一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物及其制備方法和使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及獸用藥領(lǐng)域，特別是指一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物 及其制備方法和使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS)，是由豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征病毒（PRRSV)引起豬 的以繁殖障礙和呼吸道癥狀為主要特征的一種高度傳染性疾病。該病既能垂直傳染又能水 平傳播，能夠引起妊娠母豬發(fā)熱、厭食、流產(chǎn)、早產(chǎn)、木乃伊胎、仔弱及誘發(fā)仔豬和育成豬的 多種呼吸系統(tǒng)疾病。1996年郭寶清等人確定了其在我國(guó)的存在PRRS具有傳播迅速、流行廣 泛和毒株變異能力強(qiáng)的特點(diǎn)，該病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重威脅和巨大經(jīng)濟(jì)損失，防治主要靠疫 苗預(yù)防，目前尚無(wú)有效藥物，其綜合防制有很大難度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提出一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物及其制備方法和使用 方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中市場(chǎng)上沒(méi)有對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒此類(lèi)藥物的問(wèn)題。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥 物，包括用以下重量份原料制得的凍干制劑：滸苔粉65~75重量份、黃芪6~9重量份、板 藍(lán)根7~12重量份、五味子3~6重量份、連翅2~5重量份、穿心蓮8~13重量份、黃連 2~5重量份。
[0005]作為進(jìn)一步的優(yōu)選，包括用以下重量份原料制得的凍干制劑：滸苔粉70重量份、 黃苗8重量份、板藍(lán)根10重量份、五味子4重量份、連翹3重量份、穿心蓮12重量份、黃連 3重量份。
[0006] 本發(fā)明提出了一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物的制備方法，包括以 下步驟：
[0007] 1)將新鮮滸苔洗凈，烘干至恒量，粉碎后過(guò)80目篩得滸苔粉；
[0008] 2)分別按各重量份稱(chēng)取原料，后加入所述原料總量10~15倍的水，在90°C下煎 煮4. 2小時(shí)，過(guò)濾后分別得濾渣、第一次煮液；
[0009] 3)向所述濾渣中加入所述濾渣重量10倍的水，重復(fù)煎煮和提取，后過(guò)濾得第二次 煮液，合并所述第一次煮液和所述第二次煮液，真空濃縮至兩次煮液體積的50%，經(jīng)細(xì)菌過(guò) 濾器過(guò)濾除菌，凍干，即得。
[0010] 本發(fā)明提出了一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物的使用方法，其特征 在于：包含操作步驟用2倍濃度的DMEM培養(yǎng)基液將藥物稀釋至濃度范圍20 %~55 %，對(duì)細(xì) 胞進(jìn)行預(yù)處理，后接種豬繁殖與呼吸綜合征病毒。
[0011] 作為優(yōu)選的技術(shù)方案，包含操作步驟用2倍濃度的DMEM培養(yǎng)基液將藥物稀釋至濃 度范圍40%，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，后接種豬繁殖與呼吸綜合征病毒。
[0012] 本發(fā)明采用的滸苔富含多糖，滸苔多糖是滸苔的主要活性成分，存在于藻體細(xì)胞 中，具有降低膽固醇、抗菌和抗病毒、抗氧化、增強(qiáng)免疫功能等諸多藥理作用，目前國(guó)外的研 宄報(bào)道藻類(lèi)多糖具有抗多種病毒的作用。本發(fā)明前期研宄證實(shí)，滸苔對(duì)抗豬繁殖與呼吸病 毒具有明顯的阻斷和抑制作用。
[0013] 本發(fā)明采用的黃芪：增強(qiáng)免疫功能，促進(jìn)機(jī)體代謝，增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧及抗應(yīng)激作 用、抗菌及抑制病毒作用。
[0014] 本發(fā)明采用的板藍(lán)根：性寒，味微甜后苦澀，具有清熱解毒、抗菌消炎的功效。
[0015] 本發(fā)明米用的五味子：果肉氣微，味酸；種子破碎后，有香氣，味辛、微苦，能增強(qiáng) 機(jī)體對(duì)非特異性刺激的防御能力和抗菌作用。本發(fā)明前期研宄證實(shí)，五味子具有明顯的抗 豬繁殖與呼吸病毒的阻斷作用。
[0016] 本發(fā)明采用的連翹：性味苦、涼，功能主治清熱，解毒，散結(jié)，消腫。
[0017] 本發(fā)明采用的穿心蓮：具有清熱解表、解毒抗菌作用，對(duì)多種細(xì)菌有效，對(duì)流感也 有抑制作用。本發(fā)明前期研宄證實(shí)，穿心蓮對(duì)抗豬繁殖與呼吸病毒具有明顯的阻斷和抑制 作用。
[0018] 本發(fā)明采用的黃連：其味入口極苦，清熱燥濕，瀉火解毒之功效。本發(fā)明前期研宄 證實(shí)，黃連具有明顯的對(duì)豬繁殖與呼吸病毒的阻斷作用。
[0019] 本發(fā)明采用原料分別為滸苔粉、黃芪、板藍(lán)根、五味子、連翹、穿心蓮和黃連，制備 的凍干制劑能明顯降低豬繁殖與呼吸病毒的毒性，且采用水煎蒸煮的提取方法，更完全保 留各個(gè)物質(zhì)的活性成分，當(dāng)用2倍濃度的DMEM培養(yǎng)基液將藥物稀釋至濃度范圍40%時(shí)，預(yù) 處理細(xì)胞，接種的豬繁殖與呼吸病毒的增殖被抑制。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可 以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0021] 圖1為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)PRRSV增殖的抑制效果圖；
[0022]圖2為不同藥物濃度對(duì)PRRSV增殖的抑制效果圖；
[0023]圖3為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)PRRSV增殖的抑制效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完 整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于 本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他 實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0025] 一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物，包括用以下重量份原料制得的凍 干制劑：消 1苔粉65~75重量份、黃苗6~9重量份、板藍(lán)根7~12重量份、五味子3~6 重量份、連翹2~5重量份、穿心蓮8~13重量份、黃連2~5重量份。
[0026] 下述實(shí)施例中使用的實(shí)驗(yàn)材料與試劑：
[0027] Marc145細(xì)胞系由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)贈(zèng)送；胰蛋白酶、DMSO為Invitrogen產(chǎn)品，新生 牛血清為杭州四季青生物工程材料有限公司，磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、氯化鈉、氯化鉀等 為國(guó)產(chǎn)分析純，滸苔由黃島海域采集。
[0028]實(shí)施例一
[0029]一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物的制備方法，包括以下步驟：
[0030] 1)將新鮮滸苔洗凈，烘干至恒量，粉碎后過(guò)80目篩得滸苔粉；
[0031] 2)分別按滸苔粉65重量份、黃芪6重量份、板藍(lán)根7重量份、五味子3重量份、連 翹2重量份、穿心蓮8重量份、黃連2重量份稱(chēng)取原料，后加入所述原料總量10~15倍的 水，在90°C下煎煮4. 2小時(shí)，過(guò)濾后分別得濾渣、第一次煮液；
[0032] 3)向所述濾渣中加入所述濾渣重量10倍的水，重復(fù)煎煮和提取，后過(guò)濾得第二次 煮液，合并所述第一次煮液和所述第二次煮液，真空濃縮至兩次煮液體積的50 %，經(jīng)細(xì)菌過(guò) 濾器過(guò)濾除菌，凍干，即得。
[0033] 本發(fā)明提出了一種有效對(duì)抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的藥物的使用方法：包含操 作步驟用2倍濃度的DMEM培養(yǎng)基液將藥物稀釋至濃度范圍20%~55%，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處 理，后接種豬繁殖與呼吸綜合征病毒。
[0034]具體的實(shí)驗(yàn)步驟如下：
[0035]DMarc145細(xì)胞在12孔板上培養(yǎng)至單層，用2倍濃度的DMEM培養(yǎng)液將藥物稀釋 到濃度為40 %備用，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)組A和對(duì)照組a，實(shí)驗(yàn)組A將濃度為40 %的藥液替換孔內(nèi)培養(yǎng) 液，對(duì)照組a不替換，這兩組分別置于濃度為5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h;
[0036] 2)再將實(shí)驗(yàn)組A內(nèi)的藥液棄掉，置換為維持液（含4%新生牛血清），對(duì)照組同樣 替換為維持液，后對(duì)這兩組分別接種豬繁殖與呼吸綜合征病毒（〇. 01M0I)，置二氧化碳培養(yǎng) 箱繼續(xù)培養(yǎng)，觀(guān)察細(xì)胞變化，并于48h后收獲病毒；
[0037] 3)將細(xì)胞板凍融三次，12000rpm