一種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種免疫調(diào)節(jié)劑及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一種用于鴨黃病毒免 疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鴨黃病毒（鴨坦布蘇病毒）是一種嚴(yán)重影響蛋鴨及種鴨產(chǎn)蛋機(jī)能的病毒。其臨床 表現(xiàn)為產(chǎn)蛋機(jī)能突然下降，嚴(yán)重的在3-5天內(nèi)產(chǎn)蛋率由高峰降為零，采食量也會同時下降， 個別有死亡現(xiàn)象。病理剖解可見卵巢充血、腫脹、壞死和萎縮等嚴(yán)重病變，并伴有發(fā)熱高燒 等現(xiàn)象。對于常見病毒病來講，細(xì)胞免疫是機(jī)體的第一道防線，病毒入侵機(jī)體后，機(jī)體會在 細(xì)胞層面上調(diào)某些細(xì)胞因子的分泌，從而引起機(jī)體免疫系統(tǒng)間的信號傳導(dǎo)，激活免疫系統(tǒng) 抵御微生物的侵入。某些細(xì)胞因子如白介素家族和干擾素家族對病毒的復(fù)制有直接的抑制 作用，所以在病原微生物與機(jī)體免疫系統(tǒng)進(jìn)行接觸的同時，病原微生物會釋放或分泌特定 的因子抑制機(jī)體產(chǎn)生對病原微生物有害的細(xì)胞因子從而導(dǎo)致在疾病期間發(fā)病動物免疫力 低下。
[0003] 該病自從2010年首次在國內(nèi)被發(fā)現(xiàn)后，已經(jīng)造成山東、湖南、廣東等十二省份蛋 鴨大面積減產(chǎn)，雖然各大研宄機(jī)構(gòu)都在對該病毒進(jìn)行詳細(xì)的基礎(chǔ)研宄，有的研宄機(jī)構(gòu)已經(jīng) 研發(fā)試制出該病毒的疫苗，如公開號為CN102397539A的發(fā)明專利申請文件，公開了一種鴨 黃病毒病滅活疫苗及其制備方法，該疫苗含有經(jīng)滅活的鴨黃病毒毒株及佐劑，其制備方法 如下：將鴨黃病毒毒株的生產(chǎn)用種毒進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，收獲病毒液；將收獲的病毒液滅活 后加入佐劑中，乳化后即得鴨黃病毒病滅活疫苗；如公開號為CN102757940A的發(fā)明專利申 請文件，公開了一種鴨黃病毒及以該毒株制備油乳滅活疫苗的制備方法，所述鴨黃病毒為 鴨黃病毒AH-FlO株，保藏編號為：CCTCC V201213,通過臨床分離純化病毒，將純化后的病 毒液經(jīng)過甲醛滅活，與油乳佐劑乳化后制成鴨黃病毒滅活油乳劑疫苗。
[0004] 上述疫苗能夠使蛋鴨和種鴨對牙黃病毒起到很好的預(yù)防感染的作用，但是傳統(tǒng)的 疫苗效力不夠強(qiáng)、使得鴨子提高機(jī)體免疫力的周期較長，并且在疾病產(chǎn)生時，注射疫苗已經(jīng) 不能起到作用，反而會加重鴨子機(jī)體的負(fù)擔(dān)，而提前注射疫苗，工續(xù)繁雜、耗時耗力，會增加 鴨子養(yǎng)殖的成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供能夠抑制鴨黃病毒的復(fù)制、快速提升鴨子機(jī)體免疫能力的 一種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑，同時本發(fā)明還提供該免疫調(diào)節(jié)劑的制備方法和 應(yīng)用。
[0006] 為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：
[0007] -種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑，所述免疫調(diào)節(jié)劑為溶液，所述溶液包 括溶質(zhì)和溶劑，其中，所述溶液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為〇. 7-1 %的氯化鈉水溶液；所述溶質(zhì)為Toll 樣受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑的混合物；
[0008] 所述Toll樣受體激動劑為TLRl激動劑、TLR2激動劑、TLR3激動劑、TLR4激動劑、 TLR5激動劑、TLR6激動劑、TLR7激動劑、TLR8激動劑、TLR9激動劑、TLRlO激動劑、TLRll 激動劑、TLR12激動劑和TLR13激動劑中的一種或者兩種以上的組合，所述Toll樣受體激 動劑的濃度為〇. 001-20 μ g/ml ;
[0009] 所述NOD樣受體激動劑為NODl受體激動劑、N0D2受體激動劑、NLRP3受體激動劑、 NLRC4受體激動劑、NALPl受體激動劑和NLRP6受體激動劑中的一種或者兩種以上的組合， 所述NOD樣受體激動劑的濃度為0. 001-15 μ g/ml ;
[0010] 所述緩釋劑為卡波姆、PVPK、環(huán)糊精和海藻酸鈉中的一種或者兩種以上的組合，所 述緩釋劑的體積百分?jǐn)?shù)為〇. 01-1. 5%。
[0011] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述Toll樣受體激動劑的濃度為0. 05-0. 5 μ g/ml，所述 NOD樣受體激動劑的濃度為0. 01-0. 1 μ g/ml，所述緩釋劑為PVPK和海藻酸鈉的組合，所述 PVPK的體積百分?jǐn)?shù)為0. 05-0. 5%，所述海藻酸鈉的體積百分?jǐn)?shù)為0. 01-1%。
[0012] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述NOD樣受體激動劑為NODl受體激動劑和N0D2受體 激動劑的組合；所述Toll樣受體激動劑為：
[0013] TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR3激動劑和TLR7激動劑的組合；
[0014] 或，TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR8激動劑和TLR9激動劑的組合；
[0015] 或，TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR-3激動劑和TLR9激動劑的組合。
[0016] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述Toll樣受體激動劑的濃度為0. 001-0. 01 μ g/ml，所 述NOD樣受體激動劑的濃度為0. 001-0. 01 μ g/ml，所述緩釋劑為PVPK和卡波姆的組合，所 述PVPK的體積百分?jǐn)?shù)為0. 05-0. 5%，所述海藻酸鈉的體積百分?jǐn)?shù)為0. 01-0. 1 %。
[0017] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述NOD樣受體激動劑為NODl受體激動劑和N0D2受體 激動劑的組合；所述Toll樣受體激動劑為：
[0018] TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR3激動劑和TLR7激動劑的組合；
[0019] 或，TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR8激動劑和TLR9激動劑的組合；
[0020] 或，TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR-3激動劑和TLR9激動劑的組合。
[0021] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉水溶液為無菌氯化鈉 水溶液。
[0022] 本發(fā)明中還提供該用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑的制備方法：按照配方量 秤取好Toll樣受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑，然后將Toll樣受體激動劑、NOD樣 受體激動劑和緩蝕劑加入配方量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0. 9%的氯化鈉水溶液中，攪拌至溶解，無 菌過濾，收集濾液，即得產(chǎn)品。
[0023] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述攪拌的轉(zhuǎn)速為100_500r/min，所述無菌過濾采用的 濾膜為 〇· 1-0. 45 μ m。
[0024] 本發(fā)明的用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑制備作為滴鼻溶液的應(yīng)用。
[0025] 本發(fā)明中，還提供一種利用本發(fā)明的鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑作為注射液 的應(yīng)用。
[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：采用本發(fā)明的用于鴨黃病毒免疫療法的免 疫調(diào)節(jié)劑，能夠在發(fā)病期間使用可快速提高機(jī)體免疫力及某些特定的細(xì)胞因子，抑制病毒 的復(fù)制，從而提高蛋鴨自體免疫力，抵抗病毒的侵害；此外，該免疫調(diào)節(jié)劑的制備方法簡單、 易操作；該免疫調(diào)節(jié)劑可以作為滴鼻液和注射液等，應(yīng)用廣泛。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 本發(fā)明的所有實(shí)施例中，該用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑根據(jù)如下方法制 備：按照配方量秤取好Toll樣受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑，然后將Toll樣 受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑加入配方量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0. 9%的氯化鈉水溶 液中，攪拌至溶解，無菌過濾，所述攪拌的轉(zhuǎn)速為200r/min，所述無菌過濾采用的濾膜為 0· 25 μ m，收集濾液，即得產(chǎn)品。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 一種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑，所述免疫調(diào)節(jié)劑為溶液，所述溶液包 括溶質(zhì)和溶劑，其中，所述溶液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.9%的無菌氯化鈉水溶液；所述溶質(zhì)為 Toll樣受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑的混合物；所述Toll樣受體激動劑為： TLR2激動劑、TLR4激動劑、TLR3激動劑和TLR7激動劑的組合，所述Toll樣受體激動劑的濃 度為0. 05 μ g/ml (其中，TLR2激動劑的濃度為0. 01 μ g/ml、TLR4激動劑的濃度為0. 01 μ g/ ml、TLR3激動劑的濃度為0. 02 μ g/ml、TLR7激動劑的濃度為0. 01 μ g/ml);所述NOD樣受 體激動劑為為NODl受體激動劑和N0D2受體激動劑的組合，所述NOD樣受體激動劑的濃度 為0. 01 μ g/ml (其中，NODl受體激動劑的濃度為0. 006 μ g/ml、N0D2受體激動劑的濃度為 0. 004 μ g/ml);所述緩釋劑為PVPK和卡波姆的組合，所述PVPK的體積百分?jǐn)?shù)為0. 05%，所 述海藻酸鈉的體積百分?jǐn)?shù)為〇. 01 %。
[0030] 實(shí)施例2
[0031] 一種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑，所述免疫調(diào)節(jié)劑為溶液，所述溶液包 括溶質(zhì)和溶劑，其中，所述溶液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.9%的無菌氯化鈉水溶液；所述溶質(zhì)為 Toll樣受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑的混合物；所述Toll樣受體激動劑為TLR2 激動劑、TLR4激動劑、TLR8激動劑和TLR9激動劑的組合，所述Toll樣受體激動劑的濃度 為0. 5 μ g/ml (其中，TLR2激動劑的濃度為0. 2 μ g/ml、TLR4激動劑的濃度為0. 1 μ g/ml、 TLR8激動劑的濃度為0. 1 μ g/ml、TLR9激動劑的濃度為0. 1 μ g/ml);所述NOD樣受體激動 劑為NODl受體激動劑和N0D2受體激動劑的組合，所述NOD樣受體激動劑的濃度為0. 1 μ g/ ml (其中，NODl受體激動劑的濃度為0. 05 μ g/ml、N0D2受體激動劑的濃度為0. 05 μ g/ml); 所述緩釋劑為PVPK和卡波姆的組合，所述PVPK的體積百分?jǐn)?shù)為0. 5%，所述海藻酸鈉的體 積百分?jǐn)?shù)為0.1%。
[0032] 實(shí)施例3
[0033] 一種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑，所述免疫調(diào)節(jié)劑為溶液，所述溶液包 括溶質(zhì)和溶劑，其中，所述溶液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為〇. 9%的氯化鈉水溶液；所述溶質(zhì)為Toll 樣受體激動劑、NOD樣受體激動劑和緩蝕劑的混合物；所述Toll樣受體激動劑為TLR2激 動劑、TLR4激動劑、TLR3激動劑和TLR9激動劑的組合，所述Toll樣受體激動劑的濃度 為0. 2 μ g/ml (其中，TLR2激動劑的濃度為0. 01 μ g/ml、TLR4激動劑的濃度為0. 07 μ g/ ml、TLR3激動劑的濃度為0. 06 μ g/ml、TLR9激動劑的濃度為0. 06 μ g/ml);所述NOD樣受 體激動劑為NODl受體激動劑和N0D2受體激動劑的組合，所述NOD樣受體激動劑的濃度 為0. 05 μ g/ml (其中，NODl受體激動劑的濃度為0. 04 μ g/ml、N0D2受體激動劑的濃度為 0. 01 μ g/ml);所述緩釋劑為PVPK和卡波姆的組合，所述PVPK的體積百分?jǐn)?shù)為0. 3 %，所述 海藻酸鈉的體積百分?jǐn)?shù)為〇. 06%。
[0034] 實(shí)施例4
[0035] 一種用于鴨黃病毒免疫療法的免疫調(diào)節(jié)劑，所述免疫調(diào)節(jié)劑為溶液，所述溶液包 括溶質(zhì)和溶劑，其中，所述溶液為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為〇. 9%的氯化鈉水溶液；所述溶質(zhì)為Toll 樣受體激動劑、NOD樣受體激動