一種防治慢性乙型肝炎的藥物組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種防治慢性乙型肝炎的藥物組合物及 其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙型肝炎是由嗜肝的乙型肝炎病毒（HBV)引起的ー種在世界范圍的傳染性疾病， 全世界約有3. 5億人感染HBV，我國(guó)約占一半。乙型肝炎給人類健康造成極大的危害，尋求 高效低毒的抗HBV的天然藥物已經(jīng)刻不容緩（劉健.聯(lián)合抗病毒治療慢性乙型肝炎新進(jìn)展 [J] ?臨床合理用藥雜志，2013,6 (26) :174-176.)。
[0003]目前，市場(chǎng)上治療慢性乙型肝炎的方法主要有干擾素、阿德福韋酯，恩替卡韋等藥 物以及注射乙肝疫苗。但上述藥物或疫苗均存在比較大的缺點(diǎn)，如長(zhǎng)期服用干擾素會(huì)造成 患者出現(xiàn)流感感樣癥狀、并可能使患者出現(xiàn)消化道癥狀、脫發(fā)等不良反應(yīng)，嚴(yán)重者還能抑制 骨髓導(dǎo)致白細(xì)胞、血小板減少，這樣就會(huì)導(dǎo)致患者的凝血功能下降。而服用阿德福韋酯，恩 替卡韋等核苷類似物類則會(huì)導(dǎo)致乳酸性酸中毒和重度的脂肪性肝腫大，且很多患者服用半 年左右就會(huì)耐藥，而且還不能隨時(shí)停藥，否則可能會(huì)導(dǎo)致病情迅速惡化，甚至轉(zhuǎn)化為肝硬 化、肝癌。雖然乙肝疫苗能夠抑制HBV的復(fù)制，其安全性和耐受性都很好，但是還不足以打 破慢性乙型肝炎的免疫耐受狀態(tài)進(jìn)而清除HBV，仍需輔以抗慢性乙型肝炎藥物的治療。
[0004] 茶氨酸是ー種酰胺類化合物，化學(xué)命名為：N-乙基-L-谷氨酰胺，通常說的茶氨 酸是指L-茶氨酸，它是茶葉中的ー種非蛋白氨基酸，約占茶葉中游離氨基酸總量的40%~ 70%。研究表明，茶氨酸具有：（1)促進(jìn)大腦功能和神經(jīng)的生長(zhǎng)；（2)增加腸道有益菌群和 減少血漿膽固醇；（3)降壓安神、改善睡眠；(4)抑制腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。雖然茶氨酸具 有多種生物活性，但是其治療作用較弱，因此主要應(yīng)用于食品添加劑和保健品（文慧，魏時(shí) 來(lái)，張石蕊，等.L-茶氨酸在動(dòng)物體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)及抗氧化作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸 醫(yī)雜志，2012,48(21) 84-87.)。為了提高茶氨酸的抗癌活性，季德鑫等人對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu) 修飾和改造，合成了茶氨酸的衍生物茶氨酸溴香酰胺（TBrC)，并確認(rèn)其對(duì)高轉(zhuǎn)移的小鼠肺 癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用（SegesakaKakusaKawamuraK，etal.Pharmaclogicoalbeeffect oftheanine[J」?TheOrganizingCommitteeofISTS, 2012 :362-365.)0

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服現(xiàn)有乙肝治療藥物毒副作用大的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供ー種新型的防治慢性 乙型肝炎的藥物組合物。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量體外試驗(yàn)研究并不懈探索，最終獲得了 如下技術(shù)方案：
[0007] -種防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，由活性成分和藥劑學(xué)上可接受的輔料制備 而成，所述的活性成分包括茶氨酸溴香酰胺。
[0008] 優(yōu)選地，如上所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其中所述藥劑學(xué)上可接受的 輔料包括磺丁基-3-環(huán)糊精。進(jìn)ー步優(yōu)選地，磺丁基-3-環(huán)糊精與茶氨酸溴香酰胺的用 量比為（0.2-0. 8) :1。再進(jìn)ー步優(yōu)選地，磺丁基-(6-環(huán)糊精與茶氨酸溴香酰胺的用量比為 (0? 2-0. 4) :1。
[0009] 本發(fā)明所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其為注射劑，所述的注射劑包括注 射液、注射用凍干粉。在本發(fā)明最優(yōu)選的實(shí)施例中，所述藥劑學(xué)上可接受的輔料包括磺丁 基-(6-環(huán)糊精、氯化鈉。
[0010] 需要說明的是，本發(fā)明人采用轉(zhuǎn)染HBV的人肝癌細(xì)胞H印G2. 2. 15作為研究對(duì) 象，研究了茶氨酸溴香酰胺抗HBV的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)茶氨酸溴香酰胺和乙型肝炎e抗原 (HBeAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)的分泌均有抑制作用，可見其抗乙型肝炎病毒的效果 很顯著。因此，本發(fā)明還提供一種制藥用途，即：茶氨酸溴香酰胺在制備防治慢性乙型肝炎 的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的含有茶氨酸溴香酰胺的藥物組合物具有如下突出 的優(yōu)勢(shì)：（1)有較強(qiáng)的抗乙型肝炎病毒的生物活性，同時(shí)毒副作用低；（2)磺丁基-P-環(huán)糊 精的加入可避免茶氨酸溴香酰胺經(jīng)長(zhǎng)期儲(chǔ)存后的降解，因此所提供的注射液穩(wěn)定性高，有 望開發(fā)成抗HBV的ー線藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)ー步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而 更為清楚。但是應(yīng)理解所述實(shí)施例僅是范例性的，不對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍構(gòu)成任何限制。本 領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神下可以對(duì)技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行 修改或替換，但這些修改或替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0013] 實(shí)施例1 :轉(zhuǎn)染HBV的人肝癌細(xì)胞系H印G2. 2. 15的培養(yǎng)
[0014] 將轉(zhuǎn)染HBV的H印G2. 2. 15細(xì)胞解凍后，接種入25cm2培養(yǎng)瓶，濃度為IX10 5個(gè) /mL，待細(xì)胞長(zhǎng)滿后，加0. 25% (w/v)的胰酶溶液37°C消化3-5min。加培養(yǎng)液吹打，1 : 3 傳代，每天收集上清，連續(xù)2周，冷藏待檢。細(xì)胞培養(yǎng)液為MEN培養(yǎng)液，每IOOmL含胎牛血 清10mL，3% (w/v)的谷氨酰胺溶液lmL，G418 380iig/mL，慶大霉素50U/mL;細(xì)胞消化液為 0.25% (w/v)的胰酶溶液，用Hanks液配制。
[0015] 實(shí)施例2 :茶氨酸溴香酰胺對(duì)H印G2. 2. 15細(xì)胞的毒性試驗(yàn)
[0016] 取實(shí)施例1培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期H印G2. 2. 15細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為 IX105mじ1，將細(xì)胞接種于96孔板，每孔200iiL，37°C5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待其貼壁后， 棄掉原培養(yǎng)液。在茶氨酸溴香酰胺不同劑量組各孔，分別加入茶氨酸溴香酰濃度為16、64、 125、250、500iimol/L培養(yǎng)液200iiL，另設(shè)不加藥細(xì)胞培養(yǎng)孔為空白對(duì)照組，每組重復(fù)6孔。 將各組細(xì)胞置CO2孵箱培養(yǎng)72h，向每孔細(xì)胞中加入5iig/mLMTT10iiL，每孔中存留有上 清100iiL，37°C5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后，用酶標(biāo)儀在參考波長(zhǎng)630nm，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm 處測(cè)定每個(gè)孔的光密度（OD)值。計(jì)算不同濃度茶氨酸溴香酰胺對(duì)H印G2. 2. 15細(xì)胞生長(zhǎng)抑 制率。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（％) =(空白對(duì)照組OD值-茶氨酸溴香酰胺不同劑量組OD值）/ 空白對(duì)照組OD值X100%。根據(jù)Reed-Muench公式計(jì)算半數(shù)毒性濃度（TC5tl)。結(jié)果顯示， 茶氨酸溴香酰胺的TC5tl大于64ymol/L。因此，本實(shí)驗(yàn)選取小于或等于64ymol/L的濃度 檢測(cè)茶氨酸溴香酰胺的抗HBV活性。
[0017] 實(shí)施例3 :茶氨酸溴香酰胺對(duì)H印G2. 2. 15細(xì)胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制試驗(yàn)
[0018] 取實(shí)施例1培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期H印G2. 2. 15細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為 IX105mじ1，將細(xì)胞接種于96孔板，每孔200iiL，37°C5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待其貼壁后，棄 掉原培養(yǎng)液。在茶氨酸溴香酰胺不同劑量組各孔，分別加入茶氨酸溴香酰濃度為8、16、32、 64iimol/L培養(yǎng)液200iiL，另設(shè)不加藥細(xì)胞培養(yǎng)孔為空白對(duì)照組，每組重復(fù)6孔。將各組細(xì) 胞置CO2孵箱培養(yǎng)72h，收集各組細(xì)胞培養(yǎng)的上清液進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定。測(cè)定方法 按照HBeAg試劑盒、HBsAg試劑盒（華美生物工程有限公司）操作說明進(jìn)行。用酶聯(lián)免疫檢 測(cè)儀測(cè)定450nm處OD值，并計(jì)算抑制率。HBsAg或HBeAg抑制率=(空白對(duì)照組OD值-茶 氨酸溴香酰各劑量組OD值）/空白對(duì)照組OD值X100%。試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1、表2。
[0019] 通過表1、表2的試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，茶氨酸溴香酰胺酮各劑量組和拉米 夫定對(duì)HBsAg及HBeAg的分泌均有抑制作用，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0? 05)。
[0020] 表1茶氨酸溴香酰胺對(duì)H印G2. 2. 15細(xì)胞分泌HBeAg的影響
[0021]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，由活性成分和藥劑學(xué)上可接受的輔料制備而 成，其特征在于，所述的活性成分包括茶氨酸溴香酰胺。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其特征在于，所述藥劑學(xué)上 可接受的輔料包括磺丁基-0 -環(huán)糊精。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其特征在于，磺丁基-0 -環(huán) 糊精與茶氨酸溴香酰胺的用量比為（0.2-0. 8) :1。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其特征在于，磺丁基-0 -環(huán) 糊精與茶氨酸溴香酰胺的用量比為（0.2-0. 4) :1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其特征在于，其為 注射劑，所述的注射劑包括注射液、注射用凍干粉。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述防治慢性乙型肝炎的藥物組合物，其特征在于，所述藥劑學(xué)上 可接受的輔料包括磺丁基-3 -環(huán)糊精、氯化鈉。
7. 茶氨酸溴香酰胺在制備防治慢性乙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治慢性乙型肝炎的藥物組合物及其應(yīng)用，該藥物組合物由活性成分和藥劑學(xué)上可接受的輔料制備而成，所述的活性成分包括茶氨酸溴香酰胺。該藥物有較強(qiáng)的抗乙型肝炎病毒的生物活性，同時(shí)毒副作用低，所提供的注射液穩(wěn)定性高，有望開發(fā)成抗HBV的一線藥物。
【IPC分類】A61P31-20, A61K9-19, A61K9-08, A61P1-16, A61K31-37, A61K47-40
【公開號(hào)】CN104623676
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510087980
【發(fā)明人】朱斌, 王天寶, 魏曉霞, 曾萍, 董亭方
【申請(qǐng)人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院
【公開日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2015年2月26日