驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法，以及白癜風(fēng)藥物的用途，屬于 民族醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 白癜風(fēng)（vitiligo, OMM :#193200)是一種常見的后天性色素脫失性疾病，主要特 征為皮膚和毛發(fā)黑素細(xì)胞選擇性破壞導(dǎo)致的色素脫失。白癜風(fēng)在不同地域和種族間有較大 的差異，膚色較深的人群更易患病，我國白癜風(fēng)的患病率為〇. 09% -2. 7%。
[0003] 白癜風(fēng)的損害可發(fā)生于全身任何部位的皮膚、粘膜和毛發(fā)，但暴露部位，及易摩擦 部位，均較易發(fā)生。皮損多呈對稱分布，或沿神經(jīng)節(jié)段分布。色素完全脫失斑為乳白色，邊 界清楚，大小形態(tài)不同，生長于白斑區(qū)的毛發(fā)也可變白，嚴(yán)重者白斑可泛發(fā)全身。白癜風(fēng)組 織病理特征為皮損區(qū)黑素細(xì)胞的減少或消失，細(xì)胞中黑素顆粒缺失，早期可在皮損周邊發(fā) 現(xiàn)以淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤。
[0004] 白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制不明，目前存在多種發(fā)病機(jī)制假說，但任何一種假說都有其局限， 且不同類型白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)理可能不同。白癜風(fēng)的病因和發(fā)病機(jī)制主要有自身免疫假說、遺 傳假說、黑素細(xì)胞自身破壞假說等。
[0005] 驅(qū)蟲斑鳩菊，Vernonia anthelmintica (L. )Willd，別名印度山茴香，是菊科 (Asteraceae)斑鳩菊屬（Vernonia) -年生高大草本，藥用部位為成熟的果實(shí)，秋季采收、 晾干。其性三級干熱，功效主要是清除異常粘液質(zhì)、驅(qū)蟲、消腫、散寒止痛，是歷代傳統(tǒng)維吾 爾醫(yī)治療白癜風(fēng)的主要經(jīng)典藥物。
[0006] 驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)中含有倍半萜內(nèi)酯類、黃酮類、括環(huán)氧十八碳烯酸及其甘油酯類、 三萜類和留醇類和咖啡?；鼘幩犷惖榷喾N化合物。
[0007] 驅(qū)蟲斑鳩菊在民間用藥歷史悠久，有著長期穩(wěn)定的臨床應(yīng)用，因此其開發(fā)應(yīng)用前 景廣闊。維吾爾醫(yī)藥理論中，驅(qū)蟲斑鳩菊性三級干熱，功效主要是清除異常粘液質(zhì)、驅(qū)蟲、消 月中、散寒止痛。驅(qū)蟲斑鳩菊種子為主藥的上市藥品和制劑有驅(qū)蟲斑鳩菊注射液、卡力孜然蜜 膏、復(fù)方驅(qū)蟲斑鳩菊丸、復(fù)方卡力孜然酊、復(fù)方卡力孜然片、驅(qū)白巴布斯片等。黃酮類化合物 及黃酮部位治療白癜風(fēng)已有報(bào)道，但是酚酸類化合物及酚酸部位治療白癜風(fēng)未見報(bào)道。
[0008] 目前驅(qū)蟲斑鳩菊的提取物、黃酮部位以及黃酮類化合物治療白癜風(fēng)已有較多報(bào) 道，但是酚酸部位及酚酸類化合物未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明目的在于，提供一種驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法和用途。該方法是將 干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)粉碎，采用有機(jī)溶劑提取，樹脂分離純化獲得驅(qū)蟲斑鳩菊提取物，主 要成分為咖啡?；鼘幩?、二咖啡?；鼘幩岬确铀犷惢衔铩y定酚酸含量的質(zhì)量百分 比20% -99%。驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位中主要活性成分3, 4-二咖啡?；鼘幩?、3, 5-二咖啡 酰基奎寧酸和4, 5-二咖啡?；鼘幩岬暮糠謩e為3-26%、5-34%和5-40%。經(jīng)初步實(shí) 驗(yàn)證明：通過本發(fā)明所述的方法獲得的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位具有增加毛囊中黑素細(xì)胞、促 進(jìn)黑素合成的作用，可用于治療白癜風(fēng)。本發(fā)明所述的方法工藝簡單，生產(chǎn)成本低，有效成 分穩(wěn)定，易于質(zhì)量控制。本發(fā)明為白癜風(fēng)治療提供了新的藥用部位及化合物。
[0010] 本發(fā)明所述的一種驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法，按下列步驟進(jìn)行：
[0011] a.將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)粉碎后，用濃度為0-95%甲醇、乙醇或水溶液，室 溫-95°C提取1-5次，提取時(shí)間0. 5-3小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇 味，得到醇提物，驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)與甲醇或乙醇水溶液的固液比為1:3-30 ;
[0012] b.將步驟a得到的提取物用濃度為0-15%甲醇、乙醇或水溶液溶解分散后，過濾， 再用樹脂分離，先用水洗去雜質(zhì)，再用濃度為10-95%甲醇或乙醇洗脫，收集甲醇或乙醇洗 脫液，減壓濃縮除盡溶劑，干燥，即得到含有3, 5-二咖啡酰基奎寧酸、4, 5-二咖啡酰基奎寧 酸和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿?qū)蟲斑鳩菊酚酸部位。
[0013] 步驟 b 中所述的樹脂為 DM-130、AB-8、HPD-450、NKA-9、HPD-100、D101、HPD-400、 HPD-500、HPD-600、HPD-300、HPD-417、聚酰胺或十八烷基硅烷鍵合硅膠。
[0014] 所述方法獲得的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位中含有酚酸類化合物為質(zhì)量百分比 20% -99%。
[0015] 所述方法獲得的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位中主要活性成分3, 4-二咖啡酰基奎寧酸、 3, 5-二咖啡?；鼘幩岷?, 5-二咖啡酰基奎寧酸的含量分別為3-26%、5-34 %和5-40%。
[0016] 所述的方法獲得的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位在制備防治白癜風(fēng)的藥物中的用途。
[0017] 本發(fā)明所述的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備方法和用途，通過該方法獲得的驅(qū)蟲斑 鳩菊酚酸部位經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)證明，具有顯著的治療白癜風(fēng)的作用，且在在相同臨床等效劑 量下，驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位作用優(yōu)于白癜風(fēng)膠囊。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發(fā)明HE染色觀察皮膚組織形態(tài)學(xué)變化圖；
[0019] 圖2為本發(fā)明酚酸部位對白癜風(fēng)小鼠皮膚含黑色素毛囊數(shù)的影響（黑色素染色， 200倍）圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 實(shí)施例1 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0021] 將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)藥材IOkg粉碎，加入30倍體積的水溶液，加熱回流提取 3次，溫度95°C，時(shí)間3小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0022] 將得到的醇提物用濃度為5%乙醇分散至含生藥100g/L，過濾，再用AB-8型大孔 吸附樹脂柱，先用1倍柱體積水洗脫，再用8倍柱體積濃度為40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫 液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖啡?；鼘幩?和3, 4-二咖啡酰基奎寧酸的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位390g。
[0023] 實(shí)施例2 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0024] 將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)藥材IOkg粉碎，加入3倍體積濃度為95%乙醇，加熱回 流提取5次，室溫，時(shí)間3小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇 提物；
[0025] 將得到的醇提物用濃度為5%乙醇分散至含生藥50g/L，離心（4000轉(zhuǎn)/分鐘）， DM-130型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積水洗脫，再用1倍柱體積濃度為95%乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩帷?, 5-二咖 啡?；鼘幩岷?, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿?qū)蟲斑鳩菊酚酸部位420g。
[0026] 實(shí)施例3 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0027] 將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)藥材IOkg粉碎，加入15倍體積濃度為30%乙醇，加熱回 流提取3次，溫度75°C，時(shí)間2小時(shí)，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0028] 將得到的提取物用濃度為10 %甲醇分散至含生藥80g/L，離心（4000轉(zhuǎn)/分 鐘），HPD-100型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積濃度為50 %乙 醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、 4, 5-二咖啡?；鼘幩岷?, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿?qū)蟲斑鳩菊酚酸部位440g。
[0029] 實(shí)施例4 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0030] 將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)藥材IOkg粉碎，加入18倍體積的濃度為60%甲醇，加熱 回流提取2次，溫度50°C，時(shí)間0. 5小時(shí)，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到 醇提物；
[0031] 將得到的提取物用濃度為15%甲醇分散至含生藥100g/L，離心（4000轉(zhuǎn)/分鐘）， NKA-9型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積水洗脫，再用5倍柱體積濃度為60%甲醇洗脫， 收集甲醇洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖 啡?；鼘幩岷?, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿?qū)蟲斑鳩菊酚酸部位460g。
[0032] 實(shí)施例5 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0033] 將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)藥材IOkg粉碎，加入12倍體積濃度為10%乙醇加熱回 流提取2次，溫度80°C，時(shí)間2小時(shí)，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0034] 將得到的提取物用濃度為10 %乙醇分散至含生藥30g/L，過濾，再用DlOl型大孔 吸附樹脂柱，先用8倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積濃度為80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫 液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩?、4, 5-二咖啡?；鼘幩?和3, 4-二咖啡?；鼘幩岬尿?qū)蟲斑鳩菊酚酸部位564g。
[0035] 實(shí)施例6 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0036] 將干燥的驅(qū)蟲斑鳩菊果實(shí)藥材IOkg粉碎，加入18倍體積濃度為95 %乙醇，加熱回 流提取2次，溫度60°C，時(shí)間1小時(shí)，冷卻至室溫，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提 物；
[0037] 將得到的提取物用水分散至含生藥50g/mL，離心（4000轉(zhuǎn)/分鐘），用HPD400型 大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱體積水洗脫，再用6倍柱體積濃度為65%甲醇洗脫，收集甲醇 洗脫液，減壓濃縮，真空干燥成干粉，即得含有3, 5-二咖啡?；鼘幩帷?, 5-二咖啡?；?寧酸和3, 4-二咖啡酰基奎寧酸的驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位490g。
[0038] 實(shí)施例7 :驅(qū)蟲斑鳩菊酚酸部位的制備：
[0039] 將干燥的驅(qū)蟲斑