一種sd大鼠多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，具體地說(shuō)涉及一種IDPN注射誘導(dǎo)SD大鼠 多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 多發(fā)性抽動(dòng)癥（Tourette Syndrome，簡(jiǎn)寫(xiě)為T(mén)S)又稱抽動(dòng)-穢語(yǔ)綜合征。其臨床 特征為慢性、波動(dòng)性、多發(fā)性運(yùn)動(dòng)肌快速抽搐，并伴有不自主發(fā)聲和語(yǔ)言障礙。該病以肢體 抽掣及喉中發(fā)出怪聲或口出穢語(yǔ)為主要臨床表現(xiàn)，起病在2~12歲之間，男孩發(fā)病率較女 孩約高3倍。一般首發(fā)癥狀為簡(jiǎn)單運(yùn)動(dòng)抽動(dòng)，以面部肌肉的抽動(dòng)最多，呈間斷性，少數(shù)患者 的首發(fā)癥狀為簡(jiǎn)單的發(fā)聲抽動(dòng)。隨病程進(jìn)展，抽動(dòng)的部位增多，逐漸累及到肩部、頸部、四肢 或軀干等部位，表現(xiàn)形式也由簡(jiǎn)單抽動(dòng)發(fā)展為復(fù)雜抽動(dòng)，由單一運(yùn)動(dòng)抽動(dòng)或發(fā)聲抽動(dòng)發(fā)展 成兩者兼有，發(fā)生頻度也增加。其中約30%出現(xiàn)穢語(yǔ)癥或猥褻行為。多數(shù)患者每天都有抽 動(dòng)發(fā)生，少數(shù)患者的抽動(dòng)呈間斷性，但發(fā)作間隙期不會(huì)超過(guò)2月。病程持續(xù)迀延，超過(guò)一年 以上，給患者及患者家庭帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)和心理負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響了他們的生活質(zhì)量。
[0003] 但是由于TS的發(fā)病機(jī)理尚有許多不明之處，特別是現(xiàn)階段還沒(méi)有完全模擬人類 TS的動(dòng)物模型，深入了解TS病理機(jī)制存在著很大阻礙，導(dǎo)致目前還沒(méi)有特效的治療方法， 所以構(gòu)建出模擬人類TS的理想動(dòng)物模型，并在此基礎(chǔ)上闡明TS的發(fā)病機(jī)制與病因，最終找 到有效的治療方法是當(dāng)務(wù)之急。
[0004] 就現(xiàn)階段研宄結(jié)果來(lái)看，TS發(fā)病與腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)，尤其是多巴胺（DA)系統(tǒng)遞質(zhì) 含量變化密切相關(guān)，可以由TS模型鼠單胺類遞質(zhì)失衡，尤其是由DA遞質(zhì)失衡的病理特點(diǎn) 來(lái)判斷是否有TS發(fā)病跡象，現(xiàn)有技術(shù)中化學(xué)誘發(fā)性TS動(dòng)物模型主要有（1)苯丙胺（AMP) 模型，造模后因造模劑量不同，小鼠嗅探、咬等行為表現(xiàn)出程度差異；（2)阿撲嗎啡（APO)模 型，造模后小鼠活動(dòng)性增高，出現(xiàn)短暫攀爬行為；（3)亞氨基二丙腈（IDPN)模型，造模后模 型鼠中樞神經(jīng)興奮性增加，空間認(rèn)知能力受損；上述模型中，AMP、APO表面效度短暫，在中 醫(yī)藥防治TS中使用受限，而IDPN表面效度明顯、穩(wěn)定、持久且建模時(shí)間短，主要表現(xiàn)為ECC 綜合癥，但是現(xiàn)有IDPN模型基本給藥量大，對(duì)模型鼠造成的毒性大，不符合國(guó)際動(dòng)物模型 的倫理性要求；不利于對(duì)模型鼠的后續(xù)病理分析。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于現(xiàn)有IDPN誘發(fā)TS模型給藥量大，對(duì)模型鼠 造成的毒性大，不符合國(guó)際動(dòng)物模型的倫理性要求；且對(duì)老鼠造成了不可逆性的傷害，使得 后期的給藥效果受到干預(yù)，模型鼠癥狀表現(xiàn)不佳；此外小鼠腦組織體積小，取樣分析有限。 從而提出一種既能滿足給藥量小又能使得模型癥狀明顯的大鼠多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的 構(gòu)建方法。
[0006] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案為：
[0007] 本發(fā)明提供了一種SD大鼠多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟：
[0008] (1)選擇體重為40-60g的SD大鼠 72只，分為空白對(duì)照組和若干組IDPN注射組；
[0009] ⑵將IDPN稀釋為22. 5mg/ml，按照注射量為225mg · kg-1 · Cf1采用腹腔注射的方 法向一組IDPN注射組的大鼠注射所述IDPN，向所述空白對(duì)照組的大鼠注射與所述IDPN注 射組同體積的0. 9%的氯化鈉溶液，1次每天；
[0010] (3)連續(xù)注射5-6天后，對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)測(cè)、腦紋狀體單胺類遞質(zhì)含量和氨基 酸類神經(jīng)遞質(zhì)的變化分析。
[0011] 進(jìn)一步地，所述步驟（2)中，注射IDPN過(guò)程中，給藥位點(diǎn)深度為8-10mm，給藥速度 為 0·1-0. 2ml/s。
[0012] 進(jìn)一步地，所述行為學(xué)評(píng)測(cè)內(nèi)容包括刻板運(yùn)動(dòng)評(píng)測(cè)和自主活動(dòng)評(píng)測(cè)。
[0013] 進(jìn)一步地，所述單胺類遞質(zhì)包括5-羥吲哚乙酸、5-羥色胺、多巴胺、3,4_二羥基苯 乙酸、高香草酸和去甲腎上腺素。
[0014] 進(jìn)一步地，所述氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)包括谷氨酸、Y-氨基丁酸、谷氨酰胺、甘氨酸和 Tau蛋白。
[0015] 所述空白對(duì)照組有12只SD大鼠，所述IDPN注射組共5組，每組12只大鼠。
[0016] 本發(fā)明的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0017] (1)本發(fā)明提供的SD大鼠多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟： a.選擇體重為40-60g的SD大鼠72只，分為空白對(duì)照組和若干組IDPN注射組；b.將IDPN 稀釋為22. 5mg/ml，按照注射量為225mg · kg-1 · Cf1采用腹腔注射的方法向一組IDPN注射 組的大鼠注射所述IDPN，向所述空白對(duì)照組的大鼠注射與所述IDPN注射組同體積的0. 9% 的氯化鈉溶液，1次每天；c.連續(xù)注射6-7天后，對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)測(cè)、腦紋狀體單胺類遞 質(zhì)含量和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的變化分析。本發(fā)明所采用的模型鼠為SD大鼠，可以全面提供 TS動(dòng)物模型，進(jìn)而全面提供TS的發(fā)病機(jī)制，并且采用最小的造模劑量，從而降低IDPN對(duì)大 鼠的毒性，避免大鼠腦組織遭到不可逆性的破壞，從而達(dá)到最佳的分析狀態(tài)，同時(shí)大鼠腦體 積和質(zhì)量都較大，易于取樣分析。
[0018] (2)本發(fā)明提供的SD大鼠多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，連續(xù)注射IDPN5-6 天后，即可對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)測(cè)、腦紋狀體單胺類遞質(zhì)含量和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的變化 分析，較現(xiàn)有技術(shù)提高了制樣和分析效率；本模型對(duì)大鼠的行為學(xué)評(píng)測(cè)結(jié)果可以反應(yīng)多發(fā) 性抽動(dòng)癥患兒中樞神經(jīng)興奮性的特點(diǎn)，本模型還反映了多發(fā)性抽動(dòng)癥患兒腦單胺類神經(jīng)遞 質(zhì)失衡，尤其是DA遞質(zhì)失衡的病理特點(diǎn)和多發(fā)性抽動(dòng)癥患兒腦氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，尤其是 興奮性氨基酸Glu表達(dá)失衡的病理特點(diǎn)，為提供完全模擬人類TS的動(dòng)物模型打下了良好的 基礎(chǔ)。
[0019] (3)本發(fā)明提供的SD大鼠多發(fā)性抽動(dòng)癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，還進(jìn)一步限制了注 射IDPN過(guò)程中，給藥位點(diǎn)深度為8-10mm，給藥速度為0. 1-0. 2ml/s，在此特定的給藥位點(diǎn)和 給藥速度下，提高了對(duì)大鼠 TS模型后續(xù)的數(shù)據(jù)分析精度，同時(shí)本動(dòng)物模型的構(gòu)建方法還縮 短了模型鼠的建立時(shí)間，提高了構(gòu)建效率。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，對(duì)本 發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0021] 實(shí)施例1
[0022] L 材料
[0023] 動(dòng)物：SD大鼠，7