密花石斛芴三酚在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域及醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及密花石斛芴三酚在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是機體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細胞在基因水平上失去對 其生長的正常調(diào)控，導(dǎo)致其克隆性異常增生而形成的異常病變。我國的腫瘤病例數(shù)相當龐 大，有資料顯示占全世界病例數(shù)的55%。
[0003] 良性腫瘤對機體的影響較小，主要表現(xiàn)為局部壓迫和阻塞癥狀。惡性腫瘤由于分 化不成熟、生長較快，浸潤破壞器官的結(jié)構(gòu)和功能，并可發(fā)生轉(zhuǎn)移，因而對機體影響嚴重。惡 性腫瘤除可引起與上述良性腫瘤相似的局部壓迫和阻塞癥狀外，還可有發(fā)熱、頑固性疼痛， 晚期可出現(xiàn)嚴重消瘦、乏力、貧血和全身衰竭的狀態(tài)。
[0004] 中醫(yī)認為，癌癥的起因首先是人體內(nèi)陰陽平衡，組織細胞在不同的致癌因素長期 作用下，細胞突變而引起的。其實癌組織也是人體的一部分，只有在人本陰陽平衡失調(diào)，五 行生克乘侮發(fā)生變化的前提下，人體的免疫監(jiān)控系統(tǒng)才會對其失去監(jiān)控，任其發(fā)展。中草藥 能夠以調(diào)理氣血、調(diào)整陰陽平衡、維持正常生命體征而保命；以培補正氣、產(chǎn)生抗體，清理〃 毒源〃而治本。因而，中草藥提取物成為治療腫瘤一個重要方向。
[0005] 密花石斛芴三酚是中草藥密花石斛的提取物。密花石斛（Dendrobium densiflorumISndl.)為蘭科石斛屬植物，在我國主要分布在廣東、海南、廣西和西藏東南 部。
[0006] 石斛又名石斛蘭，屬名Dendrobium。石斛蘭屬是蘭科植物中最大的一個屬，原產(chǎn)地 主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶，澳大利亞和太平洋島嶼，全世界約有1000多種。中國約有 76種其中大部分分布于西南、華南、臺灣等地。中藥石斛味甘，性微寒，具有滋陰清熱、益胃 生津之功效，用于治療熱病津傷、口干煩渴、胃陰不足、食少干嘔、病后虛熱不退，陰虛火旺、 骨蒸勞熱、目暗不明、筋骨痿軟等。
[0007] 密花石斛別名黃草石斛、黃草，花朵密集，花色嬌艷美麗，觀賞價值很高，適宜分栽 或作吊掛植物，供室內(nèi)裝飾?，F(xiàn)代研究表明，其酸性多糖具有一定的免疫促進和抗腫瘤作 用，已成為石斛的主要代用品之一，被《貴州省中藥材標準》（1988版）和《江蘇省中藥材標 準》（1998版）收載。
[0008] 密花石斛芴三酚是天然產(chǎn)物，生物利用度高、性質(zhì)比較穩(wěn)定，具有臨床使用價值。 隨著人們對其的化學(xué)和生物學(xué)研究的深入，其分子作用機制將逐步明確，這將進一步推動 此類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究，并有助于提高石斛的藥用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是提供密花石斛芴三酚的新的藥物用途。
[0010] 一方面，本發(fā)明提供了密花石斛芴三酚在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。其中，密花石 斛莉三酚的英文全稱為dendroflorin，其結(jié)構(gòu)如式I所示。
[0011]
[0012] 所述的抗腫瘤藥物可以是抗肝癌藥物，抗前列腺癌藥物、抗胃癌藥物，也可以是抗 血癌藥物。
[0013] 實驗結(jié)果表明，密花石斛芴三酚能夠抑制多種癌細胞生長。其中部分的IC5tl達到 了微摩（Umol/L或者iiM)級。
[0014] 該抗腫瘤藥物可以為針劑或者片劑。
[0015] 另一方面，本發(fā)明提供了一種抑制體外腫瘤細胞增殖的方法，即將密花石斛芴三 酚加入腫瘤細胞的培養(yǎng)液中。
[0016] 所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、血癌細胞、宮頸癌細胞、乳腺癌細胞或者胰腺癌 細胞。在本發(fā)明的優(yōu)選例中，上述方法中，所述的腫瘤細胞可以是肝癌細胞、胃癌細胞、宮頸 癌細胞或者血癌細胞。
[0017] 更好的，所述的腫瘤細胞是5麗07721、1(562、邪(：或者]\0 7-7。
[0018] 加入密花石斛芴三酚的終濃度為I-IOOiiM。例如，l-5iiM，I-IOiiM，2-12iiM， 2-20iiM，2-30iiM，2-60iiM，14-28iiM，15-30iiM，10-50iiM，5-60iiM，等等。
[0019] 另一方面，本發(fā)明提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是密花 石斛芴三酚。
[0020] 在本發(fā)明的優(yōu)選例中，上述抗腫瘤藥針對的腫瘤是肝癌細胞、胃癌細胞、或者白血 病細胞。
[0021] 本發(fā)明提供了密花石斛芴三酚在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。密花石斛芴三酚是天 然產(chǎn)物，能夠明顯抑制腫瘤細胞的增殖。本發(fā)明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者 其輔助成分進行開發(fā)，抑瘤效果明顯，綠色環(huán)保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑 和手段。
【附圖說明】 圖1:密花石斛芴三酚的結(jié)構(gòu)。
【具體實施方式】
[0022] 實驗方法：
[0023] 1?細胞復(fù)蘇
[0024] 1)從液氮罐中取出凍存管，直接投入37°C溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
[0025] 2)從37°C水浴中取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入10倍以上 培養(yǎng)液，混合后低速離心，棄上清，再重復(fù)用培養(yǎng)液洗一次。
[0026] 3)用培養(yǎng)液適當稀釋后，接種培養(yǎng)瓶，放在37°C培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng) 液，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)至一定濃度時進行傳代。PANC-I細胞培養(yǎng)在含10%Gibico胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中；K562、HGC、QGY、MCF-7、PC-3等細胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的1640培 養(yǎng)基中，SK-hepl、HeLa、H印G2、等細胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 基中含100U/ml青霉素和100iig/ml鏈霉素。
[0027] 2.細胞傳代培養(yǎng)
[0028] 每天觀察細胞生長的情況，當細胞在培養(yǎng)瓶中長至約90%匯合時傳代，約每隔2-4 天傳代一次。一瓶傳代成三瓶，或一個25cm2傳代于一個75cm2的培養(yǎng)瓶中。方法：
[0029] 1)用IX磷酸緩沖液洗滌細胞一次。
[0030]2)加入2-3ml胰酶消化液消化，置于37°C培養(yǎng)箱中數(shù)分鐘。用手拍打細胞培養(yǎng)瓶， 使細胞分離。
[0031] 3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合適培養(yǎng)基終止胰酶消化。將細胞分裝于新 的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
[0032] 懸浮細胞傳代時，直接收集于離心管中離心，棄舊培養(yǎng)基。一般一瓶傳代成三瓶的 比例分裝于新的培養(yǎng)瓶中，加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
[0033] 3?細胞凍存
[0034] 1)取培養(yǎng)至對數(shù)生長期的細胞胰蛋白酶消化，收集于離心管中并計數(shù)，離心。
[0035] 2)棄除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入配置好的凍存培養(yǎng)液（含10%DMS0,40%DMEM 和50%Gibico胎牛血清），凍存液中細胞的最終濃度為0. 5-1X107/ml。用吸管輕輕吹打使 細胞均勻，然后分裝入無菌凍存管中，每管加1-1. 5ml。
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