生物可降解聚乳酸-羥基乙酸共聚物/殼聚糖載藥微球制備方法及產(chǎn)品的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種可降解藥物載體材料，特別是一種表面改性的聚乳酸-羥基乙酸 共聚物復(fù)合載藥微球的制備方法。
[0002] 本發(fā)明還涉及上述方法得到的復(fù)合載藥微球。
【背景技術(shù)】
[0003] 近年來，隨著基因工程重組技術(shù)和蛋白組學(xué)的發(fā)展，多肽和蛋白類藥物在臨床上 的應(yīng)用日益廣泛、深入。由于該類藥物在體內(nèi)外穩(wěn)定性差，半衰期短，易受腸胃道PH環(huán)境和 酶的影響而失活，需要頻繁、大劑量及長時(shí)間給藥，導(dǎo)致毒副作用及耐受性的產(chǎn)生，嚴(yán)重影 響了其臨床使用效果。因此，對多肽、蛋白質(zhì)類生物活性藥物的保護(hù)的研宄具有重要意義。
[0004] 聚乳酸-羥基乙酸共聚物（簡稱PLGA)是生物可降解的功能高分子有機(jī)化合物， 不但具有無毒，可降解，生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)，并且已經(jīng)被美國食品和藥物管理局（FDA)批 準(zhǔn)用于人體，在制藥領(lǐng)域有著巨大的應(yīng)用前景。由于其降解速率隨著兩種化合物組成比例 的不同而變化，因此可以根據(jù)藥物的性質(zhì)和用途選擇不同比例組合成的聚乳酸-羥基乙 酸，制備成具有特定功效的微球制劑。但是，PLGA作為藥物載體材料也存在著不足：（1)在 藥物釋放過程存在明顯的突釋效應(yīng)，增加了藥物的副作用，也可能造成藥物浪費(fèi)而使微球 無法長期釋放；（2) PLGA微球與機(jī)體細(xì)胞缺少特異性的結(jié)合，細(xì)胞攝取能力不強(qiáng)，藥物吸收 效果不佳。
[0005] 殼聚糖（CS)是一種堿性多糖，其結(jié)構(gòu)中含有羥基、氨基、正電荷密度高，有利于細(xì) 胞的粘附，且價(jià)廉易得，無毒無味，在體內(nèi)降解為氨基葡萄糖能被吸收；同時(shí)殼聚糖具有活 化巨噬細(xì)胞、誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)因子的表達(dá)等功能，具有優(yōu)良的生物相容性和吸附性。
[0006] 近年來，基于殼聚糖改性修飾的PLGA載藥微囊已經(jīng)被用到各種藥物的包載及緩 釋上，改性修飾的方法主要有物理法和化學(xué)法兩種，所謂化學(xué)法主要是用殼聚糖與PLGA共 價(jià)交聯(lián)制備共聚物，然后自組裝得到載藥微囊，如中國專利CN103006567A公開了一種載親 水性藥物的殼聚糖-PLGA復(fù)合納米微粒的制備方法。物理法較化學(xué)法過程簡單易行，主要 是基于兩種帶相反電荷聚合物之間的靜電引力復(fù)合而成，大多采用乳化溶劑揮發(fā)技術(shù)制備 的，中國專利CN104001178A公開了一種由單乳法制備的PLGA納米微球內(nèi)核和香草醛交聯(lián) 殼聚糖外殼構(gòu)成的PLGA納米藥物載體，并將其應(yīng)用于包載疏水性腫瘤藥物。其主要缺陷在 于該復(fù)合載體的藥物包載率較低，造成原料浪費(fèi)且無法達(dá)到長期緩釋的目的。本發(fā)明采用 改良物理法制備包載親水性蛋白類藥物的PLGA-CS復(fù)合微球，本發(fā)明首先對PLGA進(jìn)行表面 水解改性，從而增加其羧基含量，提高其電荷量，為了進(jìn)一步提高載藥率、延長緩釋時(shí)間，采 用層層自組裝技術(shù)制備多層復(fù)合PLGA-CS載藥復(fù)合微球。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足而完成的，本發(fā)明的目的是提供一種生 物可降解聚乳酸-羥基乙酸PLGA/殼聚糖載藥微球的制備方法。
[0008] 技術(shù)方案如下：
[0009] 所述方法包括以下步驟：
[0010] (I)PLGA 的水解
[0011] 將PLGA膜浸泡于30-50 °C濃度為約2mol/L NaOH溶液中，2. 0-6. Oh后取出，用 lmol/L HCl溶液清洗，以除去表面殘留的NaOH，然后在超聲波條件下用乙醇和去離子水洗 滌2次，置于30°C真空干燥24h，得到水解的PLGA ;
[0012] (2) PLGA-CS載藥微球的制備
[0013] 稱取定量的殼聚糖溶于乙酸溶液中，配成濃度為1%的殼聚糖溶液待用；
[0014] 取大約0. 5g水解后的PLGA溶于20mL二氯甲烷中，再加入IOmL濃度5-10wt%的 BSA (牛血清蛋白）水溶液，加入0. 2mL吐溫80超聲乳化lmin，得到的油包水（W/0)乳液倒 入IOOmL濃度為1 %的PVA (聚乙烯醇）水溶液中，超聲乳化2min，所得的W/0/W乳液在室 溫下磁力攪拌，同時(shí)滴加5g濃度為1 %的殼聚糖溶液，0. 5h后滴加Ig三聚磷酸鈉（TPP)，之 后繼續(xù)攪拌3h，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，微球固化成型，得到帶正電荷的PLGA兩層復(fù)合載藥 微球；將其置于20mL溶有0. 5gPLGA的二氯甲烷溶液中，25°C下超聲振蕩30min后離心分離 清洗，得到帶負(fù)電荷的三層復(fù)合載藥微球；將其加入5g濃度為1 %的殼聚糖溶液中，磁力攪 拌0. 5h后滴加lgTPP，0. 5h后離心分離，用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥24h后即得PLGA復(fù) 合載藥微球粉末產(chǎn)品。
[0015] 本發(fā)明還進(jìn)一步要求保護(hù)上述方法制備得到的生物可降解聚乳酸-羥基乙酸 PLGA/殼聚糖載藥微球。
【附圖說明】
[0016] 圖1是本發(fā)明載藥微球的體外釋放曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例和對比例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，下述實(shí)施例僅用來對說明書的 詳細(xì)解釋，并不作為對于本發(fā)明的限制。
[0018] 本發(fā)明使用的PLGA膜采用下述方法制備：
[0019] 稱取2. OgPLGA溶于20mL二氯甲烷中，攪拌完全溶解后倒入模具中，室溫?fù)]發(fā)24h 后，將其在35°C下真空干燥24h，薄膜取出待用。
[0020] 本發(fā)明其它試劑都是通過商購獲得。
【具體實(shí)施方式】
[0021]
[0022] 實(shí)施例1
[0023] 將2. OgPLGA膜浸泡于50mL30 °C濃度為2mol/L NaOH溶液中，2. Oh后取出，用 lmol/L HCl溶液清洗，以除去表面殘留的NaOH，然后在超聲波條件下用乙醇和去離子水洗 滌2次，置于30°C真空干燥24h，得到水解的PLGA，其表面羧基含量及表面電荷見表1。
[0024] 取0. 5g水解后的PLGA溶于20mL二氯甲烷中，再加入IOmLBSA水溶液（濃度5 % )， 加入0. 2mL吐溫80后超聲乳化lmin，得到的油包水（W/0)乳液倒入IOOmL濃度為I %的PVA 水溶液中，超聲乳化2min。所得的W/0/W乳液在室溫下磁力攪拌，同時(shí)滴加5g濃度為1 % 的殼聚糖溶液，〇. 5h后滴加lgTPP，之后繼續(xù)攪拌3h，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，微球固化成型， 得到帶正電荷的PLGA兩層復(fù)合載藥微球；將其置于20mL溶有0. 5gPLGA (水解后）的二氯 甲烷溶液中，25°C下超聲振蕩30min后離心分離清洗，得到帶負(fù)電荷的三層復(fù)合載藥微球； 將其加入5g濃度為1%的殼聚糖溶液中，磁力攪拌0. 5h后滴加lgTPP，0. 5h后離心分離， 用蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥24h后即得PLGA復(fù)合載藥微球粉末產(chǎn)品。所得產(chǎn)品的平均粒 徑、電荷大小、載藥率及包封率見表1。
[0025] 實(shí)施例2
[0026] 將2. OgPLGA膜浸泡于50mL30 °C濃度為2mol/L NaOH溶液中，6. Oh后取出，用 lmol/L HCl溶液清洗，以除去表面殘留的NaOH，然后在超聲波條件下用乙醇和去離子水洗 滌2次，置于30°C真空干燥24h，得到水解的PLGA，其表面羧基含量及表面電荷見表1。
[0027] 取0. 5g水解后的PLGA溶于20mL二氯甲烷中，再加入IOmLBSA水溶液（濃度8%)， 加入0. 2mL吐溫80后超聲乳化lmin，得到的油包水（W/0)乳液倒入IOOmL濃度為1 %的PVA 水溶液中，超聲乳化2min。所得的W/0/W乳液在室溫下磁力攪拌，同時(shí)滴加5g濃度為1 % 的殼聚糖溶液，〇. 5h后滴加lgTPP，之后繼續(xù)攪拌3h，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，微球固化成型， 得到帶正電荷的PLGA兩層復(fù)合載藥微球；將其置于20mL溶有0. 5gPLGA (水解后）的二氯 甲烷溶液中，25°C下超聲振蕩30min后離心分離清洗，得到帶負(fù)電荷的三層復(fù)合載藥微球； 將其加入5g濃度為1%的殼聚糖溶液中，磁力攪拌0. 5h后