用于治療Alpers-Huttenlocher綜合征的藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體地，涉及藥物、藥物組合物及其用途，更具體地，涉及用于治療Alpers-Huttenlocher綜合征藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]Alpers-Huttenlocher 綜合征(Alpers-Huttenlocher syndrome, AHS)在臨床上常常有難治性癲癇、進行性肝衰竭同時有發(fā)作性的精神運動減退等神經(jīng)疾病癥狀。該病以嬰幼兒，也可晚至青少年發(fā)病，甚至有報道25歲發(fā)病(Simonati A et al., 2003 ；HunterMF ea al., 2011) ο丙戊酸鈉(Sodium Valproate, VPA)是一種廣譜抗癲癇的藥物，它對治療癲癇具有良好的效果，但是使用VPA對AHS患者進行治療時誘發(fā)高死亡率，研宄發(fā)現(xiàn)，月艮用VPA的患者死亡率高達1/3。
[0003]因而，治療Alpers-Huttenlocher綜合征的藥物有待于進一步研宄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種用于預(yù)防和治療Alpers-Huttenlocher綜合征的藥物組合物，該藥物組合物能高顯著減輕VPA單獨用藥引起的肝細胞凋亡。
[0005]需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作而完成的:
[0006]AHS患者施用VPA易導(dǎo)致急性肝衰竭，誘發(fā)高死亡率的情況，嚴重限制了 VPA的臨床應(yīng)用。發(fā)明人經(jīng)大量實驗研宄發(fā)現(xiàn)，肝衰竭與患者施用VPA后肝細胞易于通過線粒體途徑發(fā)生自發(fā)凋亡異常升高有關(guān)。線粒體上的通透性轉(zhuǎn)換孔道(mPTP孔道)具有重要的生理功能，發(fā)明人將mPTP孔道設(shè)計成藥物靶點，與VPA聯(lián)合施用，利用CsA對mPTP的抑制作用，從而抑制VPA對AHS患者肝細胞的毒性，實驗結(jié)果表明Csk與VPA聯(lián)合施用可以顯著提高VPA治療AHS癲癇的成功率，從而提高患者的存活機率。
[0007]因而，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一種用于治療Alpers-Huttenlocher綜合征的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該藥物組合物包含:丙戊酸鈉和抗肝損傷藥物，其中所述抗肝損傷藥物選自環(huán)孢素A、左旋肉堿和N-乙酰半胱氨酸的至少之一。發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，利用該藥物組合物可以對Alpers-Huttenlocher綜合征進行治療，治療效果好，并且能顯著抑制肝細胞凋亡，明顯減輕單獨使用VPA對AHS患者進行治療時導(dǎo)致的急性肝衰竭，降低患者的死亡率。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了一種藥物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該藥物包括前述的藥物組合物。發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，利用該藥物可以對Alpers-Huttenlocher綜合征進行治療，治療效果好，并且能顯著抑制肝細胞凋亡，明顯減輕使用VPA對AHS患者進行治療時導(dǎo)致的患者急性肝衰竭，降低患者的死亡率。
[0009]根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了前述的藥物組合物或前述的藥物在預(yù)防和治療Alpers-Huttenlocher綜合征以及預(yù)防和治療具有Alpers-Huttenlocher綜合征相似癥狀的疾病的用途。由此，利用前述的藥物組合物或前述的藥物對Alpers-Huttenlocher綜合征及其具有相似癥狀的疾病進行預(yù)防和治療，能顯著抑制肝細胞凋亡，明顯減輕使用VPA對AHS患者進行治療時導(dǎo)致的患者急性肝衰竭，降低患者的死亡率。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了選自環(huán)孢素A、左旋肉堿和N-乙酰半胱氨酸的至少之一在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防或者治療對象中丙戊酸鈉所引起的肝損傷。由此，該組合物能顯著抑制肝細胞的凋亡情況，明顯減輕丙戊酸鈉所引起的肝損傷，降低丙戊酸鈉的毒副作用。
[0011]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0012]本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結(jié)合下面附圖對實施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中:
[0013]圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的患者IAHS皮膚成纖維細胞誘導(dǎo)AHS iPSCs第4天的細胞狀態(tài)的顯微圖片；
[0014]圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的患者I的AHS iPSCs誘導(dǎo)分化成AHSiPSCs-Hep過程各階段的細胞狀態(tài)顯微圖片；
[0015]圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的VPA處理的Ctrl、H1，患者IAHS iPSCs-Hep和患者2AHS iPSCs-Hep的細胞凋亡實驗結(jié)果示意圖；
[0016]圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的Ctrl、Hl和患者IAHS iPSCs-HepmPTP開放頻率不意圖；
[0017]圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的分別用VPA以及VAP-CsA處理的Ctrl、Hl以及患者I和患者2的AHS iPSCs-Hep的細胞凋亡實驗結(jié)果示意圖；
[0018]圖6顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的分別用VPA、VAP+L-Carnitine以及VPA+NAC處理的Ctrl、Hl以及患者I和患者2的AHS iPSCs-Hep的細胞凋亡實驗結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0019]下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0020]本發(fā)明的技術(shù)方案是發(fā)明人通過大量的實驗，反復(fù)地研宄而獲得的。AHS疾病大部分是線粒體DNA的聚合酶基因POLG突變引起線粒體DNA缺失突變導(dǎo)致的，目前僅發(fā)現(xiàn)POLG基因突變情況以及線粒體DNA的缺失突變情況，但對POLG基因突變以及線粒體DNA的缺失突變怎樣引起線粒體功能缺陷而導(dǎo)致細胞易于凋亡的研宄存在空白，發(fā)明人進行了大量的實驗，對凋亡的病理原因進行研宄，從而獲得了針對VPA治療Alpers-Huttenlocher綜合征導(dǎo)致肝損傷的治療靶點。
[0021]首先，發(fā)明人對線粒體途徑的細胞凋亡進行檢測。發(fā)明人進行AnnexinV-FITC和PI雙染實驗，通過流式細胞儀分析的方法檢測肝細胞凋亡，研宄發(fā)現(xiàn)分化得到的肝細胞會自發(fā)凋亡，而且AHS肝細胞更易自發(fā)凋亡，VPA處理后肝細胞凋亡都有所提高但是AHS肝細胞的凋亡率遠高于正常人的肝細胞。這可能是AHS患者往往伴隨著肝衰竭，且用VPA對患者進行治療后出現(xiàn)急性肝衰竭癥狀的原因。
[0022]為找出AHS患者細胞凋亡水平高的原因，發(fā)明人檢測了與細胞凋亡密切相關(guān)的線粒體mPTP孔道的開放情況。利用Calcein-氯化鈷實驗進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AHS肝細胞中calcein染料的綠色熒光最弱，熒光值越弱表示mPTP孔道開放頻率越高，該結(jié)果表明AHS肝細胞線粒體mPTP孔道開放頻率明顯大于正常人的肝細胞。
[0023]基于上述實驗，發(fā)明人將mPTP設(shè)計成的藥物革El點。CsA是線粒體mPTP孔道開放的抑制劑，用CsA處理能顯著提高AHS，Ctrl和Hl肝細胞的熒光，降低肝細胞線粒體mPTP孔道開放。發(fā)明人將CsA與VPA作為藥物組合物，對Alpers-Huttenlocher綜合征進行治療，發(fā)現(xiàn)該組合物對AHS患者的治療效果好，并且能顯著抑制肝細胞凋亡，明顯減輕使用VPA對AHS患者進行治療時導(dǎo)致的患者急性肝衰竭，降低患者的死亡率。
[0024]根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一種用于治療Alpers-Huttenlocher綜合征的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該藥物組合物包含:丙戊酸鈉和抗肝損傷藥物，其中所述抗肝損傷藥物選自環(huán)孢素A、左旋肉堿和N-乙酰半胱氨酸的至少之一。發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，利用該藥物組合物可以對Alpers-Huttenlocher綜合征進行治療，治療效果好，并且能顯著抑制肝細胞凋亡，明顯減輕使用VPA對AHS患者進行治療時導(dǎo)致的急性肝衰竭，降低患者的死亡率。
[0025]本發(fā)明中所使用的術(shù)語“抗肝損傷藥物”是指與丙戊酸鈉作為藥物組合物共同使用，用于減輕單獨使用VPA在預(yù)防和治療Alpers-Huttenlocher綜合征，和具有Alpers-Huttenlocher綜合征相似癥狀的疾病時，引起的肝損傷。由此，抗肝損傷藥物的種類不受特別的限制，只要與VPA共同使用，相對于VPA單獨使用，在用于預(yù)防和治療Alpers-Huttenlocher綜合征，和具有Alpers-Huttenlocher綜合征相似癥狀的疾病時，能減輕肝損傷即可，例如，本發(fā)明實施例采用的環(huán)孢素A、左旋肉堿和N-乙酰半胱氨酸。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的實施例，丙戊酸鈉與抗肝損傷藥物的摩爾比是本發(fā)明藥物組合物的重要技術(shù)特征之一。一般而言，在本發(fā)明的藥物組合物中，丙戊酸鈉與所述抗肝損傷藥物的摩爾比為2000:1-2:1。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，丙戊酸鈉和環(huán)孢素A的摩爾比為2000:1-500:1，其中，摩爾比為1000:1藥物效果更佳。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，丙戊酸鈉和左旋肉堿的摩爾比為50:1-2:1，其中，摩爾比為4:1時，藥物效果更佳。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，丙戊酸鈉和N-乙酰半胱氨酸的摩爾比為100:1-2:1，其中，摩爾比為20:1時，藥物效果更佳。
[0027]本發(fā)明中丙戊酸鈉與抗肝損傷藥物的摩爾比可以根據(jù)所選配伍藥物、給藥方式和適應(yīng)癥的不同而研宄出最佳摩爾比。由此，藥物組合物對Alpers-Huttenlocher綜合征的治療效果好，對肝損傷小。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了一種藥物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該藥物包括前述的藥物組合物。發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，利用該藥物可以對Alpers-Huttenlocher綜合征進行治療，治療效果好，并且能顯著抑制肝細胞凋亡，明顯減輕使用VPA對AHS患者進行治療時導(dǎo)