玉屏風(fēng)在制藥中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及玉屏風(fēng)在制藥中的應(yīng)用，具體涉及在制備促進(jìn)樹突狀細(xì)胞增殖與活化 的藥物中的應(yīng)用，同時(shí)涉及在制備減少炎性T細(xì)胞亞群增殖的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 樹突狀細(xì)胞（dendriticcell，DC)作為連接固有免疫與適應(yīng)性免疫的紐帶，是功 能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞（antigen-presentingcell，APC)，廣泛分布于全身各組織器 官，它能通過模式識(shí)別受體（pattern-recognitionreceptors，PRR)識(shí)別各種病原微生物、 攝取抗原、加工成抗原肽、遞呈給相應(yīng)的T淋巴細(xì)胞，并分泌多種細(xì)胞因子，激活初始T細(xì)胞 (Na'iveTcells)，誘導(dǎo)其向效應(yīng)性Thl/Th2/Thl7/Treg等不同亞群分化，是獲得性免疫的 始動(dòng)者，成為多種疾病細(xì)胞生物治療的重要細(xì)胞。DC的這一功能依賴于共同刺激信號分子 和主要組織相容性抗原復(fù)合物（majorhistocompatibilitycomplex，MHC)分子的表達(dá)、相 應(yīng)細(xì)胞因子的釋放等多個(gè)環(huán)節(jié)的信號調(diào)控。
[0003]DC功能的啟動(dòng)主要通過多種PRR識(shí)別多種病原微生物共有的病原相關(guān)分子模式 (pathogen-associatedmolecularpattern，PAMP)，快速啟動(dòng)有效信號清除危險(xiǎn)因素，維 持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。Toll樣受體（Toll-likerec印tors，TLRs)是其中一類重要的PRR，為 I型跨膜蛋白，其胞內(nèi)段含有一結(jié)構(gòu)保守的區(qū)域，負(fù)責(zé)活化信號的傳導(dǎo)；胞外段為富含亮氨 酸的重復(fù)序列，參與配體識(shí)別。TLRs及其信號途徑在調(diào)控DC成熟和免疫應(yīng)答中起重要作 用，在正常情況下，體內(nèi)絕大多數(shù)DC處于非成熟狀態(tài)，具有很強(qiáng)的抗原捕獲、處理能力，但 缺乏激活T細(xì)胞的能力。一旦TLRs被PAMPs刺激，未成熟DCQmmaturedendriticcell, iDC)歷經(jīng)一個(gè)快速的成熟過程，上調(diào)細(xì)胞粘附分子和趨化因子受體等介導(dǎo)迀移和募集的分 子的表達(dá)，迀移至次級淋巴器官，進(jìn)一步分化為成熟DC(maturedendriticcell,mDC)，喪 失吞噬抗原能力，上調(diào)共刺激信號和MHC-II的表達(dá)，獲得激活初始T細(xì)胞活化和功能分化 的能力，擴(kuò)大Thl/Th2/Thl7/Treg等亞群主導(dǎo)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。
[0004] DC具有強(qiáng)大的抗原遞呈能力和強(qiáng)化獲得性免疫反應(yīng)的作用，使其成為細(xì)胞生物治 療的重要細(xì)胞。該細(xì)胞的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法通常采用細(xì)胞因子與TLR配基、病毒載體負(fù)載 的flt3等方法，這些方法誘導(dǎo)的DC較易導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子的過表達(dá)，在臨床應(yīng)用中往往存 在成本較高和難以控制的副作用等問題。中藥在增強(qiáng)免疫方面已有較多的文獻(xiàn)報(bào)道，但精 確用于DC體外培養(yǎng)的誘導(dǎo)劑尚無系列的研宄成果。根據(jù)中醫(yī)理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研宄成果，結(jié) 合DC在細(xì)胞生物治療中的應(yīng)用價(jià)值，在經(jīng)典增強(qiáng)免疫的中藥中發(fā)掘新用途，減低DC體外培 養(yǎng)工程中生物制劑應(yīng)用成本、降低其副作用，為經(jīng)典中藥的新用途提供重要的科學(xué)技術(shù)手 段。
[0005] 玉屏風(fēng)是中醫(yī)固表抗邪的經(jīng)典方藥，并在抗病毒、抗感染的治療實(shí)踐中反復(fù)驗(yàn)證 了其有效性，但是，有關(guān)玉屏風(fēng)在樹突狀細(xì)胞增殖和活化中的應(yīng)用尚無報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了玉屏風(fēng)的新用途，即在制藥中的新用途。
[0007] 具體涉及在制備促進(jìn)樹突狀細(xì)胞增殖及活化的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 同時(shí)還涉及在制備減少炎性T細(xì)胞亞群增殖的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 為了更好的理解本發(fā)明，結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)來說明其在制藥中的新用途。
[0010] 1?實(shí)驗(yàn)材料和方法 1.1實(shí)驗(yàn)材料 1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)采用SPF級近交系BALB/c小鼠，6~8周齡，體重（21±1. 2)g，雌性，購于山東大 學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，23~27°C，45~50%濕度無菌飼養(yǎng)，自由攝食飲水。
[0011]I. 1. 2中藥玉屏風(fēng)散的配伍及提取玉屏風(fēng)散方藥組成：君藥防風(fēng)（Divaricate SaposhnikoviaRoot，黑龍江）、臣藥黃苗（MilkvetchRoot，內(nèi)蒙古）、佐藥白術(shù)（Largehead AtractylodesRh，浙江）按1:2:2比例配伍，先將3味藥漂洗后加入8倍水，充分浸泡1小 時(shí)后，煮沸45min，濾取藥液；再加入5倍水繼續(xù)煮沸l(wèi)h，濾取藥液；重復(fù)煎煮三次，合并濾 取藥液，水浴濃縮成膏狀，依次加入65%、75%、85%的乙醇，沉淀過夜，濾取上清，采用水浴減 壓法回收乙醇，獲取玉屏風(fēng)散制劑(含生藥I. 2g/ml)。制劑分裝后，滅菌后4°C冰箱保存。
[0012] 1.1. 3實(shí)驗(yàn)儀器 用于動(dòng)物飼養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞檢測、基因檢測等相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器見表1。
[0013] LL4實(shí)驗(yàn)試劑及配置方法 熒光抗體：用于檢測DC膜表面分子的多種抗體：FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD86單克隆 抗體、PE標(biāo)記的大鼠抗小鼠⑶80和IA-d(MHC-II)單克隆抗體均購自BDPharmingen公 司。PE_Cy5標(biāo)記的大鼠抗小鼠⑶Ilc單克隆抗體購自eBioscience公司。用于小鼠T淋巴 細(xì)胞胞內(nèi)外分子檢測的多種熒光抗體：FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD4、PE-Cy5標(biāo)記的大鼠抗 小鼠CD3、PE標(biāo)記的大鼠抗小鼠IFN-y、TNFa、IL-10、IL-17、IL-4等熒光抗體均購于BD Pharmingen公司。
[0014] 表1實(shí)驗(yàn)中常用儀器
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 玉屏風(fēng)在制備促進(jìn)樹突狀細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
2. 玉屏風(fēng)在制備促進(jìn)樹突狀細(xì)胞活化的藥物中的應(yīng)用。
3. 玉屏風(fēng)在制備減少炎性T細(xì)胞亞群增殖的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及玉屏風(fēng)在制藥中的新用途。玉屏風(fēng)具有促進(jìn)樹突狀細(xì)胞增殖與活化中的作用,玉屏風(fēng)參與誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞具有更好的增殖能力和更強(qiáng)的抗原遞呈能力，同時(shí)玉屏風(fēng)還具有減少炎性T細(xì)胞亞群增殖的作用。
【IPC分類】A61P37-04, A61K36-481
【公開號】CN104758343
【申請?zhí)枴緾N201510182593
【發(fā)明人】姚成芳, 郭鈺琪, 王麗, 李霞, 周憲賓, 郝鈺, 張巧鳳
【申請人】山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月17日