約有80-85％的降低。為了比較，在該分析中也測(cè)試了吲哚美辛，口服劑量為2mg/kg，發(fā)現(xiàn)炎癥有類似的降低。
更具體地說(shuō)，在用甲氧氟烷溫和麻醉下，向雄性Sprague-Dawley大鼠(150克)右后腳板足下注射角叉菜聚糖(0.1mL 1％角叉菜聚糖的無(wú)菌鹽水混懸液)。1小時(shí)后大鼠被管飼0.5mL含90μL DMSO或90μL下述劑量的化合物14的玉米油。為計(jì)算水腫，用水置換器官充滿度測(cè)量器在注射后3小時(shí)測(cè)量同側(cè)腳板體積(mL)，并與注射前0小時(shí)的腳板體積比較。
對(duì)每種劑量，注射6只大鼠，結(jié)果總結(jié)如下。

實(shí)施例5腫瘤抑制測(cè)試測(cè)定了化合物11對(duì)裸鼠體內(nèi)的人結(jié)腸癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)的抑制力(人腫瘤異種移植物分析)。在對(duì)小鼠皮下接種人腫瘤細(xì)胞后，向動(dòng)物腹膜內(nèi)注射載體或含5mg/mL化合物11的載體，一周三次。
更具體地說(shuō)，在向背側(cè)表面皮下植入于PBS中的5×106HCA-7(人結(jié)腸腺癌，colony 29)細(xì)胞之前，向雄性無(wú)胸腺裸(nu/nu)鼠(25克，6-8周，Harlan Sprague-Dawley)腹膜內(nèi)注射100μL載體(無(wú)菌PBS溶液中的5％乙醇、5％吐溫80)或100μL含化合物11的載體。小鼠，每組5只，一周三次接受注射載體或含化合物11(5mg/kg)的載體。腫瘤體積用電子測(cè)徑儀外部測(cè)定。
從總結(jié)如下的腫瘤生長(zhǎng)的比較中，可以看出化合物11明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)。

要理解在不背離本發(fā)明的范圍的前提下，本發(fā)明的各種細(xì)節(jié)可以改變。另外，在前的描述僅為闡釋的目的而不是為了限制權(quán)利要求書中定義的本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.治療溫血脊椎動(dòng)物癌癥的方法，其包含給予動(dòng)物足以抑制癌癥的治療有效量的某化合物的羧酸仲酰胺衍生物，其中(1)所述衍生物對(duì)環(huán)氧合酶-2的抑制是選擇性的；以及(2)所述化合物(a)是環(huán)氧合酶抑制劑，但對(duì)環(huán)氧合酶-2的抑制缺乏選擇性，且(b)含有羧酸部分或其藥學(xué)可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中癌癥的治療是抗血管生成的治療，且足以抑制癌癥的量足以抑制供給癌癥的血細(xì)胞或供給癌癥的血管細(xì)胞。
3.權(quán)利要求1的方法，其中癌癥治療是抗腫瘤治療，且足以抑制癌癥的量足以抑制腫瘤生長(zhǎng)。
4.權(quán)利要求3的方法，進(jìn)一步包括，所述衍生物具有止痛、抗炎或退熱性質(zhì)，像所述化合物所具有的一樣，且治療提供止痛、抗炎或退熱作用，而未同時(shí)給予其他化合物以提供這些作用。
5.權(quán)利要求1的方法，其中的化合物是非甾體抗炎藥。
6.權(quán)利要求5的方法，其中的非甾體抗炎藥選自芬那酸類、吲哚類、苯基鏈烷酸類、苯乙酸類、它們的藥學(xué)可接受的鹽，以及它們的組合。
7.權(quán)利要求5的方法，其中的非甾體抗炎藥選自吲哚美辛、6-甲氧基-α-甲基-2-萘乙酸、甲氯芬那酸、雙氯芬酸、氟芬那酸、尼氟酸、甲芬那酸、舒林酸、托美丁、舒洛芬、酮咯酸、氟比洛芬、布洛芬、醋芬酸、阿芬酸、氨芬酸、苯噁洛芬、溴芬酸、卡洛芬、環(huán)氯茚酸、二氟尼柳、乙芬那酸、乙哚乙酸、芬布芬、芬氯酸、苯克洛酸、非諾洛芬、氟克洛酸、吲哚洛芬、三苯唑酸、酮洛芬、洛索洛芬、甲氯芬那酸鹽、萘普生、奧帕諾辛、吡洛芬、普拉洛芬、托芬那酸、扎托洛芬、苯酰吡酸、它們的藥學(xué)可接受的鹽，以及它們的組合。
8.權(quán)利要求1的方法，其中的仲酰胺衍生物是非甾體抗炎藥的仲酰胺衍生物。
9.權(quán)利要求1的方法，其中的仲酰胺衍生物選自以下物質(zhì)的仲酰胺衍生物芬那酸類、吲哚類、苯基鏈烷酸類、苯乙酸類，以及它們的組合。
10.權(quán)利要求1的方法，其中的仲酰胺衍生物選自以下物質(zhì)的仲酰胺衍生物吲哚美辛、6-甲氧基-α-甲基-2-萘乙酸、甲氯芬那酸、雙氯芬酸、氟芬那酸、尼氟酸、甲芬那酸、舒林酸、托美丁、舒洛芬、酮咯酸、氟比洛芬、布洛芬、醋芬酸、阿芬酸、氨芬酸、苯噁洛芬、溴芬酸、卡洛芬、環(huán)氯茚酸、二氟尼柳、乙芬那酸、乙哚乙酸、芬布芬、芬氯酸、苯克洛酸、非諾洛芬、氟克洛酸、吲哚洛芬、三苯唑酸、酮洛芬、洛索洛芬、甲氯芬那酸鹽、萘普生、奧帕諾辛、吡洛芬、普拉洛芬、托芬那酸、扎托洛芬、苯酰吡酸，以及它們的組合。
11.權(quán)利要求1的方法，其中的仲酰胺衍生物選自吲哚美辛-N-甲基酰胺、吲哚美辛-N-乙烷-2-醇酰胺、吲哚美辛-N-辛基酰胺、吲哚美辛-N-壬基酰胺、吲哚美辛-N-(2-甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-((R)-，4-二甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-((S)-，4-二甲基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-(2-苯乙基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-氟苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-氯苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-乙酰氨基苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲基巰基)苯基酰胺、吲哚美辛-N-(3-甲巰基苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲氧苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(3-乙氧苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(3，4，5-三甲氧苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(3-吡啶基)酰胺、吲哚美辛-N-5-((2-氯)吡啶基)酰胺、吲哚美辛-N-5-((1-乙基)吡唑啉酮)酰胺、吲哚美辛-N-(3-氯丙基)酰胺、吲哚美辛-N-甲氧羰基甲基酰胺、吲哚美辛-N-2-(2-L-甲氧羰基乙基)酰胺、吲哚美辛-N-2-(2-D-甲氧羰基乙基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲氧羰基芐基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-甲氧羰基甲基苯基)酰胺、吲哚美辛-N-(2-吡嗪基)酰胺、吲哚美辛-N-2-(4-甲基噻唑基)酰胺、吲哚美辛-N-(4-聯(lián)苯基)酰胺，以及它們的組合。
12.權(quán)利要求1的方法，其中足以抑制癌癥的治療有效量在每天每千克動(dòng)物體重約0.5mg到約7.0mg的范圍內(nèi)。
13.權(quán)利要求1的方法，其中足以抑制癌癥的治療有效量在每天每千克動(dòng)物體重約1.5mg到約6.0mg的范圍內(nèi)。
14.權(quán)利要求1的方法，其中足以抑制癌癥的治療有效量在每天每千克動(dòng)物體重約2.0mg到約5.0mg的范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過(guò)給予各種含COOH的藥物的仲酰胺衍生物治療患有癌癥的動(dòng)物的方法,含COOH的藥物例如含COOH的非甾體抗炎藥,如吲哚美辛。
文檔編號(hào)A61K31/427GK1337850SQ99816425
公開日2002年2月27日 申請(qǐng)日期1999年12月16日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月7日
發(fā)明者阿米特·S·卡爾古特卡, 勞倫斯·J·馬爾內(nèi)特 申請(qǐng)人:范德比爾特大學(xué)