榅桲子提取物的制備方法及降糖用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種榲梓子提取物的制備方法及其降血糖用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 榲梓是薔薇科（Rosaceae)榲梓屬（Cydonia)植物，它是一種用途廣泛的藥食兩用 植物，主要藥理活性有抗氧化、抗增殖、抗溶血、抗過敏、抑菌殺菌、抗病毒等，有較高的研宄 和藥用價值。在我國民族藥中，榲梓果、種子、葉等均可入藥，其中榲梓子可以清除胃腸干 熱、生津止咳，用于咳嗽、肺結(jié)核。Mustafa Aslan等對榲梓葉子乙醇提取物進(jìn)行了降糖作用 研宄，發(fā)現(xiàn)它能使患糖尿病大鼠血糖水平下降33. 8%，具有降血糖活性。本所哈及尼莎等申 請了關(guān)于榲梓果實降糖的專利，并獲得授權(quán)。雖然國內(nèi)外已有關(guān)于榲梓化學(xué)成分及用途的 報道，但未見到關(guān)于榲梓子降糖的報道，其調(diào)節(jié)血糖的有效部位或有效成分尚不明確。
[0003] 糖尿病是由于體內(nèi)胰島素紊亂導(dǎo)致的，一組以高血糖為特征的代謝性疾病。隨著 人們生活水平的提高，生活方式的改變和老齡化進(jìn)度的加速，我國糖尿病的患病率呈快速 上升趨勢，尤其是非胰島素依賴型糖尿?。碔I型糖尿?。┤藬?shù)成倍增長。II型糖尿病主 要是由于胰島素分泌不足和胰島素抵抗兩個病因引起。無論是歐美發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國 家如中國，糖尿病控制狀況均不容樂觀。從中藥有效成分中尋找新型降糖藥物是目前國內(nèi) 糖尿病研宄的熱點之一，已見報道具有降糖療效的活性成分多達(dá)幾十種，從眾多中藥有效 成分中跟蹤篩選出具有降糖作用的活性成分，進(jìn)一步指導(dǎo)植化分離，是新型降糖藥物開發(fā) 的關(guān)鍵。
[0004] 已有研宄表明蛋白酪氨酸磷酸酶 IB (PTP1B, protein tyrosine phosphatase 1B) 可減弱胰島素及瘦素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，引起脂代謝異常，是導(dǎo)致胰島素抵抗和肥胖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研 宄報道，敲除蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B基因后會明顯改善肥胖且瘦素抵抗的小鼠的外周胰 島素抵抗和動脈血管功能。蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)在胰島素信號通路中起著重要 的負(fù)調(diào)控作用，是治療II型糖尿病的重要靶點之一。此外，PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶）/ AKT (絲/蘇氨酸激酶）信號通路是胰島素發(fā)揮降糖的生理功能的重要途徑。為了合理開發(fā) 利用新疆榲梓藥材資源，我們利用植化方法獲得榲梓子提取物，并對其進(jìn)行體外蛋白質(zhì)酪 氨酸磷酸酶1B活性篩選和胞內(nèi)分子水平的分析，結(jié)果表明，通過本發(fā)明所述方法制備得到 的榲梓子提取物在體外可以抑制蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B，細(xì)胞內(nèi)通過激活磷脂酰肌醇-3 激酶/絲氨酸激酶（PI3K/AKT)信號通路，增強(qiáng)胰島素生物效應(yīng)，從而提高肌細(xì)胞的糖原合 成，降低血糖濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于提供一種榲梓子提取物的制備方法及降糖用途，該方法是從維藥 榲梓子中采用有機(jī)溶劑提取，大孔樹脂分離純化獲得，經(jīng)初步的活性篩選試驗證明：通過本 發(fā)明所述的方法獲得的榲梓種子提取物具有蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP1B)抑制作用，促進(jìn)肌 細(xì)胞的葡萄糖吸收利用，并證實通過磷脂酰肌醇-3激酶/絲氨酸激酶（PI3K/AKT)信號通 路來改善胰島素抵抗，從而降低血糖。本發(fā)明所述方法獲得的榲梓子提取物可用于預(yù)防治 療糖尿病的藥物或保健品的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明所述的一種榲梓子提取物的制備方法，按下列步驟進(jìn)行：
[0007] a、將榲梓子原料進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂榲梓 子；
[0008] b、將步驟a中得到脫脂榲梓子在室溫冷浸3次，每次1-3天，或在溫度30-80°C的 條件下，用濃度為30-95%乙醇加熱回流1-3次，每次l-3h，乙醇與脫脂榲梓子的重量體積 比為1:3-1:30,最終收集得到回流液；
[0009] C、將步驟b回流液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的大孔樹脂柱，用水沖洗至還原 糖反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提取物。
[0010] 步驟C所用的大孔樹脂型號為HPD100、HPD300、AB-8、D101、X-5。
[0011] 所述的方法獲得的榲梓種子提取物在制備糖尿病藥物篩選靶點_蛋白質(zhì)酪氨酸 磷酸酶1B的抑制作用。
[0012] 所述的方法獲得的榲梓子提取物在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
[0013] 所述的方法獲得的榲梓子提取物在制備治療糖尿病的保健品或其他功能性食品 的中的用途。
【附圖說明】
[0014] 圖1為本發(fā)明不同濃度榲梓子提取物對蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶（PTP1B)的抑制率 圖；
[0015] 圖2為本發(fā)明不同濃度榲梓子提取物對L6肌細(xì)胞葡萄糖消耗的影響圖，其中 一I I一為非膜島素組，一一為膜島素組；
[0016] 圖3為本發(fā)明不同濃度榲梓子提取物對L6肌細(xì)胞乳酸量的影響圖，其中一D- 為非胰島素組，一_一為胰島素組；
[0017] 圖4為本發(fā)明不同濃度榲梓子提取物對肌糖原含量的影響圖，其中一D-為非 膜島素組，一一為膜島素組；
[0018] 圖5為本發(fā)明不同濃度榲梓子提取物對L6肌細(xì)胞己糖激酶的影響圖，其中 一 D-為非胰島素組，一_一為胰島素組；
[0019] 圖6為本發(fā)明不同濃度榲梓子提取物對L6肌細(xì)胞蛋白表達(dá)量的影響圖。
【具體實施方式】[0020] 實施例1
[0021] 將520g榲梓子進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂榲梓子 460g；
[0022] 按重量體積比乙醇：脫脂榲梓子=1:30將得到的脫脂榲梓子在室溫，用濃度為 30 %乙醇，冷浸3次，每次1天，收集得到浸出液；
[0023] 將浸出液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的HPD100大孔樹脂柱，用水沖洗至還原糖 反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提取物。
[0024] 實施例2
[0025] 將520g榲梓子進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂種子 460g；
[0026] 按重量體積比乙醇：脫脂榲梓子=1:20在室溫，用濃度為95%乙醇冷浸3次，每 次1天，收集得到浸出液；
[0027] 將浸出液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的HPD300大孔樹脂柱，用水沖洗至還原糖 反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提取物。
[0028] 實施例3
[0029] 將520g榲梓子進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂種子 460g；
[0030] 按重量體積比乙醇：脫脂榲梓子=1:3在溫度30°C的條件下，用濃度為95%乙醇 加熱回流2次，每次2小時，收集得到回流液；
[0031] 將得到的回流液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的D-101大孔樹脂柱，用水沖洗至 還原糖反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提 取物。
[0032] 實施例4
[0033] 將520g榲梓子進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂種子 460g；
[0034] 按重量體積比乙醇：脫脂榲梓子=1:30在溫度50°C的條件下，用濃度為80%乙 醇加熱回流3次，每次lh，收集得到回流液；
[0035] 將得到的回流液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的AB-8大孔樹脂柱，用水沖洗至還 原糖反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提取 物。
[0036] 實施例5
[0037] 將520g榲梓子進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂種子 460g；
[0038] 按重量體積比乙醇：脫脂榲梓子=1:20在溫度70°C的條件下，用濃度為60%乙 醇加熱回流2次，每次lh，收集得到回流液；
[0039] 將得到的回流液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的X-5大孔樹脂柱，用水沖洗至還 原糖反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提取 物。
[0040] 實施例6
[0041] 將520g榲梓子進(jìn)行清洗、粉碎，用石油醚按常規(guī)方法進(jìn)行脫脂，得到脫脂種子 460g；
[0042] 按重量體積比乙醇：脫脂榲梓子=1:10在溫度80°C的條件下，用濃度為50%乙 醇加熱回流1次，每次3h，收集得到回流液；
[0043] 將得到的回流液濃縮除醇后，加入預(yù)先處理好的AB-8大孔樹脂柱，用水沖洗至還 原糖反應(yīng)陰性，再用乙醇洗脫，收集流出液，濃縮，即得到具有降血糖活性的榲梓種子提取 物。
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