芬戈莫德在治療根尖周炎中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于根尖周炎的防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及芬戈莫德（Fingolimod)在治療 根尖周炎中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 根尖周炎為口腔的常見病、多發(fā)病，通常由齲病或牙髓病發(fā)展而來，病理特征主要 表現(xiàn)為根尖周牙槽骨的破壞與吸收。根尖周炎通常被認(rèn)為是根管內(nèi)微生物混合感染的結(jié) 果，因此其主要的臨床治療手段為通過根管治療以去除感染物質(zhì)。但對以往X線片的調(diào)查 表明，根管治療后的患牙中有25%仍存在根尖周骨破壞；通過CT檢測發(fā)現(xiàn)約63%的患牙盡 管經(jīng)過完善的根管治療，其根尖周骨缺損仍無法痊愈，最后可能需要采取根尖切除或?qū)⒒?牙拔除。近來研宄表明，感染并非為根尖周炎骨破壞的唯一原因，根尖周炎的病理過程事實(shí) 上是機(jī)體對根管系統(tǒng)內(nèi)抗原物質(zhì)免疫反應(yīng)。因此，尋找潛在免疫調(diào)節(jié)藥物以治療根尖周炎 已成為根管治療的重要輔助策略。
[0003]鞘氨醇-1-磷酸I型受體（Sphingosine-1-phosphatereceptor 1，SlPl)廣泛表達(dá)于絕大多數(shù)免疫細(xì)胞的表面，通過與其配體鞘氨醇-1-磷酸 (Sphingosine-l-phosphate,S1P)相結(jié)合，影響免疫反應(yīng)的程度和發(fā)展，包括趨化炎性細(xì)胞 的浸潤、影響淋巴細(xì)胞的增殖及炎性因子的釋放、調(diào)控T細(xì)胞的分化方向等。由于SlPl在 多種疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，SlPl的調(diào)節(jié)成為相關(guān)疾病的治療靶點(diǎn)。新型免疫調(diào) 節(jié)劑芬戈莫德（Fingolimod)為SlP受體調(diào)節(jié)劑，是子囊菌冬蟲夏草提取物的衍生物，化學(xué) 結(jié)構(gòu)為2-氨基-2-[2 (4-辛基苯基）乙基]-1，3-丙二醇鹽酸鹽，相對分子質(zhì)量為343. 94。 其藥理學(xué)研宄發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ingolimod在體內(nèi)經(jīng)磷酸化后能競爭性結(jié)合SlP的受體，并能促進(jìn)細(xì) 胞膜上SlPl由胞外轉(zhuǎn)移至胞內(nèi)，從而下調(diào)S1P/S1P1信號軸。
[0004] Fingolimod以其突出的優(yōu)點(diǎn)越來越受到人們的關(guān)注。目前，涉及到Fingolimod 的報道有治療多發(fā)性硬化、炎癥性結(jié)腸炎、自身免疫性葡萄膜炎、骨質(zhì)疏松等。但是，迄今為 止，F(xiàn)ingolimod在治療根尖周炎中的應(yīng)用沒有被公開或使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供Fingolimod在治療根尖周炎中的應(yīng)用。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0007] Fingolimod可通過改善根尖周炎病損區(qū)骨質(zhì)破壞，達(dá)到治療根尖周炎的作用。
[0008]Fingolimod可通過減緩根尖周炎病損區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤，達(dá)到治療根尖周炎的作 用。
[0009] Fingolimod可通過降低根尖周炎病損區(qū)SlPl表達(dá)水平，達(dá)到治療根尖周炎的作 用。
[0010] Fingolimod可通過降低根尖周炎病損區(qū)核因子kappaB受體激活劑配體 (ReceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKL)表達(dá)水平，達(dá)到治療根 尖周炎的作用。
[0011] Fingolimod的上述作用表明其可用于制備治療根尖周炎的藥物，具體為 Fingolimod可用于制備改善根尖周炎病損區(qū)骨質(zhì)破壞、減緩根尖周炎病損區(qū)炎癥細(xì)胞浸 潤、降低根尖周炎病損區(qū)SlPl表達(dá)水平或降低根尖周炎病損區(qū)RANKL表達(dá)水平的藥物。
[0012] 本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：提供了Fingolimod用于治療根尖周炎中的新用 途。該用途表明Fingolimod可用于制備治療根尖周炎的藥物。
【附圖說明】
[0013] 圖1是HE染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓7天、21天和35天導(dǎo)致大鼠下頒 第一磨牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)骨破壞的干預(yù)效果圖。
[0014] 圖2是TRAP染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓7天、21天和35天導(dǎo)致大鼠下 頒第一磨牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)破骨細(xì)胞的影響圖。
[0015] 圖3是免疫組織化學(xué)染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓導(dǎo)致大鼠下頒第一磨 牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)SlPl表達(dá)的影響圖。
[0016] 圖4是免疫組織化學(xué)染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓導(dǎo)致大鼠下頒第一磨 牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)RANKL表達(dá)的影響圖。
[0017] 圖5是免疫組織化學(xué)染色觀察Fingolimod(3mg/kg)對開髓導(dǎo)致大鼠下頒第一磨 牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)骨保護(hù)素（〇steoprotegrin，OPG)表達(dá)的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。以下實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本 發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā) 明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0019] 實(shí)施例1
[0020] 1 ?實(shí)驗(yàn)動物和材料：
[0021] 1.1實(shí)驗(yàn)動物
[0022] 所有的實(shí)驗(yàn)程序符合武漢大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院倫理委員會的指導(dǎo)原則。SPF級雌性 Wistar大鼠48只，體重200~220克，購于湖北省實(shí)驗(yàn)動物中心，分籠飼養(yǎng)。
[0023] 1. 2實(shí)驗(yàn)材料
[0024] Fingolimod購置于美國LClaboratories公司，參考藥物說明書，用生理鹽水制 備成藥物工作濃度0. 4mg/mL。
[0025] 2.動物分組及大鼠根尖周炎動物模型的建立：
[0026] 2. 1動物分組
[0027] 隨機(jī)分成7天模型對照組、7天Fingolimod給藥組、21天模型對照組、21天 Fingolimod給藥組、35天模型對照組、35天Fingolimod給藥組，每組8只。常規(guī)飼養(yǎng)、稱體 重并做標(biāo)記。
[0028] 2. 1大鼠根尖周炎動物模型的建立
[0029] 腹腔注射16. 7%的烏拉坦溶液（0. 8mg/g)使大鼠麻醉后，用1/4號球鉆（瑞士登 士柏公司）在大鼠雙側(cè)下頒第一磨牙的遠(yuǎn)中窩處開髓，開髓深度約為球鉆直徑，注意避免 穿通髓室底，以能用K挫探穿髓點(diǎn)為開髓成功的標(biāo)準(zhǔn)；將髓腔直接暴露于口腔環(huán)境中，常規(guī) 飼養(yǎng)7天、21天或35天。
[0030] 3?實(shí)驗(yàn)方法：
[0031] 3.1給藥方案
[0032]Fingolimod給藥組于模型建立后第 1、2、5、8、11、13、15、16、19、22、23、25、28、31、 33天分別用灌胃方式給藥（3mg/kg);模型對照組進(jìn)行生理鹽水灌胃處理。所有大鼠預(yù)定時 間頸椎脫白處死并分離下頒骨組織。
[0033] 3. 2標(biāo)本的采集和切片制備
[0034] 分離的下頒骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，所有標(biāo)本流水沖洗24h后轉(zhuǎn)入10%的 乙二胺四乙酸（EDTA)中，隔天換液，室溫脫鈣1個半月，以ImL注射器無阻力通過第三磨牙 牙冠為標(biāo)準(zhǔn)，終止脫鈣。修整標(biāo)本，保留下頒第一磨牙周圍l_2mm組織。標(biāo)本流水沖洗24h， 50%、60%、70% (可過夜）、80%、90%、95%1(可過夜）、95%11上行梯度酒精脫水，每個 梯度2h，正丁醇繼續(xù)脫水透明3d。隨后置入含正丁醇：石蠟（比例為1:1，v/v)的蠟缸中 浸蠟3h，再置入含純低熔點(diǎn)石蠟的蠟缸中浸蠟3h，再用高熔點(diǎn)石蠟進(jìn)行包埋，使下頒骨頰 面朝下。行4ym近遠(yuǎn)中向連續(xù)切片，展片后用表面黏附有多聚賴氨酸的載玻片撈片，傾斜 控水后，將切片編號裝入烤片架，60°C烤箱烤片2-3h后取出常溫保存。
[0035] 3. 3HE染色
[0036] 選取標(biāo)本中部可明顯顯示下頒第一磨牙遠(yuǎn)中根根管、根尖孔的切片，放入染缸中。 將染缸放入60°C烤箱中烤片lh。在通風(fēng)櫥中快速將二甲苯I倒入染缸脫蠟20min，換二甲 苯II脫蠟 15min。標(biāo)本 100%I、100%II、95%I、95%11、90%、80%、70%下行梯度酒精入 水，每個梯度2-3min，細(xì)水流自來水沖洗5min。蘇木素染液染色l-2min，流水沖洗3min， PBS溶液浸泡IOmin返藍(lán)；伊紅染液染色l-2min，流水沖洗3min。70%、80%、90%、95%I、 95%II、100%I、100%II上行梯度酒精脫水，每個梯度倒進(jìn)倒出，放入通風(fēng)櫥中干燥。玻片 放入二甲苯中透明約15s后取出，滴加液態(tài)中性樹膠，用合適長度的蓋玻片封片，在通風(fēng)櫥 的攤片板上，待中性樹膠凝固后即可鏡下觀察拍照。
[0037] 3. 4 抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant