一種抗血栓的麥冬皂苷組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種麥冬皂苷組合物及其制備方法，以及該組合 物在抗血栓、抗血小板聚集、延長凝血時(shí)間上的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 血栓性疾?。╰hrombotic disease)是由各種原因?qū)е碌难涸谘軆?nèi)或心臟中， 從流動(dòng)狀態(tài)變?yōu)槟虪顟B(tài)，從而造成血管不同程度的栓塞（embolism)而形成的一系列綜 合征。故血栓性疾病又稱為血栓栓塞性疾病。大量的研宄資料表明，血栓栓塞性疾病已成為 危害人群健康的重要因素。血栓栓塞可遍及大小動(dòng)脈、靜脈、甚或毛細(xì)血管，由此導(dǎo)致的心 肌梗死、腦梗死、肺梗死等，死亡率與致殘率極高，為各種病因之首。血栓形成的基本條件： 1、血管壁損傷（主要為血管內(nèi)皮損傷）2、血流變化（血流瘀滯與渦旋）3、血液成分的改變 (凝血因子改變與血小板數(shù)量增多或功能亢進(jìn)），而血管內(nèi)皮受損是最重要和最常見的。
[0003] 目前所用的抗血栓藥物主要分為三類：一是抗血小板藥物，二是抗凝藥物，三是溶 栓藥物。
[0004] 血小板是一種多功能細(xì)胞，是由骨髓中成熟的巨核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)脫落而成，平均 分布在血液中，具有粘附、聚集、釋放和分泌顆粒內(nèi)容物（如5-羥色胺，ADP)的功能。在血 栓形成的過程中，血小板的粘附起著重要的始動(dòng)作用，隨之又激發(fā)了內(nèi)源性與外源性的凝 血過程。血流緩慢、渦流形成、血液凝固性增高及心血管內(nèi)膜受損等諸多因素出現(xiàn)時(shí)，或以 某種因素為主時(shí)，靠邊的血小板則黏附在裸露的膠原纖維上，并釋放ADP和血栓素 A2,促使 更多的血小板黏附，但當(dāng)凝血過程啟動(dòng)后，血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，后者使血 小板牢固地凝集于受損內(nèi)膜表面。上述過程反復(fù)進(jìn)行，血小板黏集堆不斷增大、增多，構(gòu)成 多個(gè)血小板小丘，阻塞血流，從而引起血栓。因此血小板聚集性是預(yù)示血栓形成趨勢(shì)的重要 參數(shù)，血小板活化聚集可導(dǎo)致或促進(jìn)這些疾病的發(fā)生和發(fā)展，所以，對(duì)于抗血小板藥物的研 宄具有很重要的意義。
[0005] 臨床上，阿司匹林、氯吡格雷和GP II b/IIIa拮抗劑是當(dāng)前抗血小板藥物的主體， 前兩者可口服，后者只能靜脈注射，且僅適用于疾病急性期。但前兩者也常引起不良反應(yīng)， 如阿司匹林常引起紫斑、齦血、消化道出血或術(shù)后出血等。氯吡格雷常引起中性粒細(xì)胞減 少，血栓性血小板減少性紫癜及消化道癥狀等。
[0006] 抗凝藥物，目前常用的有肝素類、水蛭素及其基因重組制劑與維生素 K拮抗劑等。 前兩者均為靜脈注射給藥，后者為口服抗凝藥物。肝素類藥物的主要不良反應(yīng)為出血，也可 導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、過敏等。重組水蛭素的不良反應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他抗凝劑，但由于其作用的不可 逆性而使醫(yī)者慎用。常用的維生素 K詰抗劑有華法令（warfarin)和新抗凝（acencoumarol， 商品名sintrom)兩種。華法令可導(dǎo)致不同程度的出血，且其在臨床使用過程中影響因素較 多。
[0007] 溶栓藥物，主要有尿激酶、鏈激酶等，可使血栓完全溶解，但多需注射應(yīng)用，具有一 定抗原性，大劑量使用可導(dǎo)致全身出血、出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)等。
[0008] 針對(duì)此等現(xiàn)象，研宄與開發(fā)安全、有效的抗血栓藥物顯得尤為重要。麥冬為百合科 植物麥冬的干燥塊根，其味甘、微苦，微寒，歸心、肺、胃經(jīng)，具有養(yǎng)陰潤肺、益胃生津、清心除 煩之功效，臨床用于治療支氣管炎、肺炎等炎癥性疾病以及心律失常及心肌缺血等心血管 疾病。麥冬含有留體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸等活性類成分，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明麥冬 中所含的單體成分具有明確的藥理活性，如麥冬皂苷D具有抗氧化活性，短葶由麥冬皂苷C 具有明確的抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用和麥冬皂苷B可以抑制肺癌細(xì)胞的生長等。但單體類成 分制備過程較繁瑣，得率很低，且成本較高。所以我們選用含有各個(gè)單體的提取物作為出發(fā) 點(diǎn)，優(yōu)化其分離及制備提純方法，目的是可以得到具有治療效果明確的麥冬提取物，使其可 以直接用于醫(yī)療領(lǐng)域，并被制作成各種制劑，使其原料得到充分的利用。
[0009] 201310710650. 0公開了一種具有抗血小板聚集活性的提取物的制備方法，該方法 包括：以麥冬藥材為原料，用有機(jī)溶劑提取，提取液離心，大孔樹脂分離，以乙醇溶液進(jìn)行洗 脫，收集洗脫液，干燥即得提取物。
[0010] 201310710650. 0實(shí)施例1公開了一種具有抗血小板聚集活性的提取物的制備 方法，該方法包括：取麥冬藥材，加麥冬原料重量大約15倍量水回流提取。提取液過濾， 靜置放涼后，離心，棄去不溶物，上清液、過DlOl型大孔樹脂柱分離，先以水洗脫至洗脫液 molish反應(yīng)呈陰性，再以30 %的乙醇溶液洗脫，最后用85 %的乙醇溶液洗脫，洗脫液回收 溶劑，干燥即得麥冬不同洗脫部位。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，麥冬的抗血小板聚集作用的主要活性部 位為85%乙醇洗脫部位，與陽性藥持平。
[0011] 麥冬各洗脫部位對(duì)ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率的影響 [0012]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗血栓的麥冬皂苷組合物，其特征在于： 本發(fā)明涉及的麥冬皂苷組合物的制備方法包括如下：取麥冬，加水浸泡6-18h，打碎， 再加水煎煮〇. 5-6h，兩次，提取液過濾，靜置放涼后，離心，棄去不溶物，上清液、過D-IOl樹 脂柱吸附，重復(fù)上樣一次，靜置6-18h，先以水洗脫至洗脫液molish反應(yīng)呈陰性，再以30% 的乙醇溶液洗脫，最后用85 %的乙醇溶液洗脫，洗脫液分別回收溶劑，將30 %乙醇部位和 85 %乙醇部位混合，凍干，得麥冬皂苷組合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物在制備抗凝血活性藥物上的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物在制備縮短凝血時(shí)間藥物上的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物在制備抗血小板聚集藥物上的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物在制備抗肺血栓藥物上的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物在制備保護(hù)缺氧復(fù)氧損傷細(xì)胞藥物上的應(yīng)用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物的薄層色譜定性鑒別，其特征在于： 取麥冬皂苷組合物，Iml甲醇溶解，LC-C18SPE固相萃取小柱吸附，分別用水、40%、 75 %、85 %甲醇溶液各8ml洗脫，收集75 %洗脫部位，揮干溶劑，用少量甲醇溶解，備用； 展開系統(tǒng)如下： (1) 氯仿-甲醇-水（17 : 6 : 2) (2) 丙酮-乙酸乙酯-水-乙酸（5 : 5 : 1 : 0.2) (3) 水飽和正丁醇系統(tǒng)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物的HPLC-ELSD色譜，其特征在于： 用HPLC-ELSD進(jìn)行成分定性測定。 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18,4.6X250mm，5ym; 色譜條件：甲醇-水梯度洗脫，洗脫條件； 總皂苷HPLC-ELSD色譜條件 時(shí)間 0 10 ' 11 41 61 71 80 甲醇 10% 28% 48% 80% 98% 100% 10%。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1的麥冬皂苷組合物的麥冬多糖含量測定方法，其特征在于： 標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的制備 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：精密稱取80°C烘至恒重的果糖8. 30mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶 解，并定容，得〇. 〇83mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勾，備用； 供試品的制備：精密稱取麥冬皂苷組合物樣品適量，放至IOml容量瓶中，甲醇溶解并 定容，搖勾，備用； 最大吸收波長的選擇 精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液7ml，用甲醇稀釋并定容至10ml。取供試品溶液2. 5ml至IOml 容量瓶中，用甲醇稀釋并定容。分別精密量取甲醇，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后溶液，供試品稀釋后溶液 2ml至具塞試管中，各加入5%苯酚溶液Iml，再迅速沿管壁加入5ml濃硫酸，40°C水浴反應(yīng) 15min，冰水浴3min終止反應(yīng)，放至室溫，在波長400~760nm處掃描，選擇最大吸收波長為 490nm ； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取果糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液l、2、3、5、7ml至IOml容量瓶中，甲醇稀釋并定容，制成 0· 0083mg/ml、0. 0166mg/ml、0. 0249mg/ml、0. 0415mg/ml、0. 0581mg/ml 的一系列濃度的標(biāo) 準(zhǔn)品溶液，分別從各標(biāo)準(zhǔn)品溶液中精密量取2ml至具塞試管中，按照2. 5. 2項(xiàng)下的方法顯 色，以隨行空白溶液為參比溶液，在波長490nm下測定吸光度，以濃度mg/ml為橫坐標(biāo)，吸光 度A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y = 13. 38χ-0. 002, r = 0. 9998, η = 3,果糖在 8. 3 μ g/ml~58. 1 μ g/ml范圍內(nèi)線性良好； 樣品測定 精密量取麥冬皂苷組合物供試品溶液2. 5ml至IOml容量瓶中，甲醇稀釋并定容。精密 量取2ml稀釋后供試品溶液至IOml具塞試管中，顯色，以隨行空白溶液為參比溶液，在波長 490nm下測定吸光度，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各個(gè)樣品的多糖含量。
【專利摘要】本發(fā)明涉及的麥冬皂苷組合物的制備方法包括如下：取麥冬，加水浸泡6-18h，打碎，再加水煎煮0.5-6h，兩次，提取液過濾，靜置放涼后，離心，棄去不溶物，上清液、過D-101樹脂柱吸附，重復(fù)上樣一次，靜置6-18h，先以水洗脫至洗脫液molish反應(yīng)呈陰性，再以30％的乙醇溶液洗脫，最后用85％的乙醇溶液洗脫，洗脫液分別回收溶劑，將30％乙醇部位和85％乙醇部位混合，凍干，得麥冬皂苷組合物。本發(fā)明涉及的麥冬皂苷組合物具備抗血栓、抗凝血、縮短凝血時(shí)間、抗血小板聚集、抗肺血栓、保護(hù)缺氧復(fù)氧損傷細(xì)胞的活性。
【IPC分類】A61K36-8968, G01N30-36, A61P39-00, G01N30-02, A61P7-02, G01N30-90
【公開號(hào)】CN104873746
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510140472
【發(fā)明人】張劍, 董迪, 陳維
【申請(qǐng)人】哈爾濱泰華藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年3月25日