聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏載體的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏載體的制備方法，屬 醫(yī)藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 惡性腫瘤具有生長速度快、轉(zhuǎn)移能力強、復發(fā)率高的特點。單靠任何一種治療手段 治愈癌癥又兼顧患者的生存質(zhì)量，是難以實現(xiàn)的。相對于現(xiàn)有臨床上常用的治療方法，如外 科手術、放射治療、化學藥物治療及免疫治療，光動力療法由于其獨特的優(yōu)點和良好的兼容 性，已成為腫瘤診斷和治療中一支新的生力軍，在腫瘤的綜合治療中發(fā)揮著重要作用。光動 力療法（PhotodynamicTherapy，F(xiàn)1DT)是利用光動力效應進行疾病診斷和治療的一種新技 術。其過程原理是，特定波長的激光照射使組織吸收的光敏劑受到激發(fā)，而激發(fā)態(tài)的光敏劑 又把能量傳遞給周圍的氧，生成活性很強的單線態(tài)氧，單線態(tài)氧和相鄰的生物大分子發(fā)生 氧化反應，產(chǎn)生細胞毒性作用，進而導致細胞受損乃至死亡。相對于手術，化療等傳統(tǒng)的腫 瘤治療手段相比，光動力療法有其獨到的優(yōu)勢，如創(chuàng)傷很小，適用性好，可重復治療等。）由 于光動力療法具有諸多顯著優(yōu)勢，美國食品與藥品監(jiān)督管理局（FDA)于1997年正式將光動 力療法列入腫瘤治療的五類基本方法（手術、放療、化療、光動力、生化免疫），成為單列的 一類腫瘤治療方法。
[0003] 雖然光動力治療技術已獲得了大量的臨床應用，但其依然存在著不少自身難以克 服的缺陷和不足，其中最為顯著的就是光敏劑疏水性強，體內(nèi)易團聚、藥物利用率低，容易 造成正常組織如皮膚的光毒性。這些缺陷無疑限制了光動力治療在腫瘤治療中的進一步應 用。因此，研制新型光敏藥物制劑，對于提高光轉(zhuǎn)換效率，減少對正常組織的光毒性，
[0004] 納米藥劑的研制有望解決上述光動力治療中長期困擾人們的問題。納米藥劑指利 用三維空間中至少有一維處于納米尺度范圍（I-IOOnm)或由它們作為基本單元構(gòu)成的納 米材料為基材，來承載藥物而制備的新型藥物制劑。因而可以增加藥效，從而減少給藥量并 降低系統(tǒng)的毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 鑒于納米藥劑在醫(yī)學上的重要應用，本發(fā)明提供一種聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺 接枝聚合物納米光敏載體的制備方法。具體涉及兩部分內(nèi)容即1)聚馬來酸酐-磷脂酰乙 醇胺接枝聚合物的合成；2)將這種雙親性高分子與光敏劑復合制備出納米光敏載體。對水 溶性聚馬來酸酐進行改性獲得的雙親性高分子具有操作簡便、適用性強、成本低的優(yōu)點。并 且由于馬來酸酐開環(huán)后，生成大量的羧基官能團，使其容易進行多功能化，如腫瘤靶向分子 RGD多肽。同傳統(tǒng)的未經(jīng)修飾的光敏制劑相比，組裝得到的聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝 聚合物納米光敏載體具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，粒徑均一等優(yōu)點。
[0006] 本發(fā)明首先利用聚（1-十八烯/馬來酸酐）開環(huán)并與磷脂酰乙醇胺反應制備出 聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺雙親性高分子。同聚（1-十八烯/馬來酸酐）相比，聚馬來酸 酐-磷脂酰乙醇胺雙親性大大增強在水中具有較好溶解性。如圖2紅外結(jié)構(gòu)分析所示，聚 馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺的譜圖上有大量酰胺鍵的產(chǎn)生，證明聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺 雙親性高分子合成成功；接著利用這種雙親性高分子同光敏劑一起，通過薄膜法制備了聚 馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏制劑；如圖3投射電鏡測試結(jié)果顯示，制備的 這種高分子脂質(zhì)體粒徑小于l〇〇nm，粒度分布均勻；經(jīng)過化學偶聯(lián)可將靶向分子RGD連接在 納米制劑的表面，如圖4通過MTT細胞毒性測試，聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納 米光敏制劑和RGD修飾的聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏制劑在很高的濃 度下（200微克每毫升），仍然具有很低的細胞毒性；如圖5通過細胞染色發(fā)現(xiàn)，將聚馬來酸 酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏制劑同細胞共培養(yǎng)后，細胞仍能保持很高活性（染 色顯示為綠色）；如圖6在體外光動力實驗中表明，R⑶修飾的聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺 接枝聚合物納米光敏制劑在光照條件下，可有效地殺傷腫瘤細胞。
[0007] 本發(fā)明的技術方案如下：
[0008] 1)聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的合成：首先利用聚（1-十八烯/馬來 酸酐）開環(huán)并與磷脂酰乙醇胺為原料，通過開環(huán)反應制備出聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺雙 親性高分子。其具體結(jié)構(gòu)式如下所示：
【主權(quán)項】
1. 一種聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏載體的制備方法，其特征是步 驟如下： 1) 聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的合成：利用聚（1-十八烯/馬來酸酐）與 磷脂酰乙醇胺為原料，通過開環(huán)反應制備出聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺雙親性高分子； 2) 薄膜分散法制備聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏制劑。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述聚馬來酸酐_磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的 合成方法如下： (1) 將原料聚（1-十八烯/馬來酸酐）和磷脂酰乙醇胺加入到反應器；磁力攪拌條件 下，向反應器中加入四氫呋喃使原料完全溶解；加熱至30~70°C，冷凝回流反應； (2) 待反應結(jié)束后，降溫將產(chǎn)物放入透析袋中透析；取透析后溶液過濾凍干，便得到雙 親性聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述的聚（1-十八烯/馬來酸酐）：磷脂酰乙醇 胺質(zhì)量份數(shù)配比為1:10~30。
4. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述的冷凝回流反應1~3天。
5. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述的透析袋中透析3~7天。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述采用薄膜分散法步驟如下： (1) 將聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物與光敏劑酚酞鋅，加入二氯甲烷使其完 全溶解中，形成油相； (2) 在35~50°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流保護，使有 機溶劑揮發(fā)； (3) 在真空烘箱中充分干燥后，加入去離子水使其完全溶解，將脂質(zhì)膜水化，然后用超 聲波清洗器進行超聲分散，便得到聚馬來酸酐_磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏制劑。
7. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征是所述的聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物： 光敏劑酚酞鋅質(zhì)量份數(shù)配比為10~30 : 1。
【專利摘要】本發(fā)明涉及聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏載體的制備方法1)聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物的合成：首先利用聚(1-十八烯/馬來酸酐)開環(huán)并與磷脂酰乙醇胺為原料，通過開環(huán)反應制備出聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺雙親性高分子；2)按照薄膜分散法制備聚馬來酸酐-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物納米光敏制劑的制備。本發(fā)明操作簡便，適用性強，成本低，在水中及多種有機溶劑中具有較好的溶解性，且接枝效率可達10％-30％。光敏制劑有效粒徑在50～150nm之間，粒徑更均勻；穩(wěn)定性好，可在水溶液中保存至少2個月以上；載藥率可保持在10-20％之間，產(chǎn)率高，適合大批量生產(chǎn)。
【IPC分類】C08F8-40, C08F222-06, A61K41-00, C08F210-14, A61K47-32, A61P35-00
【公開號】CN104623662
【申請?zhí)枴緾N201510084427
【發(fā)明人】王漢杰, 侯貝貝, 常津, 宮曉群, 蘇琳, 鄭斌
【申請人】天津大學
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月16日