一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥用活性成分的提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]柿樹在我國(guó)已有三千余年的栽培史。柿樹全身是寶:果實(shí)是人們喜愛的水果；根、葉、花、果實(shí)、宿存花粵(柿蒂)等均可入藥。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，柿葉中含有維生素C、黃酮類成分、胡蘿卜素等。由于柿葉的營(yíng)養(yǎng)、療效作用，我國(guó)在十多年前就開發(fā)了柿葉茶，除在國(guó)內(nèi)銷售外，還出口日本。臨床報(bào)道柿葉提取物用于止血，治療血小板減少性紫癜，軟化血管，防治動(dòng)脈硬化、冠心病、心絞痛有明顯的生理活性。據(jù)國(guó)外雜志報(bào)道柿葉中含有大量黃酮類化合物。黃酮類化合物具有抗過敏、降血壓、抗炎、抗茴、抗腫瘤、保肝和降血脂等活性，在食品工業(yè)上可用作抗氣化劑、色素等，在醫(yī)學(xué)上可治療冠心病、腦血栓和消除自由基。
[0003]眾多科研人員對(duì)于從柿葉中提取黃酮類物質(zhì)的研宄不計(jì)其數(shù)，如申請(qǐng)?zhí)枮?01110003597.1的中國(guó)發(fā)明專利公開了一種從柿葉提取含量為85?98%的柿葉黃酮的方法，它是將柿葉破碎，用2?10倍的PH = 10?14的水微波提取I?5次，每次提取10?60min，提取溫度為30?60°C，合并提取液，調(diào)節(jié)PH = 5?7，加入絮凝澄清劑，攪勻，靜置，過濾，濾液過超濾膜純化和RO反滲透膜脫水，調(diào)節(jié)濃縮液PH = 4?5，將所得濃縮液用乙酸乙酯萃取2?6次，萃取液濃縮，干燥制得。雖然柿葉黃酮含量可達(dá)到85?98%，但是制備出來的柿葉黃酮為大分子物質(zhì)，相比于小分子比較人體比較難吸收。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，該方法既能夠制備小分子柿葉黃酮，且制備得到的黃酮純度高，工藝簡(jiǎn)單。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0006]一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，包括以下制備步驟:
[0007](I)將柿葉除雜、洗凈、破碎；
[0008](2)加入柿葉重量4?7倍水，調(diào)節(jié)pH至3.5?5.0，升溫至40?55°C，然后再加入柿葉重量0.1?0.5%的復(fù)合酶，所述復(fù)合酶為果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解3?5小時(shí)，得到酶解液；
[0009](3)再將酶解液過濾，加水，回流提取2?3次，每次60?120min，每次的提取溫度都控制在90?100°C，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；
[0010](4)將正己烷、乙酸乙醋、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勾，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動(dòng)相；
[0011](5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于15?25倍體積的流動(dòng)相中，得到樣品溶液；
[0012](6)將固定相以25?30ml/min流速裝滿色譜分離柱，以600?680rpm轉(zhuǎn)速開啟逆流色譜儀主機(jī)，將流動(dòng)相以4?6ml/min流速泵入色譜柱內(nèi)，待流動(dòng)相平衡后，取樣品溶液通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外色譜圖，在580nm波長(zhǎng)下，收集目的組分，分別減壓蒸干，得到小分子柿葉黃酮。
[0013]本發(fā)明步驟⑵的果膠酶和纖維素酶的重量比為2:3。柿葉中一些有效成分被以纖維素為主的細(xì)胞壁所包圍，并且這些細(xì)胞間還有果膠粘結(jié)，用果膠酶和纖維素酶復(fù)合酶充分破壞了以纖維素為主的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及其細(xì)胞間相連的果膠物質(zhì)，將原料中的果膠完全分解成小分子物質(zhì)，可制備得小分子目的成分，同時(shí)使提取傳質(zhì)阻力減小，使原料中有效物質(zhì)充分地釋放出來，既提高了提取率，也減少了提取時(shí)間。
[0014]本發(fā)明步驟(3)回流提取過程中，第一次加水量為酶解液重量的6?8倍，第二次加水量為酶解液重量的5?7倍，第三次加水量為酶解液重量的4?6倍。連續(xù)進(jìn)行3次水提，可以最大限度提取柿葉中的黃酮，提高黃酮提取率。
[0015]本發(fā)明的有益效果在于:
[0016]1、先將原料粉碎再酶解，縮短酶解反應(yīng)時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，酶解可將大分子物質(zhì)分解成小分子物質(zhì)，可制備出小分子柿葉黃酮。
[0017]2、對(duì)酶解液進(jìn)行水提三次，可以最大限度提取柿葉中的黃酮，提高提取率。
[0018]3、用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，制備出的黃酮純度高，性能可靠，分析成本低，易于操作，設(shè)備低廉。
[0019]4、本發(fā)明的方法工藝簡(jiǎn)單。
【具體實(shí)施方式】
[0020]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0021]實(shí)施例1
[0022](I)將柿葉除雜、洗凈、破碎；
[0023](2)加入柿葉重量4倍水，調(diào)節(jié)pH至3.5，升溫至40°C，然后再加入柿葉重量0.1%的復(fù)合酶，所述復(fù)合酶為重量比為2:3的果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解5小時(shí)，得到酶解液；
[0024](3)再將酶解液過濾，加入酶解液重量的6倍水，回流提取，得到第一次提取液，再加入酶解液重量的5倍水，進(jìn)行第二次回流提取，得到第二次提取液，加入酶解液重量的4倍水，進(jìn)行第三次回流提取，得到第三次提取液，每次提取時(shí)間為60min，每次的提取溫度都控制在90°C，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；
[0025](4)將正己烷、乙酸乙醋、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勾，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動(dòng)相；
[0026](5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于25倍體積的流動(dòng)相中，得到樣品溶液；
[0027](6)將固定相以25ml/min流速裝滿色譜分離柱，以600rpm轉(zhuǎn)速開啟逆流色譜儀主機(jī)，將流動(dòng)相以4ml/min流速泵入色譜柱內(nèi)，待流動(dòng)相平衡后，取樣品溶液通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外色譜圖，在580nm波長(zhǎng)下，收集目的組分，分別減壓蒸干，得到小分子柿葉黃酮。
[0028]經(jīng)檢測(cè)，產(chǎn)品純度為99.8%。
[0029]實(shí)施例2
[0030](I)將柿葉除雜、洗凈、破碎；
[0031](2)加入柿葉重量5倍水，調(diào)節(jié)pH至3.9，升溫至44°C，然后再加入柿葉重量0.2%的復(fù)合酶，所述復(fù)合酶為重量比為2:3的果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解4小時(shí)，得到酶解液；
[0032](3)再將酶解液過濾，加入酶解液重量的7倍水，回流提取，得到第一次提取液，再加入酶解液重量的6倍水，進(jìn)行第二次回流提取，得到第二次提取液，加入酶解液重量的5倍水，進(jìn)行第三次回流提取，得到第三次提取液，每次提取時(shí)間為75min，每次的提取溫度都控制在95°C，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；
[0033](4)將正己烷、乙酸乙醋、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勾，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動(dòng)相；
[0034](5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于23倍體積的流動(dòng)相中，得到樣品溶液；
[0035](6)將固定相