用于免疫療法的組合物的制作方法
【專利說明】用于免疫療法的組合物
[0001] 描述
[0002] 本發(fā)明涉及可被用在免疫療法中的組合物以及具體地，涉及可被用在對罹患花生 過敏癥的例如人類哺乳動物的哺乳動物的免疫療法中的組合物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明組合 物用于通過免疫療法使罹患過敏癥的哺乳動物的免疫系統(tǒng)脫敏的治療性處理的用途以及 本發(fā)明組合物在具有發(fā)展某種過敏癥的高度的傾向的哺乳動物的預防性治療中的用途。
[0003] 過敏原免疫療法，也可稱作消除過敏治療、免疫脫敏、消除過敏、或過敏原特異性 免疫療法，是用于過敏性紊亂的免疫療法的一種形式，其中對患者使用逐漸變大的劑量的 過敏原接種疫苗，所述過敏原即，患者對其過敏的一種或更多種物質，目的是誘導免疫耐受 性。
[0004] 免疫原特異性免疫療法是治療過敏性紊亂的潛在原因的唯一治療策略。它是高度 地成本效益的治療策略并且導致改善的生活質量。
[0005] 已經(jīng)顯示出免疫療法產(chǎn)生過敏癥狀的長期緩解，降低相關過敏性反應的嚴重程 度，并且降低對過敏原的新的致敏作用發(fā)展的機會。免疫療法目的在于調節(jié)免疫系統(tǒng)對過 敏原的反應。
[0006] 免疫療法通常包括經(jīng)由例如，舌下的或皮下的途徑向特定的過敏原重復暴露，從 而提供使過敏的患者對過敏原脫敏，并且因此降低過敏癥狀以及基于癥狀的治療的使用。
[0007] 免疫療法的潛在精確機制不是完全地清楚的，但是公認的是免疫療法導致對過敏 原的免疫反應的改變。修改至少包括在IgE合成中的改變以及降低免疫系統(tǒng)對特定過敏原 的過敏反應的IgE阻斷抗體的產(chǎn)生。還觀察到在Th2向Thl/T調節(jié)細胞的轉化中的升高。 在分子水平，潛在的機制的部分取決于優(yōu)先地誘導過敏原特異性IgG以中和過敏原并且降 低過敏原特異性IgE。
[0008] 免疫療法通常包括暴露過敏的患者于低劑量過敏原。該劑量以規(guī)則的例如，每周 的基礎逐漸地增加，直到達到"維持"劑量。這造成每周地注射大約四個月以達到維持劑量。 在維持劑量達到后，注射被較不頻繁地施用，例如每月一次，持續(xù)幾年。通常地，治療越長和 劑量越高，治療的益處越大。
[0009] 免疫療法成功的完成之后，可以預計持續(xù)3至5年或更久的時期的長期的保護。如 果癥狀開始恢復或如果個體開始暴露于不包括在之前的治療療法中的新的過敏原，可以重 復治療。
[0010] 花生是造成食物誘導的過敏癥的最常見的食物之一。對花生過敏癥有療效的治療 仍舊是不可得的。使用水性花生提取物的特定的免疫療法（SIT)展示對口服攝取花生的 提高的耐受性。但是，如由Nelson等人報道的（J. Allergy Clin. Immunol. 1997年，6月， 99期（6Pt I) :744-751頁），花生提取物水溶液導致不可接受的全身反應，甚至在維持注射 期間。相應地，Nelson等人推斷："對于此治療方法的臨床上的應用，需要改性的花生提取 物。"
[0011] 考慮到免疫療法的臨床相關性，本領域中對于適于免疫療法的組合物以及特別地 針對花生過敏癥有效的免疫療法，存在持續(xù)的需要。對于這些組合物的前提條件是除了提 供暴露于過敏原后的免疫反應的改變，組合物需要是安全的，即，組合物必須不能引發(fā)過敏 反應以及，在最嚴重情況下，過敏性休克。
[0012] 考慮到本領域中以上需要，本發(fā)明的目標是，除了其它目標以外，提供適于免疫療 法的組合物以及特別地針對花生過敏癥的免疫療法。
[0013] 本發(fā)明的此目標，除了其它目標以外，通過如在附加的權利要求書中定義的適于 免疫療法的組合物被滿足。
[0014] 具體地，本發(fā)明的此目標，除了其它目標以外，根據(jù)第一方面，通過包含過敏原的 適于免疫療法的組合物被滿足，其中在所述組合物中，實質上100%的所述過敏原是與鋁絡 合的。
[0015] 在本發(fā)明的上下文中，過敏原被定義為能夠通過免疫球蛋白E(IgE)反應在特應 性哺乳動物中刺激過敏性反應的抗原。大多數(shù)哺乳動物發(fā)動顯著的免疫球蛋白E反應僅作 為對寄生蟲感染的防御。但是，一些哺乳動物可以對許多普通的環(huán)境抗原做出反應。此遺 傳傾向也被稱為特應性。在特應性哺乳動物中，非寄生蟲抗原刺激不希望的IgE產(chǎn)生，導致 超敏反應或過敏癥。
[0016] 普通的過敏原包括動物產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的抗原，例如，F(xiàn)el dl (貓過敏癥）、毛皮和皮 肩、幢螂花萼（cockroach calyx)、羊毛和塵螨排泄物；藥物，例如，青霉素、磺胺類和水楊酸 鹽/酯；食物，例如，芹菜和塊根芹、谷物或玉米、蛋（典型地蛋白）、水果、南瓜、茄子、豆科 植物、豆類、豌豆、花生、黃豆、牛奶、海鮮、芝麻、大豆（soy)、木本堅果、美洲山核桃、杏仁和 小麥；蟲叮，例如，蜂蟄傷毒液、黃蜂蟄傷毒液、以及蚊叮；霉菌孢子；膠乳；金屬；以及植物 花粉，例如，草花粉和樹花粉。
[0017] 在本發(fā)明的上下文中，術語"過敏原（allergen) "、"過敏原（allergens) "、"抗原 (antigen) "和"抗原（antigens) "可交換地被使用，除非另外表明。
[0018] 發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，當在制品中實質上100%的，例如大于99%的過敏原是 與鋁絡合、或綴合或結合的時，盡管鋁絡合的過敏原仍然能夠誘導IgG反應，但未觀察到非 臨床上相關的過敏反應，即，肥大細胞介導的全身反應，從而提供尤其適于在免疫療法中使 用的組合物。
[0019] 肥大細胞介導的全身反應通過暴露至過敏原后降低身體的溫度可以容易地被測 量。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的此第一方面的優(yōu)選的實施方案，此鋁絡合的、結合的或綴合的過敏 原是花生仁蛋白質提取物，優(yōu)選地，通過還原和隨后的烷基化被改性的花生仁蛋白質提取 物。
[0021] 此花生仁蛋白質提取物可以通過以下被獲得：a)將花生磨碎以提供花生粉；b)通 過使用每50ml丙酮5克花生粉，將花生粉在丙酮中孵育30分鐘以提供脫脂的花生粉；c)將 脫脂的花生粉干燥；d)將干燥的花生粉懸浮在具有7至9之間pH的緩沖液中；以及e)將 步驟（d)所得的上層清液分離，從而提供花生仁蛋白質提取物。
[0022] 此花生提取物的還原可以通過將提取物與選自由以下組成的組的一種或更多種 還原試劑接觸來提供：2_巰基乙醇（β -ME)、二硫蘇糖醇（DTT)、二硫赤蘚糖醇、半胱氨酸、 高半胱氨酸、三丁基膦、亞硫酸鹽、三（2-羧乙基）膦（TCEP)、（氰基）硼氫化鈉、堿液（Iye)、 谷胱甘肽、E-巰基乙胺、硫代乙醇酸、二甲硫醚以及二乙硫醚。
[0023] 此提取物的隨后的烷基化可通過將還原的提取物與選自由以下組成的組的一種 或更多種烷基化試劑接觸來提供：N-乙基馬來酰亞胺、胱胺、碘乙酰胺、碘乙酸、烷基鹵化 物；烷基硫酸鹽；烯烴，優(yōu)選地，末端烯（H2C) = C(H)-R,以及酶。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的此第一方面的另一優(yōu)選的實施方案，此花生仁蛋白質提取物包括至 少主要花生過敏原Ara hi、Ara h2和Ara h6。
[0025] 花生過敏蛋白Ara hi被描述為通過非共價相互作用以約180kDa的三聚體形式天 然存在的63. 5kDa蛋白。三聚體的Ara hi結構通常聚集，形成達600-700kDa的多聚體。花 生過敏蛋白Ara h2以約20kDa的雙聯(lián)體迀移。此雙聯(lián)體由幾乎是一致的兩個亞型組成，除 了在較高分子量亞型中插入序列DPYSPS?；ㄉ^敏蛋白Ara h6,基于SDS-PAGE被鑒定為 具有約15kDa的分子量以及通過質譜確定為14, 981Da的蛋白。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明的此第一方面的又另一優(yōu)選的實施方案，此過敏原是過敏蛋白，優(yōu)選 地是選自由食物蛋白或毒液蛋白組成的組的蛋白。
[0027] 本發(fā)明組合物優(yōu)選地包含藥學上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑。
[0028] 考慮到本發(fā)明組合物在免疫療法中的有益的特征，根據(jù)第二方面，本發(fā)明涉及包 含過敏原的組合物，其中在所述組合物中，實質上100%的所述過敏原是與鋁絡合的，所述 組合物用于通過免疫療法治療性治療或預防性治療罹患過敏癥的哺乳動物，優(yōu)選地人類哺 乳動物。
[0029] 根據(jù)此第二方面的尤其優(yōu)選的實施方案，過敏原是花生仁蛋白質提取物，優(yōu)選地 通過還原和隨后的烷基化被改性，并且過敏癥是花生過敏癥。
[0030] 考慮到本發(fā)明組合物在免疫療法中的有益的特征，根據(jù)第三方面，本發(fā)明涉及包 含過敏原的組合物，其中在所述組合物中，實質上100%的所述過敏原是與鋁絡合的，所述 組合物用于使哺乳動物，優(yōu)選地人類哺乳動物的免疫系統(tǒng)對所述過敏原脫敏的預防性治療 中。
[0031] 根據(jù)此第三方面的尤其優(yōu)選的實施方案，過敏原是花生仁蛋白質提取物，優(yōu)選地 通過還原和隨后的烷基化被改性，并且免疫系統(tǒng)對暴露于花生脫敏。
[0032] 根據(jù)第四方面，本發(fā)明涉及包含過敏原的組合物，其中在所述組合物中實質上 100%的所述過敏原是與鋁絡合的，所述組合物用于藥物中。
[0033] 根據(jù)第五方面，本發(fā)明涉及用于免疫療法的方法，該方法包括以降低、或消除所述 哺乳動物對所述過敏原的過敏反應的足夠的量和足夠的時間向罹患過敏癥的哺乳動物，優(yōu) 選地人類哺乳動物施用包含過敏原的組合物，其中在所述組合物中，實質上100%的所述過 敏原是與鋁絡合的。
[0034] 典型的足夠的量將是從約0· lng/kg至10mg/kg、10ng/kg至約100 μ g/kg，或 0. 1 μ g/kg至1 μ g/kg的相對于向其被施用的個體的體重的鋁絡合的過敏原。通常，治療將 包括以這些范圍的低檔開始使用施用劑量并且隨著治療過程提高劑量。
[0035] 對于脫敏治療，患者接受頻繁的施用是典型地必需的，例如，初始地每一天、每兩 天或每三天一次，逐漸地降低至每兩周或每三