物質(zhì)和方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫治療劑。特別地，涉及可以用于預(yù)防或治療病癥的物質(zhì)，所述病癥 的特征在于存在不需要的細(xì)胞，如引起腫瘤或其它疾病的細(xì)胞。
【背景技術(shù)】
[0002] 用于靶向惡性疾病的免疫治療策略是轉(zhuǎn)譯（translational)臨床研宄的活躍領(lǐng) 域，并且已經(jīng)進(jìn)行了數(shù)十年。目前的模型要求癌癥代表可以用宿主的免疫治療操作治療的 功能性或體質(zhì)（constitutional)免疫缺陷。這些努力可以寬泛地分為兩組。第一組通過(guò) 如接種疫苗、細(xì)胞因子支持（IL_2、IFNy)或降低免疫抑制環(huán)境（伊匹單抗（ipilimumab)) 這樣的方法來(lái)增強(qiáng)或支持內(nèi)源性抗腫瘤免疫力，而第二組設(shè)法用功能性免疫應(yīng)答成分來(lái)修 復(fù)絕對(duì)缺陷（使用抗體的被動(dòng)免疫治療、TCR轉(zhuǎn)移、干細(xì)胞移植和過(guò)繼性免疫治療）。通過(guò) 高效的功能性抗腫瘤免疫應(yīng)答確實(shí)是可能的論點(diǎn)，將這些方法進(jìn)行了統(tǒng)一。盡管在一些情 況中對(duì)于有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答存在勿庸置疑的證據(jù)，但這個(gè)腫瘤免疫學(xué)的重要支柱受到 目前臨床現(xiàn)實(shí)壓倒性的反對(duì)，所述臨床現(xiàn)實(shí)為盡管進(jìn)行了很多努力，但對(duì)于大部分的癌癥 病人沒有可用的有效的免疫治療方法。幾乎所有的癌癥疫苗接種試驗(yàn)都提供了否定結(jié)果， 而提供肯定數(shù)據(jù)的那些最常見的是證明了小的作用。現(xiàn)實(shí)是，治療性抗體，除了少數(shù)例外， 在腫瘤學(xué)領(lǐng)域中提供了非常少的臨床益處。
[0003] 如果可以研發(fā)出能有效地重新定向內(nèi)源性抗病毒免疫應(yīng)答到分子上而不是靶向 惡性組織的治療策略，這將提供一種新的有力且安全的治療惡性疾病的方法。
[0004] 大部分細(xì)胞毒性治療抗體依賴于免疫效應(yīng)物機(jī)制，來(lái)傳送它們的抗癌作用，如補(bǔ) 體依賴性細(xì)胞毒性（CDC)和抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC)。重要地，所有細(xì)胞（健康的和惡 性的）都具有各種機(jī)制來(lái)限制免疫應(yīng)答的攻擊，以避免自身免疫性。這在自身免疫疾病的 環(huán)境中是明顯的，其中高水平的組織反應(yīng)性抗體盡管常常引起器官炎癥，但很少誘發(fā)完全 的器官破壞。實(shí)際上，已知其中觀察到完全的組織破壞的自身免疫疾病，如糖尿病，是依賴 于CTL應(yīng)答，而不是抗體定向的機(jī)制。
[0005] 為了提高治療抗體差的功效，已經(jīng)使用了免疫偶聯(lián)物（放射性核素/毒素）和 工程化抗體，其能更好地保證細(xì)胞毒性效應(yīng)物機(jī)制（例如，糖基化工程）。然而，這些藥劑 的臨床試驗(yàn)仍然是很令人失望的，并且受到毒性的困擾。一個(gè)實(shí)例是已經(jīng)研發(fā)來(lái)選擇性 地將抗腫瘤劑靶向腫瘤的抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC)(參見US 5, 773, 001 ;US 5, 767, 285 ; US 5, 739, 116 ；US 5, 693, 762 ；US 5, 585, 089 ；US 2006/0088522 ；US 2011/0008840 ；US 7,659,241 ；Hughes(2010)Nat Drug Discov 9:665,Lash(2010) ；In vivo:The Business & Medicine Report 32-38 ;Mahato 等人（2011)Adv Drug Deliv Rev 63:659 ;Jeffrey 等人 (2006) BMCL 16:358 ;Drugs R D 11(1): 85-95)。ADC通常含有對(duì)抗存在于腫瘤細(xì)胞上的目 標(biāo)的單克隆抗體、細(xì)胞毒性藥物以及將抗體連接至藥物的連接物。然而，目前只有少數(shù)ADC 處于臨床研發(fā)的后期，而且已經(jīng)證明了這些的臨床成功是難以捉摸的。
[0006] 因此，仍然存在對(duì)具有更高功效和更低毒性的更有效的免疫治療劑的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的物質(zhì)（agent)是重新定向的（re-directed)免疫治療的實(shí)例。這指的是 將通常靶向帶有外源抗原的細(xì)胞的現(xiàn)有的免疫應(yīng)答重新定向到靶向病癥（如癌癥）中不需 要的細(xì)胞的概念。此概念需要標(biāo)記物抗原（marker antigen)在不需要的細(xì)胞上遞呈，使得 它們成為免疫細(xì)胞的目標(biāo)。
[0008] WO 95/17212描述了由肽T細(xì)胞抗原和細(xì)胞結(jié)合配偶體組成的偶聯(lián)物 (conjugate)及其在重新定向的免疫治療中的用途。偶聯(lián)物在結(jié)合了結(jié)合配偶體到表面受 體后內(nèi)在化至靶細(xì)胞中，并且從偶聯(lián)物加工T細(xì)胞抗原，并且以與MHC分子的復(fù)合物的形式 在細(xì)胞表面上表達(dá)。經(jīng)T細(xì)胞受體的復(fù)合體的識(shí)別誘導(dǎo)了對(duì)祀細(xì)胞的細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答。 然而，從WO 95/17212難以預(yù)測(cè)哪些結(jié)合配偶體能夠?qū)崿F(xiàn)內(nèi)在化并且因此隨后遞呈T細(xì)胞 抗原，而哪個(gè)不能。僅有的顯示有效地遞呈肽抗原的受體是B細(xì)胞的抗原受體，其正常作用 是結(jié)合并內(nèi)在化遞呈至輔助性T細(xì)胞的抗原。然而，WO 95/17212沒有對(duì)哪些其它受體（如 果有的話）可確保提供相同的結(jié)果提供任何指導(dǎo)。
[0009] 令人驚奇地且預(yù)料不到地，本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)鑒定了在重新定向的免疫治療中具 有實(shí)用性的具體的抗原，即 CD70、CD74、CD22、HLA-DR、CD23、CD30、CD43、CD44、CD47、CD54、 ⑶55、⑶58、⑶59、⑶62L或⑶95。用病毒衍生肽靶向這些抗原中的每一個(gè)都使得體外病毒 特異性T細(xì)胞的活化增加，這表明，令人驚奇地，各個(gè)抗原都能使肽內(nèi)在化并隨后在細(xì)胞表 面上遞呈。
[0010] ⑶70 (TNFSF7)是腫瘤壞死因子（TNF)超家族的成員。其是II型膜內(nèi)在蛋白且是 ⑶27的配體。該蛋白在抗原活化的T和B淋巴細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)，并且其與⑶27的相互作用 調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞的功能。具體地，該蛋白的作用為控制靶細(xì)胞的死亡、存活和共刺激。 盡管⑶70是由正常淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的限定亞群（limited subsets)表達(dá)，其由廣泛 的惡性血液病和某些實(shí)體腫瘤異常地表達(dá)。
[0011] ⑶74是II型MHC分子伴侶并且功能為免疫細(xì)胞上促炎性細(xì)胞因子巨噬細(xì)胞迀移 抑制因子（MIF)的膜受體。MIF結(jié)合至⑶74通過(guò)MPK和Akt途徑激活下游信號(hào)并促進(jìn)細(xì) 胞增殖和存活。除了由免疫細(xì)胞表達(dá)，還已經(jīng)在數(shù)個(gè)非-CNS癌癥中觀察到CD74的過(guò)表達(dá)， 并且在這些腫瘤中的CD74表達(dá)通常與攻擊行為和患者預(yù)后不良相關(guān)。
[0012] CD22是屬于凝集素的SIGLEC家族的分子，其特異性地用位于其N-末端的免疫球 蛋白（Ig)結(jié)構(gòu)域結(jié)合唾液酸。其出現(xiàn)在成熟B細(xì)胞的表面上且較小程度地出現(xiàn)在一些未 成熟的B細(xì)胞上。認(rèn)為CD22是調(diào)節(jié)分子，其阻止免疫系統(tǒng)的過(guò)度活化和自身免疫疾病的發(fā) 展。其存在于許多B細(xì)胞惡性腫瘤（包括慢性淋巴細(xì)胞性白血病和非霍奇金氏淋巴瘤）上。
[0013] 由染色體6上的人類白細(xì)胞抗原復(fù)合體編碼HLA-DRII型MHC細(xì)胞表面受體。 HLA-DR和其配體的復(fù)合體（長(zhǎng)度為9個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)的肽）構(gòu)成了 T細(xì)胞受體（TCR)的配 體。應(yīng)答信號(hào)時(shí)HLA-DR分子被上調(diào)。HLA-DR出現(xiàn)在各種癌癥（包括結(jié)直腸癌）中，其中增 加的HLA-DR表達(dá)涉及更好的預(yù)后結(jié)果。
[0014] ⑶23是IgE (-種參與過(guò)敏和抗寄生蟲的抗體同種型）的"低親和力"受體，并且 在IgE水平的調(diào)節(jié)中很重要。與許多抗體受體不同，CD23是C型凝集素。其出現(xiàn)在成熟的 B細(xì)胞、活化的巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、濾泡樹突狀細(xì)胞和血小板上。CD23出現(xiàn)在B細(xì)胞 惡性腫瘤（如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血?。┲械腂細(xì)胞 上。
[0015] CD30是腫瘤壞死因子受體家族的細(xì)胞膜蛋白并且是腫瘤標(biāo)記物。此受體由活化 的（而不是休眠的）T細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)。TRAF2和TRAF5可以與此受體相互作用，并介導(dǎo) 導(dǎo)致NF- K B活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。其是細(xì)胞凋亡的正調(diào)節(jié)子，并且還顯示限制自身反應(yīng)性⑶8 效應(yīng)T細(xì)胞的增殖潛能并保護(hù)身體抵抗自身免疫。CD30出現(xiàn)在T細(xì)胞淋巴瘤（包括間變性 大細(xì)胞淋巴瘤）并且也由B細(xì)胞淋巴瘤（包括霍奇金淋巴瘤）表達(dá)。
[0016] ⑶43是人類T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和一些B淋巴細(xì)胞表面上的主要的唾 液酸糖蛋白，其似乎對(duì)于免疫功能是重要的，并且可以是參與T細(xì)胞活化的生理配體-受體 復(fù)合體的一部分。⑶43在超過(guò)90%的T細(xì)胞淋巴瘤中存在，并也可用作群組（panel)的一 部分以證明B細(xì)胞淋巴母細(xì)胞性淋巴瘤，這是因?yàn)樵诖瞬“Y中的惡性細(xì)胞通常是⑶43陽(yáng)性 的。其還染色粒細(xì)胞和它們的前體，因此其可以是骨髓腫瘤的有效的標(biāo)記物。
[0017] CD44是參與細(xì)胞-細(xì)胞相互作用、細(xì)胞粘附和迀移的細(xì)胞表面糖蛋白。其是透明 質(zhì)酸的受體，并也可與其它配體如骨橋蛋白、膠原和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP)相互作用。其參 與多種細(xì)胞功能（包括淋巴細(xì)胞活化、再循環(huán)和歸巢、造血和腫瘤轉(zhuǎn)移）。CD44以各種剪切 形式出現(xiàn)，并且報(bào)道了 CD44中的變動(dòng)用作一些乳腺癌和前列腺癌干細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記 物。其還被視為上皮卵巢癌患者的存活時(shí)間增加的一個(gè)指標(biāo)。CD44變體亞型還與頭頸部鱗 狀細(xì)胞癌的進(jìn)展相關(guān)聯(lián)。
[0018] CD47是膜蛋白，其涉及經(jīng)由細(xì)胞粘附到細(xì)胞外基質(zhì)而發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的增 加。該蛋白還是血小板反應(yīng)蛋白的C末端細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的受體，并且其可以在膜運(yùn)輸和 信號(hào)傳導(dǎo)中起作用。CD47是出現(xiàn)在許多類型的癌癥中的分子，并被膀胱癌細(xì)胞使用以躲避 巨噬細(xì)胞的正常清除。
[0019] CD54(也稱為細(xì)胞間粘附分子1)是細(xì)胞表面糖蛋白，其通常表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞和免 疫系統(tǒng)的細(xì)胞上。其結(jié)合⑶Ila/⑶18或⑶Ilb/⑶18型的整合素。⑶54出現(xiàn)在B細(xì)胞淋巴 母細(xì)胞性淋巴瘤、黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤以及其它的內(nèi)皮癌上，且在轉(zhuǎn)移中起作用。
[0020] CD55(也稱為補(bǔ)體衰變加速因子）是70kDa的膜蛋白，其調(diào)節(jié)細(xì)胞表面上的補(bǔ)體 系統(tǒng)。其防止C3bBb復(fù)合體（可替代途徑的C3-轉(zhuǎn)化酶）的組裝或加速預(yù)先形成的轉(zhuǎn)化酶 的分解，從而阻斷膜攻擊復(fù)合體的形成。這種糖蛋白廣泛分布于造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞中。 其還出現(xiàn)在許多內(nèi)皮癌（包括結(jié)直腸癌和前列腺癌）中。
[0021] ⑶58是表達(dá)在抗原遞呈細(xì)胞（APC)(尤其是巨噬細(xì)胞）上的細(xì)胞粘附分子。其結(jié) 合至T細(xì)胞的⑶2上，并且在加強(qiáng)T細(xì)胞和專職性抗原遞呈細(xì)胞（professional antigen presenting cell)之間的粘附上是重要的。當(dāng)T細(xì)胞漫游于淋巴結(jié)中，尋找APC表面上的 肽：MHC復(fù)合體時(shí)，這種粘附作為T細(xì)胞活化前的T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞之間的短暫最初的 接觸