具有水潤(rùn)和潤(rùn)滑活性的藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了基于透明質(zhì)酸的酯衍生物的藥物組合物，其可用作特征為彈性和水 潤(rùn)性降低的陰道粘膜病癥如陰道干燥和/或萎縮性陰道炎的局部治療，并可用作生殖器粘 膜的潤(rùn)滑劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 陰道粘膜是面向腔體的陰道表面。其由不含角蛋白但是被粘液保護(hù)的厚的多層被 覆上皮組成，所述粘液富含由分泌粘液的細(xì)胞所分泌的粘多糖。陰道粘膜的細(xì)胞、尤其是最 外層的那些細(xì)胞是與激素相關(guān)的，并且在維持陰道環(huán)境的代謝平衡方面起著重要作用。所 述細(xì)胞受雌激素的刺激而合成和儲(chǔ)存大量糖原（糖儲(chǔ)備），當(dāng)所述細(xì)胞脫落時(shí)，其被引入到 陰道腔中。被釋放出來的趟原被陰道中正常存在的菌群代謝而形成負(fù)責(zé)酸性局部pH的乳 酸，尤其是在接近月經(jīng)周期的中期時(shí)。乳酸桿菌形成一種覆蓋陰道粘膜的生物被膜，其與低 的pH值一起保護(hù)該環(huán)境不受病原體和機(jī)會(huì)致病菌侵襲并對(duì)抗自身無害并且通常在陰道中 以正常的"固有"菌叢形式少量存在的細(xì)菌的過度生長(zhǎng)。
[0003] 粘膜的最內(nèi)層是粘膜固有層，其由粘彈性結(jié)締組織組成，并且其最深的部分血管 豐富。雖然陰道粘膜不包含腺體，但是，刺激、喚醒和性交增加其分泌，該分泌有潤(rùn)滑其表面 的作用。這種分泌實(shí)際上源于宮頸的腺體，還有一些是源自粘膜固有層的滲出液。
[0004] 由這一復(fù)雜的畫面可以容易地推斷出，陰道平衡中的任何變化都會(huì)導(dǎo)致粘膜的變 化，使粘膜傾向于喪失其水潤(rùn)和腫脹性，從而產(chǎn)生陰道干燥。從出生到絕經(jīng)，外陰陰道粘膜 的水潤(rùn)和潤(rùn)滑、厚度、結(jié)構(gòu)和功能性在女性生育期內(nèi)一直在變化，但主要變化發(fā)生在絕經(jīng)期 和絕經(jīng)后，當(dāng)雌激素刺激顯著降低時(shí)。陰道干燥的其它原因是產(chǎn)后期、哺乳、長(zhǎng)期使用一些 藥物（如抗腫瘤藥、抗抑郁藥和抗組胺藥）、手術(shù)操作（卵巢切除）和一些并發(fā)的病癥如肥 胖或糖尿病。還有一些精神和身體方面的原因如應(yīng)激反應(yīng)，特別是限制飲食、強(qiáng)烈的體力活 動(dòng)，和一些嚴(yán)重的社會(huì)問題。
[0005] 最后，性喚起階段一些阻止常規(guī)粘液產(chǎn)生的精神或關(guān)系問題可造成干燥。
[0006] 不管什么原因，陰道干燥影響約50%的女性，其表現(xiàn)為干燥感、陰道瘙癢、不適、性 交期間疼痛，在更難以醫(yī)治的一些形式中，表現(xiàn)為炎癥和泌尿問題。陰道粘膜營(yíng)養(yǎng)的改變?yōu)?機(jī)會(huì)性真菌或細(xì)菌感染鋪平了道路；在這些情況中，該病癥被更具體地稱為陰道萎縮或萎 縮性陰道炎。
[0007] 除細(xì)菌或真菌感染的藥理學(xué)治療或激素替代治療（其并不總是適用）外，陰道干 燥和萎縮性陰道炎的治療主要是以使用具有舒緩和滋潤(rùn)作用的、特征在于組成其的載體的 潤(rùn)滑劑為基礎(chǔ)。潤(rùn)滑劑可以是：
[0008] 以油為基礎(chǔ)的潤(rùn)滑劑：通常為得自石油的聚合物凝膠。因?yàn)榕c空氣接觸時(shí)不會(huì)變 干并且不會(huì)與體液發(fā)生不利的相互作用，它們通常具有長(zhǎng)效作用，但是，它們并不十分潤(rùn)滑 (它們會(huì)產(chǎn)生摩擦），并且尤其會(huì)溶解乳膠，這意味著它們不能與避孕套一起使用，因?yàn)樗?們將會(huì)降低避孕套的避孕功效和對(duì)抗性傳播疾病的功效；
[0009] 以硅酮為基礎(chǔ)的潤(rùn)滑劑：最新一代，其類似水凝膠。它們易于涂布并且干燥緩慢， 但可能會(huì)攻擊基于娃酮的產(chǎn)品；
[0010] 以水為基礎(chǔ)的潤(rùn)滑劑：高水含量的凝膠，其易于涂布、與生物學(xué)液體相容并且對(duì) 制備避孕套用的乳膠沒有影響；雖然它們?cè)趹?yīng)用后可以提供極佳的快感，但是，它們十分容 易變干，并且因此需要頻繁使用。
[0011] 當(dāng)不僅需要即刻潤(rùn)滑，而且還需要長(zhǎng)效潤(rùn)滑、滋潤(rùn)、保護(hù)作用時(shí)，以水為基礎(chǔ)的產(chǎn) 品當(dāng)然是使用最廣泛的。
[0012] 在這些制劑中，最廣泛使用的成分之一是透明質(zhì)酸（HA)，一種具有多種性質(zhì)的廣 泛存在于人體內(nèi)的聚合物；特別是，對(duì)于局部應(yīng)用而言，其可以起到潤(rùn)濕劑、滋潤(rùn)劑、粘膜粘 著劑、愈合劑和組織再生劑的作用。其吸收大量的水（高達(dá)其自身重量的1〇〇〇倍），產(chǎn)生易 于涂布且可舒服涂抹的水溶性凝膠。但是，高水含量使得它們很快變干。
[0013] 現(xiàn)已令人吃驚地發(fā)現(xiàn)，一些通過HA的酯化獲得的透明質(zhì)酸衍生物可成功用于這 些應(yīng)用，克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的所有問題。
[0014] 一些HA酯衍生物已被成功用于其它領(lǐng)域，如組織工程學(xué)；例如，如EP618817中所 述，可將75或100%的衍生物壓縮成纖維，當(dāng)以無紡布形式進(jìn)行處理時(shí)，其可形成一種可用 于皮膚病學(xué)領(lǐng)域的三維基質(zhì)。
[0015] 本發(fā)明的凝膠形式的藥物組合物由與芐醇形成的透明質(zhì)酸酯組成，其中50%的透 明質(zhì)酸羧基被芐醇的相應(yīng)羥基酯化（Hyaffllp50);由此獲得的酯吸收的水分低于HA本身， 其是低水溶性的并且更致密，但是，令人吃驚地是，其還可發(fā)揮比已知的包含HA鈉鹽的制 劑更有效、更長(zhǎng)效的濕潤(rùn)作用。
[0016]因此，本發(fā)明的組合物顯著改善了干燥陰道粘膜的營(yíng)養(yǎng)和水潤(rùn)性。
[0017] 發(fā)明詳沭
[0018] 本發(fā)明公開了以透明質(zhì)酸芐基酯為基礎(chǔ)的藥物組合物，其中透明質(zhì)酸50%的羧基 被芐醇的相應(yīng)羥基酯化（HyafTllp50)，該組合物可用作特征為彈性和水潤(rùn)性降低的、可能 伴有并發(fā)的炎癥或細(xì)菌或真菌感染的陰道粘膜病癥如陰道干燥和萎縮性陰道炎的局部治 療；所述組合物還可成功用作生殖器粘膜的潤(rùn)滑劑，即使在生理學(xué)條件下也是如此。本發(fā)明 所用的透明質(zhì)酸原料可得自任何來源，例如由公雞冠提取（EP138572)、如本領(lǐng)域技術(shù)人員 已知的通過發(fā)酵獲得、或者通過生物合成獲得（得自芽孢桿菌屬，W02012032154)，且具有 100, 000至250, OOODa，特別是180, 000至230, OOODa的平均分子量。應(yīng)當(dāng)注意，這里的平 均分子量是指通過"特性粘度"法計(jì)算（Terbojevich等，Carbohydr Res, 1986,363-377)的 重均分子量。
[0019] 本文所用的酯衍生物是如EP216453中所述那樣獲得的，具體如實(shí)施例1所述：
[0020] 實(shí)施例1:其中50%的HA羧基被芐醇酯化的透明質(zhì)酸芐基酯（Hyaff lp50)的制備
[0021] 在25°C下，將10. 6g HA四丁基銨鹽（重均分子量為200,OOODa)(相當(dāng)于17毫當(dāng) 量的單體單元）溶解于530ml二甲基亞砜中，加入7. 8毫當(dāng)量的芐基溴，并將所得溶液在 30°C下維持12小時(shí)。然后，加入62ml包含9g氯化鈉的水溶液，在不斷攪拌下，將所得混合 物緩慢傾倒到3000ml丙酮中。將形成的沉淀濾出，用500ml5 :1的丙酮/水洗滌三次，最 后，在30°C下真空干燥8小時(shí)。重復(fù)該沉淀階段；將沉淀用5 :1的丙酮/水洗滌兩次，然后 再單獨(dú)用丙酮洗滌三次，然后在30°C下真空干燥24小時(shí)。
[0022] 由此獲得的終產(chǎn)物是其中50%的透明質(zhì)酸羧基被芐醇的相應(yīng)羥基酯化了的透明 質(zhì)酸（Hyaffllp50)。根據(jù) Cundiff and Markunas, Anal Chem, 1961, 33, 1028-1030 來講行 酯基的定量。
[0023] 由此獲得的酯衍生物的吸水度低于起始分子。由于明顯的化學(xué)原因和立體化學(xué)原 因，芐醇芳族基團(tuán)對(duì)50%羧基的置換降低了起始分子的親水性；但是，如下所述，出乎意料 地證明Hyaffllp50:
[0024] ?雖然含水百分?jǐn)?shù)較低，但是，在對(duì)粘膜水潤(rùn)、維持新鮮度和快感的長(zhǎng)效方面，遠(yuǎn)遠(yuǎn) 優(yōu)于HA本身；
[0025] ?能發(fā)揮抑菌作用，在機(jī)會(huì)性感染事件中是有用的；
[0026] ?由于在水中的溶解度更低，因此更長(zhǎng)效；
[0027] ?因?yàn)榫哂型耆缘幕|(zhì)，故對(duì)乳膠無害，因此可與避孕套一起使用；
[0028] ?是粘膜粘著性的并且是生物相容性的；
[0029] 因此，其無疑是對(duì)目前可獲得的陰道水潤(rùn)和潤(rùn)滑產(chǎn)品的明確改善。
[0030] 實(shí)施例2:HA制劑（制劑A)和Hyaffllp50制劑（制劑B)的水潤(rùn)作用評(píng)估，其中 HA 的平均MW為180, 000-230,OOODa。
[0031] 該制劑是通過將HA粉末本身或Hyaff llp50用等滲鹽水溶液（0? 9%w/v的NaCl水 溶液）水合以獲得〇. 2%的終濃度來簡(jiǎn)單制備的。
[0032] 本研究是在通過手術(shù)切除獲得的全無病理學(xué)疾病的豬陰道粘膜上離體進(jìn)行的。
[0033] 將面積為2cm2的陰道粘膜樣品放置到陪替氏培養(yǎng)皿上并用1ml制劑A或制劑B或 者等體積的鹽水溶液（對(duì)照）處理。
[0034] 然后，將這些樣品用1ml的鹽水溶液潤(rùn)濕以模擬陰道環(huán)境，并在恒濕下將其儲(chǔ)存 在37°C的恒溫箱中。在1小時(shí)后，將該粘膜帶轉(zhuǎn)移到干燥的陪替氏培養(yǎng)皿上，并將此時(shí)記 為〇時(shí)和最大水潤(rùn)水平，對(duì)它們的水潤(rùn)程度進(jìn)行評(píng)估，對(duì)照值被設(shè)定為100。在預(yù)設(shè)的時(shí)間 (1、3、6和24小時(shí)，對(duì)應(yīng)于Tl、T2、T3和T4)測(cè)量粘膜的水潤(rùn)程度，在一次測(cè)量和下一次測(cè) 量之間，將樣品保留在保溫箱中。用皮膚水分測(cè)試儀（corneometer)進(jìn)行測(cè)量；通過向測(cè)試 表面應(yīng)用傳感器來測(cè)量該表面所包含水分的介電功率（dielectric power),其顯然會(huì)隨著 水分含量而發(fā)生變化。
[0035] 在下面的表1中列出了所得的結(jié)果，其明確表明，制劑B(Hyaffllp50)的濕潤(rùn)效果 遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于制劑A(HA);在24小時(shí)后，用Hyaffllp50處理的樣品的殘余水化水平比用HA處 理的樣品高兩倍。這意味著與制劑A相比，制劑B為粘膜提供了更多的水。
[0036] 表1:豬陰道粘膜樣品水化程度評(píng)估
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于陰道干燥和/或萎縮性陰道炎的局部治療的包含透明質(zhì)酸的凝膠形式的藥物 組合物，其中50%的透明質(zhì)酸羧基被芐醇酯化。
2. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述透明質(zhì)酸具有100, 000至250, OOODa，優(yōu) 選180, 000至230, OOODa的平均分子量。
3. 如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述50%被芐醇酯化的透明質(zhì)酸的濃度為 0· 2%w/w。
4. 用于治療伴有陰道干燥和/或萎縮性陰道炎的細(xì)菌或真菌感染的如權(quán)利要求1-3任 意一項(xiàng)所述的藥物組合物。
5. 包含濃度為0. 2%w/w的50%被芐醇酯化的透明質(zhì)酸的凝膠形式的藥物組合物，其中 所述透明質(zhì)酸具有180, 000至230, OOODa的重均分子量且膠凝劑是Carbomer974P，并且其 還包含可藥用的賦形劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其不包含尼泊金酯類防腐劑。
7. 用于治療陰道干燥和/或萎縮性陰道炎的如權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了具有水潤(rùn)和潤(rùn)滑活性的藥物組合物，具體地講，本發(fā)明公開了基于透明質(zhì)酸的酯衍生物的藥物組合物，其可用作特征為彈性和水潤(rùn)性降低的陰道粘膜病癥如陰道干燥和/或萎縮性陰道炎的局部治療，并可用作生殖器粘膜的潤(rùn)滑劑。
【IPC分類】A61K31-728, A61K9-06, A61P31-10, A61P15-02, A61P31-04
【公開號(hào)】CN104666240
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310610684
【發(fā)明人】L·皮洛托, G·蓋恩納里, A·M·贊納拉托
【申請(qǐng)人】菲迪亞制藥股份公司
【公開日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2013年11月26日