多酶酶解制作人參提取成份的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及酶工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多酶酶解制作人參提取成份的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人參(Panax ginseng C.A.Mey)是五加科(Aral iaceae)植物人參的干燥根，俗稱人銜、鬼蓋、地精、孩兒參等，是我國名貴的藥材，已有數(shù)千年的藥用歷史。人參性平、味甘、微苦且微溫，具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津止渴，安神益智之功效。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對人參的有效成分進(jìn)行了藥理研宄、臨床觀察和流行病學(xué)檢查，結(jié)果表明人參具有改善微循環(huán)、提高組織抗缺氧能力、抑制血小板聚集、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射、抗疲勞等多種生物活性。
[0003]人參的化學(xué)成分主要有三萜類人參皂苷、有機(jī)酸及酯類、維生素類、多糖類等，其中人參皂苷是其最主要活性成分。按照人參皂苷的結(jié)構(gòu)類型(羥基的數(shù)量不同)、糖基的數(shù)量和位置，可將目前已分離鑒定出的60余種單體皂苷化合物分為3組:
[0004](a) οIeanoI ic酸型，S卩齊墩果酸(Oleanol ic acid)類，如人參阜苷Ro，主要有抗炎、抗血小板釋放等作用；
[0005](b) 20 (S)-原人參萜二醇(PD)型，如人參皂苷 Ra、Rbl、Rb3、Rc、Rd、Rg3、Rh2、Rs。其中人參皂苷Rbl、Rb2表現(xiàn)出具有中樞神經(jīng)抑制、降低細(xì)胞內(nèi)鈣、抗氧化、清除自由基和改善心肌缺血再灌注損傷等作用，原人參二醇組皂苷無溶血活性；
[0006](c)20(S)_原人參萜三醇(PT)型，如人參皂苷Re、Rf、Rgl、Rg2、Rhl。其中人參皂苷Rgl表現(xiàn)出具有中樞神經(jīng)興奮、促智、促進(jìn)蛋白質(zhì)及DNA和RNA的合成等作用；人參皂苷Re是抗心律失常有效成分，具有可抑制嗎啡誘發(fā)小鼠產(chǎn)生的耐藥性等作用；人參皂苷Rg2具有可抑制兔血小板釋放反應(yīng)等作用。
[0007]現(xiàn)有的人參有效成分提取方法，普遍存在提取率低、生物活性低、殘渣不能循環(huán)再利用的缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種多酶酶解制作人參提取成份的方法.工藝簡便易操作，提取率高。
[0009]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0010]多酶酶解制作人參提取成份的方法，包括如下步驟:
[0011]S1、取干爭人參切成5毫米厚度的片狀后，進(jìn)行超微粉碎，過100?400目藥篩；
[0012]S2、按1: 8?1: 12的比例加入蒸餾水后，用檸檬酸和乳酸調(diào)節(jié)PH值至3.6?4.8 ；
[0013]S3、將步驟SI所得的人參漿置于30?45°C的溫度下，低溫處理10?15分鐘；
[0014]S4、將步驟S3所得的人參漿置于試管中，加塞后放人超聲波水浴中，恒溫超聲30min ；
[0015]S5、將步驟S4所得的人參漿倒入酶解罐中，加入活性為55?85U/mL木質(zhì)素降解酶，50?60°C酶解0.7?1.8h ;
[0016]S6、按300.0?350.0克/噸的比例加入復(fù)合酶解液，35°C，酶解72小時，每4小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5?6.2之間；
[0017]S7、酶解結(jié)束后，過濾，殘渣加入65?80%乙醇浸提2?3次，濾過，合并濾液，進(jìn)行噴霧干燥，干燥溫度不超過65°C，水分控制在7%以下，得粉體；
[0018]優(yōu)選的，所述復(fù)合酶解液由超濾酶、蛋白酶、果膠酶、葡萄糖異構(gòu)酶、纖維素酶按3:1:1:2: 3的比例混合所得。
[0019]優(yōu)選的，所述木質(zhì)素降解酶為過氧化物酶和真菌漆酶的混合物。
[0020]優(yōu)選的，所述過氧化物酶和真菌漆酶的比例為1:1。
[0021]優(yōu)選的，所述人參漿與木質(zhì)素降解酶重量體積比(kg/L)為1: 13?27。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟S7中乙醇浸提溫度為80?90°C，時間為0.5?1.5小時。
[0023]優(yōu)選的，所述步驟S4中的溫度為35?50°C。
[0024]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0025]采用微粉碎技術(shù)將人參材粉碎，藥物粒徑越小，其表面積越大，有助于藥物有效成分的溶出。同時由于藥材細(xì)胞的破壁，細(xì)胞內(nèi)各類有效成分均呈釋放狀態(tài)，縮短提取時間。采用木質(zhì)素降解酶可以降解人參中的木質(zhì)素，促進(jìn)植物中活性成分的釋放，進(jìn)一步提高提取效率，采用生物酶技術(shù)與傳統(tǒng)的中藥提取技術(shù)相結(jié)合，采用多種酶協(xié)同作用，使有效成分更加充分的提取出，提取出的皂苷成分更充分全面，提取率高。
【具體實(shí)施方式】
[0026]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0027]實(shí)施例
[0028]以下實(shí)施例中，復(fù)合酶解液由超濾酶、蛋白酶、果膠酶、葡萄糖異構(gòu)酶、纖維素酶按3:1:1:2: 3的比例混合所得；所述木質(zhì)素降解酶由過氧化物酶和真菌按1:1的比例混合所得。
[0029]實(shí)施例1
[0030]S1、取干凈人參切成5毫米厚度的片狀后，進(jìn)行超微粉碎，過100目藥篩；
[0031]S2、按1: 8的比例加入蒸餾水后，用檸檬酸和乳酸調(diào)節(jié)PH值至3.6 ；
[0032]S3、將步驟SI所得的人參漿置于30°C的溫度下，低溫處理10分鐘；
[0033]S4、將步驟S3所得的人參漿置于試管中，加塞后放人超聲波水浴中，恒溫超聲30min ；
[0034]S5、將步驟S4所得的人參漿倒入酶解罐中，加入活性為55U/mL木質(zhì)素降解酶，50°C 酶解 0.7h ；
[0035]S6、按300.0克/噸的比例加入復(fù)合酶解液，35°C，酶解72小時，每4小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5之間；
[0036]S7、酶解結(jié)束后，過濾，殘渣加入65%乙醇浸提2次，濾過，合并濾液，進(jìn)行噴霧干燥，干燥溫度不超過65°C，水分控制在7%以下，得粉體。
[0037]實(shí)施例2
[0038]S1、取干凈人參切成5毫米厚度的片狀后，進(jìn)行超微粉碎，過400目藥篩；
[0039]S2、按1: 12的比例加入蒸餾水后，用檸檬酸和乳酸調(diào)節(jié)PH值至4.8;
[0040]S3、將步驟SI所得的人參漿置于45°C的溫度下，低溫處理15分鐘；
[0041]S4、將步驟S3所得的人參漿置于試管中，加塞后放人超聲波水浴中，恒溫超聲30min ；
[0042]S5、將步驟S4所得的人參漿倒入酶解罐中，加入活性為55?85U/mL木質(zhì)素降解酶，60°C酶解 1.8h ；
[0043]S6、350.0克/噸的比例加入復(fù)合酶解液，35°C，酶解72小時，每4小時攪拌、充氧一次，控制PH值在6.2之間；
[0044]S7、酶解結(jié)束后，過濾，殘渣加入80%乙醇浸提3次，濾過，合并濾液，進(jìn)行噴霧干燥，干燥溫度不超過65°C，水分控制在7%以下，得粉體。
[0045]實(shí)施例3
[0046]S1、取干凈人參切成5毫米厚度的片狀后，進(jìn)行超微粉碎，過250目藥篩；
[0047]S2、按1: 10的比例加入蒸餾水后，用檸檬酸和乳酸調(diào)節(jié)PH值至4.2 ；
[0048]S3、將步驟SI所得的人參漿置于40°C的溫度下，低溫處理12.5分鐘；
[0049]S4、將步驟S3所得的人參漿置于試管中，加塞后放人超聲波水浴中，恒溫超聲30min ；
[0050]S5、將步驟S4所得的人參漿倒入酶解罐中，加入活性為55?85U/mL木質(zhì)素降解酶，55°C酶解 1.25h ；
[0051]S6、375克/噸的比例加入復(fù)合酶解液，35°C，酶解72小時，每4小時攪拌、充氧一次，控制PH值在4.85之間；
[0052]S7、酶解結(jié)束后，過濾，殘渣加入72.5%乙醇浸提2.5次，濾過，合并濾液，進(jìn)行噴霧干燥，干燥溫度不超過65°C，水分控制在7%以下，得粉體。
[0053]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、取干凈人參切成5毫米厚度的片狀后，進(jìn)行超微粉碎，過100?400目藥篩； 52、按1: 8?1: 12的比例加入蒸餾水后，用檸檬酸和乳酸調(diào)節(jié)PH值至3.6?4.8 ; 53、將步驟SI所得的人參漿置于30?45°C的溫度下，低溫處理10?15分鐘； 54、將步驟S3所得的人參漿置于試管中，加塞后放人超聲波水浴中，恒溫超聲30min; 55、將步驟S4所得的人參漿倒入酶解罐中，加入活性為55?85U/mL木質(zhì)素降解酶，50 ?60°C酶解 0.7 ?1.8h ; 56、按300.0?350.0克/噸的比例加入復(fù)合酶解液，35°C，酶解72小時，每4小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5?6.2之間； 57、酶解結(jié)束后，過濾，殘渣加入65?80%乙醇浸提2?3次，濾過，合并濾液，進(jìn)行噴霧干燥，干燥溫度不超過65°C，水分控制在7%以下，得粉體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于，所述復(fù)合酶解液由超濾酶、蛋白酶、果膠酶、葡萄糖異構(gòu)酶、纖維素酶按3:1:1:2: 3的比例混合所得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于，所述木質(zhì)素降解酶為過氧化物酶和真菌漆酶的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于，所述過氧化物酶和真菌漆酶的比例為1:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于，所述人參漿與木質(zhì)素降解酶重量體積比(kg/L)為1: 13?27。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于，所述步驟S7中乙醇浸提溫度為80?90°C，時間為0.5?1.5小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多酶酶解制作人參提取成份的方法，其特征在于所述步驟S4中的溫度為35?50°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了多酶酶解制作人參提取成份的方法，包括如下步驟：取干凈人參切成5毫米厚度的片狀后，進(jìn)行超微粉碎，加入蒸餾水后，用檸檬酸和乳酸調(diào)節(jié)PH值至3.6～4.8后，置于30～45℃的溫度下，低溫處理10～15分鐘，置于試管中，加塞后放人超聲波水浴中，恒溫超聲30min；倒入酶解罐中，加入活性為55～85U/mL木質(zhì)素降解酶，50～60℃酶解0.7～1.8h；加入復(fù)合酶解液，35℃，酶解72小時，每4小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5～6.2之間；酶解結(jié)束后，過濾，殘渣加入乙醇浸提，濾過，合并濾液，進(jìn)行噴霧干燥，得粉體。本發(fā)明工藝簡便易操作，提取率高。
【IPC分類】A61K36-258
【公開號】CN104721245
【申請?zhí)枴緾N201510148374
【發(fā)明人】曲新砉
【申請人】琿春綠源參業(yè)生物科技有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年3月28日