皮膚外用溶菌酶復合制劑及制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種溶菌酶復合制劑，具體是一種皮膚外用溶菌酶復合制劑及制造方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 溶菌酶（lysozyme)，正式定名為N-乙酰己糖胺酶，又稱N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解 酶，屬胞壁質(zhì)酶。溶菌酶自被發(fā)現(xiàn)以來一直是生物技術(shù)領(lǐng)域的研究熱點，研究成果也不斷涌 現(xiàn)，現(xiàn)在已被廣泛應用于醫(yī)藥、食品、飼料和化妝品等領(lǐng)域。溶菌酶具有生物相容性好、對組 織無刺激和無毒性等優(yōu)點。溶菌酶作為一種存在于人體正常體液及組織中的非特異性免疫 因素，具有多種藥理作用，它具有抗菌、抗病毒和抗腫瘤的功效。目前可檢索到溶菌酶相關(guān) 專利166項，其中藥物制劑相關(guān)專利17項。從劑型上劃分目前已有的專利覆蓋了注射劑、 噴霧劑、乳膏劑、泡騰片等幾乎所有劑型。從溶菌酶的來源來看目前大多使用蛋清溶菌酶和 海洋生物溶菌酶。從藥用成分配伍上看既有溶菌酶單獨使用的也有和抗生素聯(lián)合使用的。 目前文獻尚未有蛋清溶菌酶和蘿卜溶菌酶配伍使用的劑型。蛋清溶菌酶對革蘭氏陽性菌、 好氣性孢子形成菌、枯草桿菌和耐輻射微球菌均有良好的分解作用。蘿卜溶菌酶的抑菌效 果與蛋清溶菌酶有所不同，其對大腸桿菌等6種革蘭氏陰性菌具有不同程度的抑制作用。 如將二者制備成溶菌酶復合制劑，必將取得更為廣譜的抑菌效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明提供一種皮膚外用溶菌酶復合制劑及制造 方法，蛋清溶菌酶和蘿卜溶菌酶并配以相關(guān)輔料制備成溶菌酶復合制劑，具有更為廣譜的 抑囷效果。
[0004] 本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種皮膚外用溶菌酶復合制劑，由以下質(zhì)量份 數(shù)數(shù)的原料制成：蛋清溶菌酶25~75份、蘿卜溶菌酶25~75份、磷酸氫二鈉30~50份、 磷酸二氫鈉40~60份、EDTA-2Na2~4份、氯化鈉15~20份、薄荷腦1~2份、無水乙 醇15~25份、苯扎溴銨1~2份，甘油450~550份、羧甲基纖維素鈉280~320份，水 3800 ~4200 份，pH值為 5. 5-6. 5。
[0005] 優(yōu)選的，一種皮膚外用溶菌酶復合制劑，其特征在于：由以下質(zhì)量份數(shù)的原料制 成，蛋清溶菌酶50份、蘿卜溶菌酶50份、磷酸氫二鈉39份、磷酸二氫鈉52份、EDTA-2Na3 份、氯化鈉17份、薄荷腦1份、無水乙醇20份、苯扎溴銨1份，甘油500份、羧甲基纖維素鈉 300份，水4000份，pH值為5. 9。
[0006] -種皮膚外用溶菌酶復合制劑的制造方法，具體步驟如下：（1)薄荷腦用乙醇溶 解，備用； (2)稱取EDTA-2Na、Nacl、NaH2P0jPNa2HP04用熱注射用水溶解，攪拌均勻后，降溫至 45°C左右，加入步驟（1)中的薄荷腦乙醇溶液，攪拌混合； (3)苯扎溴銨用水溶解，加入步驟（2)溶液中，攪拌混合； (4) 溶菌酶用45°C以下的水溶解，加入上述步驟（3)的溶液中，攪拌混合； (5) 向步驟（4)混合后的溶液中加入甘油，然后攪拌混合； (6) 定容，過濾； (7) 在步驟（6)中的溶液中加入羧甲基纖維素鈉，攪拌混合； (8) 灌裝。
[0007] 本發(fā)明的有益效果是： (1) 廣譜抗菌：本產(chǎn)品對革蘭氏陽性菌、好氣性抱子形成菌、枯草桿菌和、微球菌、大腸 桿菌均具有良好的分解作用，較單純蛋清溶菌酶制劑具有更為廣譜的抗菌性； (2) 不含抗生素：本產(chǎn)品有效成分完全為具有抑菌活性的活性蛋白，不含抗生素，較溶 菌酶與抗生素符合制劑具有更高的安全性； (3) 不會產(chǎn)生耐藥性：因本品有效成分為溶菌酶，目前尚未見溶菌酶抗藥性的報道，因 此本品較含抗生素的制劑具有更高的抗耐藥性； (4) 給藥方便、安全：本品為皮膚外用藥，相對于內(nèi)服制劑而言不受胃腸道因素的影響， 避免肝臟的首過效應，釋藥平穩(wěn)，不良反應小。
【具體實施方式】
[0008] -種皮膚外用溶菌酶復合制劑，由以下質(zhì)量份數(shù)數(shù)的原料制成：蛋清溶菌酶25~ 75份、蘿卜溶菌酶25~75份、磷酸氫二鈉30~50份、磷酸二氫鈉40~60份、EDTA-2Na2~ 4份、氯化鈉15~20份、薄荷腦1~2份、無水乙醇15~25份、苯扎溴銨1~2份，甘油 450~550份、羧甲基纖維素鈉280~320份，水3800~4200份，pH值為5. 5-6. 5。其中， 磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉為酸堿度緩沖液，用以維持制劑的PH值；EDTA-2Na為活性增強劑、 金屬螯合劑，實驗證明一定量的EDTA-2Na可有效促進溶菌酶的活性；氯化鈉為滲透壓調(diào)節(jié) 齊U，用以調(diào)節(jié)制劑的滲透壓；薄荷腦為清涼劑；無水乙醇為薄荷腦助溶劑，用以溶解薄荷 腦，實驗證明少量乙醇溶液不影響溶菌酶活性；苯扎溴銨為抑菌劑；甘油為增強劑；羧甲基 纖維素鈉為凝膠基質(zhì)。
[0009] 上述皮膚外用溶菌酶復合制劑的制造方法，具體步驟如下： (1) 薄荷腦用乙醇溶解，備用； (2) 稱取EDTA-2Na、Nacl、NaH2P0jPNa2即04用適量熱注射用水溶解，攪拌均勻后，降 溫至45°C左右，加入步驟（1)中的薄荷腦乙醇溶液，攪拌混合； (3) 苯扎溴銨用適量水溶解，加入步驟（2)溶液中，攪拌混合； (4) 溶菌酶用適量45°C以下的水溶解，加入上述溶液中，攪拌混合； (5) 向步驟（4)混合后的溶液中加入甘油，然后攪拌混合； (6) 定容，過濾； (7) 在步驟（6)中的溶液中加入羧甲基纖維素鈉，攪拌混合； (8) 灌裝。
[0010] (1)不同配方溶菌酶制劑的體外抑制溶壁微球菌的實驗效果。
[0011] (a)實驗材料 試驗菌株：溶壁微球菌。
[0012] 培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基。
[0013]實驗處方： 處方1 :蛋清溶菌酶50份、磷酸氫二鈉39份、磷酸二氫鈉52份、EDTA-2Na3份、氯化鈉 17份、薄荷腦1份、無水乙醇20份、苯扎溴銨1份，甘油500份、羧甲基纖維素鈉300份，水 4000 份，pH值為 5.9。
[0014] 處方2 :蘿卜溶菌酶50份、磷酸氫二鈉39份、磷酸二氫鈉52份、EDTA-2Na3份、氯 化鈉17份、薄荷腦1份、無水乙醇20份、苯扎溴銨1份，甘油500份、羧甲基纖維素鈉300 份，水4000份，pH值為5.9。
[0015] 處方3 :蛋清溶菌酶50份、蘿卜溶菌酶50份、磷酸氫二鈉39份、磷酸二氫鈉52份、 EDTA-2Na3份、氯化鈉17份、薄荷腦1份、無水乙醇20份、苯扎溴銨1份，甘油500份、羧甲 基纖維素鈉300份，水4000份，pH值為5. 9。陰性對照：生理鹽水。
[0016] (b)實驗內(nèi)容 細菌平板的制備：取直徑約90mm培養(yǎng)皿、LB培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，待冷卻至60°C將培 養(yǎng)基無菌條件下注入培養(yǎng)皿，放置水平臺面上使凝固。取溶壁微球菌懸液0. 2ml，注入已凝 固的平板培養(yǎng)基上，涂布均勻，即為細菌平板。
[0017]溶壁微球菌對不同處方的藥敏實驗：紙片法將以上不同處方的制劑制成藥敏紙 片，測定抑菌圈的大小。方法：取直徑為0.6厘米的滅菌濾紙片在不同處方的制劑中浸泡 40分鐘，取出備用，在已制備好的細菌平板中，無菌操作放置藥敏紙片，每種配方制劑放置 六個平板，然后將平板置37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后測定抑菌圈的大小，取其平均值。
[0018] (c)實驗結(jié)果
【主權(quán)項】
1. 一種皮膚外用溶菌酶復合制劑，其特征在于：由以下質(zhì)量份數(shù)的原料制成：蛋清溶 菌酶25~75份、蘿卜溶菌酶25~75份、磷酸氫二鈉30~50份、磷酸二氫鈉40~60份、 EDTA-2Na2~4份、氯化鈉15~20份、薄荷腦1~2份、無水乙醇15~25份、苯扎溴銨 1~2份，甘油450~550份、羧甲基纖維素鈉280~320份，水3800~4200份，pH值為 5. 5-6. 5〇
2. -種皮膚外用溶菌酶復合制劑，其特征在于：由以下質(zhì)量份數(shù)的原料制成，蛋清溶 菌酶50份、蘿卜溶菌酶50份、磷酸氫二鈉39份、磷酸二氫鈉52份、EDTA-2Na3份、氯化鈉 17份、薄荷腦1份、無水乙醇20份、苯扎溴銨1份，甘油500份、羧甲基纖維素鈉300份，水 4000 份，pH 值為 5.9。
3. -種皮膚外用溶菌酶復合制劑的制造方法，其特征在于：具體步驟如下：（1)薄荷腦 用乙醇溶解，備用； (2) 稱取￡0了4-2似、似〇1、似112?04和似2即04用熱注射用水溶解，攪拌均勻后，降溫至 45°C左右，加入步驟（1)中的薄荷腦乙醇溶液，攪拌混合； (3) 苯扎溴銨用水溶解，加入步驟（2)溶液中，攪拌混合； (4) 溶菌酶用45°C以下的水溶解，加入上述步驟（3)的溶液中，攪拌混合； (5) 向步驟（4)混合后的溶液中加入甘油，然后攪拌混合； (6) 定容，過濾； (7) 在步驟（6)中的溶液中加入羧甲基纖維素鈉，攪拌混合； (8) 灌裝。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種皮膚外用溶菌酶復合制劑及制造方法，由以下質(zhì)量份數(shù)數(shù)的原料制成：蛋清溶菌酶25～75份、蘿卜溶菌酶25～75份、磷酸氫二鈉30～50份、磷酸二氫鈉40～60份、EDTA-2Na2～4份、氯化鈉15～20份、薄荷腦1～2份、無水乙醇15～25份、苯扎溴銨1～2份，甘油450～550份、羧甲基纖維素鈉280～320份，水3800～4200份,pH值為5.5-6.5。（1）薄荷腦用乙醇溶解；（2）稱取EDTA-2Na、Nacl、NaH2PO4和Na2HPO4用熱注射用水溶解,降溫至45℃左右,加入薄荷腦乙醇溶液；（3）向步驟（2）溶液中加入苯扎溴銨；(4)溶菌酶用45℃以下的水溶解,加入步驟（3）的溶液中；(5)向步驟（4）的溶液中加入甘油；（6）定容，過濾；（7）在步驟（6）中的溶液中加入羧甲基纖維素鈉；（8）灌裝。
【IPC分類】A61K38-47, A61P31-04
【公開號】CN104623645
【申請?zhí)枴緾N201510045881
【發(fā)明人】宋凱, 袁紹莉, 陳文武
【申請人】徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學院
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年1月29日