一種具有抗癌作用的柞樹葉提取物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種柞樹葉提取物，特別涉及一種具有抗癌作用的柞樹葉提取物，還 涉及該柞樹葉提取物的制備方法及其在制備對腫瘤細胞生長具有抑制作用的藥物中的用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 柞樹（QuerusmongolicaFisch)為殼斗科（Fagaceae)櫟屬（Quercus)落葉喬木， 有蒙古櫟、遼東櫟、麻櫟、槲樹等種類，葉緣有鋸齒，少有全緣。雄花柔荑花序下垂，雌花單生 于總苞內(nèi)。堅果單生，果皮內(nèi)壁無毛，不發(fā)育的胚珠位于種子基部之外側(cè)。樹干奇特蒼勁， 樹形優(yōu)美多姿，枝繁葉茂，耐修剪、易造型，經(jīng)拉片造型后冠如華蓋，千姿百態(tài)，神韻獨具，是 風景園林、庭院別墅區(qū)造型景觀精品樹種。全世界約有300余種，中國有60余種，柞林面積 約有6. 67X106hm2。具有耐寒、耐旱能力強，適應能力強等特點，我國主要分布在東北和華 北地區(qū)，其中遼寧省柞樹林有182萬公頃，占林地面積的14. 7% ;資源極為豐富。
[0003] 柞樹資源廣泛，屬于野外自然生長、產(chǎn)地天然無污染。柞樹葉、柞樹皮和柞樹根的 組成和應用各異。研宄發(fā)現(xiàn)，柞樹葉營養(yǎng)豐富，藥食兼用，可以為人們提供蛋白質(zhì)、脂肪、多 糖、粗纖維、氨基酸、多種礦物質(zhì)元素，還含有單寧、黃酮類等一些生物活性物質(zhì)。一直以來 柞樹葉主要作為柞蠶飼料被人們熟知。遼寧、吉林、黑龍江、山東等地民間有傳統(tǒng)著名小吃 "波羅葉餅子"（柞樹葉餅子），近幾年柞樹葉已出口日本用于制作年糕，深受日本人歡迎，每 片葉子收購價達到0. 6-0. 7元錢，有較大的開發(fā)價值。
[0004] 以柞樹葉為原料，制備具有抗癌作用的柞樹葉提取物的相關(guān)實驗研宄未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)問題之一是提供一種具有抗癌作用的柞樹葉提取物的制備方 法。
[0006] -種具有抗癌作用的柞樹葉提取物的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：
[0007] ①將柞樹葉用浸提劑進行浸提，得到浸提液，蒸發(fā)濃縮浸提液，得到濃縮液；
[0008] ②步驟①所得濃縮液加水稀釋后，超濾得到分子量為<5000Dr的柞樹葉提取液；
[0009] ③將步驟②所得提取液冷凍干燥得到凍干粉，即柞樹葉提取物。
[0010] 所述柞樹葉來自于麻櫟、遼東櫟、蒙古櫟、槲櫟或銳齒櫟中的任何一種。
[0011] 所述步驟①中的柞樹葉在浸提前清洗、22~30°C陰干、粉碎至40目。
[0012] 所述步驟①中的浸提為柞樹葉用浸提劑于20~25°C浸提，每次浸提時間為4~ 12h，過濾后渣再浸提，共浸提1~3次，合并的浸提液可通過離心達到進一步固液分離，得 到浸提液。
[0013] 優(yōu)選地，所述浸提中柞樹葉與浸提劑的料液比為1 :15,料液比的單位為g/ml。
[0014] 所述步驟①中的浸提劑為水或體積分數(shù)為65~95 %的乙醇水溶液。
[0015] 所述步驟①中的濃縮為當浸提劑為水時，將浸提液于55~65°C蒸發(fā)濃縮至浸提 液體積的2~5%;當浸提劑為體積分數(shù)為65~95%的乙醇水溶液時，將浸提液于55~ 65°C蒸發(fā)濃縮至浸提液體積的2~5%，得到第一次濃縮液，再向第一次濃縮液中加入其 5~10倍體積的水，55~65°C蒸發(fā)濃縮至第一次濃縮液的體積。
[0016] 所述步驟②中所述濃縮液加水稀釋的目的是使?jié)饪s液的濃度達到適宜超濾的濃 度范圍，優(yōu)選地，所述濃縮液加水稀釋至步驟①所得濃縮液體積的10倍。
[0017] 所述步驟②中的超濾為在截留分子量為5000Dr的超濾裝置內(nèi)，0. 05~0.08MPa過 濾，收取分子量在5000Dr以下的柞樹葉提取液。
[0018] 本發(fā)明解決的技術(shù)問題之二是提供利用上述制備方法制備得到的具有抗癌作用 的柞樹葉提取物。
[0019] 本發(fā)明解決的技術(shù)問題之三是提供所述的具有抗癌作用的柞樹葉提取物在制備 對腫瘤細胞生長具有抑制作用的藥物中的用途。
[0020] 所述腫瘤細胞為人宮頸癌細胞、人肝癌細胞、人胃癌細胞、人乳腺癌細胞、鼠胃肉 瘤細胞中的任何一種。
[0021] 所述對腫瘤細胞生長具有抑制作用的藥物包括抗癌藥品、保健食品和保健品添加 劑。
[0022] 本發(fā)明有益效果為：
[0023] (1)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)并得到了具有廣譜抗癌作用的物質(zhì)，本發(fā)明所述的制備抗癌作用 柞樹葉提取物的實驗研宄尚屬首次，填補此領(lǐng)域研宄空白，具有先進性。本發(fā)明以人肝癌細 胞SMMC-7721、人胃癌細胞BGC-823、人乳腺癌MCF-7細胞、人宮頸癌Hela細胞為例研宄柞 樹葉提取物對其生長抑制的影響，為其在醫(yī)藥、保健品領(lǐng)域的應用提供理論基礎；
[0024] (2)本發(fā)明制備的柞樹葉提取物在生物體內(nèi)和體外均可以抑制多種腫瘤細胞生 長，具有較強的抗癌作用；
[0025] (3)本發(fā)明采用的浸提劑為水或體積分數(shù)為65~95%的乙醇水溶液，成本低，乙 醇用后易揮發(fā)清除，避免溶劑殘留，又可以重復利用；
[0026] (4)本發(fā)明利用超濾膜分離方法得到分子量<5000Dr的具有抗癌活性成分的柞 樹葉提取物，本發(fā)明工藝流程簡單，易操作，設備投入少，易于工業(yè)化生產(chǎn)，制備工藝過程無 污染，不含有任何有害化學成分；
[0027] (5)本發(fā)明拓展了柞樹葉的開發(fā)應用領(lǐng)域，擴大了柞樹資源的利用范圍和價值。
【附圖說明】
[0028] 本發(fā)明附圖8幅，
[0029] 圖1柞樹葉提取物對人胃癌BGC-823細胞生長的抑制作用，其中，P代表對應柞 樹葉提取物（OLE)或順鉑（Cisplatin)的濃度；
[0030] 圖2柞樹葉提取物對人肝癌SMMC-7721細胞生長的抑制作用，其中，P代表對應 柞樹葉提取物（OLE)或順鉑（Cisplatin)的濃度；
[0031] 圖3柞樹葉提取物對人宮頸癌Hela細胞生長的抑制作用，其中，P代表對應柞樹 葉提取物（OLE)或順鉑（Cisplatin)的濃度；
[0032] 圖4柞樹葉提取物對人乳腺癌MCF-7細胞生長的抑制作用，其中，P代表對應柞 樹葉提取物（OLE)或順鉑（Cisplatin)的濃度；
[0033] 圖5柞樹葉提物處理不同時間的人胃癌BGC-823細胞形態(tài)，其中，Al~A3.倒置 相差顯微鏡觀察陰性對照組培養(yǎng)24. 48. 72h的BGC-823細胞形態(tài)，Bl~B3.倒置相差顯微 鏡觀察8.Omg/LOLE處理24、48、72h的細胞形態(tài)；
[0034] 圖6柞樹葉提物處理不同時間的人肝癌SMMC-7721細胞形態(tài)，其中，Al~A3.倒 置相差顯微鏡觀察陰性對照組培養(yǎng)24、48、72h的SMMC-7721細胞形態(tài)，Bl~B3.倒置相差 顯微鏡觀察8.Omg/LOLE處理24、48、72h的細胞形態(tài)；
[0035] 圖7柞樹葉提物處理不同時間的人宮頸癌Hela細胞形態(tài)，其中，Al~A3.倒置相 差顯微鏡觀察陰性對照組培養(yǎng)24、48、72h的Hela細胞形態(tài)，Bl~B3.倒置相差顯微鏡觀 察8.Omg/LOLE處理24、48、72h的細胞形態(tài)；
[0036] 圖8柞樹葉提物處理不同時間的人乳腺癌MCF-7細胞形態(tài)，其中，Al~A3.倒置 相差顯微鏡觀察陰性對照組培養(yǎng)24、48、72h的MCF-7細胞形態(tài)，Bl~B3.倒置相差顯微鏡 觀察8.Omg/LOLE處理24、48、72h的細胞形態(tài)。
【具體實施方式】
[0037] 下述實施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式 限制本發(fā)明。
[0038] 實施例1
[0039] 采用遼東櫟柞樹葉為原料，柞樹葉提取物的制備方法包括如下步驟：
[0040] ①樹葉用水清洗、25°C陰干、粉碎至40目后與去離子水按料液比為lg/15mL，于 20°C浸提，每次浸提時間為12h，使用4層紗布過濾后渣再浸提，共浸提3次，合并浸提液； 合并的浸提液于3000rpm離心lOmin，得到浸提液；將浸提液65°C蒸發(fā)濃縮至浸提液體積的 5%，得到濃縮液；
[0041] ②將步驟①所得濃縮液用去離子水稀釋至濃縮液體積的10倍，在截留分子量為 5000Dr的超濾膜裝置內(nèi)，0. 05~0. 08MPa過濾，收取分子量在5000Dr以下的提取液。
[0042] ③將步驟②所得提取液冷凍干燥得到柞樹葉提取物干粉。
[0043] 實施例2
[0044] 采用遼東櫟柞樹葉為原料，柞樹葉提取物的制備方法與實施例1相同，不同之處 僅在于，本實施例的步驟①為：將柞樹葉用水清洗、25°C陰干、粉碎至40目后與體積分數(shù)為 65%的乙醇水溶液按料液比為lg/15mL，于20°C浸提，每次浸提時間為12h，使用4層紗布 過濾后渣再浸提，共浸提3次，合并浸提液；合并的浸提液于3000rpm離心lOmin，得到浸提 液；將浸提液60°C蒸發(fā)濃縮至浸提液體積的5%，得到第一次濃縮液，向第一次