Adrb2抑制劑與索拉菲尼聯(lián)用在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種ADRB2抑制劑與索拉菲尼聯(lián)用在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
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[0002]原發(fā)性肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上第五大常見腫瘤，在癌癥相關(guān)死亡原因中排名第三。肝細胞癌常見于發(fā)展中國家，尤其多發(fā)于東亞、東南亞、太平洋盆地和非洲撒哈拉沙漠南部地區(qū)。在已報告的626，000例肝細胞癌患者中，大約410，000例分布于東亞地區(qū)(其中中國346，000例，日本40，000例)。但是，由于治療前侵襲和轉(zhuǎn)移的發(fā)生率較高，肝細胞癌的預(yù)后較差。
[0003]索拉菲尼是由Bayer和Onyx聯(lián)合研發(fā)的多靶點抗腫瘤藥物，具有顯著抑制腫瘤增殖和血管再生的作用，是被美國FDA批準的第一個用于臨床治療肝細胞癌的靶向藥物。索拉菲尼通過對ERK1/2信號通路中抑制絲/蘇氨酸蛋白激酶RAF，腫瘤的增殖被顯著地控制。此外，索拉菲尼也抑制了 VEGF和TOGFR，從而阻止了腫瘤的血管形成(WilhelmSM, Carter C，Tang Lj Wilkie D，McNabola A，Rong H，，et al.:BAY 43_9006exhibitsbroad spectrum oral antitumor activity and targets the RAF/MEK/ERK pathway andreceptor tyrosine kinases involved in tumor progress1n and ang1genesis.CancerRes 2004，64(19):7099-7109.)。但肝癌患者中使用索拉菲尼易產(chǎn)生耐藥性，治療效果也不理想。
[0004]隨著研宄水平的不斷深入，神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)異常在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用越來越受到關(guān)注。其中，β腎上腺素受體廣泛表達于大多數(shù)哺乳動物細胞，是調(diào)節(jié)機體應(yīng)對應(yīng)激反應(yīng)過程的重要功能分子。根據(jù)結(jié)構(gòu)和效應(yīng)不同，β腎上腺素受體可分為β?，β2和β3三個亞型。β腎上腺素受體阻滯劑的使用(如非選擇性β 1，β 2腎上腺素受體抑制劑，普萘洛爾)有助于延緩乳腺癌和前列腺癌患者的疾病進展，改善患者預(yù)后(Bairon TI, ConnollyRMj Sharp L，Bennett Kj Visvanathan K.Beta blockers and breast cancer mortality:apopulat1n-based study.J Clin Oncol.Jul 12011 ;29(19):2635-2644.)0
[0005]近年來，β 2腎上腺素受體(ADRB2)及其信號通路在腫瘤預(yù)防和治療研宄領(lǐng)域受到越來越多的關(guān)注。IC1-118, 551為特異性β 2腎上腺素受體抑制劑，其抑制腫瘤的作用也逐漸受到重視。但β 2腎上腺素受體(ADRB2)抑制劑在肝癌治療中的作用仍不清楚，目前尚未有文獻報道聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼在治療肝癌中的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0006]本發(fā)明的目的在于提供ADRB2抑制劑的新的醫(yī)藥用途，本發(fā)明的另一目的在于提供ADRB2抑制劑與索拉菲尼聯(lián)用在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
[0007]為了克服現(xiàn)有的肝癌治療方法難以抑制肝癌生長和轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，以及索拉菲尼治療肝癌耐藥性高等不足，本發(fā)明提供了 β 2腎上腺素受體(ADRB2)抑制劑的新醫(yī)藥用途。
[0008]本發(fā)明提供了 β 2腎上腺素受體(ADRB2)抑制劑在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用，特別是β2腎上腺素受體抑制劑作為肝癌化療藥物的增效劑或者增敏劑。
[0009]所述的肝癌化療藥物，為索拉菲尼、順鉑或表柔比星等。
[0010]進一步地，本發(fā)明還提供了 β 2腎上腺素受體抑制劑在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用，所述的藥物為β2腎上腺素受體抑制劑與索拉菲尼聯(lián)用。
[0011]本發(fā)明提供了 β 2腎上腺素受體抑制劑與索拉菲尼聯(lián)用在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明所述的β 2腎上腺素受體抑制劑，是抑制或降低ADRB2基因轉(zhuǎn)錄(翻譯)的物質(zhì)，或能抑制ADRB2受體正常生物學(xué)功能的物質(zhì)，例如通過siRNA或shRNA等方法降低ADRB2基因轉(zhuǎn)錄；使用非選擇性β 1，β 2腎上腺素受體抑制劑普萘洛爾或特異性β 2腎上腺素受體抑制劑IC1-118，551抑制ADRB2受體正常生物學(xué)功能等。
[0013]本發(fā)明的主要技術(shù)方案為:將ADRB2抑制劑與索拉菲尼同時對患者進行給藥。
[0014]在本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述的肝癌包括肝細胞癌和膽管細胞癌。
[0015]在本發(fā)明的優(yōu)選實施例，所述的ADRB2抑制劑為口服制劑、針劑或者緩釋制劑等。
[0016]在本發(fā)明的優(yōu)選實施例，以ADRB2抑制劑與索拉菲尼作為活性成份的藥物的給藥方式包括靜脈注射、口服和局部給藥等。
[0017]在本發(fā)明的優(yōu)選實施例，ADRB2抑制劑與索拉菲尼可以聯(lián)合給藥，或分開給藥。
[0018]本發(fā)明經(jīng)細胞實驗證實，ICI在24h就能夠明顯減慢肝癌細胞的增殖速度，并且這種趨勢隨著時間的延長而逐漸顯著。
[0019]ICI能夠明顯抑制克隆形成，并存在濃度依賴性，提示ICI確實能夠抑制腫瘤細胞的增殖。
[0020]干擾肝癌細胞中ADRB2表達之后，細胞增殖速度明顯減慢。
[0021]ICI聯(lián)用Sorafenib能夠明顯增加Sorafenib對肝癌細胞的生長抑制，并且這種抑制水平要高于單獨使用ICI或Sorafenib所引起的細胞抑制之和。
[0022]ICI聯(lián)用Sorafenib后發(fā)生凋亡的肝癌細胞明顯增多，提示了更強的殺傷效果。
[0023]聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼可顯著抑制肝細胞癌移植瘤的生長。
[0024]本發(fā)明的有益效果是，這種聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼治療肝癌的方法能有效抑制肝癌生長，并能有效抑制肝癌細胞的移植成瘤效率，降低了肝癌的進展，易于臨床使用推廣。利用本發(fā)明的方法能抑制肝癌細胞的增殖和克隆形成能力，促進肝癌細胞凋亡，抑制肝癌細胞移植瘤的生長，大大增強了肝癌細胞對索拉菲尼的敏感性，易于臨床推廣使用。
【附圖說明】
[0025]圖1是本發(fā)明使用ADRB2抑制劑抑制肝癌細胞生長的示意圖，其中A為ICI抑制肝癌細胞增殖速度的圖，B為ICI抑制肝癌細胞克隆形成的照片，C為ICI抑制肝癌細胞克隆形成實驗克隆數(shù)量計數(shù)圖；
[0026]圖2是本發(fā)明干擾ADRB2表達抑制肝癌細胞生長的示意圖；
[0027]圖3是本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼后肝癌的生長示意圖，其中A為SMMC-7721細胞的結(jié)果，B為H印G2細胞的結(jié)果，C為HCC-LM3細胞的結(jié)果；
[0028]圖4是本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼后肝癌細胞的克隆形成能力示意圖，其中A為克隆形成的照片，B為克隆形成數(shù)目的計數(shù)圖；
[0029]圖5是本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼后肝癌細胞的凋亡比例示意圖；
[0030]圖6是本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用ADRB2抑制劑與索拉菲尼后肝癌細胞移植效率的示意圖。
【具體實施方式】
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[0031]以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明。應(yīng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0032]IC1-118, 551 (以下簡稱為ICI)為特異性β 2腎上腺素受體抑制劑，購自Sigma公司，貨號 I127-5MG。
[0033]普萘洛爾為非選擇性β?，β 2腎上腺素受體抑制劑，購自Sigma公司，貨號P0884-1G。
[0034]索拉菲尼(Sorafenib)，購自LC laboratories，貨號 S_8502。
[0035]肝細胞癌細胞系SMMC-7721、H印G2、PVTT, HMCC-LM3購自中科院細胞所。
[0036]實施例1:
[0037]將肝癌細胞系SMMC-7721、!fepG2、& PVTT分別傳入96孔板，每孔3000個細胞，每種細胞分為DMSO及ICI兩組，每組設(shè)5個副孔。待細胞貼壁后計為O時刻，同時各組分別給予DMSO或ICI 10 μ M。分別在0、24、48、72、96h吸掉培養(yǎng)基，加入用DMEM稀釋的10%的CCK8檢測試劑，37°C孵箱孵育Ih后檢測450nm處的吸光度值。用各時間點所測的吸光度值繪制生長曲線。
[0038]由圖1中A可知，ICI在24h就能夠明顯減慢肝癌細胞的增殖速度，并且這種趨勢隨著時間的延長而逐漸顯著。
[0039]為了進一步證明ICI能夠抑制肝癌細胞的增殖，我們進行了細胞克隆實驗。具體實施如下:將MHCC-LM3細胞傳入6孔板中，每孔500個細胞。分為D