癡呆癥治療藥或預(yù)防藥的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及癡呆癥治療藥或預(yù)防藥。具體而言，本發(fā)明涉及具有優(yōu)異的認(rèn)知功能 改善效果的新的含有抗磷酸化蛋白或肽抗體和抗磷酸化tau抗體或能夠誘導(dǎo)抗磷酸化tau 抗體的抗原的癡呆癥治療藥或預(yù)防藥。
【背景技術(shù)】
[0002] 癡呆癥是指一且發(fā)達(dá)了的智力因后天的某種原因而下降、呈現(xiàn)社會性適應(yīng)困難的 狀態(tài)。癡呆性疾病分為神經(jīng)變性疾病、血管性癡呆癥、朊病毒病、感染性疾病、代謝?內(nèi)分泌 疾病、外傷和腦外科疾病、中毒性疾病等（非專利文獻(xiàn)1)。在日本，2010年時存在約210萬 名左右的癡呆癥患者，據(jù)報道65歲以上的高齡者中的患病率為8?10%左右或10%以上，在 全球性的高齡化潮流中被認(rèn)為是大問題（非專利文獻(xiàn)2)。看看癡呆癥的基礎(chǔ)疾病可知：約 35%為阿爾茨海默?。ˋD)，約15%為AD和腦血管性的混合型，5%為額葉顳葉變性?。‵TLD)， 作為變性疾病的AD或FTLD等神經(jīng)變性疾病占大部分比例（非專利文獻(xiàn)2)。由神經(jīng)變性疾 病引起的癡呆癥是以用至少6個月以上的時間進(jìn)行的記憶障礙和/或人格變化的潛在性發(fā) 病為特征的疾病。在與認(rèn)知功能障礙的程度具有高度相關(guān)性的神經(jīng)變性過程中一貫的特長 是神經(jīng)原纖維變化（神經(jīng)原纖維纏結(jié)，NFT)(非專利文獻(xiàn)3)。
[0003] 在人體內(nèi)，tau (蛋白）是指由存在于17號染色體（17q21)的MPT基因編碼的蛋 白，是在中樞系統(tǒng)大量表達(dá)的微小管結(jié)合蛋白之一。發(fā)現(xiàn)tau是構(gòu)成作為神經(jīng)變性疾病的 代表的AD中的NFT的雙股螺旋狀纖維（paired helical filament)和直纖維（straight filament)的主要構(gòu)成蛋白，更明確了在各種神經(jīng)疾病中tau在細(xì)胞內(nèi)蓄積。這種發(fā)生tau 在細(xì)胞內(nèi)蓄積的疾病統(tǒng)稱為Tau蛋白?。═au病，Tauopathy)(非專利文獻(xiàn)4)。作為Tau蛋 白病中包含的神經(jīng)變性疾病，有阿爾茨海默?。ˋD)、皮質(zhì)基底核變性?。–BD或CBS)、進(jìn)行 性核上性麻痹、皮克病、嗜銀顆粒性癡呆癥（嗜銀性顆粒?。?、癡呆癥患者多系統(tǒng)tau蛋白病 (Multiple system tauopathy with dementia，MSTD)、連鎖于 17 號染色體的伴帕金森式綜 合征的額顳型癡呆癥（FTDP-17)、神經(jīng)原纖維變化型癡呆癥、伴有鈣質(zhì)沉積的彌漫性神經(jīng)原 纖維變化病（DNTC)、伴有球狀神經(jīng)膠質(zhì)封入體的白質(zhì)Tau蛋白病（WMT-GGI)、伴有tau陽性 封入體的額顳葉變性病（FTLD-tau)等，即使在神經(jīng)變性疾病以外，Tau蛋白病還包括：昏睡 性腦炎后遺癥或亞急性硬化性全腦炎等由感染癥引起的疾病、拳擊者腦病等由外傷引起的 疾?。ǚ菍＠墨I(xiàn)4)。
[0004] MPT基因的基因組上的結(jié)構(gòu)包含13個外顯子，通過選擇性剪接表達(dá)多個作為同 工型的蛋白（非專利文獻(xiàn)4)。另外，作為tau的結(jié)構(gòu)特征，依據(jù)外顯子2和外顯子3的選擇 性剪接的29個氨基酸重復(fù)序列（N)由0?2個（NO?N2) N末端酸性結(jié)構(gòu)域、含有大量脯 氨酸的中間結(jié)構(gòu)域、以及包含3個（3R)或4個（4R)參與微小管結(jié)合的重復(fù)序列（R)的C 末端微小管結(jié)合結(jié)構(gòu)域（由外顯子9?12編碼）構(gòu)成（非專利文獻(xiàn)3和4)。因此，根據(jù)包 含29個氨基酸重復(fù)序列（N)和參與微小管結(jié)合的重復(fù)序列（R)的數(shù)目，tau以3R0N (352個 氨基酸）_3R1N(381個氨基酸）_3R 2N(410個氨基酸）_4R0N(383個氨基酸）_4R1N(412 個氨基酸）和4R2N(441個氨基酸）這6種作為代表性的同工型。在這些同種型中，在胎兒 期的腦中只存在3R0N，相對于此，在成人的人腦中存在所有的6種同種型，但4R型大量存 在（非專利文獻(xiàn)3)。同種型的3R型與4R型的不同是由包含通過選擇性剪接除去外顯子 10的（3R)的（4R)來決定。這樣，雖然tau中存在幾種同工型，但為了特定其對應(yīng)位置的氨 基酸編號，用作為最長同工型的4R2N(SEQ ID NO: 1)中的氨基酸的編號（1?441)表示。 例如，記作Ser413時，在4R2N(SEQ ID NO: 1)中表示第413位的氨基酸殘基即絲氨酸，在 4R1N(SEQ ID NO: 2)中表示第384位的氨基酸殘基即絲氨酸、在4R0N(SEQ ID NO: 3)中 表示第355位的氨基酸殘基即絲氨酸、在3R2N(SEQ ID NO: 4)中表示第382位的氨基酸殘 基即絲氨酸、在3R1N(SEQ ID NO: 5)中表示第353位的氨基酸殘基即絲氨酸、在3R0N(SEQ ID NO: 6)中表示第324位的氨基酸殘基即絲氨酸。
[0005] 神經(jīng)變性疾病中的tau的參與在與連鎖于最初17號染色體伴帕金森式綜合征 的額顳型癡呆癥（FTDP-17)中存在著由MPT基因突變與tau蓄積的關(guān)系解明的原委，在 FTDP-17中報道了 MAPT基因中的40種以上的基因突變（非專利文獻(xiàn)4)。這樣的基因突變 會引起tau同工型的比率變化或突變tau與微小管的相互作用的變化，暗示參與病態(tài)形成 的可能性。但是，不同于家族性神經(jīng)變性疾病，在AD等散發(fā)性神經(jīng)變性疾病中，往往看不到 MAPT的突變。另外，作為在神經(jīng)變性疾病中蓄積的tau的特征，具有高度接受磷酸化修飾的 特征。另外，在顯示出輕度的認(rèn)知功能障礙的患者（MCI)中，在骨髓液中的磷酸化tau量與 下垂體萎縮之間發(fā)現(xiàn)了相關(guān)性，認(rèn)為磷酸化tau是關(guān)于Tau蛋白病患者中的神經(jīng)變性的可 靠性高的生物標(biāo)志物（非專利文獻(xiàn)5)。因此，為了抑制tau的磷酸的過剩磷酸化，嘗試著在 治療中使用針對作為與磷酸化有關(guān)的酶的激酶、其中特別是GSK-3々的酶抑制劑，并進(jìn)行 了開發(fā)（非專利文獻(xiàn)5)。但認(rèn)為GSK-3,等激酶不僅在病態(tài)下、在正常生理作用中也與功 能控制有關(guān)，因此擔(dān)心副作用等。事實上，在tau被GSK-3，磷酸化的位點中，有若干個位 點與在胎兒或正常人的腦中看到的tau的磷酸化位點一致（非專利文獻(xiàn)3)，由此還考慮到 其影響到正常tau功能的可能性。
[0006] 另外，按照以往的考慮，認(rèn)為存在于細(xì)胞外的tau由于變性了的神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞 死亡而泄露到細(xì)胞外，但根據(jù)最近的研究，認(rèn)為tau在細(xì)胞內(nèi)被過度磷酸化后，接受加工而 能動地分泌到細(xì)胞外。認(rèn)為分泌到細(xì)胞外的磷酸化tau在一部分的磷酸化位點接受脫磷酸 化，之后與周圍細(xì)胞的毒蕈堿型受體的Ml和M3作用，參與細(xì)胞內(nèi)的tau磷酸化亢進(jìn)或細(xì)胞 死亡的誘導(dǎo)等作用（非專利文獻(xiàn)6、非專利文獻(xiàn)7)。這樣，認(rèn)為tau發(fā)揮在細(xì)胞外作用的因 子的作用，因此以難以在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的抗體等高分子作為藥效成分的治療藥的可能性 也逐漸受到重視。但是，如上所述，分泌到細(xì)胞外的tau -部分接受加工，還接受脫磷酸化 等，根據(jù)迄今為止作為靶向的過度磷酸化的tau的結(jié)構(gòu)信息，存在著進(jìn)一步接受改變的可 能性。而且，還考慮到與脫磷酸化的tau部分作用的藥物對正常tau功能也有影響的可能 性。在抗體等中以病態(tài)中的tau為靶時，選擇什么樣的病態(tài)特異性位點、即與tau的磷酸化 表位作用的位點較為重要，但由于具有這樣的復(fù)雜信息，可以說選擇這樣的表位會變得更 加困難。
[0007] 作為指向與tau的特異性作用的嘗試，報道了關(guān)于以tau蛋白為靶的Tau蛋白病 的免疫學(xué)治療的發(fā)明（非專利文獻(xiàn)5、專利文獻(xiàn)1、專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)3)。免疫學(xué)治療是 指以通過給予肽疫苗等誘導(dǎo)特異性抗體的產(chǎn)生為目的而進(jìn)行的療法，由于對靶蛋白或肽的 特異性高，因此期待著減輕副作用。作為這樣的搭配，報道了通過使用磷酸化的tau的部分 肽（相當(dāng)于Ser396和Ser404的氨基酸殘基被磷酸化了的肽、以及相當(dāng)于Ser262的氨基酸 殘基被磷酸化了的肽）的疫苗對表達(dá)突變tau的動物模型進(jìn)行免疫，改善該模型動物的運 動功能改善等。但是，在這些報道中，是使用導(dǎo)入了 P301L(作為tau的第301位氨基酸殘 基的脯氨酸轉(zhuǎn)變成亮氨酸的突變）等基因突變的轉(zhuǎn)基因小鼠（tg小鼠）的研究，該tg小鼠 雖然是關(guān)于作為家族性神經(jīng)變性疾病之一的FTDP-17的基因突變模型，但未必表現(xiàn)出不伴 有Tau蛋白病所包含的tau基因突變的神經(jīng)變性疾病中的大多數(shù)、特別是散發(fā)性神經(jīng)變性 疾病的病態(tài)。另外，P30ILtg小鼠是運動功能障礙的模型，并不是表現(xiàn)在人的癡呆癥等中成 為問題的認(rèn)知功能障礙的模型（非專利文獻(xiàn)8)，因此根據(jù)該動物模型中的結(jié)果，難以知曉 能否適于人癡呆癥的治療。在專利文獻(xiàn)4中，給予與Ser409被磷酸化的tau肽發(fā)生抗原抗 體反應(yīng)的抗體，觀察關(guān)于Tau蛋白病治療的效果。但是，作為昂貴的肽疫苗，總給藥量多、且 直至體現(xiàn)出效果的期間長。另外，給藥的人或動物的免疫應(yīng)答反應(yīng)性根據(jù)遺傳背景而不同， 肽疫苗的效果未必在所有個體中均可有效地誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生。因此，考慮采用通過抗體進(jìn)行 被動免疫的免疫療法，但在tau中存在非常多的接受磷酸化的位點，使用針對其中的哪一 個磷酸化位點的抗體才有效，這樣的信息基本上不存在。另外，即使看到目前存在的抗體在 動物模型中的效果，也不認(rèn)為就具有足以用于治療的功能。
[0008] 而且，使用抗體作為治療藥或預(yù)防藥的主劑時，由于避免副作用或醫(yī)療經(jīng)濟上的 問題，對