一種從辣木葉中萃取并分離辣木黃酮和辣木皂苷的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于辣木天然產(chǎn)物分離提純領(lǐng)域，涉及辣木中生物活性物質(zhì)黃酮、皂苷(甙)的提取及分離提純方法，涉及到亞臨界萃取技術(shù)和重結(jié)晶提純等技術(shù)，是一種新穎的辣木葉萃取并分離辣木黃酮與皂苷生物活性物質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]辣木(Moringa oleifera Lam),屬白花菜目辣木科,又稱鼓槌樹、神奇樹等,原產(chǎn)于北印度亞喜馬拉雅區(qū)域及非洲，廣泛分布在印度、巴基斯坦等國。辣木營養(yǎng)豐富，辣木樹所含的鈣質(zhì)是牛奶的四倍，鉀是香蕉的三倍，鐵是菠菜的三倍，維他命C是柑桔的七倍，維他命A是胡蘿卜的四倍。辣木葉片、果莢含有的多種礦物質(zhì)、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，使其作為食品食用有食療保健的功能，也可用于醫(yī)藥、保健、工業(yè)等方面，被譽為“神奇之樹”、“生命之樹”。辣木葉是近年來在歐美新興的一種保健植物(食品)，號稱高鈣、高蛋白質(zhì)、高纖維、低脂質(zhì)，并且具有增強體力、治療貧血、抑制病菌、驅(qū)除寄生蟲等功效。
[0003]辣木葉中富含辣木黃酮、辣木皂苷(甙)等生物活性物質(zhì)，這些生物活性物質(zhì)是體現(xiàn)辣木獨特保健和藥用價值的關(guān)鍵成份。黃酮類化合物泛指兩個具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子相互連結(jié)而成的一系列化合物，其基本母核為2-苯基色原酮。它是一種很強的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生。皂苷(甙)是苷元為三萜或螺旋留烷類化合物的一類糖苷，許多中草藥如人參、遠志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。皂苷還具有抗菌的活性或解熱、鎮(zhèn)靜、抗癌等有價值的生物活性。
[0004]從辣木中提取、分離生物活性物質(zhì)的方法，目前廣泛使用的是傳統(tǒng)溶劑提取法。此種方法將辣木葉片干燥粉碎，然后使用有機溶劑室溫或加熱回流提取，減壓濃縮，得到生物活性物質(zhì)富集的濃縮萃取液。傳統(tǒng)方法提取天然產(chǎn)物中的生物活性成分是一件耗時耗能又耗費溶劑的工作，同時還存在被提取成分損失大、操作周期長、能耗高、操作不便、提取率不高等缺點，已不能適應(yīng)現(xiàn)代化生產(chǎn)的需要，特別是在現(xiàn)代化中草藥有效成分的提取過程中這些缺點日漸顯現(xiàn)，造成了人力、物力資源的極大浪費。
[0005]亞臨界流體是指某些化合物在溫度高于其沸點但低于臨界溫度，且壓力低于其臨界壓力的條件下，以流體形式存在的該物質(zhì)。亞臨界流體具有近似超臨界流體的浸潤性和擴散性，卻沒有那么嚴苛的溫度和壓力要求。選擇合適的物質(zhì)，可以在較低溫度和壓力下操作。這些性質(zhì)均有利于從天然產(chǎn)物中提取生物活性物質(zhì)。
[0006]亞臨界流體萃取技術(shù)，是利用亞臨界流體作為萃取劑，在密閉、無氧、低壓的壓力容器內(nèi)，根據(jù)有機物相似相溶的原理，通過物料與萃取劑在浸泡過程中的擴散作用，達到固體物料中的目標成分擴散轉(zhuǎn)移到萃取劑中，再通過減壓蒸發(fā)的過程將萃取劑與目的產(chǎn)物分離，最終得到目的產(chǎn)物的一種新型萃取與分離技術(shù)。1939年,美國的Henry Rosenthal首創(chuàng)將壓縮后液化的低級氣態(tài)烷烴用于油料浸出，成為亞臨界萃取方法的雛形。
[0007]使用亞臨界流體萃取技術(shù)相比傳統(tǒng)溶劑加熱回流提取的方法具有以下優(yōu)點:提取速度快，提取效率高，對比孫鳴燕和王羽梅等研究所使用的傳統(tǒng)乙醇回流提取法(提取3次，每次提取的時間1.5小時)，亞臨界流體萃取技術(shù)可以縮短提取時間3倍以上；溶劑消耗量少，97%以上的溶劑可以回收循環(huán)使用；浸出液濃度高，大大減少了后期處理的成本；提取溫度不高，適用于是熱敏性物料提??；生產(chǎn)連續(xù)性好，應(yīng)能適于現(xiàn)代化大規(guī)模連續(xù)性生產(chǎn)；節(jié)約能源，安全可靠；結(jié)構(gòu)簡單，操作方便。此外，我們還將亞臨界萃取后的黃酮與皂苷混合物進行柱層析、重結(jié)晶分離，分別得到純度較高的辣木黃酮與辣木皂苷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種高效提取辣木中黃酮類和皂苷(甙)類生物活性物質(zhì)方法。該方法操作簡單，可以縮短提取時間、減少溶劑用量、降低能耗；并對萃取物進行了辣木黃酮與辣木皂甙的分離，提高目標組份的純度。
[0009]本發(fā)明的所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
[0010]將新鮮采摘的辣木葉片干燥，粉碎至200?700目，裝入濾筐中，投入亞臨界萃取爸中，密閉萃取爸，調(diào)節(jié)萃取爸內(nèi)真空度至0.06?0.1Mpa0然后加入有機萃取劑，調(diào)節(jié)固液比1: 5?1: 20(g: ml)，升溫至80?200°C，儀表指示壓力范圍在108kPa?4048kPa，每次所得萃取液投入溶劑回收釜，減壓回收溶劑，提取2?3次，每次的提取時間為0.2h?lh，得到黑綠色浸膏。后本分別依次加入5倍量的乙酸乙酯、正丁醇、乙醚或丙酮萃取2?3次，離心，取上清液，合并乙酸乙酯、正丁醇清液，減壓濃縮，干燥后得到棕黃色浸膏，取該浸膏適量上硅膠柱，用洗脫液按極性由小到大梯度洗脫，檢測，取黃酮含量較高部分洗脫液，濃縮至干粉，用甲醇或乙醇重結(jié)晶2?4次即得純度為98%以上的黃酮類產(chǎn)品。取乙醚或丙酮溶出的上清液，減壓濃縮得到黃綠色浸膏，取適量該浸膏上硅膠柱，用洗脫液按極性由小到大梯度洗脫，檢測，取皂苷(甙)含量較高部分洗脫液，用水溶析結(jié)晶，再用乙醇、甲醇重結(jié)晶2?4次即得純度98%以上皂苷類產(chǎn)品。
[0011]所述的有機萃取劑是體積分數(shù)70%?100%的甲醇或乙醇、乙醚、石油醚等。
[0012]所述的亞臨界萃取設(shè)備為亞臨界萃取成套設(shè)備。
[0013]所述的干燥方法為真空干燥或冷凍干燥。
[0014]所述的硅膠是200?300目，稱量40g硅膠，溶于兩倍體積的洗脫液中，并超聲除氣泡。
[0015]所述的梯度洗脫速率為0.2?3mL / min。
[0016]所述洗脫液為一定體積配比的甲醇一二氯甲烷、乙醇一二氯甲烷、乙醇一水體系
[0017]本發(fā)明的亞臨界流體萃取技術(shù)提取辣木中的黃酮類和皂苷(甙)類物質(zhì)具有以下優(yōu)點:
[0018]1、本發(fā)明相比較的傳統(tǒng)的從辣木中提取生物活性物質(zhì)的方法，涉及了辣木中生物活性物質(zhì)的精細分離，更有利于充分發(fā)揮辣木中生物活性物質(zhì)的作用。
[0019]2、亞臨界流體萃取技術(shù)具有操作周期短、節(jié)能省時、操作簡便等優(yōu)點，亞臨界流體萃取技術(shù)可縮短提取時間3倍以上。
[0020]3、相比較傳統(tǒng)的水溶液提取、乙醇加熱回流萃取，亞臨界流體萃取技術(shù)提取的黃酮類和皂苷類物質(zhì)雜質(zhì)含量少、提取率高。對比陳瑞嬌等研究，亞臨界流體萃取技術(shù)單次黃酮提取率為2.21 %，單次黃酮提取率提高2倍。
[0021]4、提取時間短、提取效率高有效地避免了辣木中黃酮類和皂苷類物質(zhì)的受熱分解，充分保留了生物活性物質(zhì)的生理活性。
[0022]5、采用硅膠柱層析與重結(jié)晶工藝，將萃取獲得的辣木黃酮與皂苷混合物進行了提純分離。
【附圖說明】
[0023]圖1:亞臨界流體萃取技術(shù)提取辣木中的黃酮類和皂苷(甙)類物質(zhì)操作流程圖；具體實施例
[0024]以下為本發(fā)明的【具體實施方式】，所述實施例是為進一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明