一種包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸納米凝膠的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥劑學領域的一種納米凝膠緩釋微粒的制備技術，具體涉及一種包載 堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸納米凝膠的制備方法。
【背景技術】
[0002] 口腔潰瘍是一種生活常見病，多發(fā)于舌尖、舌腹、頰粘膜處，伴隨間歇性、碰觸式刺 痛，嚴重影響病患的生活質量。目前對于口腔潰瘍的治療尚缺乏有效方法，傳統(tǒng)的治療方 法著重于局部的止痛，而對于如何加快潰瘍面的愈合重視程度不夠。堿性成纖維細胞生長 因子是一種多功能蛋白類生物活性物質，對創(chuàng)面和神經損傷均有較強的修復作用。利用堿 性成纖維細胞生長因子治療口腔潰瘍已有報道。存在的突出問題是：1、堿性成纖維細胞生 長因子在口腔環(huán)境中容易降解失活；2、隨著人體唾液的分泌，堿性成纖維細胞生長因子在 潰瘍表面處會被迅速清除，限制了其治療效果。因此，如何保留堿性成纖維細胞生長因子活 性，延長堿性成纖維細胞生長因子在潰瘍表面處的滯留時間是本發(fā)明所解決的關鍵問題。 殼聚糖是一種天然陽離子聚多糖，具有資源量大、生物可降解、穩(wěn)定性好、生物親和性好、安 全無毒性等優(yōu)點，是開發(fā)生物醫(yī)用材料的良好資源。殼聚糖季銨鹽作為殼聚糖的水溶性衍 生物，在保留殼聚糖分子良好生物相容性的同時，具有良好的抑菌性、成膜和成膠性，是理 想的粘膜藥物輔料。有報道指出殼聚糖季銨鹽能夠與口腔粘膜粘液層蛋白發(fā)生靜電作用并 形成氫鍵，表現出良好的粘膜粘附性。本發(fā)明采用兩部法（離子交聯(lián)一一聚電解質凝聚） 制備包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸復合納米凝膠，旨在長時間維 持堿性成纖維細胞生長因子在口腔潰瘍部位的有效活性濃度，提高臨床治療效果。

【發(fā)明內容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質 酸納米凝膠制備方法，以彌補現有技術的不足。
[0004] 本發(fā)明采用兩步法合成目標產物即包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨 鹽透明質酸納米凝膠。其具體步驟是：
[0005] 步驟一：將殼聚糖季銨鹽溶解于去離子水中，再將堿性成纖維細胞生長因子溶液 加入該溶液中，攪拌30分鐘，控制轉速、殼聚糖季銨鹽濃度。
[0006] 步驟二（離子交聯(lián)法）：將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖季銨鹽/堿性成纖維細 胞生長因子混合液中進行離子交聯(lián)反應，控制殼聚糖季銨鹽濃度、三聚磷酸鈉濃度以及三 聚磷酸鈉的滴加速度；
[0007] 步驟三（聚電解質凝聚法）：向步驟二中發(fā)生離子交聯(lián)的殼聚糖季銨鹽溶液中， 加入透明質酸鈉溶液，控制轉速、透明質酸鈉的濃度和滴加速度。調節(jié)溶液的酸堿度至pH 4. 0 - 6. 0,最后將其分離純化，干燥得到包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透 明質酸納米凝膠。
[0008] 本發(fā)明更具體的實施方案如下：
[0009]步驟一：將殼聚糖季銨鹽溶解于去離子水中，殼聚糖季銨鹽濃度為0. 3-0. 6%(w/ v);向殼聚糖季銨鹽溶液中加入濃度為2-5mg/mL的堿性成纖維細胞生長因子溶液；
[0010] 步驟二：將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖季銨鹽溶液中進行離子交聯(lián)反應，其中 三聚磷酸鈉與殼聚糖季銨鹽游離氨基的摩爾比為〇. 1-0. 3 :1 ;滴加在20分鐘內完成，室溫 下攪拌，攪拌速度是200轉/分鐘，反應時間是30分鐘；
[0011] 步驟三：將透明質酸鈉溶解于去離子水中，溶液濃度分別控制在〇. 3% -0. 5% (w/ v);將透明質酸鈉溶液滴入第二步所得到的三聚磷酸鈉一一殼聚糖季銨鹽混合溶液中，其 添加量為透明質酸鈉與殼聚糖的質量比為1-1. 7:1，滴加在30分鐘內完成，調節(jié)酸堿度至 pH4. 0-6. 0,室溫下攪拌，攪拌速度為500轉/分鐘，反應時間為3小時；15000轉/分鐘離 心1小時分離產物，干燥得到固體產品，即包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽 透明質酸納米凝膠。
[0012] 本發(fā)明進一步具體的實施方案如下：
[0013] 一種包載堿性成纖維生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸納米凝膠的制備方法，取 殼聚糖季按鹽30_60mg，溶于IOmL去離子水中，在攪拌條件下滴入IOmL2-5mg/mL堿性成纖 維細胞生長因子溶液，Iml0. 2-0. 5% (w/v)三聚磷酸鈉溶液，20分鐘滴完，室溫下200轉/ 分鐘攪拌30分鐘，在攪拌條件下滴加IOmL含有0. 3-0. 5 % (w/v)的透明質酸鈉溶液，30分 鐘滴完，用氫氧化鈉調節(jié)酸堿度至pH4. 0-6. 0,室溫下攪拌，200轉/分攪拌5小時，15000 轉/分離心1-2小時，冷凍干燥得到固體產物。
[0014] 所述透明質酸分子量范圍10_50kDa。
[0015] 本發(fā)明具有操作方便、制備技術工藝簡便和制造成本低廉等優(yōu)點。所形成的包載 堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸納米凝膠呈規(guī)則球形。本發(fā)明的重要意 義在于形成的核殼結構的載藥納米凝膠對堿性成纖維細胞生長因子的包載量高；具有良好 的藥物緩釋作用和粘膜粘附性，在醫(yī)藥、醫(yī)用材料以及口腔粘膜給藥等許多方面具有良好 的研宄和開發(fā)應用前景，因此，該發(fā)明技術具有很好的經濟開發(fā)潛力。本發(fā)明的包載堿性成 纖維生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸納米凝膠產品的平均粒徑在150-230nm;Zeta電 位為-28. 6--36. 7mV，包覆率 60-75 %。
[0016] 以下結合附表、附圖和實施例對本發(fā)明做出進一步說明。
【附圖說明】
[0017] 圖1為包載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖季銨鹽透明質酸納米凝膠透射電 鏡照片。
【具體實施方式】
[0018] 本發(fā)明采用殼聚糖季銨鹽、透明質酸鈉和三聚磷酸鈉為原料，通過離子交聯(lián)、聚合 物凝聚法目標產物。具體實施方案為：
[0019]步驟一：將殼聚糖季銨鹽溶解于去離子水中，殼聚糖季銨鹽濃度為0. 3%(w/v); 向殼聚糖季銨鹽溶液中加入濃度為2mg/mL的堿性成纖維細胞生長因子溶液；
[0020] 步驟二：將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖季銨鹽溶液中進行離子交聯(lián)反應，其中 三聚磷酸鈉與殼聚糖季銨鹽游離氨基的摩爾為0.l-o. 3 :1 ;滴加在20分鐘內完成，室溫下 攪拌，攪拌速度是200轉/分鐘，反應時間是30分鐘；
[0021] 步驟三：將透明質