一種含雷公藤多甙的注射用生物膠的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種含雷公藤多甙的注射用生物膠，具體涉及一種在器官移植后抗機(jī)體急性免疫排斥的注射用藥物給藥系統(tǒng)，用于動(dòng)物或人體的器官移植后的抗移植免疫排斥的治療。
【背景技術(shù)】
[0002]免疫排斥是機(jī)體對(duì)移植物(異體細(xì)胞、組織或器官)通過(guò)特異性免疫應(yīng)答使其破壞的過(guò)程。一般是指移植術(shù)后，受者可識(shí)別移植物抗原并產(chǎn)生應(yīng)答，移植物中免疫細(xì)胞也可識(shí)別受者抗原組織并產(chǎn)生應(yīng)答。在同種異體移植中，排斥反應(yīng)有兩種基本類型:宿主抗移植物反應(yīng)(hostversusgraftreact1n，HVGR)和移植物抗宿主反應(yīng)(graftversushostreact1n, GVHR)，臨床最多見(jiàn)的是前者；根據(jù)發(fā)生的機(jī)制、時(shí)間、速度和臨床表現(xiàn)，HVGR又可分為3種類型。
[0003]1.超急排斥反應(yīng)發(fā)生在移植物與受者血管接通的數(shù)分鐘到數(shù)小時(shí)內(nèi)，出現(xiàn)壞死性血管炎表現(xiàn)，移植物功能喪失，患者有全身癥狀。發(fā)生的基本原因是受者循環(huán)內(nèi)存在抗供者的抗體，常見(jiàn)于下列情況:①ABO血型不符；②由于多次妊娠或反復(fù)輸血等使受者體內(nèi)存在抗HLA抗體；③移植物保存或處理不當(dāng)?shù)绕渌?。超急排斥發(fā)生迅速，反應(yīng)強(qiáng)烈，不可逆轉(zhuǎn)；需立即切除移植物，否則會(huì)導(dǎo)致受者死亡。如果事先認(rèn)真進(jìn)行ABO基至Rh血型檢查和交叉配合試驗(yàn)，多可避免這種現(xiàn)象的發(fā)生。
[0004]2.急性排斥反應(yīng)是排斥反應(yīng)最常見(jiàn)的一種類型，多發(fā)生在移植后數(shù)周到I年內(nèi)，發(fā)生迅速，臨床表現(xiàn)多有發(fā)熱、移植部位脹痛和移植器官功能減退等；病理特點(diǎn)是移植物實(shí)質(zhì)和小血管壁上有以單個(gè)核細(xì)胞為主的細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)水腫與血管損害，后期在大動(dòng)脈壁上有急性纖維素樣炎癥。急性排斥出現(xiàn)得早晚和反應(yīng)的輕重與供-受者HLA相容和程度有直接的關(guān)系，相容性高則反應(yīng)發(fā)生晚、癥狀輕，有些可遲至移植后2年才出現(xiàn)。急性排斥反應(yīng)經(jīng)過(guò)及時(shí)恰當(dāng)?shù)拿庖咭种浦委煻嗫删徑狻?br>[0005]3.慢性排斥反應(yīng)屬于遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年之后，表現(xiàn)為進(jìn)行性移植器官的功能減退直至喪失；病理特點(diǎn)是血管壁細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化和瘢痕形成，有時(shí)伴有血管硬化性改變。本型反應(yīng)雖然進(jìn)展緩慢，但用免疫抑制治療無(wú)明顯的臨床效果O
[0006]4.移植物抗宿主反應(yīng)多發(fā)生于同種骨髓移植者，也可見(jiàn)于脾、胸腺和小腸移植中；此時(shí)患者的免疫狀態(tài)極度低下，而移植物中豐富的免疫活性細(xì)胞則將受者細(xì)胞視為非己抗原，對(duì)其發(fā)塵免疫應(yīng)答；移植物的T細(xì)胞在受者淋巴組織中增殖并產(chǎn)生一系列損傷性效應(yīng)。GVHR分為急性與慢性兩型。急性型多見(jiàn)，多發(fā)塵于移植后3個(gè)月以內(nèi)，患者出現(xiàn)肝脾腫大、高熱、皮瘆和腹瀉等癥狀；雖是可逆性變化，但死亡率較高；慢性型由急性型轉(zhuǎn)來(lái)，患者呈現(xiàn)嚴(yán)重的免疫失調(diào)，表現(xiàn)為全身消瘦，多個(gè)器官損害，以皮膚和粘膜變化最突出，病人往往因嚴(yán)重感染或惡液質(zhì)而死亡。
[0007]器官移植術(shù)后，抗急性免疫排斥對(duì)于早期器官的存活和療效的發(fā)揮意義重大。
[0008]雷公藤多甙，又叫雷公藤甲素(Triptolide，TPL)、雷公藤內(nèi)酯醇，是中藥雷公藤中的主要活性成分之一。雷公藤自1969年福建三明地區(qū)第二醫(yī)院用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以來(lái)，已廣泛用于治療多種自身免疫性疾病，且療效顯著。雷公藤多甙是一個(gè)獨(dú)立的新組分，保留了生藥的成分，并顯著降低了整體副作用。作為一種免疫抑制劑，其作用可能是通過(guò)抑制IL-2的分泌，以及抑制T淋巴細(xì)胞增殖早期IL-2受體的表達(dá)，發(fā)揮免疫抑制作用。其免疫作用已在心、腎、皮膚、小腸等動(dòng)物器官移植實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。南京軍區(qū)總醫(yī)院黎磊石等在大鼠同種異體腎移植研宄中發(fā)現(xiàn)，雷公藤多甙可以抑制移植腎的急性排斥反應(yīng)，其機(jī)理在于能減少外周血Tc/s、NK細(xì)胞和總T細(xì)胞的數(shù)量，抑制細(xì)胞免疫。黎介壽等在小腸同種異體移植的動(dòng)物及臨床研宄中，應(yīng)用雷公藤多甙替代硫唑嘌呤，與Cs A、皮質(zhì)類固醇三聯(lián)應(yīng)用，作為免疫抑制用藥方案，取得了良好的免疫抑制效果。單獨(dú)應(yīng)用作為抑制慢性排斥反應(yīng)的長(zhǎng)期用藥，發(fā)現(xiàn)較未處理組的移植物及受體的存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，并認(rèn)為雷公藤多甙可部分替代Cs A用于防治急性排斥反應(yīng)。錢葉勇等在臨床腎移植中亦證實(shí)了雷公藤多甙的免疫抑制作用，并認(rèn)為雷公藤多甙能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，與Cs A有協(xié)同作用。
[0009]雷公藤是一個(gè)有著悠久、廣泛應(yīng)用歷史的中藥。雷公藤多甙是一個(gè)具有多種生物活性的天然產(chǎn)物，來(lái)源于中藥雷公藤的根，研宄表明它具有抗氧化，抗類風(fēng)濕，抗老年性癡呆癥、抗癌等功效。它是一個(gè)具有多種生物活性的二萜內(nèi)酯，來(lái)源于中藥雷公藤的根，它是治療類風(fēng)濕病雷公藤片、雷公藤多甙片等制劑的主要有效成分。臨床上雷公藤多苷片主要用于祛風(fēng)解毒、除濕消腫、舒筋通絡(luò)、抗炎及抑制細(xì)胞免疫和體液免疫等作用，用于風(fēng)濕熱瘀，毒邪阻滯所致的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腎病綜合癥，白塞氏三聯(lián)癥，麻風(fēng)反應(yīng)，自身免疫性肝炎等?，F(xiàn)代研宄表明:雷公藤甲素不僅有抗類風(fēng)濕作用，還有抗癌作用，在美國(guó)正在進(jìn)行一期抗癌臨床研宄，目前熱點(diǎn)研宄的天然活性產(chǎn)物。雷公藤多甙，難溶于水，易溶于甲醇、二甲基亞砜、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、氯仿等，具有抗炎及免疫抑制作用。
[0010]本品具有的抗炎、免疫抑制作用有相關(guān)的實(shí)驗(yàn)證明，結(jié)果如下:
[0011]1.抗炎作用:雷公藤多苷能顯著抑制大白鼠瓊脂關(guān)節(jié)腫；抑制組織胺所致的毛細(xì)血管通透性增加；抑制大白鼠的棉球肉芽增殖，可使大白鼴血漿C-GMP含量明顯下降，并有阻斷組織胺、5-輕色胺對(duì)豚鼠離體回腸的作用。
[0012]2.免疫抑制作用:(1)對(duì)體液免疫的抑制作用:雷公藤多苷能顯著抑制溶血素、溶血空斑及脾細(xì)胞免疫特異花環(huán)的形成；有抑制輔助性T細(xì)胞、抑制B細(xì)胞的活化及抗體分泌作用。在臨床上，對(duì)體液免疫亢進(jìn)，存在循環(huán)抗體及免疫復(fù)合物的疾病療效較好。治療后免疫球蛋白下降，類風(fēng)濕因子、LE細(xì)胞、抗核抗體轉(zhuǎn)陰，總補(bǔ)體上升及免疫復(fù)合物降低等均證明雷公藤多苷對(duì)體液免疫有抑制作用。(2)對(duì)細(xì)胞免疫有抑制作用:體外試驗(yàn)示雷公藤多苷可抑制淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及E花環(huán)形成；抑制豚鼠、兔E花環(huán)形成；抑制豚鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及OT皮膚試驗(yàn)；大劑設(shè)雷公藤多苷可使幼齡小鼠胸腺萎縮。臨床上雷公藤多苷對(duì)第IV型過(guò)敏反應(yīng)引起的疾病有效。這些試驗(yàn)及臨床資料均支持雷公藤多背對(duì)細(xì)胞免疫有抑制作用。
[0013]雷公藤多甙還被證明對(duì)多種癌癥如白血病、乳腺癌、胰腺癌及肺癌等均有良好的抗腫瘤活性。最近的研宄發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素除了特異地影響某些蛋白和信號(hào)通路以外，還會(huì)抑制廣泛的基因轉(zhuǎn)錄，但其作用機(jī)理有待進(jìn)一步明確。中科院上海藥物研宄所俞強(qiáng)課題組對(duì)Triptolide抑制廣泛基因轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制進(jìn)行了深入研宄。研宄發(fā)現(xiàn)，Triptolide通過(guò)促進(jìn)RNA聚合酶II中最大及最主要的功能亞基Rpbl磷酸化，以及隨后的Rpbl的泛素化降角軍，從而抑制基因的轉(zhuǎn)錄。Rpbl上游激酶PTEF-b在Triptolide誘導(dǎo)的Rpbl的磷酸化的過(guò)程中發(fā)揮著正調(diào)控作用。研宄還發(fā)現(xiàn)，Triptolide可以誘導(dǎo)DNA損傷。這些研宄提示，Triptolide通過(guò)造成細(xì)胞的DNA損傷，從而激活P_TEFb，使其磷酸化Rpbl，造成Rpbl的降解，從而抑制了廣譜的基因轉(zhuǎn)錄。2012年10月，美國(guó)明尼蘇達(dá)大學(xué)研宄人員研宄發(fā)現(xiàn)，小鼠模型顯示在傳統(tǒng)中藥中有悠久使用歷史的天然植物產(chǎn)品雷公藤甲素對(duì)治療胰腺癌有效。由于雷公藤甲素不溶于水，它在小鼠體內(nèi)的作用不甚理想。研宄人員于是對(duì)雷公藤甲素進(jìn)行加工，最終得到一種水溶性、注射用新藥明尼甲素，后者可以更有效地運(yùn)輸?shù)揭认侔┘?xì)胞。研宄人員在胰腺癌細(xì)胞系以及移植了人類胰腺腫瘤的小鼠中測(cè)試了新藥。他們發(fā)現(xiàn)，該藥對(duì)殺滅腫瘤細(xì)胞及縮小腫瘤效果極佳。
[0014]目前雷帕霉素多甙主要的應(yīng)用劑型為片劑，用法為口服，按體重每Ikg每日1-1.5mg，分三次飯后服用(例如:按60kg體重的成年人計(jì)算，一次2?3片，一日3次，飯后服用，或遵醫(yī)囑。
[0015]不良反應(yīng)有:1.消化系統(tǒng):口干、惡心、嘔吐、乏力、食欲不振、腹脹、腹瀉、黃疽、轉(zhuǎn)氨酶升高；嚴(yán)重者可出現(xiàn)急性中毒性肝損傷、胃出血。2.血液系統(tǒng):白細(xì)胞，血小板下降；嚴(yán)重者可出現(xiàn)粒細(xì)胞缺乏和全血細(xì)胞減少。3.泌尿系統(tǒng):少尿或多尿、水腫、腎功能異常等腎臟損害；嚴(yán)重者可出現(xiàn)急性腎功能衰竭。4.心血管系統(tǒng):心t季、胸悶、心律失常、血壓升高或下降、心電圖異常。5.生殖、內(nèi)分泌系統(tǒng):女子月經(jīng)紊亂、月經(jīng)量少或閉經(jīng)；男子梢子數(shù)量減少、活力下降。6.神經(jīng)系統(tǒng):頭昏、頭輦、嗜睡，失眠、神經(jīng)炎、復(fù)視。7.其他:皮瘆、瘙癢、脫發(fā)、面部色素沉著。
[0016]生物膠的種類很廣，包括創(chuàng)面修復(fù)用生物蛋白膠，血管或組織粘合生物膠，美容美體注射用生物膠等，主要成分有采用纖維蛋白原、氯化鈣、XIII因子、抑肽酶組成的I劑和凝血酶組成的II劑組成的高效生物膠，1、I1、II1、IV、V型膠原、明膠、透明質(zhì)酸鈉，和一些生物粘性物質(zhì)。其中采自生物的產(chǎn)品有豬和牛的筋腱、大鼠的尾腱，或來(lái)自于轉(zhuǎn)基因微生物表達(dá)系統(tǒng)的重組人的膠原等。纖維蛋白使用前將兩劑于恒溫箱溶成2.5的生理鹽水水劑；使用時(shí)可涂于組織上部或涂布于斷面，或注射于相關(guān)部位，有生物相容性好、粘合強(qiáng)度高，復(fù)位性好，見(jiàn)效快的特點(diǎn)。生物膠還可用于藥物的緩釋或控釋給藥系統(tǒng)，將藥物混懸與可注射用生物膠中，注射至皮下或肌肉組織中，藥物可透過(guò)生物膠緩慢釋放，起到長(zhǎng)效作用。
[0017]可注射用生物膠中