Yap抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，特別涉及一種YAP抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應 用。
【背景技術】
[0002] 膠質細胞瘤是人類難治性腫瘤之一，也是中樞神經(jīng)系統(tǒng)在腫瘤中的常見腫瘤，有 33. 3~58. 6%的原發(fā)性腦腫瘤起源于膠質細胞，即膠質瘤。其中原發(fā)性惡性腦腫瘤中約有 77%為惡性膠質瘤。目前公認的惡性膠質瘤標準治療方案為手術切除腫瘤，替莫唑胺化療 以及放療，但事實上由于惡性膠質瘤的特殊的病理特點和生長方式，這些臨床治療方法效 果有限，一直不甚理想，惡性膠質瘤患者的中位生存期僅為確診后的12~18個月，5年生存 率不足10%。對于惡性膠質瘤來說，單純手術切除后復發(fā)率高，因此必須經(jīng)過放化療，然而 目前對于膠質細胞瘤屬猴放化療的具體方案意見并不統(tǒng)一，且效果不理想，患者預后不容 樂觀。這主要是因為血腦屏障對阻礙化療藥物充分進入腫瘤組織以及惡性膠質劉對細胞毒 性藥物固有的和誘導產生的耐藥性。因此通過基因治療的方法將外源性基因轉染至患者腫 瘤細胞來干擾腫瘤細胞的增殖或者迀移能力是一種有效的方法。其關鍵是找到腫瘤特異性 的靶點蛋白，作為治療的靶點，通過研制該靶點蛋白的抑制劑來達到干預膠質細胞腫瘤的 目標。
[0003] 由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多基因互相調控的過程，膠質瘤的分子病理學機制研 宄也已從過往的單基因的研宄逐漸轉移到多基因的信號通路調控及其信號網(wǎng)絡調控的研 宄中。YAP(Yes_associatied protein)為Yes相關蛋白，是Hippo通路的轉錄共激活因子， 定位于人類染色體llq22,通過增強轉錄因子的活性促進基因表達。外界信號激活MST1/2， 與調節(jié)蛋白SAVl結合后磷酸化LATS1/2、M0B，繼而直接磷酸化YAP/TAZ，磷酸化后的YAP/ TAZ停滯在細胞質內，轉錄抑制。當此信號通路被阻斷或失活，未磷酸化的YAP/TAZ由細胞 質轉入細胞核，與TEADs、Smad、Runxl/2、p63/p73、ErbB4等轉錄因子結合促進基因轉錄。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中存在的缺點與不足，提供一種YAP抑制劑在制 備抗腫瘤藥物中的應用。
[0005] 本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)：YAP抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用。
[0006] 所述的YAP抑制劑為降低YAP核酸或蛋白表達的化合物；
[0007] 優(yōu)選的，所述的YAP抑制劑為ΥΑΡ-i-l或YAP-i-2所示的核酸序列。
[0008] 所述的ΥΑΡ-i-l為針對YAP核酸序列第1062個堿基開始的YAP-i-1 siRNA序列 或 YAP-i-lshRNA 序列；
[0009] 所述的 YAP-i-1 siRNA 序列如下：CCGGGATGACTCAGGAATT ;
[0010] 所述的YAP-i-1 shRNA序列如下：
[0011] YAP-i-1 shRNA 正鏈：
[0012] 5' -GATCCCCCCGGGATGACTCAGGAATTTTCAAGAGAAATTCCTGAGTCATCCCGGTTTTTA-3' ；
[0013] YAP-i-1 shRNA 反鏈：
[0014] 5' -AGCTTAAAAACCGGGATGACTCAGGAATTTCTCTTGAAAATTCCTGAGTCATCCCGGGGG-3' ；
[0015] 所述的YAP-i-2為針對YAP核酸序列第930個堿基開始的YAP-i-2 siRNA序列或 YAP-i-2 shRNA 序列；
[0016] 所述的 YAP-i-2 siRNA 序列如下：GGCAATACGGAATATCAAT ;
[0017] 所述的YAP-i-2 shRNA序列如下：
[0018] YAP-i-2 shRNA 正鏈：
[0019] 5' -GATCCCCGGCAATACGGAATATCAATTTCAAGAGAATTGATATTCCGTATTGCC TTTTTA-3' ；
[0020] YAP-i-2shRNA 反鏈：
[0021] 5' -AGCTTAAAAACCGGGATGACTCAGGAATTTCTCTTGAAAATTCCTGAGTCATCCCGGGGG-3' ；
[0022] 所述的腫瘤為膠質細胞腫瘤。
[0023] 由于核苷酸序列的特殊性，任何含有ΥΑΡ-i-l和YAP-i-2所示的核酸序列或其變 體，只要其片段與前述核酸序列同源性在90%以上，或針對YAP起始位點第930或第1062 個堿基的siRNA序列，且具有相同功能，均屬于本發(fā)明保護范圍之列。此多核苷酸的變體包 括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如等位變異體是一個多核苷酸的替換形式，它可 能是一個多個核苷酸的取代、缺失或插入，但不會從實質上改變其編碼的氨基酸的功能。
[0024] 本發(fā)明的發(fā)明原理：受YAP在膠質細胞瘤發(fā)生和發(fā)展中起關鍵作用的啟示，發(fā)明 人研宄了其對這些過程的影響。根據(jù)臨床膠質瘤標本的檢測結果顯示YAP特異性地表達在 膠質細胞瘤中，而在癌旁組織中表達量很低，且其表達量隨腫瘤的病理分級息息相關，IV型 的表達量高于III型，高于II型和I型。且YAP對于膠質瘤細胞的增殖和迀移起必要作用。 通過siRNA或shRNA干擾YAP的表達能夠顯著抑制膠質瘤細胞系U251的增殖能力和迀移 能力。在腫瘤細胞U251中以特異性siRNA或shRNA以基因干擾的方式敲低YAP的表達，對 U251細胞的增殖和迀移能力有顯著的抑制作用。這些結果顯示YAP的表達對腫瘤生成和生 長有關鍵的調節(jié)作用，也提供了新型的抑癌靶點和藥物形式。YAP表達在臨床膠質細胞瘤標 本中的顯著升高也提供了以檢測YAP的表達水平進行臨床腫瘤診斷和預后判斷的可行性。
[0025] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術具有如下的優(yōu)點及效果：
[0026] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)YAP蛋白表達水平在病人膠質瘤中明顯升高，發(fā)現(xiàn)YAP蛋白的表達可 以反映膠質瘤的惡性程度，并研制降低YAP表達的物質對干擾膠質瘤細胞的增殖和迀移， 從而起到抑癌的作用，有助于進行干預腫瘤發(fā)生和轉移的治療，并提供了 YAP抑制劑在制 備抗腫瘤藥物中的應用，為新的腫瘤藥物研發(fā)提供了基礎。
【附圖說明】
[0027] 圖1是YAP蛋白在人膠質細胞瘤組織的免疫組化結果；
[0028] 圖2是YAP蛋白在人膠質細胞瘤組織表達量顯著高于癌旁組織（正常組織）統(tǒng)計 圖；
[0029] 圖3是ΥΑΡ-i-l和YAP-i-2對YAP蛋白的表達的影響結果；其中：A為ΥΑΡ-i-l和 YAP-i-2對YAP蛋白的印跡結果圖，B為ΥΑΡ-i-l和YAP-i-2降低YAP蛋白表達的統(tǒng)計圖；
[0030] 圖4是YAP抑制劑抑制人膠質瘤細胞U251的細胞增殖的結果圖；
[0031] 圖5是YAP抑制劑抑制膠質細胞腫瘤細胞系的迀移的結果圖；其中，Con :對照組； ΥΑΡ-i-l :干擾 YAP 表達的 siRNA-1 ;YAP-i-2 :干擾 YAP 表達的 siRNA-2 ;
[0032] 圖6是YAP抑制劑抑制膠質細胞腫瘤細胞系的迀移統(tǒng)計圖；其中，Con :對照組； ΥΑΡ-i-l :干擾 YAP 表達的 siRNA-1 ;YAP-i-2 :干擾 YAP 表達的 siRNA-2。
【具體實施方式】
[0033] 下面結合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限 于此。
[0034] 實施例1
[0035] 臨床膠質瘤標本的檢測分析證實YAP在癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，且 YAP的表達水平與腫瘤的病理分級密切相關，證實YAP的表達是臨床膠質瘤診斷的新型標 記物。