口服胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊的制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種口服胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊的制備工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，胎盤(pán)肽對(duì)機(jī)體具有較高的免疫和生理調(diào)節(jié)作用對(duì)病毒性傳染病、真菌感染、免疫缺陷等疾病的輔助治療有良好的效果[11];由于多肽的分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，半衰期短，在口服給藥過(guò)程中，易被胃腸道中大量的蛋白分解酶降解，失去活性，致使該類(lèi)藥物在給藥方面受到限制。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的多肽類(lèi)藥物被發(fā)掘，多肽類(lèi)藥物的口服給藥問(wèn)題已成為醫(yī)藥領(lǐng)域的焦點(diǎn)問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于，克服現(xiàn)有口服多肽類(lèi)藥物微囊制備技術(shù)的不足之處，提供一種以殼聚糖、海藻酸鈉為壁材、以胎盤(pán)多肽為芯料，采用W / O / W乳化凝膠-外部交聯(lián)技術(shù)，制備口服胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊的工藝，試驗(yàn)結(jié)果顯示:該工藝制備的微囊，成形性較好，微囊的包封率及載藥量較高、粒徑較小、體外模式腸液釋藥試驗(yàn)顯示:胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉微囊具有良好的緩釋性能，能較好的提高多肽藥物的穩(wěn)定性，有望成為口服蛋白多肽類(lèi)藥物的緩釋載體，現(xiàn)將口服胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊的制備方法及工藝條件介紹如下:
1、口服胎盤(pán)多肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊制備工藝 1.1、儀器與設(shè)備
HL-4數(shù)顯恒溫磁力攪拌器；可見(jiàn)光紫外分光光度儀；真空干燥器；LD52A型離心機(jī)；H1-4電泳儀；光學(xué)顯微鏡:1°/?電子分析天平；HS2060型超聲提取器。
[0004]1.2、藥物與試劑
海藻酸鈉；殼聚糖；胎盤(pán)多肽，胸腺肽α 1，六磷酸肌醇溶液，十二烷基硫酸鈉液，植物油；山梨糖醇酐油酸酯(Span-80);氯化鈣(CaCI2 )正丁醇、石油醚、異丙醇等試劑均為分析純。
[0005]1.3、多肽微囊制備方法
1.3.1溶液配制
水相的制備:精密稱(chēng)取海藻酸鈉2g，攪拌溶解于六磷酸肌醇溶液中，配制成2.0%海藻酸鈉六磷酸肌醇溶液100ml (W / V),精密稱(chēng)取胎盤(pán)肽0.4g，超聲溶解于2.0%海藻酸鈉六磷酸肌醇溶液中，靜止放置除去氣泡，得胎盤(pán)多肽-海藻酸鈉混合溶液，作為乳化過(guò)程中的水相。
[0006]油相的制備:取精密量取植物油100ml，置三頸瓶中，用1%乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，水浴加熱至35°C,攪拌(400r.mirT1)下加入span80 0.8g,分散均勻，得0.8% span80植物油溶液，作為油相。
[0007]膠聯(lián)劑的制備:精密稱(chēng)取殼聚糖0.6g，在攪拌下溶于1%乙酸10ml溶液中(25°C)，配制成0.6%殼聚糖溶液100ml (W / V)，用1%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5.6，精密稱(chēng)取氯化鈣lg，超聲溶解于0.6%殼聚糖溶液10ml中，分別用0.4nm、0.22nm濾膜濾過(guò)，得殼聚糖-氯化鈣混合溶液，作為膠聯(lián)劑。
[0008]1.3.2多肽微囊的制備
①取一定量的0.8% span80植物油溶液，水浴加熱至30°C，在攪拌下(800r.mirT1)，緩慢加入(2ml.miiT1)胎盤(pán)多肽-海藻酸鈉混合溶液，油相與水相比例1: 4 (V / V)，乳化30min，形成W / O初乳；低溫放置120min，除去氣泡；
②取W/ O初乳,在攪拌下(800r.mirT1)緩慢加入(2ml.mirT1)殼聚糖-氯化|丐混合溶液中，水浴加熱至30°C，攪拌乳化30min，W / O / W復(fù)乳形成，靜止孵化進(jìn)行固化；
③將復(fù)乳移入分液漏斗中，分別用石油醚、異丙醇充分洗脫、離心，棄去上層油相，再用蒸餾水洗脫，離心，棄去上層水相，得凝膠狀微粒；
④取固化后的凝膠狀微粒分?jǐn)傆阡X薄上，置真空干燥器中干燥2h；
⑤取干燥后的微粒，在攪拌下(60r.mirT1)緩慢放入0.4%殼聚糖溶液中，攪拌下孵化120min進(jìn)行二步膠聯(lián),取出微粒,在攪拌下(60r.mirT1)放入正丁醇溶液中，離心取出分別用異丙醇、石油醚、純凈水反復(fù)洗脫，離心棄去上層油相和水相；
⑥將固化后的微粒分?jǐn)傆阡X薄上，置真空干燥器中干燥。
[0009]2、微囊的制備主要技術(shù)條件:
通過(guò)正交試驗(yàn)研究及單因素研究考察發(fā)現(xiàn)，制備胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊，其主要技術(shù)條件為:海藻酸鈉濃度2.0%、殼聚糖濃度0.8%、CaCl2濃度1.0%、攪拌速度800r.1nin^10其外乳化時(shí)的溫度(30°C )、span-80的濃度(0.8%)、油相與水相的比例1: 4(V / V)、蛋白多肽與海藻酸鈉的比例(I: 5)等因素均能對(duì)微囊的形態(tài)、粒徑、包封率、載藥量、藥物釋藥度產(chǎn)生一定影響。另外本工藝還采用了二次交聯(lián)技術(shù)——對(duì)多肽凝膠狀微囊用0.4%殼聚糖溶液二次交聯(lián)包封覆膜，避免了微囊的突釋現(xiàn)象，延長(zhǎng)藥物的釋藥時(shí)間。
[0010]3、該工藝制備的胎盤(pán)肽殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微囊達(dá)到的技術(shù)指標(biāo):
采用W / O / W乳化凝膠-外部交聯(lián)法，制備多肽緩釋微囊。經(jīng)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):該工藝微囊成形性較好，主要以圓形、橢圓形及菱形為主，平均粒徑為125um，藥物平均包封率達(dá)76.60%、載藥量6.3mg/g ;體外模式腸液釋藥試驗(yàn)顯示:前8h藥物累積釋藥率65.60%, 8h后呈現(xiàn)緩慢釋放，24h藥物累積釋藥率達(dá)到90.46%，具有較好的緩釋性能，符合口服藥物動(dòng)力學(xué)要求。
[0011]4、結(jié)論:
殼聚糖、海藻酸鈉可作為多肽類(lèi)藥物生物降解的載體材料，能較好的提高胎盤(pán)肽分子結(jié)構(gòu)及功效的穩(wěn)定性，ff/0/ff乳化凝膠-外部交聯(lián)法工藝簡(jiǎn)便、操作性強(qiáng)，制備的微囊包封率和載藥量較高，緩釋性能較好，粒徑、釋藥度符合口服藥物動(dòng)力學(xué)要求，該微囊有望成為口服多肽藥物的載體。
【具體實(shí)施方式】
[0012]現(xiàn)參照實(shí)施例，具體說(shuō)明如下:
1.1、儀器與設(shè)備 HL-4數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(昆山市精明儀器公司);可見(jiàn)光紫外分光光度儀(UV755B，上海精密科學(xué)儀器有限公司)；真空干燥器(南京金星干燥有限公司);LD52A型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠(chǎng))；Η1-4電泳儀(上海精密儀器廠(chǎng))；光學(xué)顯微鏡(日本尼康公司)^。/^電子分析天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)；HS2060型超聲提取器(上海之信儀器有限公司)。
[0013]1.2、藥物與試劑
海藻酸鈉(Sodium alginate, Aig化學(xué)級(jí)，批號(hào)=013062346,低粘度:25°C，2%海藻酸鈉溶液，粘度0.2Ns / m2,青島海藻集團(tuán)提供)；殼聚糖(chitosan Cts,試劑級(jí),批號(hào):013061466脫乙酰基D.D%=91%，分子量10000，濟(jì)南海得貝生物工程有限公司生產(chǎn))；胎盤(pán)肽(純度96.6%，分子量小于7000，本單位制劑室提供，)，胸腺肽α I (吉爾生化(上海)有限公司，批號(hào):01302162)，六磷酸肌醇溶液(食品級(jí)，批號(hào):13022317，徐州昌鼎進(jìn)出口貿(mào)易有限公司生產(chǎn))，十二烷基硫酸鈉液，植物油(廣西宏太植物油廠(chǎng)生產(chǎn))；山梨糖醇酐油酸酯(Span-80);氯化鈣(CaCI2 )正丁醇、石油醚、異丙醇等試劑均為分析純。
[0014]1.3、多肽微囊制備方法
1.3.1溶液配制
水相的制備:精密稱(chēng)取海藻酸鈉2g，在攪拌下溶解于10ml的六磷酸肌醇溶液中(30°C)，配制成2.0%海藻酸鈉六磷酸肌醇溶液(W / V),精密稱(chēng)取胎盤(pán)肽0.4g，超聲溶解于10ml的2.0%海藻酸鈉六磷酸肌醇溶液中，低溫靜止放置(2°C，2h)除去氣泡，得胎盤(pán)多肽-海藻酸鈉混合溶液，作為乳化過(guò)程中的水相。
[0015]油相的制備:取精密量取植物油100ml，置三頸瓶中，用1%乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，水浴加熱至35°C，攪拌(400r.mirT1)下，將span80 0.8g分散于植物油10ml中，得0.8%span80植物油溶液，作為油相。
[0016]膠聯(lián)劑的制備:精密稱(chēng)取殼聚糖0.6g，攪拌下將殼聚糖溶于1%乙酸10ml溶液中(水浴加熱至25°C )，配制成0.6%殼聚糖溶液100ml (W / V)，用1%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5.6，精密稱(chēng)取氯化鈣lg，超聲溶解于0.6%殼聚糖溶液10ml中，分別用0.4nm、0.22nm濾