去氫燈心草二酚在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工領域及醫(yī)藥領域，涉及去氫燈心草二酚在制備抗腫瘤藥物中的應 用。
【背景技術】
[0002] 腫瘤是機體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細胞在基因水平上失去對 其生長的正常調(diào)控，導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。我國的腫瘤病例數(shù)相當龐 大，有資料顯示占全世界病例數(shù)的55%。
[0003] 良性腫瘤對機體的影響較小，主要表現(xiàn)為局部壓迫和阻塞癥狀。惡性腫瘤由于分 化不成熟、生長較快，浸潤破壞器官的結構和功能，并可發(fā)生轉移，因而對機體影響嚴重。惡 性腫瘤除可引起與上述良性腫瘤相似的局部壓迫和阻塞癥狀外，還可有發(fā)熱、頑固性疼痛， 晚期可出現(xiàn)嚴重消瘦、乏力、貧血和全身衰竭的狀態(tài)。
[0004] 中醫(yī)認為，癌癥的起因首先是人體內(nèi)陰陽平衡，組織細胞在不同的致癌因素長期 作用下，細胞突變而引起的。其實癌組織也是人體的一部分，只有在人本陰陽平衡失調(diào)，五 行生克乘侮發(fā)生變化的前提下，人體的免疫監(jiān)控系統(tǒng)才會對其失去監(jiān)控，任其發(fā)展。中草藥 能夠以調(diào)理氣血、調(diào)整陰陽平衡、維持正常生命體征而保命；以培補正氣、產(chǎn)生抗體，清理〃 毒源〃而治本。因而，中草藥提取物成為治療腫瘤一個重要方向。
[0005] 去氫燈心草二酚提取自中草藥燈心草。燈心草(學名：JuncuseffususL)是多年 生草本水生植物，地下莖短，匍匐性，桿叢生直立，圓筒形，實心，莖基部具棕色，退化呈鱗片 狀鞘葉，穗狀花序，頂生，在莖上呈假側生狀，基部苞片延伸呈莖狀，花下具2枚小苞片，花 被裂片6枚，雄蕊3枚，雌蕊柱頭3分歧。褐黃色蒴果，卵形或橢圓形，種子黃色呈倒卵形。 燈心草也是藥用植物，其莖髓或全草入藥具有清熱、利水滲濕之功效，可用于淋病，水腫，心 煩不寐，喉痹，創(chuàng)傷等癥。
[0006] 去氫燈心草二酚屬于天然產(chǎn)物，生物利用度高、性質比較穩(wěn)定，具有臨床使用價 值。目前關于去氫燈心草二酚的化學結構研究方面報道較少，系統(tǒng)的生物活性研究更少。隨 著人們對其的化學和生物學研究的深入，其分子作用機制將逐步明確，這將進一步推動此 類化合物的化學結構修飾和構效關系研究，并有助于提高燈心草的藥用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供去氫燈心草二酚的新的藥物用途。
[0008] -方面，本發(fā)明提供了去氫燈心草二酚在制備抗腫瘤藥物中的應用。其中，去氫燈 心草二酚的英文全稱為dehydroeffusol，其結構如式I所示；
[0009]
[0010] 所述的抗腫瘤藥物可以是抗肝癌藥物，抗乳腺癌藥物、抗宮頸癌藥物，也可以是抗 血癌藥物。
[0011] 實驗結果表明，去氫燈心草二酚能夠抑制多種癌細胞生長。其中部分的IC5tl達到 了微摩（Umol/L或者iiM)級。
[0012] 該抗腫瘤藥物可以為針劑或者片劑。
[0013] 去氫燈心草二酚能夠導致腫瘤細胞的Gl期阻滯，尤其是肝癌細胞的Gl期阻滯。
[0014] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，去氫燈心草二酚能夠導致QGY細胞的Gl期阻滯。
[0015] 另一方面，本發(fā)明提供了一種抑制體外腫瘤細胞增殖的方法，即將去氫燈心草二 酚加入腫瘤細胞的培養(yǎng)液中。
[0016] 所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、血癌細胞、宮頸癌細胞、乳腺癌細胞或者胰腺癌 細胞。在本發(fā)明的優(yōu)選例中，上述方法中，所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、胃癌細胞、宮頸 癌細胞或者血癌細胞。
[0017] 更好的，所述的腫瘤細胞是Mcf-7、QGY、K562、HGC或者Hela。
[0018] 加入去氫燈心草二酚的終濃度為I-IOOiiM。例如，l-5iiM，I-IOiiM，2-12iiM， 2-20iiM，2-30iiM，2-60iiM，14-28iiM，15-30iiM，10-50iiM，5-60iiM，等等。
[0019]另一方面，本發(fā)明提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是去氫 燈心草二酚。
[0020] 在本發(fā)明的優(yōu)選例中，上述抗腫瘤藥針對的腫瘤是肝癌細胞、胃癌細胞、宮頸癌細 胞或者白血病細胞。
[0021] 本發(fā)明提供了去氫燈心草二酚在制備抗腫瘤藥物中的應用。去氫燈心草二酚是天 然產(chǎn)物，能夠明顯抑制腫瘤細胞的增殖。本發(fā)明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者 其輔助成分進行開發(fā)，抑瘤效果明顯，綠色環(huán)保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑 和手段。
【附圖說明】
[0022] 圖1 :0微摩濃度的去氫燈心草二酚(陰性對照）對QGY細胞的細胞周期的影響。
[0023] 圖2 :10微摩濃度的去氫燈心草二酚對QGY細胞的細胞周期的影響。
[0024] 圖3 :20微摩濃度的去氫燈心草二酚對QGY細胞的細胞周期的影響。
[0025] 圖4:去氫燈心草二酚對QGY細胞的細胞周期的影響。圖4為圖1-圖3的柱狀圖。
[0026] 以上圖1-4表明，去氫燈心草二酚能導致細胞周期的Gl期阻滯。
【具體實施方式】
[0027] 實驗方法：
[0028] 1?細胞復蘇
[0029] 1)從液氮罐中取出凍存管，直接投入37°C溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
[0030] 2)從37°C水浴中取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入10倍以上 培養(yǎng)液，混合后低速離心，棄上清，再重復用培養(yǎng)液洗一次。
[0031] 3)用培養(yǎng)液適當稀釋后，接種培養(yǎng)瓶，放在37°C培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng) 液，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)至一定濃度時進行傳代。PANC-I細胞培養(yǎng)在含10%Gibico胎牛血清的 DMEM高糖培養(yǎng)基中，SW620人結腸癌細胞培養(yǎng)在Leibovitz'sL-15培液，添加10%胎牛血 清；1(562、邪(：、06￥、]\〇7-7、？(：-3等細胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基中，51(-11印1、 HeLa、H印G2、等細胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中含lOOU/ml青 霉素和IOOyg/ml鏈霉素。
[0032] 2.細胞傳代培養(yǎng)
[0033] 每天觀察細胞生長的情況，當細胞在培養(yǎng)瓶中長至約90%匯合時傳代，約每隔2-4 天傳代一次。一瓶傳代成三瓶，或一個25cm2傳代于一個75cm2的培養(yǎng)瓶中。方法：
[0034] 1)用IX磷酸緩沖液洗滌細胞一次。
[0035] 2)加入2_3ml胰酶消化液消化，置于37°C培養(yǎng)箱中數(shù)分鐘。用手拍打細胞培養(yǎng)瓶， 使細胞分離。
[0036] 3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合適培養(yǎng)基終止胰酶消化。將細胞分裝于新 的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
[0037] 懸浮細胞傳代時，直接收集于離心管中離心，棄舊培養(yǎng)基。一般一瓶傳代成三瓶的 比例分裝于新的培養(yǎng)瓶中，加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
[0038] 3?細胞凍存
[0039]1)取培養(yǎng)至對數(shù)生長期的細胞胰蛋白酶消化，收集于離心管中并計數(shù)，離心。
[0040] 2)棄除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入配置好的凍存培養(yǎng)液（含10%DMS0,40%DMEM 和50%Gibico胎牛血清），凍存液中細胞的最終濃度為0. 5-1X107/ml。用吸管輕輕吹打使 細胞均勻，然后分裝入無菌凍存管中，每管加1-1. 5ml。
[0041] 3)將凍存管放入凍存盒置-80°c速凍，5小時后移入液氮罐中保存。
[0042] 4?藥物準備：
[0043] 去氫燈心草二酚溶于DMSO(二甲基亞砜），配制成IOOmM或50mM的母液備用。
[0044] 去氫燈心草二酚可從上海甄準生物科技有限公司（CAS號：137319-34-7)購買。
[0045] 去氫燈心草二酚的結構如式I所示。
[0046] 本發(fā)明提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是去氫燈心草二 酚。所述的腫瘤可以是肝癌細胞、胃癌細胞、